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Avaliação imunopatológica do tecido muscular cardíaco canino, submetido ao efeito da Azatioprina e infecção por diferentes formas da cepa Be-78 do Trypanosoma cruzi, durante a fase aguda.

Souza, Sheler Martins de January 2014 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-02-26T17:21:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoiImunopatológicaTecido.pdf: 2317446 bytes, checksum: f62f2d34e8d10255b4c402c58c290344 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-02-27T18:24:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoiImunopatológicaTecido.pdf: 2317446 bytes, checksum: f62f2d34e8d10255b4c402c58c290344 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-27T18:24:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoiImunopatológicaTecido.pdf: 2317446 bytes, checksum: f62f2d34e8d10255b4c402c58c290344 (MD5) Previous issue date: 2014 / As duas formas de infecção pelo Trypanosoma cruzi, tripomastigota metacíclica (TM) e sanguínea (TS) são distintas em relação ao processo de interação com as células do hospedeiro, devido às moléculas presentes em sua superfície. Esta diferença pode desencadear diferente resposta imunológica. Resposta esta, que também pode ser alterada com o tratamento pelo fármaco Azatioprina. Com base nestes aspectos, o objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune no coração de cães tratados com a Azatioprina ou não, durante a fase aguda da infecção por formas TM ou TS da cepa Berenice-78 do T. cruzi. Ao avaliar o parasitismo e a resposta imune no tecido muscular cardíaco de cães infectados por formas TM, verifica-se que estes apresentaram um aspecto histopatológico mais preservado, com baixo parasitismo, um balanço favorável, evidenciado pela razão, da expressão da IL-12p40 e uma maior expressão dos receptores TLR2 e TLR4. Em contrapartida, os cães infectados por formas TS apresentaram destruição tecidual, alto parasitismo, intenso processo inflamatório e elevada expressão das citocinas, quimiocinas, CCR5 e TLR9. Nos animais submetidos à infecção por diferentes formas do T. cruzi e tratados com a Azatioprina, ocorreu um aumento do parasitismo em ambos os grupos (TMA e TSA) e do processo inflamatório no grupo TMA, sendo estes fatores determinantes na gênese das lesões da fibra muscular cardíaca. Além disso, pode-se constatar aumento das citocinas TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-10 e TGF-β1, da quimiocina CCL3/MIP-1α e TLR9 no grupo TMA. Em suma, a ação da Azatioprina parece conduzir à resposta imune distinta. Esta evidência foi observada em ambas as formas de infecção, culminando em uma piora dos aspectos histopatológicos, principalmente naqueles do grupo TMA. Este fato pode estar ligado a mecanismos co-estimulatórios, via CD28. Sabe-se que a Azatioprina pode levar ao bloqueio desta via que é de grande importância para desencadear uma resposta imune Th1. Neste sentido, o bloqueio ou mesmo o desequilíbrio desta via e, consequentemente, da resposta imune de cunho protetora, favorece a replicação parasitária. Sugere-se a possível importância da via CD28 nos mecanismos de defesa contra o T. cruzi e chama-se a atenção para a função dos receptores TLR2 e TLR4 na infecção chagásica, pois estes podem desempenhar função protetora. _____________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The two infective forms of Trypanosoma cruzi, metacyclic trypomastigote (MT) and blood trypomastigote (BT), are distinct with respect to the host cell interaction process due to molecules present on the surface of the parasite, which could trigger different immune responses. Therefore, this study clarifies some aspects inherent of the two major infective forms of T. Thus, investigating the two forms of infection, this work highlights the aspects related to a possible imbalance in the immune response by treating the dogs with Azathioprine drug. Based on these aspects, it was evaluated the immune response in the hearts of dogs treated with Azathioprine or not, during the acute phase of infection by MT or BT forms of Berenice -78 strain of T. cruzi. Analysis of the parasitism and immune response in cardiac muscle tissue of dogs infected MT forms demonstrated that this group had a more preserved histopathology, lower tissue parasitism, a favorable cytokine balance, evidenced by the ratio of the expression of IL-12p40 and increased expression of TLR2 and TLR4 receptors. In contrast, infected dogs with BT forms have tissue destruction, higher tissue parasitism, an intense inflammation and increased expression of cytokines, chemokines, CCR5 and TLR9 receptor. In infected by different forms of T. cruzi and treated with Azathioprine, it appears that there was an increase of cardiac parasitism in both groups (MTA and BTA) and inflammation (MTA group), which are determining factors in the genesis of the cardiac muscle fiber lesions. Moreover, it was not notice differences in other parameters, such as an increased on mRNA cytokine expression for instance TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-10 and TGF-β1, chemokine CCL3/MIP-1α and TLR9 in MTA Group. In summary, the action of Azathioprine leads to a distinct immune response, in both forms of infection, resulting in a worsening of histopathological aspects, especially those of the MTA group. This may be associated to co-stimulatory mechanisms, via CD28. It is known that Azathioprine can block this pathway, which is of great importance to elicit a Th1 immune response. In this sense, the block or even the imbalance of this pathway and of the protective immune response favors the parasite replication. Finally, this study presents a more severe form of Chagas infection with BT forms, which could have implications in non-endemic areas, such as USA and Europe. Moreover, it suggests a possible role and significance of CD28 pathway in defense mechanisms against T. cruzi and draws attention to the role of TLR2 and TLR4 receptors in infection, as these can play a protective role.
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Obtenção de derivados 1H-pirazolo[3,4-b]piridina planejados como candidatos a fármacos antichagásicos

Salvador, Raquel Rocha Silva 18 April 2017 (has links)
Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-18T17:31:50Z No. of bitstreams: 1 Salvador, Raquel Rocha Silva [Dissertação, 2012].pdf: 704535 bytes, checksum: 012b827ee322bb83f22e0531f9d7c888 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T17:31:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salvador, Raquel Rocha Silva [Dissertação, 2012].pdf: 704535 bytes, checksum: 012b827ee322bb83f22e0531f9d7c888 (MD5) / Neste trabalho relatamos a síntese e avaliação de atividade tripanocida de novos derivados 4-carboidrazidas do sistema heterocíclico 1H-pirazolo[3,4-b]piridina, substituídos na posição C-6 por grupamentos metílicos (-CH3 ou -CF3). Foram obtidos 24 novos compostos, sendo 12 da série metílica e 12 da série trifluorometílica. Estes compostos foram identificados por métodos espectroscópicos e avaliados em ensaios biológicos in vitro a fim de verificar a atividade antiparasitária sobre a forma tripomastigota de T. cruzi. Os derivados da série metílica apresentaram melhor perfil de atividade tripanocida do que os derivados da série de trifluorometílica. O composto 1-fenil-3,6-dimetil-1H-pirazolo[3,4-b]piridina-4- carboidrazida (10) exibiu o mais significativo perfil antiparasitário (IC50= 227,9 μM) / This research report the synthesis and evaluation of trypanocidal activity of novel derivatives from 4-carbohydrazides of the heterocyclic system 1H-pyrazolo [3,4-b] pyridine, substituted in position C-6 by methyl groups (-CH3 or-CF3). It was obtained 24 novel compounds, with 12 from the methyl series and 12 from trifluoromethyl series. These compounds were identified by spectroscopic methods and evaluated by biological assay in vitro to verify the antiparasitic activity of the trypomastigotes from T. cruzi. The methyl derivatives showed better profile of trypanocidal activity than derivatives of the trifluoromethyl series. The compound 4- carbohydrazide-1-phenyl-3,6-dimethyl-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridine (10) exhibited the most significant antiparasitic activity (IC50 = 227.9 μM)
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Production and expression of inflammation and angiogenic parameters triggered by different genetic population of Trypanosoma cruzi.

Shrestha, Deena January 2014 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-14T18:41:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ProdutionExpressionInflamattion.pdf: 3309907 bytes, checksum: 979c5e6d2df78ca5fd04916f54b09924 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-15T16:02:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ProdutionExpressionInflamattion.pdf: 3309907 bytes, checksum: 979c5e6d2df78ca5fd04916f54b09924 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-15T16:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_ProdutionExpressionInflamattion.pdf: 3309907 bytes, checksum: 979c5e6d2df78ca5fd04916f54b09924 (MD5) Previous issue date: 2014 / A cardiopatia induzida pela infecção pelo Trypanosoma cruzi aprensenta a inflamação como sua principal característica imunopatológica. Differente células inflamatórias contribuem para a produção de mediatores inflamatorios e regulatórios promotores diretos ou indiretos do processo denominado angiogênese inflamatória. As células cardíacas de mamíferos apresentam-se como importantes alvos do T.cruzi e, consequentemente, do próprio sistema imune do hospedeiro que objetiva a eliminação desses parasitos. Esse processo inflamatório culmina em uma destruição celular, em fibrose, hipóxia e alterações funcionais ao coração. A hipóxia e a produção de mediadores inflamatórios são estímulo bem definidos para o início da angiogênese. Assim, o objetivo desse estudo é estudar a participação do T.cruzi na produção de fatores inflamatórios e angiogênicos em animais C57BL/6 infectados com diferentes cepas desse parasito. Demonstrou-se a formação de novos vasos sanguíneos na matriz da esponja culminando no 14º dia pos-implante dorsal. Demonstrou-se, ainda, alta produção de mediadores inflamatórios no plasma de animais infectados com as cepas Y e Colombiana do T.cruzi. Esses animais também apresentaram elevados níveis plasmáticos de VEGF. Além disso, observou-se que a cepa Colombiana do T.cruzi foi capaz de induzir elevado infiltrado leucocitário e parasitos no tecido cardíaco. Possivelmente, devido ao alto parasitismo induzido pela cepa Colombiando do parasito, houve baixa produção (VEGF, ANG-1 e ANG-2) e expressão (VEGF) de fatores angiogênicos no tecido cardíaco. De forma interessante, animais infectados pela cepa VL-10 do T.cruzi demonstraram reduzida parasitemia, produção de citocinas inflamatórias e quimiocinas, bem como de infiltrado celular no tecido cardíaco. Além disso, o Benznidazol, a droga de escolha para o tratamento da doença de Chagas com alta citotoxicidade, foi capaz de manter os parâmetros angiogênicos similares aos animais não infectados. Também, o Enalapril e a Sinvastatina (fármacos utilizados para o tratamento de doenças cardioavasculares) foram capazes de reduzir citocinas inflamatóras em camundongos infectados, mas não a produção e a expressão de VEGF que mostrou-se similar aos animais infectados não tratados. Em suma, este estudo apresenta mediadores da angiogênese locais (coração) e sistêmicos durante a infecção pelo T.cruzi, sendo esses mediadores definidos pela genética e pela quantidade de parasitos presente no tecido cardíaco. _____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Inflammation is a key immune-pathophysiological characteristic of cardiomyopathy induced by Trypanosoma cruzi. Different inflammatory cells can contribute to the release of pro- and anti-inflammatory mediators which can directly or indirectly promote inflammatory angiogenesis. Mammalian cardiac cells are important targets to the protozoan T. cruzi driving an immune system that attempts to eliminate parasites. This inflammation culminates in cellular destruction, fibrosis, hypoxia and heart disturbances. Hypoxia and releasing of inflammatory mediators are well-defined stimuli to initiate angiogenesis. Therefore, we aimed to study the participation of T. cruzi in the production of inflammatory and angiogenesis mediators in C57BL/6 mice infected with different strains of this parasite. We found that in sponge matrix from infected mice, formation of new blood vessels were abrogated on day 14. Our data also demonstrated higher production of inflammatory mediators in plasma from mice infected with Y and Colombian strains of T.cruzi. These mice also demonstrated increase plasma VEGF. In addition, Colombian strain induced higher leukocyte infiltration and tissue parasites in cardiac tissue. However, possibly by the Colombian strain-associated higher tissue parasites, there were low production (VEGF, ANG-1 and ANG-2) and mRNA expression (VEGF) of angiogenic factors in cardiac tissue. It is very interesting that VL-10 infected C57BL/6 mice demonstrated decreased circulating parasite, production of inflammatory cytokines and chemokines, cellular infiltration in cardiac tissue. Furthermore, Benznidazole, a drug of choice for the treatment of Chagas disease, although exhibits numerous side effects, we observed that treament with this drug maintained angiogenic parameters similar to uninfected mice. Enalapril and Simvastatin (used for the treatment of cardiovascular diasease) treatment to infected mice diminished inflammatory cytokines but not VEGF expression and production which was similar to untreated infected mice. In summary, this study demonstrates angiogenesis mediators in local tissue (heart) and systemically during T. cruzi infection may be defined by the genetic and the load of tissue parasites.
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Trypanosoma cruzi: diversidade, relações filogenéticas e padrões ecogeográficos de isolados silvestres. / Trypanossoma cruzi: diversity, phylogenetics analysis and ecogeographic patterns of wild isolates.

Arlei Marcili 22 October 2008 (has links)
T. cruzi compreende populações heterogêneas classificadas nas linhagens TCI e TCIIa-e. Neste estudo, foi caracterizado um grande número de isolados de mamíferos e vetores silvestres de diversas origens geográficas, além de isolados humanos da Amazônia. Análises filogenéticas baseadas em SSU rDNA e Cyb foram utilizadas para inferir relações entre linhagens e padrões biogeográficos. Além de análises ITS1 rDNA e RAPD para detectar polimorfismo intraespecífico. TCIIa circula em primatas e é transmitida por Rhodnius, no ecótopo arbóreo da Amazônia brasileira ocasionalmente infectando o homem. TCI é mais prevalente em macacos e no homem na Amazônia onde pode causar doença severa, como demonstramos no Nordeste. No Brasil, morcegos são infectados por três espécies de tripanossomas, incluindo uma nova linhagem de T. cruzi (TCbat). Foram caracterizados T. rangeli de macacos e morcegos. A linhagem TCIIc possui ampla distribuição no Brasil, associada com mamíferos e triatomíneos terrestres. Isolados TCIIa dos USA pertencem a uma linhagem, aparentemente ausente no Brasil. / T. cruzi comprises highly heterogeneous populations classified as TCI and TCIIa-e lineages. This study characterized large wild mammal and vector strains of various geographical origins, and human isolates from Amazonia. Phylogenetic analysis using SSU rDNA and Cyb genes inferred relationships among lineages and their biogeographic patterns. ITS1 rDNA and RAPD detected intraspecific polymorphism. TCIIa circulates in primates in the Brazilian Amazon, transmitted by Rhodnius in arboreal ecotopes sporadically infecting humans. TCI is the most prevalent in the Amazonian primates and humans, and can induce severe Chagas disease as demonstrated in a patient from Northeast Brazil. Bats of several biomes were found infected by three trypanosome species, including a new lineage of T. cruzi denominated TCbat. Isolates from monkeys and bats were also molecularly characterized. The lineage TCIIc showed to be widespread in Brazil, and was associated to terrestrial mammals and triatomines. TCIIa from the USA corresponds to an independent lineage, probably absent in Brazil.
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Caracterização molecular e bioquímica das enzimas envolvidas na biossíntese de prolina em Trypanosoma cruzi. / Molecular and biochemical characterization of the enzymes involved in proline biosynthesis in Trypanosoma cruzi.

Marchese, Letícia 29 September 2017 (has links)
Alguns organismos podem biossintetizar L-prolina (L-Pro) principalmente via L-glutamato (L-Glu). A Δ1-pirrolina-5-carboxilato (P5C) sintase (P5CS) converte o L-Glu ao intermediário da via, o P5C que uma vez formado é reduzido a L-Pro via P5C redutase (P5CR). Nesse trabalho, verificou-se a possível ocorrência dessa via em Tritryps. Em Trypanosoma cruzi toda a via é operativa, em Trypanosoma brucei está ausente, enquanto que em Leishmania amazonensis acontece parcialmente. A biossíntese de L-Pro em T. cruzi é abordada com mais detalhes. Ambas as enzimas da via foram expressas e tiveram sua localização determinada no citosol, compartimento distinto das enzimas do catabolismo de L-Pro. Ainda realizou-se a caracterização bioquímica da TcP5CR, que curiosamente sofre inibição incompetitiva pelo NADPH, e por isso é candidata a regular esse metabolismo. Por fim, evidenciou-se a saída do P5C da mitocôndria, possibilitando a existência de um mecanismo de transidrogenação via a interconversão de L-Pro em P5C e vice versa. / Some organisms biosynthesize L-proline (L-Pro) mainly from L-glutamate (L-Glu). The Δ1-pyrroline-5-carboxylate (P5C) synthase (P5CS) converts L-Glu into the intermediate P5C, which in turn, is reduced to L-Pro by a P5C reductase (P5CR). In this study, we verified the possible occurrence of this pathway in Tritryps. In Trypanosoma cruzi the entire route is operative. In Trypanosoma brucei, is absent, while Leishmania amazonensis this pathway is partially operative. In T. cruzi, both enzymes were expressed and had their location determined in the cytosol, differently from those of the catabolism of L-Pro. In addition, the biochemical characterization of TcP5CR showed an uncompetitive inhibition by NADPH, and therefore it is a candidate to be a regulation point of the pathway. Finally, it was observed the exit of PC5 from the mitochondria, a condition for the existence of a transhydrogenation mechanism via the interconversion between Pro and P5C.
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Caracterização morfoestrutural e molecular do processo de amastigogenese extracelular em Trypanossoma cruzi

Souza, Lauro Manhaes de January 2007 (has links)
Orientador : Dr. Samuel Goldenberg / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2007 / Inclui bibliografia / O Trypanosoma cruzi é o agente causador da doença de Chagas, que continua sendo um importante problema de saúde pública na América Latina. Os estudos sobre o T. cruzi têm sido facilitados pela possibilidade de cultivo e diferenciação in vitro dos principais estágios evolutivos do parasita. Este trabalho aborda o estudo de aspectos morfológicos e moleculares da diferenciação in vitro de tripomastigotas metacíclicos para amastigotas (amastigogênese extracelular). Extensas mudanças morfológicas foram caracterizadas por microscopia óptica e eletrônica durante a diferenciação, como brotamento, crescimento e liberação de uma estrutura muito semelhante à forma amastigota, com capacidade replicativa e positiva para a marcação com o anticorpo alfa-Ssp-4 específico para amastigotas. Análises por espectrometria de massas mostraram que o perfil lipídico total é alterado, com aumento na proporção de liso-lipídios durante a diferenciação, podendo estar correlacionado às alterações morfológicas observadas no processo de amastigogênese. Com o intuito de obter amostras enriquecidas de membrana plasmática, foi elaborada uma nova estratégia, baseada na interação biotina/avidina. Tal estratégia visou o estudo mais detalhado dos constituintes da membrana, visto que foi observada alteração em sua forma, sugerindo sua relevância para o processo de diferenciação. Foram também feitas análises do transcritoma de amastigotas extracelulares utilizando microarranjos de DNA, comparando-os com os demais estágios, principalmente tripomastigotas metacíclicos e amastigotas obtidos de cultura de células. Estas análises proporcionaram uma visão geral dos grupos de genes diferencialmente expressos entre tripomastigotas metacíclicos e amastigotas extracelulares, no qual se pode destacar como aumentados em amastigotas genes envolvidos na replicação, reparo e transcrição do DNA, e no processamento de RNA. Também foram detectados genes com o mesmo padrão de expressão em amastigotas extracelulares e amastigotas de cultura de célula, sugerindo a proximidade entre os dois tipos de formas replicativas intracelulares. Tais grupos gênicos podem ser agora melhor investigados, corroborando para a elucidação dos mecanismos de regulação de sua expressão, suas funções em cada estágio e sua importância durante a diferenciação. Os dados aqui apresentados abrem muitas perspectivas para a investigação da amastigogênese, um fenômeno ainda pouco conhecido, de vital importância para o T. cruzi e que pode conter novas informações para o desenvolvimento de terapias para doença de Chagas. / Trypanosoma cruzi is the causative agent of Chagas’ disease, which still represents an important public health problem in Latin America. Studies on T. cruzi have been rendered feasible by the possibility to reproduce under in vitro culture conditions the life-cycle of the parasite. This work is focused on the description of the morphological and molecular changes occurring in the course of the in vitro differentiation of metacyclic trypomastigotes to amastigotes (extracellular amastigogenesis). The morphological changes have been characterized by optical and electron microscopy investigation during differentiation, including budding, development and release of a structure resembling to amastigote forms. These extracellular amastigotes are able to replicate and react with an antibody against the Ssp-4 antigen, which is specific for amastigotes. Mass-spectrometry analyses have shown total lipid profile changes during amastigogenesis, with an increase in lyso-lipids ratios during differentiation; this could be related to morphological alterations observed in the course of the amastigogenesis process. In order to obtain plasma membrane enriched samples, a new strategy was elaborated based on biotin/avidin affinity purification. The strategy aims to identify plasma membrane and its components, since important morphological changes occur during amastigogenesis which are very likely relevant to differentiation process. Furthermore, the transcriptome analysis of extracellular amastigotes is described using DNA microarrays to compare metacyclic trypomastigotes and cell culture derived amastigotes. These analyses allowed a broad comparison between metacyclic trypomastigotes and extracellular amastigotes differentially expressed group of genes, such as those involved in replication, repairing and transcription of DNA, and processing of RNA, almost all of them more expressed in extracellular amastigotes. Genes presenting similar expression patterns have been also observed in extracellular and intracellular amastigotes, suggesting the similarity between these developmental forms. These genes are being investigated in order to get further insight into the mechanisms involved in their expression regulation and their relevance to the differentiation process. The data presented herewith pave the way to investigate the amastigogenesis process, an important step of T. cruzi life-cycle.
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Avaliação do trato digestório de cães Beagle infectados com as cepas Y ou Berenice-78 do Trypanosoma cruzi nas fases aguda ou crônica da doença de chagas experimental.

Paiva, Nívia Carolina Nogueira de January 2011 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-03-16T20:00:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoTratoDigestório.pdf: 2128923 bytes, checksum: bc9e8b3b565ff4319486b7f5221aaa47 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-03-17T19:13:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoTratoDigestório.pdf: 2128923 bytes, checksum: bc9e8b3b565ff4319486b7f5221aaa47 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-17T19:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoTratoDigestório.pdf: 2128923 bytes, checksum: bc9e8b3b565ff4319486b7f5221aaa47 (MD5) Previous issue date: 2011 / O protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, apresenta uma ampla variabilidade intraespecífica que determina a existência de subpopulações com características genéticas, morfológicas, moleculares e bioquímicas distintas. Este polimorfismo tem sido associado ao desenvolvimento das diferentes formas clínicas da doença de Chagas e suas implicações epidemiológicas. Neste contexto, a forma digestiva parece estar ausente na América Central, México e Venezuela, porém em países como Brasil e Bolívia pode ocorrer sozinha ou em associação com a forma cardíaca. O megaesôfago e o megacólon, manifestações mais comuns da forma digestiva, são caracterizados por acalásia e obstrução parcial/total do cólon, respectivamente. Achados histopatológicos demonstram o envolvimento do sistema nervoso entérico na patogênese dessas visceromegalias, porém poucos estudos têm abordado qual é o limite de desnervação necessário para as alterações da motilidade. Neste trabalho, cães da raça Beagle foram infectados com as cepas Y ou Berenice-78 do T. cruzi e necropsiados durante as fases aguda (30 dias após infecção-DAI) ou crônica (730 DAI) da doença experimental para avaliação histopatológica do esôfago e cólon. Ambas as cepas foram capazes de infectar o esôfago e o cólon e provocar resposta inflamatória durante a fase aguda. Na fase crônica, a PCR convencional detectou parasitismo tecidual apenas no grupo infectado com a cepa Be-78 o que poderia estar relacionado com a manutenção do processo inflamatório neste grupo. Apenas nos animais infectados com a cepa Y foi observada fibrose na fase crônica. Desnervação dos gânglios mientéricos foi observada na infecção com ambas as cepas durante a fase aguda, porém na fase crônica a desnervação foi persistente apenas nos animais infectados com a cepa Be-78. O comprometimento das células gliais foi precoce nos animais infectados com a cepa Y enquanto os animais infetados com a cepa Be-78 apresentaram redução de células gliais entéricas GFAP-IR apenas na fase crônica. Estes resultados sugerem que embora as duas cepas sejam capazes de provocar lesões no trato digestório, a cepa Y controla precocemente essas alterações, enquanto a cepa Be-78 sustenta as alterações ao longo da infecção experimental, sugerindo o desenvolvimento de lesões digestivas crônicas. ______________________________________________________________________ / ABSTRACT: The flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease, presents a wide intraspecific variability that determines the existence of subpopulations with distinc genetic, morphological, molecular and biochemical feactures. This polymorphism has been associated with the development of different clinical forms of Chagas disease and its epidemiological implications. In this context, the digestive form seems to be absent in Central America, Mexico and Venezuela, but in countries like Brazil and Bolivia may occur alone or in combination with the cardiac form. Megaesophagus and megacolon, the most common manifestations of the digestive form, are characterized by achalasia and colon partial /total obstruction, respectively. Histopathologic findings demonstrate the involvement of enteric nervous system in these visceromegalies pathogenesis, but few studies have addressed the limit of what is necessary for denervation changes in motility. In this study, Beagle dogs were infected with strains Y or Berenice-78 of T. cruzi and necropsied during the acute phase (30 days post infection-DPI) or chronic (730DPI) of the experimental disease for esophagus and colon post-mortem histopathological evaluation. Both strains were able to infect the esophagus and colon and cause an inflammatory response during the acute phase. In the chronic phase, the conventional PCR detected only tissue parasitism in the group infected with Be-78 strain that is associated with the inflammatory process maintenance in this group. Only in animals infected with the Y strain was observed fibrosis in chronic phase. Denervation of myenteric ganglia was observed in infection with both strains during the acute phase, but in chronic phase, denervation was persistent only in animals infected with Be-78 strain. The glial cells involvement was earlier in animals infected with Y strain while animals infected with Be-78 strain showed a reduction in enteric glial cells GFAP-IR only in the chronic phase. These results suggest that although the two strains are capable of causing injury in the digestive tract, the Y strain control these changes earlier, while the Be-78 strain sustain alterations throughout the experimental infection, suggesting the development of chronic digestive lesions.
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Análise de elementos moduladores dos níveis da enzima COX-2 em células H9c2 infectadas com Trypanosoma cruzi; cepa Berenice-62.

Mota, Suianne Letícia Antunes January 2014 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-14T20:14:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseElementosModuladores.pdf: 1035006 bytes, checksum: 86c60d7f9c600a6ddcc7567806c112f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-29T18:49:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseElementosModuladores.pdf: 1035006 bytes, checksum: 86c60d7f9c600a6ddcc7567806c112f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T18:49:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseElementosModuladores.pdf: 1035006 bytes, checksum: 86c60d7f9c600a6ddcc7567806c112f3 (MD5) Previous issue date: 2014 / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é responsável por uma significante mortalidade e morbidade nas Américas Central e do Sul, afetando um número significativo da população mundial. A doença desenvolveu-se ao longo de décadas e a presença de mediadores inflamatórios e a hipertrofia cardíaca são características comuns. Buscando uma compreensão dos mecanismos moleculares que ocorrem no processo inflamatório e que subsidiem a caracterização de marcadores moleculares na patologia chagásica, a proteína COX-2 tornou se objeto de estudo. Sabe- se que a regulação desta proteína pode se dar a nível transcricional e/ou pós traducional, envolvendo um conjunto de fatores protéicos e incluindo a participação de miRNAs. Estudos recentes tem mostrado uma possível co-regulação indireta entre os níveis de PTEN e de COX-2, mas até o momento, os resultados preliminares ainda não elucidaram esses mecanismos. Particularmente, em relação à Doença de Chagas, poucos são os estudos que focam na elucidação do processamento do mRNAs na doença e nos fatores que co-regulam a proteína COX-2. Sendo assim, objetivou se nesse estudo analisar os moduladores do processo pró-inflamatório/ hipertrófico em células H9c2 infectadas pela cepa Berenice-62 do T.cruzi, buscando a caracterização de marcadores moleculares do processo inicial da Doença de Chagas. Para isso, os tempos de infecção de 0, 2, 6, 12, 24 e 48 horas foram estudados, logo após 2 horas de interação com o parasito. A comprovação da infectividade foi feita por ensaios de microscopia pela coloração com Giemsa e Dapi. A análise transcricional de genes correlatos ao processo inflamatório/ hipertrófico e de microRNAs foram realizados por ensaios de qRT-PCRs e as análises das proteínas COX-2, PTEN, P-PTEN foram investigadas nos ensaios de Western blots. Outros ensaios bioquímicos, como o de viabilidade celular e o de mensuração de prostaglandina E2, foram realizados. Com os resultados, conclui-se que a infecção com a cepa Be-62 diminui a viabilidade celular após 48 horas de infecção e modula os níveis de expressão dos marcadores de hipertrofia cardíaca Anf, Bnp e β –myhc, além de modular o ambiente pró-inflamatório nos intervalos iniciais de infecção, considerando-se o aumento da expressão e da atividade da proteína COX-2 e no aumento na produção de PGE2. Os resultados também demonstraram uma relação entre os genes Cox-2, Pten, Akt, sugerindo uma possível correlação cruzada entre COX-2 e PTEN. Os microRNAs-26b, -463,-1 e -21, respectivamente, indicaram uma possível regulação pós-traducional das proteínas COX-2 e PTEN, demonstrando um papel fundamental na instalação do quadro de hipertrofia. Estudos futuros poderão validar o papel dessas moléculas como marcadores moleculares e espera-se que os resultados do presente estudo possam direcionar a caracterização de moléculas que auxiliem no prognóstico e tratamento da doença de maneira direcionada, considerando-se a grande variabilidade genética das cepas do T. cruzi. ____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is responsible for significant mortality and morbidity in Central and South America, affecting a significant number of the world population. The disease develops over decades and the presence of inflammatory mediators and cardiac hypertrophy are common features. Searching for an understanding of the molecular mechanisms that occur during the inflammatory process, and that subsidize the characterization of molecular markers in Chagas disease, COX - 2 protein became an object of study. It is known that the regulation of this protein can occur at transcriptional and/ or post- translational level, involving a number of protein factors and including the involvement of miRNAs. Recent studies have shown a possible indirect co-regulation in the levels of PTEN and COX - 2, but so far the preliminary results not yet elucidated these mechanisms. Particularly in relation to Chagas disease, there are few studies that focus on the elucidation of the processing of mRNAs in this disease and in the factors that co - regulate COX - 2 protein. Therefore, this study was aimed to analyze the hypertrophic/ proinflammatory process modulators in H9c2 cells infected with strain Berenice -62 of the Trypanosoma cruzi, searching for characterize the molecular markers of the initial process of Chagas disease. For this reason, the time of infection of 0, 2, 6, 12, 24 and 48 hours were studied soon after 2 hours from the interaction with the parasite. The proof of the infectivity was performed by microscopy assays by the staining with Giemsa and Dapi. The transcriptional analysis of genes related to the inflammatory / hypertrophic process and microRNAs were performed by qRT- PCR assays and the analyzes of COX-2, PTEN, PTEN - P proteins were explored in Western blots assays. Other biochemical assays such as cell viability and measurement of prostaglandin E2 were performed. From the results, it is concluded that infection with Be- 62 strain decreases cell viability after 48 hours of infection and modulates the levels of expression of markers of cardiac hypertrophy Anf and Bnp β - myhc, in addition to modulate the environment pro-inflammatory in the initial intervals of infections, considering the increased expression and COX -2 protein activity and in the increased production of PGE2. The results also demonstrated a relationship among cox-2, pten, akt genes suggesting a possible cross- correlation between COX-2 and PTEN. MicroRNAs-26b, - 463, -21 and -1 respectively indicate a possible posttranslational regulation of COX-2 and PTEN protein, demonstrating a crucial role in the installation of hypertrophy. Future studies could validate the role of these molecules as molecular markers and it is expected that the results of this study may direct the characterization of molecules that assist in the prognosis and treatment of disease in targeted way, considering the high genetic variability of strains of T. cruzi.
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Estudo do mecanismo de resistência a compostos derivados da classe das tiossemicarbazonas em tripanosomatídeos, com ênfase na glicoproteína-P e na nitrorredutase do tipo I

Campos, Mônica Caroline Oliveira January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_campos_ioc_dout_2014.pdf: 1838588 bytes, checksum: ec217383fd2574c1a377fc8a97dc5507 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os tratamentos disponíveis para a doença de Chagas e as leishmanioses não são eficientes e apresentam alta toxicidade. Diversos estudos mostram que há possibilidade de indução de resistência de Trypanosoma cruzi ao Benznidazol (BZ) o que pode interferir na eficácia do tratamento. O mesmo tem sido relatado com relação aos fármacos utilizados para o tratamento das leishmanioses, embora não exista um mecanismo de ação definido para a resistência a drogas nestes protozoários. Neste trabalho foram focalizados dois potenciais mecanismos: 1) atividade da glicoproteína-P (Pgp), uma proteína de membrana que atua como uma bomba de efluxo dependente de energia e associada ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR); 2) a enzima nitrorredutase presente em T. cruzi (TcNTR), reponsável pela redução de nitroderivados, como BZ, para obter o efeito tripanocida. Na busca de novos compostos seletivos contra T. cruzi e Leishmania amazonensis, nosso grupo vem estudando derivados da classe das tiossemicarbazonas. Em estudos prévios foi observado que o derivado 4-N-(2-metoxi-estiril)-tiossemicarbazona (2-MEOTIO) foi o composto mais efetivo sobre diferentes formas de T. cruzi, enquanto 4-N-(4\2019-hidroxi-3\2019-metoxi-estiril)-tiossemicarbazona (3-MEOTIO) se mostrou o mais eficiente contra L. amazonensis O mecanismo de resistência a estes compostos foi avaliado, e nossos resultados mostram a participação da Pgp na resistência a 2-MEOTIO e BZ em T. cruzi, e a 3-MEOTIO em L. amazonensis. Ainda, em T. cruzi a participação da Pgp parece estar associada não somente à membrana plasmática, como também à mitocôndria. Em T. cruzi, a perda da função do gene da TcNTR está relacionada à resistência ao BZ, no entanto, foi possível demonstrar que outros mecanismos de resistência estão atuando em conjunto nestes parasitos, e ainda, que os mecanismos são diferentes entre clones isolados de uma mesma população (B15). Também descrevemos nesta tese, a validação in vitro da expressão da luciferase em diferentes cepas de T. cruzi transfectadas com o gene red-shifted-luciferase, a serem utilizadas em futuros ensaios de imagem por bioluminescência in vivo. Os mecanismos de resistência a drogas em T. cruzi e L. amazonensis apresentados neste trabalho podem contribuir para a identificação de novos alvos nestes tripanosomatídeos, objetivando o desenho racional de novas drogas para o tratamento da doença de Chagas e leishmanioses / The available drugs for the treatment of Chagas disease and leishmaniasis are not efficient and cause toxic side effects. Several studies show the possibil ity of drug resistance induction to Benznidazol (BZ) in T rypanosoma cruzi, which may interfere with the treatment efficacy . The same has been observed regarding compounds used to treat leishmaniasis, although more studies on drug resistance mechanism are n eed ed . In the present study we focused on two potential drug resistance mechanisms: 1) P - glycoprotein (Pgp) activity, a membrane protein which acts as an efflux pump energy - dependent and is associated with the multidrug resistance fenotype (MDR); 2) the en zyme nitroreductase (TcNTR) found in T. cruzi, which is responsible for the reduction of nitroheterocyclic derivatives, such as Bz and Nifurtimox, generating metabolites with trypanocidal activity . In the search for new selective drugs for the treatment of Chagas disease and leishmaniasis, our group has been studying compounds from the class of the thiosemicarbazone s . Previous studies showed that the 4 - N - (2 - methoxy - styryl) - thiosemicarbazone (2 - MEOTIO) was the most efficient compound on different forms of T. cruzi, whereas 4 - N - (4’ - hidroxy - 3’ - methoxy styryl) - thiosemicarbazone ( 3 - MEOTIO ) was the most active on Leishmania amazonensis . Here we evaluated the drug resistance mechanism to both thiosemicarbazone derivatives, as well as, to BZ which was used as r eference drug for T. cruzi . Our results show the participation of P gp in the resistance to both 2 - MEOTIO and BZ in T. cruzi, as well as in the resistance in L. amazonensis to the compound 3 - MEOTIO . Interestingly, in T. cruzi the participation of Pg p is related to its localization not only in the plasma membrane but also in the mithocondri on . In addition, in T. cruzi , the loss of the TcNTR gene function is involved in BZ - resistance , however i t was also shown that other mechanisms of drug resistan ce a re also involved and that that these mechanisms may be different even among clones obtained from a single population (B15). We also described here the in vitro validation of the expression of luciferase in different T. cruzi strains transfectaded with the red - shifted - luciferase gene , which wil l be further used in bioluminescence imaging assays in vivo . The drug resistance mechanisms in T. cruzi and L. amazonensis shown here may be useful in the identification of parasite targets, aiming the rational design of new drugs to treat for Chagas disease and leishmaniasis
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Atividade ectonucleotidásica e localização celular das NTPDases nos tripanosomatídeos Trypanosoma cruzi e Leishmania tarentolae / Ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDases in tripanosomatids Trypanosoma cruzi and Leishmania

Valle, Myrian Augusta Araujo Neves 09 September 2015 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-12-04T15:20:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4529139 bytes, checksum: 19b46c84a5c4c3b6aaf29763184e718b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-04T15:20:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4529139 bytes, checksum: 19b46c84a5c4c3b6aaf29763184e718b (MD5) Previous issue date: 2015-09-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dentre as moléculas utilizadas pelos tripanosomatídeos para invadir a célula hospedeira estão as E-NTPDases, que são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados nos seus produtos monofosfatados. As propostas do presente trabalho foram avaliar a atividade ectonucleotidásica e a localização celular da NTPDase-1 nas cepas Berenice-62, Colombiana e nos clones CL-Brener e CL-14 de T. cruzi e das NTPDases em L. tarentolae, bem como a capacidade dessas enzimas em participar do processo de adesão. Além disto, avaliar o efeito da fase de crescimento, meio de cultura e choque térmico sobre a atividade e localização NTPDase-1 na cepa Colombiana. Os resultados deste trabalho mostraram de forma geral as atividades na fase logarítimica maiores que na fase estacionária. A NTPDase-1 participa da adesão dos parasitos da cepa Y. Pelas análises ultraestruturais da localização subcelular da NTPDase-1 foi possível observar marcações distribuídas em diversas regiões da célula. Quando se analisou a influência do meio de cultivo e choque térmico na atividade ectonucleotidásica de T. cruzi observou-se maior hidrólise dos nucleotídeos em meio Grace’s 20% SFB sem choque térmico, na fase exponencial. O choque térmico em meio LIT mostrou-se mais eficaz quando comparado à temperatura de 28°C e ao meio Grace’s 20% SFB. A inibição por suramina mostrou um perfil bem variado. A NTPDase-1 da cepa Colombiana participa da adesão celular. Em L. tarentolae os resultados confirmaram por microscopia eletrônica e confocal a presença das NTPDases em diversas organelas e na superfície celular, e mostraram uma preferência pela hidrólise de ATP tanto em formas procíclicas como metacíclicas. As NTPDases foram também parcialmente inibidas na presença de suramina. Além de participarem da adesão celular de L. tarentolae em macrófagos. Este trabalho mostrou a importância das E-NTPdases em tripanosomatídeos mesmo em espécie não patogênica para humanos. / Among the molecules used by trypanosomatids to invade the host cell are the E- NTPDase, enzymes capable of hydrolyze nucleotides tri and/or difosfatados in its monofosfatados products. . For this reason, the actual work aimed to assess the ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDase-1 in both strains Berenice-62 and Colombian and in both clones CL-Brener and CL-14 of T. cruzi; besides, the ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDases in L. tarentolae, as well to investigate the role of these enzymes in the adhesion process. Furthermore, the effects of growth stage, growth medium and heat shock in the activity and localization of NTPDase-1 in the Colombian strain were also evaluated. The results have showed, in general, a higher activity in the logarithmic phase than in the stationary phase. The NTPDase-1 participates cellular adhesion of the parasites of the Y strain. Through ultrastructural analyses of subcellular localization of NTPDase-1 was possible to observe markings distributed on several regions of the cell. Besides, when analyzing the influence of growth medium and heat shock in ectonucleotidase activity of T.cruzi, the nucleotide hydrolyses increased in Grace’s medium 20% without heat shock and exponential phase. The heat shock seemed to be more effective in comparison to the 28°C heat shock in LIT medium. Inhibition by suramin displayed a well diverse profile. Thus, electronic and confocal microscopies confirmed the presence of NTPDases in diverse organelles as well in the cellular surface of Leishmania tarentolae, in addition to the preference for ATP hydrolyses in both procyclic and metacyclic forms of this parasite. Subsequently, the NTPDases were partially inhibited by suramin. Finally, was possible to confirm the involvement of NTPDases in macrophage adhesion process in L. tarentolae. These data suggest that E-NTPDases may be important proteins to the infection process of tripanosomatids including nonpathogenic species to humans.

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