Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação em Farmácia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T07:43:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1
274209.pdf: 14556379 bytes, checksum: 6f33496ccc709255d074d7cf5e2469d9 (MD5) / Os agentes antineoplásicos atingem células que estão em processo de divisão celular, assim, a rápida taxa de renovação celular e diferenciação da medula óssea (MO) tornam o sistema hematopoiético um alvo suscetível à toxicidade por esses agentes. A MO é formada por um estroma composto de muitos tipos celulares (fibroblastos, macrófagos, células endoteliais e adipócitos) e uma matriz extracelular que juntos formam um microambiente ideal favorecendo a modulação da quiescência, auto-renovação e comprometimento de células-tronco mesenquimais (CTMs), bem como, proliferação, maturação e apoptose de células hematopoiéticas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do Mesilato de Imatinibe (MI), um fármaco inibidor de proteínas e receptores tirosinoquinases como c-Kit, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de célula-tronco (SCF), c-Abl, BCR-ABL envolvidos em diferentes vias de sinalização celular; sobre células progenitoras hematopoiéticas (CFU-GM) e células do estroma da MO de camundongos saudáveis. Por meio de ensaios clonogênicos em meio semi-sólido e cultura de células aderentes do estroma da MO, avaliamos o potencial mielossupressor do MI através de ensaio de viabilidade celular MTT e Laranja de Acridina/ Brometo de Etídio (LA/BE), citoquímica para identificação de adipócitos, ciclo celular, proliferação celular por incorporação do BrdU e expressão de alfa-actina de músculo liso (a-SMA). Quanto às células hematopoiéticas, os resultados demonstraram que o MI reduziu gradativamente o crescimento de colônias de granulócitos/macrófagos (CFU-GM), a IC50 obtida foi 26,5µM e a inibição total ocorreu em 60µM. Quanto às células do estroma, no 4º e 8º dias de cultura, não houve diferença significativa no percentual de proliferação avaliado pela incorporação de BrdU, sendo que em 10µM houve uma tendência em aumentar a proliferação. No 14º dia a proliferação diminuiu gradativamente e com 7,5µM a proliferação foi reduzida a aproximadamente 5%. O percentual de células viáveis por MTT foi semelhante no 7º e 14º dias, aumentando até 10µM e então reduzindo até atingir 0% em 25µM. A morfologia da maioria das células não tratadas e células tratadas com baixas concentrações de MI (2,5µM) era tipicamente fibroblástica, e conforme se aumentou a concentração de MI (principalmente a partir de 10µM), predominaram as células de morfologia arredondada, do tipo macrófago, as quais apresentaram inibição apenas em altas concentrações (20-25µM). A fluorescência com LA/BE mostrou os mesmos resultados vistos no MTT e revelou a presença de corpos apoptóticos, principalmente em 20µM, confirmando o efeito do fármaco na viabilidade celular. O ciclo celular das células do estroma da MO no 14º dia de cultivo mostrou a ocorrência de bloqueio das células nas fases G0/G1 (66,3% no controle para 91,5% em 15µM) e diminuição do percentual de células nas fases S e G2/M. Em 2,5µM, a expressão de a-SMA reduziu para 45,74% e foi quase totalmente inibida a partir de 10µM. A presença de adipócitos corados por Oil Red só foi observada no grupo controle. Estes resultados em conjunto sugerem um efeito mielossupressor do MI sobre células da MO saudável, o que é indesejado já que a maioria dos pacientes estará exposta por muito tempo a esse fármaco. / The antineoplastic agents affect cells that are in the process of cell division, thus rapid rate of cell renewal and differentiation of bone marrow (BM) makes the hematopoietic system a susceptible target toxicity by these agents. The BM is formed by a stroma composed of many cell types (fibroblasts, macrophages, endothelial cells and adipocytes) and an extracellular matrix that together form an ideal microenvironment favoring the modulation of quiescence, self-renewal and commitment of mesenchymal stem cells (MSCs), as well as proliferation, maturation and apoptosis of hematopoietic cells. In this context, the objective this work was to evaluate the effects of Imatinib Mesylate (IM), a drug inhibitor of tyrosine kinase proteins and receptors as c-Kit, platelet derived growth factor (PDGF), stem cell factor (SCF), c-Abl, BCR-ABL, involved in different signaling pathways of hematopoietic progenitor cells (CFU-GM) and stromal cells from BM of healthy mice. By clonogenic assays in semisolid medium and culture of adherent stromal cells from the BM, we evaluated the potential myelosuppressive of IM through the test cell viability MTT and Acridine Orange/Ethidium Bromide (AO/EB), cytochemistry to identify of adipocytes, cell cycle, cell proliferation by incorporation of BrdU and expression of alpha-smooth muscle actin (a-SMA). As for hematopoietic cells, the results showed that the MI gradually reduced the growth of colonies of granulocytes/macrophages (CFU-GM), the IC50 obtained was 26.5µM and total inhibition occurred at 60µM. The stromal cells in 4 and 8 days of culture, no significant difference in the percentage of proliferation measured by BrdU incorporation, and in 10µM there was a tendency to increase proliferation. In 14 days the proliferation decreased gradually and at 7.5 µM proliferation was reduced to about 5%. The percentage of viable cells by MTT was similar at 7 and 14 days, rising to 10µM and then reducing to reach 0% at 25µM. The morphology of most cells untreated and cells treated with low concentrations of IM (2.5µM) was typically fibroblastic, and in more elevated concentrations of IM (mainly from 10µM), the predominant cells were rounded morphology of type macrophages, which were inhibited only at high concentrations (20-25µM). Fluorescence with AO/EB showed the same results seen in the MTT and revealed the presence of apoptotic bodies, especially in 20µM, confirming the drug effect on cell viability. The cell cycle of stromal cells from the BM on day 14 of culture indicates the occurrence of blockage of cells in G0/G1 phase (66.3% in control to 91.5% in 15µM) and decreased the percentage of cells in S phase and G2/M. At 2.5µM, the expression of a-SMA decreased to 45.74% and was almost completely inhibited from 10µM. The presence of adipocytes stained with Oil Red was observed only in the control group. These results together suggest a myelossupressive effect of IM on healthy cells of the BM, which is undesirable since the majority of patients of will be exposed for a long time with this drug.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/92312 |
| Date | 24 October 2012 |
| Creators | Soares, Pâmela de Brum |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Vituri, Cidônia de Lourdes |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 120 f.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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