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Cleonice Creuza.pdf: 2460625 bytes, checksum: 893afe600ef298af83303b91d5023108 (MD5) / Capes / A doença de Parkinson (DP) é caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos no
mesencéfalo. No entanto, mecanismos molecular responsável pelo processo degenerativo no
sistema dopaminérgico nigroestriatal durante a doença de Parkinson permanecem
desconhecidos. Atualmente, concorda-se que disfunção mitocondrial, agregação de α-
sinucleína, estresse oxidativo, neuroinflamação e degradação protéica são causas envolvidas.
Estudos farmacológicos têm focado no uso de metabolitos secundários de plantas e, entre
estes, os flavonoides têm mostrado atividade biológica com efeitos neuroprotetores,
antiinflamatórios e antioxidantes. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar os
efeitos neuroprotetores e imunomodulatórios de flavonoides bioativos usando modelos in
vitro de DP. Foram usados diferentes modelos de culturas neuronais, avaliadas pelo testes de
MTT e análises morfológicas para avaliar os efeitos citotóxicos ou neuroprotetores da rutina e
quercetina. Em seguida, foram usados diferentes modelos de cultura primária de células gliais
e neuronais e testes de MTT, exclusão ao azul de tripan, Fluoro-Jade B, Western Blot ou
imunocitoquímica para β-III-Tubulina, Western Blot para tirosina hidroxilase ou para GFAP
para investigar o efeito citotóxico induzido por aminocromo e/ou o efeito neuroprotetor
induzido por rutina. Também investigamos a resposta imunoinflamatória ou
imunomodulatória dosando citocinas (IL6, IL10, TNF-alpha) usando o método de ELISA.
Nossos resultados demonstraram que rutina e quercetina (10-50μM) não induziram
decréscimo no metabolismo mitocondrial em linhagens celulares SHSY-5Y ou co-cultura
primária de neurônios/células gliais, contudo estes aumentaram o metabolismo mitocondrial
nas concentrações de 50 e 100 μM em células da linhagem PC12. Além disso, rutina (10μM)
induziu alterações morfológicas em células PC12. Também foi visto que aminocromo (250-
500μM) induziu uma redução na viabilidade celular em co-cultura de mesencéfalo e em
cultura de microglia, cultura de células gliais e cultura de neurônios corticais. Ainda, a
exposição ao aminocromo reduziu a expressão de β-III-tubulina, tirosina hidroxilase e GFAP
em co-culturas de mesencéfalo e cultura de células gliais. Nossos resultados demonstram que
a rutina protege células neurais frente a dano induzido por aminocromo, aumenta a expressão
de β-III-tubulina e protege a rede de neuritos. Além do mais, aminocromo induziu redução de
níveis de citocinas IL-6, IL-10 e TNF-alfa que foram reguladas a níveis basais quando a cocultura
de mesencéfalo foi tratada com rutina. Concluímos então que a rutina protege células
PC12 contra danos celulares induzidos por MPTP, co-culturas de mesencéfalo e células gliais
contra danos induzidos por aminocromo. Podemos sugerir que a redução no nível de citocinas
é conseqüência da perda de células gliais induzidas por aminocromo e que o retorno a níveis
basais podem ser resultado de glioproteção e neuroproteção induzida pela rutina. / Parkinson's disease (PD) is characterized by the loss of dopaminergic neurons in the midbrain.
The molecular mechanism responsible for degenerative process in the nigrostriatal
dopaminergic system in PD remains unknown. Currently, there is a general agreement that
mitochondrial dysfunction, α-synuclein aggregation, oxidative stress, neuroinflammation and
impaired protein degradation are involved. Pharmacological studies have been focusing in
using plant secondary metabolites and, among these, flavonoids have shown biological
activity such neuroprotective, anti-inflammatory and antioxidant. In this sense, the objective
of this work was to study the neuroprotective and immunomodulatory effects of a bioactive
flavonoid using in vitro models of PD. We used different models of neuronal culture and
MTT test and morphological analysis to make a screening of cytotoxic and/or neuroprotection
by rutin and quercetin. After we used different models of primary culture of neuronal and
glial cells and MTT test, Tripan Blue, Fluoro-Jade B, western blot or immunocytochemistry
of β-III-Tubulin, tyrosine hydroxylase or GFAP in order to investigate the cytotoxic effect
induced by aminochrome and/or neuroprotection induced by rutin. We also investigated
immunoinflamatory response or immunomodulation by measuring cytokines (IL6, IL10,
TNF-alpha) using ELISA. Our results demonstrated that rutin and quercetin (10-50μM) did
not induce decrease in mitochondrial metabolism on SHSY-5Y cells line, or primary coculture
of neuron/glial cells, however it increased the mitochondrial metabolism at
concentrations 50 and 100μM on PC12 cells line. Moreover rutin (10μM) induce alterations
on PC12 cells morphology. We also saw that aminocrhome (250-500μM) induced a decrease
on cell viability at midbrain co-culture and microglia culture, glial cells culture, cortical
neurons culture. In addition, the exposure to aminocrhome decreased expression of β-IIItubulin,
tyrosine hydroxylase and GFAP on midbrain co-cultures and glial cells culture. Our
results demonstrate that rutin protects neural cells from damage induced by aminocrhome,
increases β-III-tubulin expression and protects neurite network. Furthermore, aminocrhome
induced reduction of cytokines IL-6, IL-10 and TNF-alpha levels that were regulated to basal
levels when the midbrain co-culture was treated with rutin. We concluded that rutin protects
against PC12 cells cell against death induced by MPTP and neuronal and glial cells against
death induced by aminocrhome. We can suggest that the reduction in cytokine levels are
consequence of the loss of glial cells induced by aminocrhome and that the return to baseline
levels may result from glioprotection and neuroprotection induced by rutin.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:192.168.11:11:ri/22052 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Santos, Cleonice Creusa do |
| Contributors | Silva, Victor Diogenes Amaral da, Costa, Silvia Lima, Figueiredo, Camila A. Viana, Aguilar, Juan Segura |
| Publisher | Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde, Programa de Pós Graduação em Imunologia, ufba, ICS, PPGIM, brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFBA, instname:Universidade Federal da Bahia, instacron:UFBA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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