O objetivo deste estudo foi determinar o papel do GDF-9 sozinho ou em combinaÃÃo com
FSH sobre a viabilidade, crescimento e expressÃo do RNAm para PCNA, HAS 1, HAS 2,
versican e perlecan em folÃculos secundÃrios bovinos cultivados in vitro. Para estudos in vitro,
folÃculos secundÃrios bovinos foram isolados e cultivados por doze dias, na presenÃa de MEM
sozinho ou suplementado com GDF-9 (200 ng/mL), FSH (D0-D6: 100 ng/mL e de D7-D12:
500 ng/mL) ou ambos. DiÃmetro folicular, viabilidade e formaÃÃo de antro foram avaliados
durante o cultivo. Para avaliar os nÃveis de RNAm para PCNA, HAS 1, HAS 2, perlecan e
versican em folÃculos apÃs 12 dias de cultivo, o RNA total foi extraÃdo e o cDNA foi
sintetizado. Os nÃveis de RNAm foram quantificados por PCR em tempo real. O teste
Kruskal-Wallis foi usado para comparar o diÃmetro folicular. O teste Qui-quadrado foi
utilizado para comparar a porcentagem de viabilidade e formaÃÃo de antro de folÃculos apÃs o
cultivo in vitro (p<0,05), enquanto ANOVA seguido pelo teste de Tukey foram utilizados
para avaliar os dados de expressÃo do RNAm nos folÃculos cultivados (p<0,05). Os resultados
mostram que apÃs 6 dias de cultivo, FSH sozinho ou associado com GDF-9 aumentaram o
diÃmetro folicular em relaÃÃo ao meio controle. AlÃm disso, apÃs 12 dias de cultivo, FSH
promoveu um aumento no diÃmetro folicular, enquanto a associaÃÃo de FSH com GDF-9
reduziu significativamente o diÃmetro folicular quando comparado com folÃculos cultivados
em MEM acrescido de FSH. AlÃm disso, FSH e GDF-9 aumentaram a formaÃÃo de antro
apÃs 12 dias de cultivo (P<0,05). Apesar de GDF-9 ter reduzido significativamente os nÃveis
de RNA para HAS 1 quando comparado ao MEM, esse fator aumentou os nÃveis de versican e
perlecan. AlÃm disso, a presenÃa de ambos FSH e GDF-9 aumentaram os nÃveis de RNAm
para HAS 2, porÃm, reduziu os nÃveis de RNAm para PCNA. AlÃm disso, FSH tambÃm atua
reduzindo os nÃveis de RNAm para o PCNA. Em conclusÃo, FSH e/ou GDF-9 promovem o
crescimento folicular e formaÃÃo de antro, e GDF-9 estimula a expressÃo de versican e
perlecan e interage positivamente com FSH para o aumento da expressÃo de HAS 2. / The aim of this study was to determine the role of GDF-9 alone or in combination with FSH
on growth, viability and on the mRNA expression of PCNA, HAS 1, HAS 2, versican and
perlecan in bovine secondary follicles cultured in vitro. For in vitro studies, bovine secondary
follicles were isolated and cultured for twelve days in the presence of MEM alone or
supplemented with GDF-9 (200 ng/mL), FSH (D0-D6: 100 ng/mL and of D7-D12: 500
ng/mL) or both. Follicular diameter, viability and antrum formation were evaluated during
culture. To evaluate the mRNA levels for PCNA, perlecan, versican, HAS 1 and 2 in follicles
after 12 days of culture, total RNA was extracted and cDNA was synthesized. The levels of
mRNA were quantified by real time PCR. Kruskal-Wallis test were used to compare the
follicular diameter. The chi-square test was used to compare the percentage of viability and
antrum formation of follicles after in vitro culture (p<0.05), whereas ANOVA followed by
Tukey's test were used to evaluate the mRNA expression data in cultured follicles (p<0.05).
The results show that after 6 days of culture, FSH alone or associated with GDF-9 increased
follicular diameter in relation to control medium. Moreover, after 12 days of culture, FSH
promoted an increase in follicular diameter, while the association of FSH with GDF-9 significantly reduced follicular diameter when compared with follicles cultured in MEM plus FSH. Furthermore, FSH and GDF-9 increased the antrum formation after 12 days of culture (P<0.05). Despite GDF-9 had significantly reduced the levels of mRNA for HAS 1 when compared to MEM, this factor has increased the levels of versican and perlecan. In addition, the presence of both FSH and GDF-9 increased mRNA levels for HAS 2, but reduced level those for PCNA. In addition, FSH also acts by reducing mRNA levels for PCNA. In conclusion, FSH and/or GDF-9 promotes the follicular growth and antrum formation, and
GDF-9 stimulates the expression of versican and perlecan and interact positively with FSH to
the increased expression of HAS 2
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5449 |
| Date | 28 February 2012 |
| Creators | Gisvani Lopes de Vasconcelos |
| Contributors | Josà Roberto Viana Silva, Rodrigo Maranguape Silva da Cunha, Ana Paula Ribeiro Rodrigues |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Biotecnologia (Campus da UFC em Sobral-CE), UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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