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Previous issue date: 2013-01-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Brazil was the first country to introduce the pneumococcal conjugate 10valent
vaccine into the National Immunization Program for infants, in 2010. The
nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae occurs early in life. It is the
first step for the development of invasive diseases. So far no study has evaluated the
impact of vaccination on the reduction on pneumococcal carriage. The evaluation of the
impact of vaccination should based on technologies with high accuracy. In this
investigation we applied molecular technologies, recently developed, to ascertain
pneumococcal nasopharyngeal colonization and serotypes. Objectives: (i) to compare
the prevalence of S. pneumoniae nasopharyngeal colonization by using real-time PCR
(RT-PCR) and multiplex PCR, and culture (“gold standard”) in children residing in
Goiania municipality; (ii) to evaluate the simultaneous colonization by different
serotypes by using the multiplex PCR technique. Methods: A household populationbased
survey was carried out between October/2010 and March/2011 by using a
systematic sampling, weighted by census tract. Based on previous studies, the sample
size was calculated taking into account an estimated 50% of pneumocococcal carriage.
A total of 1,437 nasopharyngeal swabs were collected from children less than 24
months of age. Broth-enriched culture of nasopharynx specimens followed by
pneumococcal isolation by both, culture and RT-PCR targeting the lytA gene (S.
pneumoniae) were performed. Pneumococcal carriage was defined for RT-PCR Cycle
threshold (Ct) < 35.0, and therefore all samples were submitted to multiplex PCR to
detect serotypes. ROC curve (Receiver Operating Characteristics) were built up to
identify Ct values predicted of S. pneumoniae positive culture. Results: The prevalence
of pneumococcal carriage by RT-PCR (56.9%) was statistically higher (p< 0,001),
compared to that obtained by culture (39.3%), regardless of the vaccination status.
Among the 818 positive children/samples by RT-PCR, in 54.2% of them it was possible
to detect the serotype. Simultaneous colonization by different types was found in 6.9%
of the children. Ct values Ct33.0 showed the best accuracy (91.4%) to predict positive
pneumococcal culture (Sensitivity=88% and Specificity=81.2%). When using Ct values
32.0 we found the best accuracy of multiplex PCR in detecting serotypes (Sensitivity
=90% and Specificity =84,7%). Conclusion: Our findings suggest that RT-PCR and
multiplex PCR techniques showed great potential to be used in evaluating the
vaccination impact. Further studies are needed to evaluate the cost-effectiveness of
using these technologies on a large scale. / O Brasil foi o primeiro pais a introduzir a vacina pneumocócica conjugada,
10-valente (PCV10), no Programa de Imunização infantil, em 2010. A colonização
nasofaringeana pelo Streptococcus pneumoniae ocorre na infância e é etapa obrigatória
para desenvolvimento da doença invasiva. Até o momento nenhum estudo avaliou o
impacto da vacinação na redução do estado de portador. Para avaliação do impacto de
vacinas deve-se utilizar tecnologias de alta acurácia. Este estudo utiliza técnicas
moleculares, recentemente desenvolvidas, para detecção de pneumococo e sorotipos de
secreção nasofaringeana.Objetivos: (i) Comparar a prevalência de colonização
nasofaringeana por S. pneumoniae pelas técnicas de PCR em tempo real (RT-PCR) e
cultura (―padrão-ouro‖) em crianças residentes em Goiânia no primeiro ano de
introdução da PCV10; (ii) avaliar a colonização simultânea por pneumococo por
diferentes sorotipos por meio da reação de PCR multiplex. Métodos: Um inquérito
populacional domiciliar foi conduzido de outubro/2010 a março/2011, com coleta de
1.437 swabs nasofaríngeos de crianças < 24 meses de idade. A amostragem foi
sistemática, ponderada por setor censitário, com tamanho da amostra calculado para
prevalência esperada de 50% de portador. O isolamento do pneumococo foi realizado a
partir do caldo enriquecido (meio STGG). A cultura foi realizada pela semeadura do
caldo em placas de Agar sangue de carneiro. A RT-PCR foi direcionada para o gene
lytA do pneumococo, utilizando como positividade valores do ciclo da PCR (Ct-Cycle
threshold) <35,0. A reação de PCR multiplex para sorotipagem foi realizada para
amostras com valores de Ct<35,0. Foram construídas curvas ROC (Receiver Operating
Characteristics) para identificação de valores de Ct preditivos de cultura positiva e de
tipo capsular. Resultados: A prevalência de pneumococo obtida pela RT-PCR foi de
56,9%, estatisticamente maior do que a prevalência de 39,3% obtida pela cultura (p<
0,001), independente da situação vacinal da criança. Dentre as 818 crianças positivas
pela RT-PCR, em 54,2% delas foi possível detectar-se o tipo capsular. Cocolonização
por diferentes sorotipos foi encontrada em 6,9% (100/1.437) das crianças. Valores de
Ct33,0 apresentaram a melhor acurácia (91,4%) na predição de cultura positiva para
pneumococo (sensibilidade/S=88% e especificidade/E=81,2%). Para detecção de
sorotipos a melhor acurácia da PCR multiplex foi para valores de Ct32,0 (S=90% e
E=84,7%). Conclusão: Os resultados sugerem que as técnicas de PCR em tempo real e
multiplex apresentam grande potencial para serem utilizadas em estudos de avaliação de
impacto da vacinação, respectivamente no portador e nos sorotipos vacinais. Estudos
deverão ser conduzidos para se avaliar o custo-benefício da utilização desta tecnologia
em larga escala.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/3731 |
| Date | 23 January 2013 |
| Creators | Garcia, Weslley José Moreira |
| Contributors | Andrade, Ana Lúcia Sampaio Sgambatti de, Andrade, Ana Lúcia Sampaio Sgambatti de, Kipnis, André, Minamisava, Ruth |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Pública (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8197219506590464977, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, -1614662311676629386, -2555911436985713659 |
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