Orientador : Dr. Samuel Goldenberg / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2007 / Inclui bibliografia / O Trypanosoma cruzi é o agente causador da doença de Chagas, que continua
sendo um importante problema de saúde pública na América Latina. Os estudos
sobre o T. cruzi têm sido facilitados pela possibilidade de cultivo e diferenciação in
vitro dos principais estágios evolutivos do parasita. Este trabalho aborda o estudo de
aspectos morfológicos e moleculares da diferenciação in vitro de tripomastigotas
metacíclicos para amastigotas (amastigogênese extracelular). Extensas mudanças
morfológicas foram caracterizadas por microscopia óptica e eletrônica durante a
diferenciação, como brotamento, crescimento e liberação de uma estrutura muito
semelhante à forma amastigota, com capacidade replicativa e positiva para a
marcação com o anticorpo alfa-Ssp-4 específico para amastigotas. Análises por
espectrometria de massas mostraram que o perfil lipídico total é alterado, com
aumento na proporção de liso-lipídios durante a diferenciação, podendo estar
correlacionado às alterações morfológicas observadas no processo de
amastigogênese. Com o intuito de obter amostras enriquecidas de membrana
plasmática, foi elaborada uma nova estratégia, baseada na interação biotina/avidina.
Tal estratégia visou o estudo mais detalhado dos constituintes da membrana, visto
que foi observada alteração em sua forma, sugerindo sua relevância para o
processo de diferenciação. Foram também feitas análises do transcritoma de
amastigotas extracelulares utilizando microarranjos de DNA, comparando-os com os
demais estágios, principalmente tripomastigotas metacíclicos e amastigotas obtidos
de cultura de células. Estas análises proporcionaram uma visão geral dos grupos de
genes diferencialmente expressos entre tripomastigotas metacíclicos e amastigotas
extracelulares, no qual se pode destacar como aumentados em amastigotas genes
envolvidos na replicação, reparo e transcrição do DNA, e no processamento de
RNA. Também foram detectados genes com o mesmo padrão de expressão em
amastigotas extracelulares e amastigotas de cultura de célula, sugerindo a
proximidade entre os dois tipos de formas replicativas intracelulares. Tais grupos
gênicos podem ser agora melhor investigados, corroborando para a elucidação dos
mecanismos de regulação de sua expressão, suas funções em cada estágio e sua
importância durante a diferenciação. Os dados aqui apresentados abrem muitas
perspectivas para a investigação da amastigogênese, um fenômeno ainda pouco
conhecido, de vital importância para o T. cruzi e que pode conter novas informações
para o desenvolvimento de terapias para doença de Chagas. / Trypanosoma cruzi is the causative agent of Chagas’ disease, which still represents
an important public health problem in Latin America. Studies on T. cruzi have been
rendered feasible by the possibility to reproduce under in vitro culture conditions the
life-cycle of the parasite. This work is focused on the description of the morphological
and molecular changes occurring in the course of the in vitro differentiation of
metacyclic trypomastigotes to amastigotes (extracellular amastigogenesis). The
morphological changes have been characterized by optical and electron microscopy
investigation during differentiation, including budding, development and release of a
structure resembling to amastigote forms. These extracellular amastigotes are able to
replicate and react with an antibody against the Ssp-4 antigen, which is specific for
amastigotes. Mass-spectrometry analyses have shown total lipid profile changes
during amastigogenesis, with an increase in lyso-lipids ratios during differentiation;
this could be related to morphological alterations observed in the course of the
amastigogenesis process. In order to obtain plasma membrane enriched samples, a
new strategy was elaborated based on biotin/avidin affinity purification. The strategy
aims to identify plasma membrane and its components, since important
morphological changes occur during amastigogenesis which are very likely relevant
to differentiation process. Furthermore, the transcriptome analysis of extracellular
amastigotes is described using DNA microarrays to compare metacyclic
trypomastigotes and cell culture derived amastigotes. These analyses allowed a
broad comparison between metacyclic trypomastigotes and extracellular amastigotes
differentially expressed group of genes, such as those involved in replication,
repairing and transcription of DNA, and processing of RNA, almost all of them more
expressed in extracellular amastigotes. Genes presenting similar expression patterns
have been also observed in extracellular and intracellular amastigotes, suggesting
the similarity between these developmental forms. These genes are being
investigated in order to get further insight into the mechanisms involved in their
expression regulation and their relevance to the differentiation process. The data
presented herewith pave the way to investigate the amastigogenesis process, an
important step of T. cruzi life-cycle.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/13636 |
| Date | January 2007 |
| Creators | Souza, Lauro Manhaes de |
| Contributors | Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica, Goldenberg, Samuel |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 109f. : il. algumas color., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | Disponível em formato digital |
Page generated in 0.0027 seconds