Made available in DSpace on 2016-04-07T13:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 wagner_baetas_ioc_dout_2006.pdf: 6224563 bytes, checksum: b9154dd330ca56ad67886153b5bb6a4f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O receptor para manose receptor (RM) é uma glicoproteína transmembrana que é expressa em vários tipos celulares, mas, pouca ou nenhuma informação sobre RM existe em células de Schwann (CS). Mostramos que CS de rato em culturas primárias de células dissociadas ou em explantes de nervo bem como numa linhagem de Schwannoma humano (ST88-14) liga uma neoglicoproteína manosil/albumina de soro bovino- isotiocianate de fluoresceina (man/BSA-FITC) de uma maneira altamente específica. Após incubação com man/BSA-FITC, a análise por citometria de fluxo demonstra 62% de células ST88-14 e 90% de CS positivas, um aumento dose-dependente de ligantes marcads e inibição quase total pela competição com D-manose 250 mM ou com a proteína (altamente manosilada) peroxidase de raiz forte (HRP) ~ 1.1 µM. O tratamente de SC cultivadas com dexametasona (0.1 µg/ml) ou interferon ? (IFN-?? \2013 100 U/ml) seguido por marcação com man/BSA-FITC e a análise por citometria de fluxo mostra um acréscimo e um decréscimo, respectivamente, da captação do ligante. Explantes de nervo ciático cultivados na presence de IFN-?? mostram colocalização de man/BSA-FITC e imunoreatividade para MHC classe II. A análise ultra-estrutural de células ST88-14 após incubação com HRP- Au coloidal com ou sem subsequente seguimento a 37ºC mostra uma localização inicial na superfície e internalização do traçador dependente de temperatura e de tempo. Células ST88-14 e CS dissociadas bem como nervos recentemente \201Cesgarçados\201D mostram reatividade a um anticorpo policlonal contra o domínio C-terminal do RM de macrófagos murinos (anti-cMR). No caso de nervos \201Cesgarçados\201D, a imunorreatividade é particularmente abundante em regiões topograficamente homólogos a alças paranodais Além disto, a imuno-histoquímica ultra-estrutural de nervo ciático incluído em Lowicryl mostra reatividade ao anti-cMR, com máxima deposição do anticorpo secundário-Au em pericários de CS mielinizantes ou não-mielinizantes. Proteínas de extratos de SC e ST88-14, separadas por SDS-PAGE, e estudadas pela ligação das lectinas endógenas mostram que ambos os tipos celulares compartilham uma proteína ligadora de HRP de ~180 kDa com macrófagos peritoneais. Uma única banda de 180 kDa foi também obtida em \201Cimmunoblots\201D com anti-cMR. Nossos resultados sugerem que células de um Schwannoma e CS expressam uma proteína MR-semelhante em um estado potencialmente funcional e que ambos os tipos podem ser modelos úteis em estudos do papel deste receptor em diferentes estados infecciosos/inflamatórios ou na homeostase do sistema nervoso periférico / The mannose receptor (MR) is a transmembrane glycoprotein that is expressed in several cell types but little or no information is available on Schwann cells (SC). We show that rodent SC in primary cultures of dissociated cells or explant nerve cultures and a human Schwannoma cell line (ST88-14) bind the exogenous MR ligand neoglycoprotein mannosyl/bovine serum albumin-fluorescein isothiocyanate (man/BSA-FITC) in a highly specific manner. After incubation with man/BSA-FITC, flow cytometry demonstrates 62% positive ST88-14 cells and 90% positive SC cells, a dose-dependent increase in tagged ligands and near total inhibition of binding by 250 mM D-mannose or ~ 1.1 μ M of the highly mannosylated protein horseradish peroxidase (HRP). Treatment of cultured SC with dexamethasone (0.1 μ g/ml) or interferon  (IFN-   – 100 U/ml) followed by tagging with man/BSA-FITC and analysis by flow cytometry shows an increase and a decrease, respectively, of the ligand uptake by the putative receptor. Sciatic nerve explants cultured in the presence of IFN-   show colocalization of man/BSA-FITC and MHC class II immunoreactivity. Ultrastructural analysis of ST88-14 cells after incubation with HRP-colloidal gold without or with subsequent chasing at 37ºC mostra localização inicial na superfície cellular e internalização ation on the cell surface and temperature- and time dependent internalization of the probe. ST88-14 cells and dissociated SC and recently teased nerves exhibit reactivity to a polyclonal antibody against the C-terminal domain of the mouse macrophage MR (anti-cMR). In the case of teased nerves, immunoreactivity was particularly abundant in regions topographically homologous to paranodal loops. Furthermore, ultrastructural immunohistochemistry of Lowicryl-embedded sciatic nerve from normal animals showed reactivity to anti-cMR with maximal deposition of Au-tagged secondary antibody in myelinating or non-myelinating SC somata. SDS-PAGE separated proteins studied by endogenous lectin binding of SC and ST88-14 extracts show that both share a unique HRP-binding protein of about 180 kDa with peritoneal macrophages. A single band of 180 kDa was also obtained in immunoblots with anti- cMR. Our results suggest that Schwannoma cells and SC in vitro and in situ express a MR-like protein in a prospectively functional state and that both types may be useful models for studies regarding the role of this receptor in different infectious/inflammatory states or in homeostasis of the peripheral nervous system

O setor avícola apresenta o maior crescimento em volume produzido dentre todos os setores cárneos no Brasil. A grande participação dos produtos avícolas na alimentação humana somada ao risco do desenvolvimento de resistência bacteriana, levaram a União Européia (UE) a abolir utilização de antimicrobianos como aditivos e de forma profilática na ração de animais. A remoção dos aditivos associada ao sistema de criação intensivo acabaram por fazer que doenças, até então consideradas controladas, se tornassem reemergentes. A enterite necrótica aviária (NE) é considerada um exemplo. De forma geral, condições estressoras predispõem ao desenvolvimento de doenças, sendo o calor um dos estressores mais comuns que ocorrem em granjas aviárias. Este estudo enfoca o efeito do estresse térmico por calor (35±1ºC) sobre o desenvolvimento da NE em frangos de corte. Para isso, 60 frangos de corte machos foram divididos em 6 grupos experimentais: 1 Grupo Controle; 2 Grupo Controle Estressado (C/HS35); 3 Grupo Tioglicolato (T); 4 Grupo Tioglicolato Estressado (T/HS35); 5 Grupo Infectado (I); 6 Grupo Infectado Estressado (I/HS35). A infecção experimental com Clostridium perfringens foi feita por via oral, com a bacteria em meio de cultura misturada a ração, do 15º ao 21º dia de vida nos grupos I e I/HS35. O estresse por calor (35±1º C) foi realizado do 14º ao 21º dia de vida das aves dos grupos estressados. Durante todo período experimental os animais foram mantidos em isoladores. Em relação aos animais não estressados, os animais submetidos ao estresse por calor apresentaram: 1- menor escore lesional macro e microscópico no intestino delgado; 2- maior concentração de IgA no lavado intestinal do duodeno; 3 - menor concentração de IgA no jejuno; 4 - redução dos níveis séricos de IgA e IgY; 5 - maior concentração sérica de IgM; 6 - diminuição qualitativa evidente dos heterofilos intestinais em relação aos animais infectados e estressados. Portanto, mostrou-se que o estresse por calor apresentou efeito imunomodulador importante, ao reduzir a inflamação intestinal. Este achado associa-se provavelmente à diminuição da imunidade inata por redução da migração de heterófilos para a mucosa intestinal, desta forma prevenindo a manifestação de um um quadro clínico mais grave de NE, fato associado à diminuição das lesôes desencadeadas pelo processo inflamatório heterofílico. / The poultry sector presented the highest growth in the volume of production among all meat sectors in Brazil. The great participation of poultry products on human diet together with the risk of food and environmental contamination by resistant bacteria led the European Union (EU) countries to abolish the use of antibiotics as feed additives in animal production. This fact associated with the intensive farming system are being reported as responsible for the re-emergence of some already controlled diseases. The avian necrotic enteritis (NE) exemplify such an effect. Generally, stressful conditions are predisponent factors for disease development; heat stress is one of the most common stressor in poultry farms. This study focuses on the effects of heat stress (35 ± 1 º C) on the development of NE in broilers. For this purpose, 60 male broilers were divided into 6 groups: 1 - control group, 2 - stressed control group (C/HS35) 3 - thioglycolate group (T) 4 - thioglycolate stressed group (T/HS35); 5 - infected group (I) 6 - infected stressed group (I/HS35). Experimental infection with Clostridium perfringens, grown in thioglycollate broth medium, was given through the feed to the birds of groups I and I/HS35 from the 15th to 21st days of life. The heat stress (35 ± 1 °C) was induced continuously from the 14th to the 21st day of life in birds of the stressed groups. Throughout the experimental period the animals were kept in isolators. Compared to non-stressed animals, broilers subjected to heat stress showed: lower gross and microscopic score lesions in the small intestine; increased concentrations of IgA in duodenal lavage and decreased IgA concentrations in the jejunum; smaller concentrations of serum IgA and IgY; increased concentration of serum IgM; reduction in gut number of heterophils in the thioglycolate treated and in the infected groups. Therefore, this experimental model showed that heat stress presented a significant immunomodulatory role on the induced NE, most probably because it reduced intestinal inflammation via decrease in heterophils migration to the intestinal mucosa, which in turn might had reduced tissue damage during infamation, hence preventing the development of a more severe form of NE.

Ecstasy é o nome popular do 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA), uma droga de abuso muito utilizada por adultos jovens. Diferentes relatos de caso têm mostrado correlações positivas entre o abuso do Ecstasy e doenças infecciosas. Muitos estudos em modelos animais mostraram que o MDMA induz alterações de imunidade inata e adquirida; entretanto pouco se sabe sobre os mecanismos pelos quais estes efeitos ocorrem. Buscamos neste trabalho por efeitos da administração i.p. de MDMA sobre parâmetros comportamentais, neuroendócrinos e de atividade de neutrófilos e o fizemos à luz de mecanismos neuroimunomodulatórios. Nossos resultados mostraram que o MDMA (5,0; 8,0; 10,0 e 20,0 mg/kg) produz, 30 minutos após a administração (1) aumento da atividade locomotora avaliada no campo aberto e no LCE e (2) diminuição do burst oxidativo de neutrófilos após indução por Staphylococcus aureus nas doses de 8,0; 10,0 e 20,0 mg/kg. Adicionalmente, 60 minutos após a administração de 10,0 mg/kg observou-se (3) um aumento de atividade locomotora avaliada no campo aberto e no LCE, (4) aumento do turnover de noradrenalina e de dopamina no hipotálamo; (5) aumento do turnover de dopamina no estriato; (6) aumento dos níveis séricos de corticosterona; (7) diminuição do burst oxidativo após indução por SAPI e PMA e, também, da porcentagem e da intensidade de fagocitose por neutrófilos sanguíneos; (8) aumento do número de eritrócitos, da quantidade de hemoglobina e da porcentagem do hematócrito e diminuição do número de linfócitos sanguíneos; (9) diminuição do número total de células na medula óssea; (10) aumento do número de leucócitos e (11) diminuição do peso relativo do baço. A exposição in vitro ao MDMA (12) não alterou o burst oxidativo e a fagocitose por neutrófilos. Esses resultados sugerem que o MDMA produz ao mesmo tempo alterações comportamentais, neuroquímicas, endócrinas e imunológicas em camundongos. A estimulação motora dos animais parece relacionada a um aumento da atividade catecolaminérgica central e, muito especialmente, do sistema dopaminérgico estriatal. É possível sugerir que a alteração na imunidade inata após MDMA esteja relacionada ao aumento de atividade do eixo HHA e, conseqüentemente, dos níveis séricos de corticosterona. Não se descarta, porém, uma possível ativação do SNAS induzida pelo MDMA. Finalmente, observamos que o MDMA não tem efeito direto sobre neutrófilos. / Ecstasy is the popular name of N-metil-3,4 methylenedioxymethamphetamine (MDMA), a drug of abuse widely used by young adults. Different case reports have been demonstrating the existence of a positive correlation between Ecstasy abuse and the presence of infectious disease. Many studies conducted in animal models showed that MDMA reduces innate and adaptative immunity. However, little is known about the mechanisms behind these reported effects. In this work we searched for effects of i.p. MDMA administration on behavioral, neuroendocrines, and neutrophil activity in mice, especially parameters looking for neuroimmune relationships. We showed that MDMA treatment (5,0; 8,0; 10,0; and 20,0 mg/kg) produces after 30 minutes (1) increased locomotor activity in the open field and plus maze apparatuses, (2) decreased neutrophil oxidative burst after Staphylococcus aureus (SAPI) after in vitro induction 8,0, 10,0, and 20,0 mg/kg doses. Additionally, 60 minutes after MDMA (10,0 mg/kg) we observed (3) increased locomotor activity in the open field and plus maze apparatuses, (4) increased noradrenaline and dopamine turnover in the hypothalamus, (5) increased dopamine turnover in the striatum, (6) increased level of serum corticosterone, (7) decreased neutrophil oxidative burst after SAPI and PMA inductions, and also decreased percentage and intensity of neutrophil phagocitosis, (8) increased erythrocyte number, hemoglobin level, and hematocrit, and decreased peripheral blood Iymphocyte number, (9) decreased bane marrow total cell number, (10) increased leucocyte number on spleen and (11) splenic weight reduction. It was also observed that (12) in vitro exposure to MDMA induced no effects on both neutrophil oxidative burst and phagocytosis. These results suggest that MDMA produces at the same time behavioral, neurochemical, endocrine, and immunological alterations in mice. The increased locomotor activity observed seems to be related to an action on central catecholaminergic activity, mainly, at the level of the dopaminergic striatal system. It is also possible to suggest that the observed innate immunity alterations are related to an increased HPA axis activity induced by MDMA, via corticosterone. However, we cannot discharge a possible SNS activation induced by MDMA, a fact that could have contributed to the present reported effects. Finally, and importantly we observed that in vitro MDMA has no effects on neutrophil activity.

Através do presente trabalho investigou-se a expressão do comportamento doentio e a atividade de neutrófilos sanguíneos de camundongos adultos, de meia idade e idosos, após o tratamento com lipopolissacarídeo de bactéria gram negativa (Escherichia coli). O comportamento doentio foi avaliado através da ingestão de alimentos e do peso corpóreo. Nos aparatos comportamentais Campo Aberto e Labirinto em cruz elevado, o comportamento doentio foi avaliado através da atividade geral, da exploração e dos níveis de ansiedade. A atividade de neutrófilos sanguíneos foi estudada através de citometria de fluxo, analisando-se a intensidade e porcentagem de neutrófilos que realizaram fagocitose e da intensidade e porcentagem de neutrófilos que realizaram burst oxidativo, ambos induzidos pelo estímulo in vitro da bactéria Staphylococcus aureus. Os animais foram tratados com solução salina ou LPS (na dose de 200 µg/kg) avaliações foram realizadas 2 horas após o tratamento. No caso da ingestão de alimentos e do peso corpóreo, as avaliações foram realizadas durante 3 dias anteriores ao experimento, e durante 7 dias posteriores ao experimento. Os resultados demonstraram que animais idosos apresentaram diferenças na expressão do comportamento doentio, sendo que houve uma maior motivação em explorar os aparatos comportamentais. Apesar da manutenção da exploração no Campo Aberto e Labirinto em Cruz elevado, a redução da ingestão de alimentos e do peso corpóreo apresentou-se mais acentuada nos camundongos de meia idade e idosos, após tratamento com LPS. A atividade de neutrófilos sanguíneos, avaliadas pela fagocitose e burst oxidativo, apresentou-se aumentada em camundongos idosos após tratamento com LPS. A menor migração de neutrófilos sanguíneos à cavidade peritoneal parece ser responsável por esse aumento de atividade dos neutrófilos de camundongos idosos. Esses resultados sugerem que a expressão do comportamento doentio de camundongos idosos é diferente, com manutenção do comportamento de exploração, e que esses camundongos seriam mais susceptíveis aos efeitos do choque endotóxico, devido à presença de maior quantidade de neutrófilos ativados no sangue. / Through the present work, it has been investigated the expression of sickness behavior and blood neutrophils activity in adult, middle-aged and aged mice, after gram negative (Escherichia coli) lipopolysaccharide treatment. Sickness behavior was evaluated through food ingestion and body weight. On the behavioral apparatus Open Field and Elevated Plus Maze, sickness behavior was evaluated through general activity, exploration and anxiety levels. Blood neutrophils activity was studied through flow cytometric analysis, assessing neutrophil\'s intensity and percentage of phagocytosis and neutrophil\'s intensity and percentage of oxidative burst, both induced by in vitroM stimulus of Staphylococcus aureus bacteria. Animals were treated either with saline solution or LPS (in the 200 µg/kg dose) and analysis were done 2 hours after treatment. In the case of food ingestioin and body weight, analysis were done through 3 days before experiment, and during 7 days after experiment. Results demonstrated that aged animals showed differences in sickness behavior expression, with a greater motivation to explore behavioral apparatus. Despite maintenance of Open Field and Elevated Plus Maze exploration, reduction in food ingestion and body weight were more pronounced in middle-aged and aged mice, after LPS treatment. Blood neutrophils activity, analysed through phagocytosis and oxidative burst, were higher in aged mice after LPS treatment. Lesser blood neutrophils migration to peritoneal cavity seems to be responsible for this enhancement in neutrophil activity. These results suggest that the expression of sickness behavior in aged mice is different, with maintenance of exploratory behavior, and that these mice would be more susceptible to endotoxic effects, due to the presence of higher quantity of activated neutrophils in blood.

O setor avícola apresenta o maior crescimento em volume produzido dentre todos os setores cárneos no Brasil. A grande participação dos produtos avícolas na alimentação humana somada ao risco do desenvolvimento de resistência bacteriana, levaram a União Européia (UE) a abolir utilização de antimicrobianos como aditivos e de forma profilática na ração de animais. A remoção dos aditivos associada ao sistema de criação intensivo acabaram por fazer que doenças, até então consideradas controladas, se tornassem reemergentes. A enterite necrótica aviária (NE) é considerada um exemplo. De forma geral, condições estressoras predispõem ao desenvolvimento de doenças, sendo o calor um dos estressores mais comuns que ocorrem em granjas aviárias. Este estudo enfoca o efeito do estresse térmico por calor (35±1ºC) sobre o desenvolvimento da NE em frangos de corte. Para isso, 60 frangos de corte machos foram divididos em 6 grupos experimentais: 1 Grupo Controle; 2 Grupo Controle Estressado (C/HS35); 3 Grupo Tioglicolato (T); 4 Grupo Tioglicolato Estressado (T/HS35); 5 Grupo Infectado (I); 6 Grupo Infectado Estressado (I/HS35). A infecção experimental com Clostridium perfringens foi feita por via oral, com a bacteria em meio de cultura misturada a ração, do 15º ao 21º dia de vida nos grupos I e I/HS35. O estresse por calor (35±1º C) foi realizado do 14º ao 21º dia de vida das aves dos grupos estressados. Durante todo período experimental os animais foram mantidos em isoladores. Em relação aos animais não estressados, os animais submetidos ao estresse por calor apresentaram: 1- menor escore lesional macro e microscópico no intestino delgado; 2- maior concentração de IgA no lavado intestinal do duodeno; 3 - menor concentração de IgA no jejuno; 4 - redução dos níveis séricos de IgA e IgY; 5 - maior concentração sérica de IgM; 6 - diminuição qualitativa evidente dos heterofilos intestinais em relação aos animais infectados e estressados. Portanto, mostrou-se que o estresse por calor apresentou efeito imunomodulador importante, ao reduzir a inflamação intestinal. Este achado associa-se provavelmente à diminuição da imunidade inata por redução da migração de heterófilos para a mucosa intestinal, desta forma prevenindo a manifestação de um um quadro clínico mais grave de NE, fato associado à diminuição das lesôes desencadeadas pelo processo inflamatório heterofílico. / The poultry sector presented the highest growth in the volume of production among all meat sectors in Brazil. The great participation of poultry products on human diet together with the risk of food and environmental contamination by resistant bacteria led the European Union (EU) countries to abolish the use of antibiotics as feed additives in animal production. This fact associated with the intensive farming system are being reported as responsible for the re-emergence of some already controlled diseases. The avian necrotic enteritis (NE) exemplify such an effect. Generally, stressful conditions are predisponent factors for disease development; heat stress is one of the most common stressor in poultry farms. This study focuses on the effects of heat stress (35 ± 1 º C) on the development of NE in broilers. For this purpose, 60 male broilers were divided into 6 groups: 1 - control group, 2 - stressed control group (C/HS35) 3 - thioglycolate group (T) 4 - thioglycolate stressed group (T/HS35); 5 - infected group (I) 6 - infected stressed group (I/HS35). Experimental infection with Clostridium perfringens, grown in thioglycollate broth medium, was given through the feed to the birds of groups I and I/HS35 from the 15th to 21st days of life. The heat stress (35 ± 1 °C) was induced continuously from the 14th to the 21st day of life in birds of the stressed groups. Throughout the experimental period the animals were kept in isolators. Compared to non-stressed animals, broilers subjected to heat stress showed: lower gross and microscopic score lesions in the small intestine; increased concentrations of IgA in duodenal lavage and decreased IgA concentrations in the jejunum; smaller concentrations of serum IgA and IgY; increased concentration of serum IgM; reduction in gut number of heterophils in the thioglycolate treated and in the infected groups. Therefore, this experimental model showed that heat stress presented a significant immunomodulatory role on the induced NE, most probably because it reduced intestinal inflammation via decrease in heterophils migration to the intestinal mucosa, which in turn might had reduced tissue damage during infamation, hence preventing the development of a more severe form of NE.

Através do presente trabalho investigou-se a expressão do comportamento doentio e a atividade de neutrófilos sanguíneos de camundongos adultos, de meia idade e idosos, após o tratamento com lipopolissacarídeo de bactéria gram negativa (Escherichia coli). O comportamento doentio foi avaliado através da ingestão de alimentos e do peso corpóreo. Nos aparatos comportamentais Campo Aberto e Labirinto em cruz elevado, o comportamento doentio foi avaliado através da atividade geral, da exploração e dos níveis de ansiedade. A atividade de neutrófilos sanguíneos foi estudada através de citometria de fluxo, analisando-se a intensidade e porcentagem de neutrófilos que realizaram fagocitose e da intensidade e porcentagem de neutrófilos que realizaram burst oxidativo, ambos induzidos pelo estímulo in vitro da bactéria Staphylococcus aureus. Os animais foram tratados com solução salina ou LPS (na dose de 200 µg/kg) avaliações foram realizadas 2 horas após o tratamento. No caso da ingestão de alimentos e do peso corpóreo, as avaliações foram realizadas durante 3 dias anteriores ao experimento, e durante 7 dias posteriores ao experimento. Os resultados demonstraram que animais idosos apresentaram diferenças na expressão do comportamento doentio, sendo que houve uma maior motivação em explorar os aparatos comportamentais. Apesar da manutenção da exploração no Campo Aberto e Labirinto em Cruz elevado, a redução da ingestão de alimentos e do peso corpóreo apresentou-se mais acentuada nos camundongos de meia idade e idosos, após tratamento com LPS. A atividade de neutrófilos sanguíneos, avaliadas pela fagocitose e burst oxidativo, apresentou-se aumentada em camundongos idosos após tratamento com LPS. A menor migração de neutrófilos sanguíneos à cavidade peritoneal parece ser responsável por esse aumento de atividade dos neutrófilos de camundongos idosos. Esses resultados sugerem que a expressão do comportamento doentio de camundongos idosos é diferente, com manutenção do comportamento de exploração, e que esses camundongos seriam mais susceptíveis aos efeitos do choque endotóxico, devido à presença de maior quantidade de neutrófilos ativados no sangue. / Through the present work, it has been investigated the expression of sickness behavior and blood neutrophils activity in adult, middle-aged and aged mice, after gram negative (Escherichia coli) lipopolysaccharide treatment. Sickness behavior was evaluated through food ingestion and body weight. On the behavioral apparatus Open Field and Elevated Plus Maze, sickness behavior was evaluated through general activity, exploration and anxiety levels. Blood neutrophils activity was studied through flow cytometric analysis, assessing neutrophil\'s intensity and percentage of phagocytosis and neutrophil\'s intensity and percentage of oxidative burst, both induced by in vitroM stimulus of Staphylococcus aureus bacteria. Animals were treated either with saline solution or LPS (in the 200 µg/kg dose) and analysis were done 2 hours after treatment. In the case of food ingestioin and body weight, analysis were done through 3 days before experiment, and during 7 days after experiment. Results demonstrated that aged animals showed differences in sickness behavior expression, with a greater motivation to explore behavioral apparatus. Despite maintenance of Open Field and Elevated Plus Maze exploration, reduction in food ingestion and body weight were more pronounced in middle-aged and aged mice, after LPS treatment. Blood neutrophils activity, analysed through phagocytosis and oxidative burst, were higher in aged mice after LPS treatment. Lesser blood neutrophils migration to peritoneal cavity seems to be responsible for this enhancement in neutrophil activity. These results suggest that the expression of sickness behavior in aged mice is different, with maintenance of exploratory behavior, and that these mice would be more susceptible to endotoxic effects, due to the presence of higher quantity of activated neutrophils in blood.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Neuromielite Óptica (NMO), anteriormente considerada como um subtipo de Esclerose Múltipla, é uma doença autoimune, inflamatória do sistema nervoso central, na qual o sistema imune ataca a mielina dos neurônios localizados nos nervos ópticos e medula espinhal, produzindo, então, mielite e neurite óptica simultânea ou sequenciais. A patogênese da neuromielite óptica é influenciada pela combinação de fatores genéticos e ambientais, incluindo agentes infecciosos. Diferentes doenças infecciosas podem tanto desencadear como exacerbar a autoimunidade. Portanto, o objetivo do presente estudo foi de analisar a responsividade imune in vitro a Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Candida albicans em pacientes com NMO recorrente-remitente, e a correlacionar ao nível de incapacidade neurológica. Nesse contexto, a extensão da linfoproliferação e perfil de citocinas em resposta a S. aureus e C. albicans, em culturas de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) foram similares entre pacientes com NMO e indivíduos saudáveis. Entretanto, maior proliferação de células T associada à elevada liberação de IL-1β, IL-6 e IL-17 foi observada em culturas de células derivadas de pacientes com NMO quando estimuladas com E. coli. Ademais, nessas culturas, a produção de IL-10 foi significativamente menor quando comparada ao grupo controle. Ensaios conduzidos em culturas de CMSP depletadas de diferentes subtipos de linfócitos demonstraram que, enquanto células T CD4+ e T CD8+ produzem IL-6 em resposta a E. coli, a produção de IL-17 foi praticamente restrita às células T CD4+. Os níveis de IL-6 e IL-17 in vitro induzidos por E. coli foram correlacionados positivamente às incapacidades neurológicas. Essa maior tendência a produzir citocinas relacionadas ao perfil Th17 foi diretamente associada aos níveis de IL-23 produzidos por monócitos ativados com LPS. De modo interessante, níveis elevados de LPS foram quantificados no plasma de pacientes com NMO e estes foram correlacionados aos níveis plasmáticos de IL-6. Em conclusão, nossos resultados sugerem que uma maior responsividade a E. coli poderia estar envolvida na patogênese da NMO. Esse tipo de investigação é muito importante pois inibidores da ligação ou sinalização do TLR poderiam ser considerados terapias com grande potencial como adjuvantes no tratamento de pacientes com NMO. / Neuromyelitis optica (NMO), once considered as a subtype of Multiple Sclerosis, is an autoimmune, inflammatory disorder of the central nervous system in which the immune system attacks myelin of the neurons located at the optic nerves and spinal cord, thus producing a simultaneous or sequential optic neuritis and myelitis. The pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO) is influenced by a combination of genetic and environmental factors, including infectious agents. Different infectious diseases can both trigger or exacerbate autoimmunity. Therefore, the objective of the present work was to evaluate the in vitro immune responsiveness to Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans in remittent-recurrent NMO patients, and correlate it to the level of neurological disability. In this context, the extent of lymphoproliferation and cytokine profile in response to S. aureus- and C. albicans-stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) cultures was similar between NMO patients and healthy individuals. Nevertheless, a higher in vitro T cell proliferation associated with elevated IL-1β, IL-6 and IL-17 release was observed in NMO-derived E. coli-stimulated cell cultures. Additionally, in these cultures, the IL-10 production was significantly lower as compared with control group. Experiments performed with PBMC cultures depleted with different lymphocytes subsets demonstrated that, while both CD4+ and CD8+ T cells produced IL-6 in response to E. coli, the IL-17 production was mainly depended with CD4+ T cells.The in vitro E.coli-induced IL-6 and IL-17 levels were positively related with neurological disabilities. This higher tendency in producing Th-17-related cytokines was directly associated with IL-23 levels produced by LPS-activated monocytes. Interestingly, elevated LPS levels were quantified in the plasma of NMO patients and they were related to plasmatic levels of IL-6. In conclusion, our results suggest that a higher Th17-responsiveness to E. coli could be involved in the NMO pathogenesis. This kind of investigation is very important because inhibitors of TLR binding or signaling could be considered as great potential therapeutics as adjuvant in the treatment of NMO patients.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-08T22:35:40Z No. of bitstreams: 1 MarioEmilioTeixeiraDouradoJunior_TESE.pdf: 5285105 bytes, checksum: 0100fd5d41dfba7610de03558937e498 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-11T20:37:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarioEmilioTeixeiraDouradoJunior_TESE.pdf: 5285105 bytes, checksum: 0100fd5d41dfba7610de03558937e498 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T20:37:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarioEmilioTeixeiraDouradoJunior_TESE.pdf: 5285105 bytes, checksum: 0100fd5d41dfba7610de03558937e498 (MD5) Previous issue date: 2015-03-17 / Indrodu??o. A S?ndrome de Guillain-Barr? (SGB) ? uma polineuropatia imunomediada, sendo, atualmente, a mais frequente causa de paralisia aguda neuromuscular. As principais variantes dessa s?ndrome s?o: a polineuropatia desmielinizante inflamat?ria aguda (PDIA), a neuropatia axonal motora aguda (NAMA), a neuropatia axonal motora e sensitiva aguda (NAMSA), e a s?ndrome de Miller-Fisher. H? tamb?m diferen?as na distribui??o geogr?fica destas variantes. A resposta imune aberrante, p?s infec??o, parece ser resultante de um mimetismo molecular, devido a forma??o de autoanticorpos e ativa??o do sistema complemento e de citocinas. S?o encontrados polimorfismos bial?licos nos genes codificadores dos receptores das fra??es Fc das imunoglobulinas (FcRIIa, FcRIIIa e FcRIIIb) que afetam a afinidade e efici?ncia na resposta imune celular, sugerindo a exist?ncia de susceptibilidade individual no risco de desenvolver a SGB. No Brasil, h? poucos estudos epidemiol?gicos sobre a SGB e nenhum relato sobre a frequ?ncia das variantes e suas manifesta??es cl?nicas. Os objetivos deste estudo foram: (1) caracterizar a SGB e suas manifesta??es cl?nicas em uma coorte de pacientes com SGB oriundos do Estado do Rio Grande do Norte (RN); (2) determinar se polimorfismos em receptores FcR est?o envolvidos com o risco de doen?a, e (3) avaliar a express?o g?nica global buscando identificar poss?veis vias que poderiam ser moduladas na fase inicial da doen?a e, consequentemente, diminuir o tempo de doen?a. Metodologia. Foram recrutados 149 casos de SGB diagnosticados entre 1994- 2013 no RN, tendo sido avaliados os dados cl?nicos e laboratoriais visando a determinar a evolu??o. DNA e RNA foram extra?dos do sangue perif?rico e anticorpos antiganglios?deos foram determinados em amostras de soro. Foram genotipados polimorfismos nos genes FCGR2A e FCGR3A, em pessoas com SGB (n=141) e controles saud?veis (n=364), sendo ainda analisadas as express?es g?nicas globais de 12 pacientes com SGB, por RNAseq. As amostras de sangue para os estudos de express?o g?nica foram coletadas ao diagn?stico e p?srecupera??o. Resultados. A incid?ncia de SGB foi de 0,3/100 mil pessoas no RN, sem presen?a de sazonalidade, com os casos ocorrendo em uma idade mais jovem. A SGB foi precedida por infec??es em 63,7%, sendo a diarreia associada a variante axonal (p=0,025). A PDIA foi a variante mais frequente (81,8%), seguida de NAMA (14,7%) e de NAMSA (3,3%). A distribui??o da fraqueza muscular correlacionou com as variantes, sendo a proximal mais frequente na PDIA, enquanto a distal predominou na variante axonal. O nadir < 10 dias ocorreu em 84,6% dos indiv?duos na variante axonal e 42,4% dos casos com PDIA (P<0,0001). A forma desmielinizante apresentou uma recupera??o na deambula??o mais r?pida do que a variante axonal (P<0,0001). A mortalidade de SGB foi de 5,3%. O pior progn?stico aos 12 meses estava associado com a variante axonal (OR 17,063; P = 0,03) e no tempo de melhora um ponto na escala funcional de Hughes (OR 1,028; P = 0.03). As distribui??es dos gen?tipos e alelos em FCGR2A (p=0,367) e em FCGR3A (p=0,2430) n?o foram diferentes entre os pacientes com SGB e controles. A an?lise da express?o g?nica global mostrou varia??o na express?o dos mRNAs de isoformas de prote?nas associadas ? fase sintom?tica da doen?a. Conclus?es. N?o h? sazonalidade na ocorr?ncia da SGB no RN, havendo um predom?nio da variante desmielinizante e 50% dos casos tinham idade inferior a 20 anos. A variante axonal est? associada ao mau progn?stico. O diagn?stico precoce e a identifica??o da variante, acompanhada de interven??es adequadas, levam a diminui??o da morbidade a longo prazo. Varia??es polim?rficas nos genes de FCGR parecem n?o influenciar a susceptibilidade ou o curso da SGB nessa popula??o. Varia??es na express?o g?nica apontam para vias de desregula??o e altera??es em intera??es transcricionais, que podem ser utilizadas como potenciais alvos de modula??o. / Introduction. Guillain-Barr? syndrome (GBS) is an immune-mediated polyneuropathy and the principal cause of acute neuromuscular paralysis. The most prominent GBS subtypes are: acute inflammatory demyelinating polyneuropathy (AIDP), acute motor axonal neuropathy (AMAN), acute motor-sensory axonal neuropathy (AMSAN) and Fisher syndrome (FS). Differences in geographical distribution of variants have been reported. In Brazil, there are few studies describing the characteristics of GBS, but none on the frequency of GBS variants and their clinical manifestations. Infection-induced aberrant immune response resulting from molecular mimicry and formation of cross-reacting antibodies, contribute to complement activation. Functional biallelic polymorphism in immunoglobulin receptors that influence the affinity of IgG subclasses and the type of immune response have been described, suggesting genetic susceptibility to developing disease. It remains unclear whether individuals carrying different FCGR alleles have differential risk for GBS and?or disease severity. The goals of this study were: (1) To characterize GBS and describe the clinical findings in a cohort of patients with GBS from the state of Rio Grande do Norte, Brazil; (2) to determine whether polymorphism in FCGR were associated with development of GBS, and (3) to tease out whether the global gene expression studies could be a tool to identify pathways and transcriptional networks which could be regulated and decrease the time of disease. Methods. Clinical and laboratory data for 149 cases of GBS diagnosed from 1994 to 2013 were analyzed. Genomic DNA and total RNA were extracted from whole blood. Antigangliosides antibodies were determined in the sera. In addition, we also assessed whether FCGR polymorphism are present in GBS (n=141) and blood donors (n=364), and global gene expressions were determined for 12 participants with GBS. Blood samples were collected at the diagnosis and post-recovery. Results. AIDP was the most frequent variant (81.8%) of GBS, followed by AMAN (14.7%) and AMSAN (3.3%). The incidence of GBS was 0.3 ? 100,000 people for the state of Rio Grande do Norte and cases occurred at a younger age. GBS was preceded by infections, with the axonal variant associated with episodes of diarrhea (P = 0.025). Proximal weakness was more frequent in AIDP, and distal weakness predominant in the axonal variant. Compared to 42.4% of cases with AIDP (P<0.0001), 84.6% of cases with the axonal variant had nadir in <10 days. Individuals with the axonal variant took longer to recover deambulation (P<0.0001). The mortality of GBS was 5.3%. A worse outcome was related to an axonal variant (OR17.063; P=0.03) and time required to improve one point in the Hughes functional scale (OR 1.028; P=0.03). The FCGR genotypes and allele frequencies did not differ significantly between the patients with GBS and the controls (FCGR2A p=0.367 and FCGR3A p=0.2430). Global gene expression using RNAseq showed variation in transcript coding for protein isoforms during acute phase of disease. Conclusions. The annual incidence of GBS was 0.3 per 100,00 and there was no seasonal pattern. A predominance of the AIDP variant was seen, and the incidence of the disease decreased with age. The distribution of weakness is a function of the clinical variants, and individuals with the axonal variant had a poorer prognosis. Early diagnosis and variant identification leads to proper intervention decreasing in long-term morbidity. FCGR polymorphisms do not seem to influence susceptibility to GBS in this population. This study found deregulated genes and signs of transcriptional network alterations during the acute and recovery phases in GBS. Identification of pathways altered during disease might be target for immune regulation and with potential to ameliorate symptoms.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Neuromielite Óptica (NMO), anteriormente considerada como um subtipo de Esclerose Múltipla, é uma doença autoimune, inflamatória do sistema nervoso central, na qual o sistema imune ataca a mielina dos neurônios localizados nos nervos ópticos e medula espinhal, produzindo, então, mielite e neurite óptica simultânea ou sequenciais. A patogênese da neuromielite óptica é influenciada pela combinação de fatores genéticos e ambientais, incluindo agentes infecciosos. Diferentes doenças infecciosas podem tanto desencadear como exacerbar a autoimunidade. Portanto, o objetivo do presente estudo foi de analisar a responsividade imune in vitro a Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Candida albicans em pacientes com NMO recorrente-remitente, e a correlacionar ao nível de incapacidade neurológica. Nesse contexto, a extensão da linfoproliferação e perfil de citocinas em resposta a S. aureus e C. albicans, em culturas de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) foram similares entre pacientes com NMO e indivíduos saudáveis. Entretanto, maior proliferação de células T associada à elevada liberação de IL-1&#946;, IL-6 e IL-17 foi observada em culturas de células derivadas de pacientes com NMO quando estimuladas com E. coli. Ademais, nessas culturas, a produção de IL-10 foi significativamente menor quando comparada ao grupo controle. Ensaios conduzidos em culturas de CMSP depletadas de diferentes subtipos de linfócitos demonstraram que, enquanto células T CD4+ e T CD8+ produzem IL-6 em resposta a E. coli, a produção de IL-17 foi praticamente restrita às células T CD4+. Os níveis de IL-6 e IL-17 in vitro induzidos por E. coli foram correlacionados positivamente às incapacidades neurológicas. Essa maior tendência a produzir citocinas relacionadas ao perfil Th17 foi diretamente associada aos níveis de IL-23 produzidos por monócitos ativados com LPS. De modo interessante, níveis elevados de LPS foram quantificados no plasma de pacientes com NMO e estes foram correlacionados aos níveis plasmáticos de IL-6. Em conclusão, nossos resultados sugerem que uma maior responsividade a E. coli poderia estar envolvida na patogênese da NMO. Esse tipo de investigação é muito importante pois inibidores da ligação ou sinalização do TLR poderiam ser considerados terapias com grande potencial como adjuvantes no tratamento de pacientes com NMO. / Neuromyelitis optica (NMO), once considered as a subtype of Multiple Sclerosis, is an autoimmune, inflammatory disorder of the central nervous system in which the immune system attacks myelin of the neurons located at the optic nerves and spinal cord, thus producing a simultaneous or sequential optic neuritis and myelitis. The pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO) is influenced by a combination of genetic and environmental factors, including infectious agents. Different infectious diseases can both trigger or exacerbate autoimmunity. Therefore, the objective of the present work was to evaluate the in vitro immune responsiveness to Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans in remittent-recurrent NMO patients, and correlate it to the level of neurological disability. In this context, the extent of lymphoproliferation and cytokine profile in response to S. aureus- and C. albicans-stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) cultures was similar between NMO patients and healthy individuals. Nevertheless, a higher in vitro T cell proliferation associated with elevated IL-1&#946;, IL-6 and IL-17 release was observed in NMO-derived E. coli-stimulated cell cultures. Additionally, in these cultures, the IL-10 production was significantly lower as compared with control group. Experiments performed with PBMC cultures depleted with different lymphocytes subsets demonstrated that, while both CD4+ and CD8+ T cells produced IL-6 in response to E. coli, the IL-17 production was mainly depended with CD4+ T cells.The in vitro E.coli-induced IL-6 and IL-17 levels were positively related with neurological disabilities. This higher tendency in producing Th-17-related cytokines was directly associated with IL-23 levels produced by LPS-activated monocytes. Interestingly, elevated LPS levels were quantified in the plasma of NMO patients and they were related to plasmatic levels of IL-6. In conclusion, our results suggest that a higher Th17-responsiveness to E. coli could be involved in the NMO pathogenesis. This kind of investigation is very important because inhibitors of TLR binding or signaling could be considered as great potential therapeutics as adjuvant in the treatment of NMO patients.

Ecstasy é o nome popular do 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA), uma droga de abuso muito utilizada por adultos jovens. Diferentes relatos de caso têm mostrado correlações positivas entre o abuso do Ecstasy e doenças infecciosas. Muitos estudos em modelos animais mostraram que o MDMA induz alterações de imunidade inata e adquirida; entretanto pouco se sabe sobre os mecanismos pelos quais estes efeitos ocorrem. Buscamos neste trabalho por efeitos da administração i.p. de MDMA sobre parâmetros comportamentais, neuroendócrinos e de atividade de neutrófilos e o fizemos à luz de mecanismos neuroimunomodulatórios. Nossos resultados mostraram que o MDMA (5,0; 8,0; 10,0 e 20,0 mg/kg) produz, 30 minutos após a administração (1) aumento da atividade locomotora avaliada no campo aberto e no LCE e (2) diminuição do burst oxidativo de neutrófilos após indução por Staphylococcus aureus nas doses de 8,0; 10,0 e 20,0 mg/kg. Adicionalmente, 60 minutos após a administração de 10,0 mg/kg observou-se (3) um aumento de atividade locomotora avaliada no campo aberto e no LCE, (4) aumento do turnover de noradrenalina e de dopamina no hipotálamo; (5) aumento do turnover de dopamina no estriato; (6) aumento dos níveis séricos de corticosterona; (7) diminuição do burst oxidativo após indução por SAPI e PMA e, também, da porcentagem e da intensidade de fagocitose por neutrófilos sanguíneos; (8) aumento do número de eritrócitos, da quantidade de hemoglobina e da porcentagem do hematócrito e diminuição do número de linfócitos sanguíneos; (9) diminuição do número total de células na medula óssea; (10) aumento do número de leucócitos e (11) diminuição do peso relativo do baço. A exposição in vitro ao MDMA (12) não alterou o burst oxidativo e a fagocitose por neutrófilos. Esses resultados sugerem que o MDMA produz ao mesmo tempo alterações comportamentais, neuroquímicas, endócrinas e imunológicas em camundongos. A estimulação motora dos animais parece relacionada a um aumento da atividade catecolaminérgica central e, muito especialmente, do sistema dopaminérgico estriatal. É possível sugerir que a alteração na imunidade inata após MDMA esteja relacionada ao aumento de atividade do eixo HHA e, conseqüentemente, dos níveis séricos de corticosterona. Não se descarta, porém, uma possível ativação do SNAS induzida pelo MDMA. Finalmente, observamos que o MDMA não tem efeito direto sobre neutrófilos. / Ecstasy is the popular name of N-metil-3,4 methylenedioxymethamphetamine (MDMA), a drug of abuse widely used by young adults. Different case reports have been demonstrating the existence of a positive correlation between Ecstasy abuse and the presence of infectious disease. Many studies conducted in animal models showed that MDMA reduces innate and adaptative immunity. However, little is known about the mechanisms behind these reported effects. In this work we searched for effects of i.p. MDMA administration on behavioral, neuroendocrines, and neutrophil activity in mice, especially parameters looking for neuroimmune relationships. We showed that MDMA treatment (5,0; 8,0; 10,0; and 20,0 mg/kg) produces after 30 minutes (1) increased locomotor activity in the open field and plus maze apparatuses, (2) decreased neutrophil oxidative burst after Staphylococcus aureus (SAPI) after in vitro induction 8,0, 10,0, and 20,0 mg/kg doses. Additionally, 60 minutes after MDMA (10,0 mg/kg) we observed (3) increased locomotor activity in the open field and plus maze apparatuses, (4) increased noradrenaline and dopamine turnover in the hypothalamus, (5) increased dopamine turnover in the striatum, (6) increased level of serum corticosterone, (7) decreased neutrophil oxidative burst after SAPI and PMA inductions, and also decreased percentage and intensity of neutrophil phagocitosis, (8) increased erythrocyte number, hemoglobin level, and hematocrit, and decreased peripheral blood Iymphocyte number, (9) decreased bane marrow total cell number, (10) increased leucocyte number on spleen and (11) splenic weight reduction. It was also observed that (12) in vitro exposure to MDMA induced no effects on both neutrophil oxidative burst and phagocytosis. These results suggest that MDMA produces at the same time behavioral, neurochemical, endocrine, and immunological alterations in mice. The increased locomotor activity observed seems to be related to an action on central catecholaminergic activity, mainly, at the level of the dopaminergic striatal system. It is also possible to suggest that the observed innate immunity alterations are related to an increased HPA axis activity induced by MDMA, via corticosterone. However, we cannot discharge a possible SNS activation induced by MDMA, a fact that could have contributed to the present reported effects. Finally, and importantly we observed that in vitro MDMA has no effects on neutrophil activity.