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Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As doenças mitocondriais são o resultado de mutações herdadas ou
espontâneas do DNA mitocondrial (DNAmt) ou DNA nuclear (DNAn) levando à
função anormal do sistema de fosforilação oxidativa. Um dos defeitos no DNAn
mais freqüentemente descritos neste grupo de doenças são as deficiências
isoladas do Complexo I, que é o maior complexo enzimático da cadeia
respiratória com 42 subunidades (7 codificadas pelo DNAmt). Propõe-se que a
subunidade de 39kDa (CI-39kDa) apresente estreita correlação com a atividade
enzimática do complexo I. Sendo assim, poderíamos interrogar se a diminuição
da expressão de CI-39kDa, detectada por Western blotting, poderia ser utilizada
como um método diagnóstico para as deficiências do Complexo I, além deste
método ter como vantagem a utilização de pequena porção de tecido congelado
obtido por biópsia. Este trabalho teve como objetivo avaliar a freqüência da
diminuição da proteína mitocondrial CI-39kDa no músculo esquelético de
pacientes com suspeita de doença mitocondrial, e verificar se mutações
conhecidas em genes codificadores de subunidades do Complexo I estariam
associadas à diminuição da expressão desta proteína. As proteínas foram
obtidas através do lisado de músculo esquelético de 56 pacientes e 21 controles.
As proteínas foram separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida
denaturante, transferidas para membrana PVDF, que foi incubada com um
anticorpo anti-CI-39kDa e SDH-Fp (succinato desidrogenase-fração
flavoproteína). As bandas foram obtidas por autoradiografia e quantificadas por
densitometria. A diminuição da expressão da proteína CI-39kDa, encontrada nos
casos com diagnóstico possível e provável para doença mitocondrial, foi de 6%.
O estudo por seqüenciamento mostrou somente uma alteração suspeita:
mutação de sentido ainda não descrita em NDUFV2. Nossos resultados
mostraram que: (1) a freqüência da diminuição da expressão de CI-39kDa foi
baixa nos casos estudados com suspeita de doença mitocondrial; (2) a avaliação
molecular desses casos mostrou que mutações em genes codificados pelo
DNAmt, e mutações conhecidas em genes nucleares para subunidades do
complexo I, não foram a causa do defeito destes pacientes; (3) a alteração de
NDUFV2 pode ser a causa de uma disfunção do complexo I, a qual deverá ser
melhor investigada para confirmar a sua patogenicidade. A ampliação deste
estudo poderá confirmar a utilidade deste método para o diagnóstico das
deficiências do Complexo I. / Mitochondrial diseases are caused by mutations in mitochondrial DNA
(mtDNA) or nuclear DNA (nDNA), leading to abnormal function of the oxidative
phosphorylation. One of the most frequent nDNA defects described in this group
of diseases are Complex I deficiency. Complex I is the largest enzymatic
complex of the respiratory chain, contains 42 subunits (7 are mtDNA encoded). It
is proposed that a 39kDa subunit (CI-39kDa) expression closely correlates with
the enzymatic activity of complex I. Thus we could hypothesize that a decrease in
the expression of CI-39kDa, detected by Western blotting, would be a good
diagnostic method for complex I deficiencies, considering the requirement of low
amounts of frozen biopsied tissue as a good advantage of this method. The aim
of this study was to evaluate the frequency of decreased expression of the CI-
39kDa in skeletal muscle of patients with a suspicion for mitochondrial disease
and to verify whether known mutations in Complex I subunit genes are
associated with a decrease in the expression of this protein. Total proteins were
obtained by skeletal muscle lysates of 56 patients and 21 controls. Proteins were
electrophoresed through a denaturing polyacrylamide gel, transferred to a PVDF
membrane and incubated with antibodies against CI-39kDa and SDH-Fp
(succinate dehydrogenase-flavoprotein subunit). After autoradiography the bands
were quantified by densitometry. A decreased expression of CI-39kDa was found
in 6 % of the cases with a possible or probable diagnosis of mitochondrial
disease. Sequencing studies demonstrated only one abnormality: a not yet
described missense mutation in NDUFV2. Our results show that: (1) the
frequency of a decreased expression in CI-39kDa was low in the studied cases
with a suspicion of mitochondrial disease; (2) molecular studies of these cases
showed that mutations in mtDNA encoded genes and known mutations in nuclear
encoded genes for complex I subunits were not the cause of the defects
observed in these patients; (3) the mutation in NDUFV2 can be the cause of a
complex I defect, but further investigations are still needed to confirm its
pathogenicity. Confirmation of the utility of this method for the diagnosis of
complex I deficiency will probably be achieved by a continuation of this study.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/39422 |
| Date | January 2005 |
| Creators | Rodrigues, Andresa De Santi [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Tengan, Celia Harumi [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 100 f. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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