Submitted by Andrea Hayashi (deachan@gmail.com) on 2016-07-29T18:03:39Z No. of bitstreams: 1 publico-39-.pdf: 435579 bytes, checksum: 128efa8faf3057e58d047183c5a9e336 (MD5) / Approved for entry into archive by Andrea Hayashi (deachan@gmail.com) on 2016-07-29T18:11:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 publico-39-.pdf: 435579 bytes, checksum: 128efa8faf3057e58d047183c5a9e336 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T18:11:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 publico-39-.pdf: 435579 bytes, checksum: 128efa8faf3057e58d047183c5a9e336 (MD5) Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As doenças mitocondriais são o resultado de mutações herdadas ou espontâneas do DNA mitocondrial (DNAmt) ou DNA nuclear (DNAn) levando à função anormal do sistema de fosforilação oxidativa. Um dos defeitos no DNAn mais freqüentemente descritos neste grupo de doenças são as deficiências isoladas do Complexo I, que é o maior complexo enzimático da cadeia respiratória com 42 subunidades (7 codificadas pelo DNAmt). Propõe-se que a subunidade de 39kDa (CI-39kDa) apresente estreita correlação com a atividade enzimática do complexo I. Sendo assim, poderíamos interrogar se a diminuição da expressão de CI-39kDa, detectada por Western blotting, poderia ser utilizada como um método diagnóstico para as deficiências do Complexo I, além deste método ter como vantagem a utilização de pequena porção de tecido congelado obtido por biópsia. Este trabalho teve como objetivo avaliar a freqüência da diminuição da proteína mitocondrial CI-39kDa no músculo esquelético de pacientes com suspeita de doença mitocondrial, e verificar se mutações conhecidas em genes codificadores de subunidades do Complexo I estariam associadas à diminuição da expressão desta proteína. As proteínas foram obtidas através do lisado de músculo esquelético de 56 pacientes e 21 controles. As proteínas foram separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida denaturante, transferidas para membrana PVDF, que foi incubada com um anticorpo anti-CI-39kDa e SDH-Fp (succinato desidrogenase-fração flavoproteína). As bandas foram obtidas por autoradiografia e quantificadas por densitometria. A diminuição da expressão da proteína CI-39kDa, encontrada nos casos com diagnóstico possível e provável para doença mitocondrial, foi de 6%. O estudo por seqüenciamento mostrou somente uma alteração suspeita: mutação de sentido ainda não descrita em NDUFV2. Nossos resultados mostraram que: (1) a freqüência da diminuição da expressão de CI-39kDa foi baixa nos casos estudados com suspeita de doença mitocondrial; (2) a avaliação molecular desses casos mostrou que mutações em genes codificados pelo DNAmt, e mutações conhecidas em genes nucleares para subunidades do complexo I, não foram a causa do defeito destes pacientes; (3) a alteração de NDUFV2 pode ser a causa de uma disfunção do complexo I, a qual deverá ser melhor investigada para confirmar a sua patogenicidade. A ampliação deste estudo poderá confirmar a utilidade deste método para o diagnóstico das deficiências do Complexo I. / Mitochondrial diseases are caused by mutations in mitochondrial DNA (mtDNA) or nuclear DNA (nDNA), leading to abnormal function of the oxidative phosphorylation. One of the most frequent nDNA defects described in this group of diseases are Complex I deficiency. Complex I is the largest enzymatic complex of the respiratory chain, contains 42 subunits (7 are mtDNA encoded). It is proposed that a 39kDa subunit (CI-39kDa) expression closely correlates with the enzymatic activity of complex I. Thus we could hypothesize that a decrease in the expression of CI-39kDa, detected by Western blotting, would be a good diagnostic method for complex I deficiencies, considering the requirement of low amounts of frozen biopsied tissue as a good advantage of this method. The aim of this study was to evaluate the frequency of decreased expression of the CI- 39kDa in skeletal muscle of patients with a suspicion for mitochondrial disease and to verify whether known mutations in Complex I subunit genes are associated with a decrease in the expression of this protein. Total proteins were obtained by skeletal muscle lysates of 56 patients and 21 controls. Proteins were electrophoresed through a denaturing polyacrylamide gel, transferred to a PVDF membrane and incubated with antibodies against CI-39kDa and SDH-Fp (succinate dehydrogenase-flavoprotein subunit). After autoradiography the bands were quantified by densitometry. A decreased expression of CI-39kDa was found in 6 % of the cases with a possible or probable diagnosis of mitochondrial disease. Sequencing studies demonstrated only one abnormality: a not yet described missense mutation in NDUFV2. Our results show that: (1) the frequency of a decreased expression in CI-39kDa was low in the studied cases with a suspicion of mitochondrial disease; (2) molecular studies of these cases showed that mutations in mtDNA encoded genes and known mutations in nuclear encoded genes for complex I subunits were not the cause of the defects observed in these patients; (3) the mutation in NDUFV2 can be the cause of a complex I defect, but further investigations are still needed to confirm its pathogenicity. Confirmation of the utility of this method for the diagnosis of complex I deficiency will probably be achieved by a continuation of this study.

O objetivo desse trabalho foi observar a evolução do modelo de jogo entre as categorias de base do voleibol feminino, analisando como cada categoria conquista o ponto e a como as variantes das ações de jogo que antecedem o ataque influenciam no seu desempenho no complexo I. Foram analisados três jogos das quatro melhores equipes classificadas da categoria infantil, infanto-juvenil e juvenil feminino, participantes do quadrangular final do Campeonato Metropolitano de São Paulo em 2009 organizado pela FPV. A coleta de dados foi realizada pelo sistema de vídeo. A análise dos dados comportou a estatística descritiva, pela obtenção de frequências e porcentagens, e a estatística inferencial pelo recurso ao Qui-quadrado e ao Phi de Cramer, no sentido de verificar a possível relação de dependência entre as vaiáveis do estudo. Através da análise descritiva observamos que a categoria infantil conquista mais pontos com o erro do adversário e as categorias infanto-juvenil e juvenil conquistam mais pontos com a ação de ataque. Com o avanço de categoria observamos uma tendência de aumento na recepção perfeita, na utilização do levantamento com toque em suspensão, do ataque contra um bloqueio duplo quebrado, na realização do ataque pela zona 2 bem como, um aumento na ocorrência dos ataques de 1º e 2º tempo e do ataque ponto. Assim como, uma diminuição na utilização do toque sem salto para o levantamento, dos ataques contra um bloqueio duplo compacto, da utilização dos ataques de 3º tempo e dos ataques que proporcionam a continuação do rally. Pela análise inferencial observamos uma relação de dependência estatisticamente significante do resultado do ataque com o resultado da recepção, a zona de levantamento, a técnica de levantamento, o resultado do levantamento, bem como com a zona de ataque, o tempo de ataque e tipo de ataque para todas as categorias / The main purpose of this study was to determine game model evolution on female volleyball under-age divisions. It was analyzed how each category wins the point and how the game actions that occur before the attack affects the performance on complex I. We analyzed three games of the four best ranked female teams in infantil, infanto-juvenil and juvenil divisions, participants of the city of São Paulo Championship in 2009. The data base was captured using video system. Data analysis included descriptive statistics, by obtaining frequencies and percentages, and inferential statistics by using chi- square and Phi Cramer, in order to verify the possible relationship of dependency between the study variables. Descriptive analysis revealed that the infantil division obtain more points with the errors of the opponent and the infanto-juvenil and juvenil divisions obtain more points with the attack. As players advance through the age divisions, there is a trend toward increasing the occurrence of perfect receptions, the use of jump sets, the attack against a broken double block, the attack in zone 2 as well as an increase in the occurrence of attacks of 1st and 2nd tempo and the attack point. Moreover, we observed a decrease in the use of overhead set without jump, attack against a compact double block, the use of 3rd tempo attack and attack that provide continued rally. For the inferential analysis we observed a statistically significant relationship of dependency between attack result and the serve reception result, the set zone, set technique, the result of the set, as well as the attack zone, the attack tempo and type of attack for all categories

O objetivo desse trabalho foi observar a evolução do modelo de jogo entre as categorias de base do voleibol feminino, analisando como cada categoria conquista o ponto e a como as variantes das ações de jogo que antecedem o ataque influenciam no seu desempenho no complexo I. Foram analisados três jogos das quatro melhores equipes classificadas da categoria infantil, infanto-juvenil e juvenil feminino, participantes do quadrangular final do Campeonato Metropolitano de São Paulo em 2009 organizado pela FPV. A coleta de dados foi realizada pelo sistema de vídeo. A análise dos dados comportou a estatística descritiva, pela obtenção de frequências e porcentagens, e a estatística inferencial pelo recurso ao Qui-quadrado e ao Phi de Cramer, no sentido de verificar a possível relação de dependência entre as vaiáveis do estudo. Através da análise descritiva observamos que a categoria infantil conquista mais pontos com o erro do adversário e as categorias infanto-juvenil e juvenil conquistam mais pontos com a ação de ataque. Com o avanço de categoria observamos uma tendência de aumento na recepção perfeita, na utilização do levantamento com toque em suspensão, do ataque contra um bloqueio duplo quebrado, na realização do ataque pela zona 2 bem como, um aumento na ocorrência dos ataques de 1º e 2º tempo e do ataque ponto. Assim como, uma diminuição na utilização do toque sem salto para o levantamento, dos ataques contra um bloqueio duplo compacto, da utilização dos ataques de 3º tempo e dos ataques que proporcionam a continuação do rally. Pela análise inferencial observamos uma relação de dependência estatisticamente significante do resultado do ataque com o resultado da recepção, a zona de levantamento, a técnica de levantamento, o resultado do levantamento, bem como com a zona de ataque, o tempo de ataque e tipo de ataque para todas as categorias / The main purpose of this study was to determine game model evolution on female volleyball under-age divisions. It was analyzed how each category wins the point and how the game actions that occur before the attack affects the performance on complex I. We analyzed three games of the four best ranked female teams in infantil, infanto-juvenil and juvenil divisions, participants of the city of São Paulo Championship in 2009. The data base was captured using video system. Data analysis included descriptive statistics, by obtaining frequencies and percentages, and inferential statistics by using chi- square and Phi Cramer, in order to verify the possible relationship of dependency between the study variables. Descriptive analysis revealed that the infantil division obtain more points with the errors of the opponent and the infanto-juvenil and juvenil divisions obtain more points with the attack. As players advance through the age divisions, there is a trend toward increasing the occurrence of perfect receptions, the use of jump sets, the attack against a broken double block, the attack in zone 2 as well as an increase in the occurrence of attacks of 1st and 2nd tempo and the attack point. Moreover, we observed a decrease in the use of overhead set without jump, attack against a compact double block, the use of 3rd tempo attack and attack that provide continued rally. For the inferential analysis we observed a statistically significant relationship of dependency between attack result and the serve reception result, the set zone, set technique, the result of the set, as well as the attack zone, the attack tempo and type of attack for all categories

Orientador: Roger Frigério Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:18:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Michelini_LuizGuilhermeBueno_M.pdf: 1602537 bytes, checksum: f58032fd3eaf359e8f094658a3612c02 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A inibição parcial do Complexo I da cadeia respiratória mitocondrial em ratos tratados cronicamente com rotenona está associada com o desenvolvimento de características neuroquímicas, comportamentais e neuropatológicas da doença de Parkinson. Os objetivos deste trabalho foram (i) caracterizar os efeitos de uma inibição parcial do Complexo I por rotenona na produção de peróxido de hidrogênio (H2O2) por mitocôndrias de cérebro de ratos (MCR) em diferentes estados respiratórios e (ii) avaliar a suscetibilidade de MCR velhos (24 meses) à inibição do consumo de oxigênio (O2) e ao estímulo da produção de H2O2 por rotenona em comparação a MCR adultos (3-4 meses). A análise do potencial de membrana por citometria de fluxo em mitocôndrias isoladas indicou que a adição de rotenona promoveu uma inibição uniforme da respiração mitocondrial nestas organelas. Quando mitocôndrias foram incubadas na presença de uma baixa concentração de rotenona (10 nM) e de substratos geradores de NADH, o consumo de O2 foi reduzido de 45,9±1,0 para 26,4±2,6 nmol O2.mg-1.min-1 e de 7,8±0,3 para 6,3±0,3 nmol O2.mg-1.min-1 nos estados respiratórios 3 (respiração estimulada por ADP) e 4 (respiração de repouso), respectivamente. Nessas condições, a produção mitocondrial de H2O2 foi estimulada de 12,2±1,1 para 21,0±1,2 pmol H2O2.mg-1.min-1 e de 56,5±4,7 para 95,0±11,1 pmol H2O2.mg-1.min-1 nos estados respiratórios 3 e 4, respectivamente. Resultados similares foram observados ao comparar preparações mitocondriais enriquecidas com organelas sinápticas e não-sinápticas ou quando o íon 1-metil-4-fenilpiridina (MPP+) foi utilizado como inibidor de Complexo I mitocondrial. O estímulo da produção de H2O2 por rotenona nos estados respiratórios 3 e 4 foi associado a um aumento do estado reduzido de nucleotídeos de nicotinamida endógenos. Na respiração mitocondrial com succinato, onde a maior parte da produção de H2O2 se origina do fluxo reverso de elétrons do Complexo II para o I, baixas concentrações de rotenona inibiram a produção de H2O2. Rotenona não exerceu efeito sobre a eliminação mitocondrial de concentrações micromolares de H2O2. Em sinaptossomas intactos, observamos que rotenona 10 nM estimulou a liberação de H2O2 em 20,2±3,3% no estado respiratório basal. Ao compararmos MCR adultos e velhos, verificamos que o consumo de O2 no estado respiratório 3 e a atividade da citrato sintase foram 21,0±3,3% e 17,0±5,4% mais baixos em MCR velhos. Experimentos conduzidos na presença de diferentes concentrações de rotenona (5, 10 e 100 nM) demonstraram sensibilidade similar à inibição do consumo de O2 por rotenona no estado respiratório 3, com IC50 de 7,8±0,4 e 6,5±0,5 nM para MCR adultos e velhos, respectivamente. De acordo com esses resultados, o estímulo da produção de H2O2 observado foi similar em MCR adultos e velhos, tratadas com diferentes concentrações de rotenona. Concluímos que, uma inibição parcial do Complexo I pode resultar em uma crise energética e/ou estresse oxidativo mitocondrial, enquanto o primeiro evento predominaria numa situação de alta demanda de fosforilação oxidativa, o segundo ocorreria em condições de respiração de repouso. Em adição, os experimentos com ratos velhos indicaram que rotenona exerce efeitos similares no consumo de O2 e na produção de H2O2 em MCR adultos e velhos / Abstract: Partial inhibition of mitochondrial Complex I is associated with the development of neurochemical, behavioral, and neuropathological features of Parkinson's disease in rats chronically and systemically treated with rotenone. The aims of this work were (i) to characterize the effects of partial inhibition of respiratory Complex I by rotenone on H2O2 production by rat brain mitochondria in different respiratory states and (ii) to evaluate the susceptibility of brain mitochondria from old rats (24 month-old) to rotenone-induced inhibition of oxygen consumption and increased generation of H2O2 when compared with organelles from adult rats (3-4 month-old). Flow cytometric analysis of membrane potential in isolated mitochondria indicated that rotenone leads to uniform respiratory inhibition when added to a suspension of these organelles. When mitochondria were incubated in the presence of a low concentration of rotenone (10 nM) and NADH-linked substrates, oxygen consumption was reduced from 45.9±1.0 to 26.4±2.6 nmol O2.mg-1.min-1 and from 7.8±0.3 to 6.3±0.3 nmol O2.mg-1.min-1 in respiratory states 3 (ADP-stimulated respiration) and 4 (resting respiration), respectively. Under these conditions, mitochondrial H2O2 production was stimulated from 12.2±1.1 to 21.0±1.2 pmol H2O2.mg-1.min-1 and 56.5±4.7 to 95.0±11.1 pmol H2O2.mg-1.min-1 in respiratory states 3 and 4, respectively. Similar results were observed when comparing mitochondrial preparations enriched with synaptic or nonsynaptic organelles or when 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP+) ion was used as a respiratory Complex I inhibitor. Rotenone-stimulated H2O2 production in respiratory states 3 and 4 was associated with a high reduction state of endogenous nicotinamide nucleotides. In succinate-supported mitochondrial respiration, where most of the mitochondrial H2O2 production relies on electron backflow from Complex II to Complex I, low rotenone concentrations inhibited H2O2 production. Rotenone had no effect on mitochondrial elimination of micromolar concentrations of H2O2. In intact synaptosomes, we observed that 10 nM rotenone stimulated H2O2 release by 20.2 ± 3.3% under basal respiratory state. When comparing isolated brain mitochondria from adult and old rats we observed that oxygen consumption under respiratory state 3 and citrate synthase activity were 21.0±3.3% and 17.0±5.4% lower in mitochondria from old rats. Experiments conducted in the presence of different rotenone concentrations (5, 10 and 100 nM) showed that brain mitochondria from adult and old rats have similar sensitive to rotenone-induced inhibition of oxygen consumption in respiratory state 3, with IC50 of 7.8±0.4 and 6.5±0.5 nM for adult and old rats, respectively. In line with these results, similar stimulations in H2O2 production were observed in mitochondria from adult and old rats treated with different concentrations of rotenone. We conclude that partial Complex I inhibition may result in mitochondrial energy crisis and oxidative stress, the former being predominant under oxidative phosphorylation and the latter under resting respiration conditions. Rotenone exerts similar effects on oxygen consumption and H2O2 production by isolated brain mitochondria from adult and old rats / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Ciências