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Previous issue date: 2013-02-22 / The intracellular protozoan Neospora caninum, is considered the main causative agent of abortion in cattle. Infection occurs by ingestion of sporulated oocysts in the environment, first occurs systemic parasitemy characterizing acute phase of infection and subsequent chronic phase with formation of tissue cysts, thus persisting the infected and the asymptomatic host. Diagnosis is made by serologic tests. Currently, there are no data to ensure the effectiveness of commercial vaccine available for cattle. Apical complex antigens of the parasite are being studied, since they have an important role in infection. The rhoptries, secretory glands present in this region of the parasite N. caninum, play an important role in invasion and formation of parasitophago vacuoles, these properties have generated interest in its use in experimental vaccine formulations. Experimentally it showed partial results of protection in challenge, when fused to other proteins of this protozoan, the protection was increased, suggesting that antigens fusion is effective for protection against N. caninum. This work produced a new chimeric antigen, originated from the fusion of ROP² N. caninum with the B subunit of heat labile enterotoxin of Escherichia coli. The construction of the chimera was accomplished by cloning in sequence where ROP² gene was inserted directly into the N-terminus of LTB. The construction ROP²/LTB was expressed in E. coli strain BL 21 (DE3) StarTM where it presented a size of approximately 24kDa. The fusion antigen did not impair the antigenicity when tested against positive bovine serum by immunofluorescence, the Western blot technique, therefore, show great potential for use as a recombinant vaccine. / O protozoário intracelular Neospora caninum, é considerado principal agentes causadores de aborto em bovinos. A infecção ocorre pela ingestão de oocistos esporulados no ambiente, inicialmente ocorre parasitemia sistêmica caracterizando fase aguda da infecção e posteriormente fase crônica com formação de cistos teciduais, permanecendo assim o hospedeiro infectado e assintomático. O diagnóstico é feito através de provas sorológicas. Atualmente, não há dados que assegurem a eficácia da vacina comercial disponível para bovinos. Antígenos do complexo apical do parasito estão sendo estudados, pois apresentam papel importante na infecção. As roptrias, glândulas secretoras presente nesta região do parasito N. caninum, desempenham papel importante na invasão e formação do vacúolo parasitófago, essas propriedades produziram interesse na sua utilização em formulações de vacina experimentais. Experimentalmente apresentou resultados parciais de proteção ao desafio, quando fusionada a outras proteínas deste protozoário, aumentou a proteção, sugerindo que fusão de antígenos é eficiente para proteção contra N. caninum. O presente trabalho produziu um novo antígeno quimérico, originado da fusão entre ROP² de N. caninum com a subunidade B, da enterotoxina termolábil de Escherichia coli. A construção da quimera foi realizada por clonagem em sequência, onde gene ROP² foi inserido diretamente na porção N-terminal da LTB. A construção, ROP²/LTB, foi expressa em cepa E. coli BL 21 (DE3) StarTM onde apresentou tamanho de aproximadamente 24kDa. A fusão de antígeno não prejudicou a antigenicidade quando testado frente a soro bovino positivo por Imunofluorescência, na técnica de Western blot, portanto, apresentando grande potencial para ser utilizado como vacina recombinante.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/2488 |
| Date | 22 February 2013 |
| Creators | SANTOS JUNIOR, Alceu Gonçalves dos |
| Contributors | CPF:20732660025, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763076J5, SILVA, éverton Fagonde da, CPF:57176930015, http://lattes.cnpq.br/5116470459238753, BERNE, Maria Elisabeth Aires, CPF:20746490020, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780596T8, NIZOLLI, Leandro Quintana, LEITE, Fabio Pereira Leivas |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Veterinária, UFPel, BR, Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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