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Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O receptor para manose receptor (RM) é uma glicoproteína transmembrana que é expressa em vários tipos celulares, mas, pouca ou nenhuma informação sobre RM existe em células de Schwann (CS). Mostramos que CS de rato em culturas primárias de células dissociadas ou em explantes de nervo bem como numa linhagem de Schwannoma humano (ST88-14) liga uma neoglicoproteína manosil/albumina de soro bovino- isotiocianate de fluoresceina (man/BSA-FITC) de uma maneira altamente específica. Após incubação com man/BSA-FITC, a análise por citometria de fluxo demonstra 62% de células ST88-14 e 90% de CS positivas, um aumento dose-dependente de ligantes marcads e inibição quase total pela competição com D-manose 250 mM ou com a proteína (altamente manosilada) peroxidase de raiz forte (HRP) ~ 1.1 µM. O tratamente de SC cultivadas com dexametasona (0.1 µg/ml) ou interferon ? (IFN-?? \2013 100 U/ml) seguido por marcação com man/BSA-FITC e a análise por citometria de fluxo mostra um acréscimo e um decréscimo, respectivamente, da captação do ligante. Explantes de nervo ciático cultivados na presence de IFN-?? mostram colocalização de man/BSA-FITC e imunoreatividade para MHC classe II. A análise ultra-estrutural de células ST88-14 após incubação com HRP- Au coloidal com ou sem subsequente seguimento a 37ºC mostra uma localização inicial na superfície e internalização do traçador dependente de temperatura e de tempo. Células ST88-14 e CS dissociadas bem como nervos recentemente \201Cesgarçados\201D mostram reatividade a um anticorpo policlonal contra o domínio C-terminal do RM de macrófagos murinos (anti-cMR). No caso de nervos \201Cesgarçados\201D, a imunorreatividade é particularmente abundante em regiões topograficamente homólogos a alças paranodais
Além disto, a imuno-histoquímica ultra-estrutural de nervo ciático incluído em Lowicryl mostra reatividade ao anti-cMR, com máxima deposição do anticorpo secundário-Au em pericários de CS mielinizantes ou não-mielinizantes. Proteínas de extratos de SC e ST88-14, separadas por SDS-PAGE, e estudadas pela ligação das lectinas endógenas mostram que ambos os tipos celulares compartilham uma proteína ligadora de HRP de ~180 kDa com macrófagos peritoneais. Uma única banda de 180 kDa foi também obtida em \201Cimmunoblots\201D com anti-cMR. Nossos resultados sugerem que células de um Schwannoma e CS expressam uma proteína MR-semelhante em um estado potencialmente funcional e que ambos os tipos podem ser modelos úteis em estudos do papel deste receptor em diferentes estados infecciosos/inflamatórios ou na homeostase do sistema nervoso periférico / The mannose receptor (MR) is a transmembrane glycoprotein that is
expressed in several cell types but little or no information is available on Schwann
cells (SC). We show that rodent SC in primary cultures of dissociated cells or explant
nerve cultures and a human Schwannoma cell line (ST88-14) bind the exogenous
MR
ligand
neoglycoprotein
mannosyl/bovine
serum
albumin-fluorescein
isothiocyanate (man/BSA-FITC) in a highly specific manner. After incubation with
man/BSA-FITC, flow cytometry demonstrates 62% positive ST88-14 cells and 90%
positive SC cells, a dose-dependent increase in tagged ligands and near total
inhibition of binding by 250 mM D-mannose or ~ 1.1
μ
M of the highly mannosylated
protein horseradish peroxidase (HRP). Treatment of cultured SC with
dexamethasone (0.1
μ
g/ml) or interferon
(IFN-
– 100 U/ml) followed by tagging
with man/BSA-FITC and analysis by flow cytometry shows an increase and a
decrease, respectively, of the ligand uptake by the putative receptor. Sciatic nerve
explants cultured in the presence of IFN-
show colocalization of man/BSA-FITC and
MHC class II immunoreactivity. Ultrastructural analysis of ST88-14 cells after
incubation with HRP-colloidal gold without or with subsequent chasing at 37ºC
mostra localização inicial na superfície cellular e internalização ation on the cell
surface and temperature- and time dependent internalization of the probe. ST88-14
cells and dissociated SC and recently teased nerves exhibit reactivity to a polyclonal
antibody against the C-terminal domain of the mouse macrophage MR (anti-cMR). In
the case of teased nerves, immunoreactivity was particularly abundant in regions
topographically homologous to paranodal loops. Furthermore, ultrastructural
immunohistochemistry of Lowicryl-embedded sciatic nerve from normal animals
showed reactivity to anti-cMR with maximal deposition of Au-tagged secondary
antibody in myelinating or non-myelinating SC somata. SDS-PAGE separated
proteins studied by endogenous lectin binding of SC and ST88-14 extracts show that
both share a unique HRP-binding protein of about 180 kDa with peritoneal
macrophages. A single band of 180 kDa was also obtained in immunoblots with anti-
cMR. Our results suggest that Schwannoma cells and SC in vitro and in situ express
a MR-like protein in a prospectively functional state and that both types may be
useful models for studies regarding the role of this receptor in different
infectious/inflammatory states or in homeostasis of the peripheral nervous system
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13623 |
| Date | January 2006 |
| Creators | Cruz, Wagner Baetas da |
| Contributors | Sarno, Euzenir Nunes, Linden, Rafael, Moura Neto, Vivaldo, Barbosa, Helene Santos, Pereira, Mirian Cláudia de Souza, Faria, Suzana Côrte-Real, Cavalcante, Leny Alves |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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