Introdução: apesar dos inúmeros avanços no conhecimento existente na relação entre asma e doença do refluxo gastroesofágico (DRGE), ainda não está bem estabelecido se a terapia desta doença interfere inequivocamente no controle clínico da asma. Objetivos: determinar o efeito do tratamento da DRGE no controle clinico e funcional respiratório em indivíduos asmáticos e avaliar as características clinicas deste grupo de pacientes. Métodos: pacientes com diagnóstico de asma portadores de RGE documentados por pHmetria de 24 horas, foram avaliados por meio de questionários sobre sintomas respiratórios, digestivos e de qualidade de vida em asma, alem de realizarem manometria esofágica, espirometria e pico de fluxo expiratório seriado antes e após o estudo. Quarenta e nove indivíduos que apresentavam RGE patológico na pHmetria esofágica de 24 horas foram selecionados e participaram de um ensaio clínico terapêutico com pantoprazol 40 mg, controlado com placebo de modo randomizado, duplo-cego e paralelo, por 12 semanas consecutivas. Resultados: Quarenta e quatro indivíduos completaram o estudo, sendo 22 em cada grupo. Houve uma melhora significativa no escore de sintomas respiratórios bem como na qualidade de vida no grupo que utilizou medicamento. Os parâmetros funcionais respiratórios não se alteraram com os diferentes tratamentos. Conclusões: Neste estudo, o tratamento efetivo do RGE melhorou a qualidade de vida, determinou diminuição dos sintomas em asma de maneira significativa no grupo que utilizou medicamento, contudo sem alterar os parâmetros funcionais. Não foi possível detectar características clinicas que diferenciassem aqueles pacientes que obtiveram melhora. / Introduction: despite the all existing data and knowledge regarding the association between asthma and gastroesophageal reflux disease(GERD), it has not been well established whether treatment of GERD interferes and improves the clinical control of asthma. Objectives: to determine if medical treatment of GERD influences in the clinical outcome, symptoms and respiratory function of asthmatic patients as well as whether there any detectable clinical characteristics of such patients. Methods: asthmatic patients who signed an informed consent, entered the study after pathologic gastroesophageal reflux was documented by abnormal 24-hour esophageal pH study. Patients we then randomized into two groups (n=22 each) to a double blind, placebo controlled study of pantoprazol(40mg once daily) for 12 consecutive weeks.Patients were assessed by pulmonary function tests, quality of life in asthma and reflux related symptoms questionnaires. Results: 44 patients completed the study period.There was an improvement in the scores of respiratory symptoms as well as in the quality of life in the patients who received pantoprazol as opposed to placebo.On the other hand, there were no significant differences in the pulmonary function tests between groups either in the beginning or towards the end of the study. Conclusions: this study showed that effective treatment of gastroesophageal reflux in asthmatic patients does improve quality of life and yields to significant reduction in the symptoms of asthma, although it does not improve pulmonary function.The present data was unable to detect any clinical features of patients that could identify those who would benefit treatment.

Este trabalho descreve a síntese e caracterização de duas séries inéditas de derivados 1H-benzimidazólicos e aziridínicos contendo os átomos de calcogênio enxofre, selênio e telúrio. Primeiramente os intermediários 2-metil-1H benzimidazol (4a) e 2-(bromometil)-1Hbenzo[ d]imidazol (4b) foram preparados através da reação entre o 1,2-diaminobenzeno 1 e ácidos carboxílicos 2 (Esquema 1a). Posteriormente, foi desenvolvida uma metodologia sintética simples e direta para preparação de calcogeno 1H-benzimidazóis 5a-e, a partir da substituição nucleofílica usando ânions calcogenolato formados in situ e o 2-(bromometil)- 1H-benzo[d]imidazol (4b) (Esquema 1b). Os derivados aziridínicos 12a-j foram sintetizados em seis etapas reacionais, partindose do aminoácido natural L-serina 6. A metodologia empregada também se mostrou bastante versátil, pois foi possível obter aziridinas substituídas na cadeia lateral com nucleófilos de selênio e enxofre (Esquema 2). Adicionalmente, os nucleófilos calcogenolatos foram gerados in situ a partir do respectivo dicalcogeneto, através da redução com NaBH4, em uma mistura 3:1 de THF e etanol, e as substituições foram conduzidas sob refluxo. A caracterização dos novos compostos foi realizada utilizando-se técnicas Espectroscópicas de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) de 1H e 13C, Espectrometria de Massas de Alta Resolução (EMAR), ponto de fusão e análises de rotação óptica. / This work involves the synthesis and characterization of two new series of 1Hbenzimidazoles and aziridines derivatives containing chalcogen atom sulfur, selenium and tellurium. Initially, the intermediates 2-methyl-1H benzimidazole (4a) and 2-(bromomethyl)- 1H-benzo[d]imidazole (4b) were prepared through the reaction between 1,2-diaminobenzene 1 and carboxylic acids 2 (Scheme 1a). Subsequently was developed a simple synthetic direct methodology for the preparation of chalcogen 1H-benzoimidazoles 5a-e by the nucleophilic substitution using chalcogenolate anions formed in situ and the 2-(bromomethyl)-1Hbenzo[ d]imidazole (4b) (Scheme 1b). We also developed a methodology for the synthesis of chalcogen aziridines starting from the amino acid L-serine, in six reaction steps. The methodology also provided to be versatile as it was possible to obtain aziridines substituted in the side chain by nucleophilic selenium and sulfur (Scheme 2). Additionally, the chalcogenolates nucleophiles were generated in situ from the corresponding dichalcogen, by reduction with NaBH4, in a 3:1 mixture of THF and ethanol, and the substitution was carried out under reflux. The new compounds characterization was done using 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance techniques (NMR), High Resolution Mass Spectrometry (HRMS), melting point and optical rotation analysis.

Introdução: apesar dos inúmeros avanços no conhecimento existente na relação entre asma e doença do refluxo gastroesofágico (DRGE), ainda não está bem estabelecido se a terapia desta doença interfere inequivocamente no controle clínico da asma. Objetivos: determinar o efeito do tratamento da DRGE no controle clinico e funcional respiratório em indivíduos asmáticos e avaliar as características clinicas deste grupo de pacientes. Métodos: pacientes com diagnóstico de asma portadores de RGE documentados por pHmetria de 24 horas, foram avaliados por meio de questionários sobre sintomas respiratórios, digestivos e de qualidade de vida em asma, alem de realizarem manometria esofágica, espirometria e pico de fluxo expiratório seriado antes e após o estudo. Quarenta e nove indivíduos que apresentavam RGE patológico na pHmetria esofágica de 24 horas foram selecionados e participaram de um ensaio clínico terapêutico com pantoprazol 40 mg, controlado com placebo de modo randomizado, duplo-cego e paralelo, por 12 semanas consecutivas. Resultados: Quarenta e quatro indivíduos completaram o estudo, sendo 22 em cada grupo. Houve uma melhora significativa no escore de sintomas respiratórios bem como na qualidade de vida no grupo que utilizou medicamento. Os parâmetros funcionais respiratórios não se alteraram com os diferentes tratamentos. Conclusões: Neste estudo, o tratamento efetivo do RGE melhorou a qualidade de vida, determinou diminuição dos sintomas em asma de maneira significativa no grupo que utilizou medicamento, contudo sem alterar os parâmetros funcionais. Não foi possível detectar características clinicas que diferenciassem aqueles pacientes que obtiveram melhora. / Introduction: despite the all existing data and knowledge regarding the association between asthma and gastroesophageal reflux disease(GERD), it has not been well established whether treatment of GERD interferes and improves the clinical control of asthma. Objectives: to determine if medical treatment of GERD influences in the clinical outcome, symptoms and respiratory function of asthmatic patients as well as whether there any detectable clinical characteristics of such patients. Methods: asthmatic patients who signed an informed consent, entered the study after pathologic gastroesophageal reflux was documented by abnormal 24-hour esophageal pH study. Patients we then randomized into two groups (n=22 each) to a double blind, placebo controlled study of pantoprazol(40mg once daily) for 12 consecutive weeks.Patients were assessed by pulmonary function tests, quality of life in asthma and reflux related symptoms questionnaires. Results: 44 patients completed the study period.There was an improvement in the scores of respiratory symptoms as well as in the quality of life in the patients who received pantoprazol as opposed to placebo.On the other hand, there were no significant differences in the pulmonary function tests between groups either in the beginning or towards the end of the study. Conclusions: this study showed that effective treatment of gastroesophageal reflux in asthmatic patients does improve quality of life and yields to significant reduction in the symptoms of asthma, although it does not improve pulmonary function.The present data was unable to detect any clinical features of patients that could identify those who would benefit treatment.

Este trabalho descreve a síntese e caracterização de duas séries inéditas de derivados 1H-benzimidazólicos e aziridínicos contendo os átomos de calcogênio enxofre, selênio e telúrio. Primeiramente os intermediários 2-metil-1H benzimidazol (4a) e 2-(bromometil)-1Hbenzo[ d]imidazol (4b) foram preparados através da reação entre o 1,2-diaminobenzeno 1 e ácidos carboxílicos 2 (Esquema 1a). Posteriormente, foi desenvolvida uma metodologia sintética simples e direta para preparação de calcogeno 1H-benzimidazóis 5a-e, a partir da substituição nucleofílica usando ânions calcogenolato formados in situ e o 2-(bromometil)- 1H-benzo[d]imidazol (4b) (Esquema 1b). Os derivados aziridínicos 12a-j foram sintetizados em seis etapas reacionais, partindose do aminoácido natural L-serina 6. A metodologia empregada também se mostrou bastante versátil, pois foi possível obter aziridinas substituídas na cadeia lateral com nucleófilos de selênio e enxofre (Esquema 2). Adicionalmente, os nucleófilos calcogenolatos foram gerados in situ a partir do respectivo dicalcogeneto, através da redução com NaBH4, em uma mistura 3:1 de THF e etanol, e as substituições foram conduzidas sob refluxo. A caracterização dos novos compostos foi realizada utilizando-se técnicas Espectroscópicas de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) de 1H e 13C, Espectrometria de Massas de Alta Resolução (EMAR), ponto de fusão e análises de rotação óptica. / This work involves the synthesis and characterization of two new series of 1Hbenzimidazoles and aziridines derivatives containing chalcogen atom sulfur, selenium and tellurium. Initially, the intermediates 2-methyl-1H benzimidazole (4a) and 2-(bromomethyl)- 1H-benzo[d]imidazole (4b) were prepared through the reaction between 1,2-diaminobenzene 1 and carboxylic acids 2 (Scheme 1a). Subsequently was developed a simple synthetic direct methodology for the preparation of chalcogen 1H-benzoimidazoles 5a-e by the nucleophilic substitution using chalcogenolate anions formed in situ and the 2-(bromomethyl)-1Hbenzo[ d]imidazole (4b) (Scheme 1b). We also developed a methodology for the synthesis of chalcogen aziridines starting from the amino acid L-serine, in six reaction steps. The methodology also provided to be versatile as it was possible to obtain aziridines substituted in the side chain by nucleophilic selenium and sulfur (Scheme 2). Additionally, the chalcogenolates nucleophiles were generated in situ from the corresponding dichalcogen, by reduction with NaBH4, in a 3:1 mixture of THF and ethanol, and the substitution was carried out under reflux. The new compounds characterization was done using 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance techniques (NMR), High Resolution Mass Spectrometry (HRMS), melting point and optical rotation analysis.

Introdução: apesar dos inúmeros avanços no conhecimento existente na relação entre asma e doença do refluxo gastroesofágico (DRGE), ainda não está bem estabelecido se a terapia desta doença interfere inequivocamente no controle clínico da asma. Objetivos: determinar o efeito do tratamento da DRGE no controle clinico e funcional respiratório em indivíduos asmáticos e avaliar as características clinicas deste grupo de pacientes. Métodos: pacientes com diagnóstico de asma portadores de RGE documentados por pHmetria de 24 horas, foram avaliados por meio de questionários sobre sintomas respiratórios, digestivos e de qualidade de vida em asma, alem de realizarem manometria esofágica, espirometria e pico de fluxo expiratório seriado antes e após o estudo. Quarenta e nove indivíduos que apresentavam RGE patológico na pHmetria esofágica de 24 horas foram selecionados e participaram de um ensaio clínico terapêutico com pantoprazol 40 mg, controlado com placebo de modo randomizado, duplo-cego e paralelo, por 12 semanas consecutivas. Resultados: Quarenta e quatro indivíduos completaram o estudo, sendo 22 em cada grupo. Houve uma melhora significativa no escore de sintomas respiratórios bem como na qualidade de vida no grupo que utilizou medicamento. Os parâmetros funcionais respiratórios não se alteraram com os diferentes tratamentos. Conclusões: Neste estudo, o tratamento efetivo do RGE melhorou a qualidade de vida, determinou diminuição dos sintomas em asma de maneira significativa no grupo que utilizou medicamento, contudo sem alterar os parâmetros funcionais. Não foi possível detectar características clinicas que diferenciassem aqueles pacientes que obtiveram melhora. / Introduction: despite the all existing data and knowledge regarding the association between asthma and gastroesophageal reflux disease(GERD), it has not been well established whether treatment of GERD interferes and improves the clinical control of asthma. Objectives: to determine if medical treatment of GERD influences in the clinical outcome, symptoms and respiratory function of asthmatic patients as well as whether there any detectable clinical characteristics of such patients. Methods: asthmatic patients who signed an informed consent, entered the study after pathologic gastroesophageal reflux was documented by abnormal 24-hour esophageal pH study. Patients we then randomized into two groups (n=22 each) to a double blind, placebo controlled study of pantoprazol(40mg once daily) for 12 consecutive weeks.Patients were assessed by pulmonary function tests, quality of life in asthma and reflux related symptoms questionnaires. Results: 44 patients completed the study period.There was an improvement in the scores of respiratory symptoms as well as in the quality of life in the patients who received pantoprazol as opposed to placebo.On the other hand, there were no significant differences in the pulmonary function tests between groups either in the beginning or towards the end of the study. Conclusions: this study showed that effective treatment of gastroesophageal reflux in asthmatic patients does improve quality of life and yields to significant reduction in the symptoms of asthma, although it does not improve pulmonary function.The present data was unable to detect any clinical features of patients that could identify those who would benefit treatment.

Este trabalho descreve a síntese e caracterização de duas séries inéditas de derivados 1H-benzimidazólicos e aziridínicos contendo os átomos de calcogênio enxofre, selênio e telúrio. Primeiramente os intermediários 2-metil-1H benzimidazol (4a) e 2-(bromometil)-1Hbenzo[ d]imidazol (4b) foram preparados através da reação entre o 1,2-diaminobenzeno 1 e ácidos carboxílicos 2 (Esquema 1a). Posteriormente, foi desenvolvida uma metodologia sintética simples e direta para preparação de calcogeno 1H-benzimidazóis 5a-e, a partir da substituição nucleofílica usando ânions calcogenolato formados in situ e o 2-(bromometil)- 1H-benzo[d]imidazol (4b) (Esquema 1b). Os derivados aziridínicos 12a-j foram sintetizados em seis etapas reacionais, partindose do aminoácido natural L-serina 6. A metodologia empregada também se mostrou bastante versátil, pois foi possível obter aziridinas substituídas na cadeia lateral com nucleófilos de selênio e enxofre (Esquema 2). Adicionalmente, os nucleófilos calcogenolatos foram gerados in situ a partir do respectivo dicalcogeneto, através da redução com NaBH4, em uma mistura 3:1 de THF e etanol, e as substituições foram conduzidas sob refluxo. A caracterização dos novos compostos foi realizada utilizando-se técnicas Espectroscópicas de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) de 1H e 13C, Espectrometria de Massas de Alta Resolução (EMAR), ponto de fusão e análises de rotação óptica. / This work involves the synthesis and characterization of two new series of 1Hbenzimidazoles and aziridines derivatives containing chalcogen atom sulfur, selenium and tellurium. Initially, the intermediates 2-methyl-1H benzimidazole (4a) and 2-(bromomethyl)- 1H-benzo[d]imidazole (4b) were prepared through the reaction between 1,2-diaminobenzene 1 and carboxylic acids 2 (Scheme 1a). Subsequently was developed a simple synthetic direct methodology for the preparation of chalcogen 1H-benzoimidazoles 5a-e by the nucleophilic substitution using chalcogenolate anions formed in situ and the 2-(bromomethyl)-1Hbenzo[ d]imidazole (4b) (Scheme 1b). We also developed a methodology for the synthesis of chalcogen aziridines starting from the amino acid L-serine, in six reaction steps. The methodology also provided to be versatile as it was possible to obtain aziridines substituted in the side chain by nucleophilic selenium and sulfur (Scheme 2). Additionally, the chalcogenolates nucleophiles were generated in situ from the corresponding dichalcogen, by reduction with NaBH4, in a 3:1 mixture of THF and ethanol, and the substitution was carried out under reflux. The new compounds characterization was done using 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance techniques (NMR), High Resolution Mass Spectrometry (HRMS), melting point and optical rotation analysis.

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_campos_ioc_dout_2014.pdf: 1838588 bytes, checksum: ec217383fd2574c1a377fc8a97dc5507 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os tratamentos disponíveis para a doença de Chagas e as leishmanioses não são eficientes e apresentam alta toxicidade. Diversos estudos mostram que há possibilidade de indução de resistência de Trypanosoma cruzi ao Benznidazol (BZ) o que pode interferir na eficácia do tratamento. O mesmo tem sido relatado com relação aos fármacos utilizados para o tratamento das leishmanioses, embora não exista um mecanismo de ação definido para a resistência a drogas nestes protozoários. Neste trabalho foram focalizados dois potenciais mecanismos: 1) atividade da glicoproteína-P (Pgp), uma proteína de membrana que atua como uma bomba de efluxo dependente de energia e associada ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR); 2) a enzima nitrorredutase presente em T. cruzi (TcNTR), reponsável pela redução de nitroderivados, como BZ, para obter o efeito tripanocida. Na busca de novos compostos seletivos contra T. cruzi e Leishmania amazonensis, nosso grupo vem estudando derivados da classe das tiossemicarbazonas. Em estudos prévios foi observado que o derivado 4-N-(2-metoxi-estiril)-tiossemicarbazona (2-MEOTIO) foi o composto mais efetivo sobre diferentes formas de T. cruzi, enquanto 4-N-(4\2019-hidroxi-3\2019-metoxi-estiril)-tiossemicarbazona (3-MEOTIO) se mostrou o mais eficiente contra L. amazonensis O mecanismo de resistência a estes compostos foi avaliado, e nossos resultados mostram a participação da Pgp na resistência a 2-MEOTIO e BZ em T. cruzi, e a 3-MEOTIO em L. amazonensis. Ainda, em T. cruzi a participação da Pgp parece estar associada não somente à membrana plasmática, como também à mitocôndria. Em T. cruzi, a perda da função do gene da TcNTR está relacionada à resistência ao BZ, no entanto, foi possível demonstrar que outros mecanismos de resistência estão atuando em conjunto nestes parasitos, e ainda, que os mecanismos são diferentes entre clones isolados de uma mesma população (B15). Também descrevemos nesta tese, a validação in vitro da expressão da luciferase em diferentes cepas de T. cruzi transfectadas com o gene red-shifted-luciferase, a serem utilizadas em futuros ensaios de imagem por bioluminescência in vivo. Os mecanismos de resistência a drogas em T. cruzi e L. amazonensis apresentados neste trabalho podem contribuir para a identificação de novos alvos nestes tripanosomatídeos, objetivando o desenho racional de novas drogas para o tratamento da doença de Chagas e leishmanioses / The available drugs for the treatment of Chagas disease and leishmaniasis are not efficient and cause toxic side effects. Several studies show the possibil ity of drug resistance induction to Benznidazol (BZ) in T rypanosoma cruzi, which may interfere with the treatment efficacy . The same has been observed regarding compounds used to treat leishmaniasis, although more studies on drug resistance mechanism are n eed ed . In the present study we focused on two potential drug resistance mechanisms: 1) P - glycoprotein (Pgp) activity, a membrane protein which acts as an efflux pump energy - dependent and is associated with the multidrug resistance fenotype (MDR); 2) the en zyme nitroreductase (TcNTR) found in T. cruzi, which is responsible for the reduction of nitroheterocyclic derivatives, such as Bz and Nifurtimox, generating metabolites with trypanocidal activity . In the search for new selective drugs for the treatment of Chagas disease and leishmaniasis, our group has been studying compounds from the class of the thiosemicarbazone s . Previous studies showed that the 4 - N - (2 - methoxy - styryl) - thiosemicarbazone (2 - MEOTIO) was the most efficient compound on different forms of T. cruzi, whereas 4 - N - (4’ - hidroxy - 3’ - methoxy styryl) - thiosemicarbazone ( 3 - MEOTIO ) was the most active on Leishmania amazonensis . Here we evaluated the drug resistance mechanism to both thiosemicarbazone derivatives, as well as, to BZ which was used as r eference drug for T. cruzi . Our results show the participation of P gp in the resistance to both 2 - MEOTIO and BZ in T. cruzi, as well as in the resistance in L. amazonensis to the compound 3 - MEOTIO . Interestingly, in T. cruzi the participation of Pg p is related to its localization not only in the plasma membrane but also in the mithocondri on . In addition, in T. cruzi , the loss of the TcNTR gene function is involved in BZ - resistance , however i t was also shown that other mechanisms of drug resistan ce a re also involved and that that these mechanisms may be different even among clones obtained from a single population (B15). We also described here the in vitro validation of the expression of luciferase in different T. cruzi strains transfectaded with the red - shifted - luciferase gene , which wil l be further used in bioluminescence imaging assays in vivo . The drug resistance mechanisms in T. cruzi and L. amazonensis shown here may be useful in the identification of parasite targets, aiming the rational design of new drugs to treat for Chagas disease and leishmaniasis

Foram estudados 83 pacientes com esofagite erosiva graus I e II, pela classificação de Savary-Miller modificada, divididos em 3 grupos. Um sem Helicobacter pylori, dois outros com Helicobacter pylori, com e sem o gene cagA. Avaliou-se a participação da bactéria e de seu gene cagA, associados à estudo histopatológico de antro e corpo e à gastrinemia basal, na cicatrização da mucosa do esôfago após tratamento com pantoprazol 40 mg ao dia por 6 semanas. Verificou-se que a presença do Helicobacter pylori, independentemente da presença do gene cagA, facilita a cicatrização esofágica. Indivíduos com gastrinemias maiores também tendem a cicatrizar melhor. Não houve relação do resultado do estudo histopatológico com a resposta terapêutica / Eighty three patients with grade I-II of the modified Savary-Miller classification have been studied. They were divided in three groups. One without Helicobacter pylori infection, two with the bacterium, one with and other without the cagA gene. We verified the influence of cagA status, histopathology of antrum and body of the stomach and gastrinemia in the esophageal healing rates after treatment with pantoprazole 40 mg once a day for six weeks. Helicobacter pylori presence but not cagA status and gastrinemia led to better healing rates. Histopathology of the gastric mucosa did not influence the response

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1930.pdf: 1937842 bytes, checksum: 666b965ef3ad7a4749933d0037305ce3 (MD5) Previous issue date: 2007-08-17 / Universidade Federal de Minas Gerais / This work presents the development and validation of a sensitive and enantioselective multidimensional high performance liquid chromatography (HPLC) method for determination of albendazole metabolites: albendazole sulphoxide, chiral compound, albendazole sulphone and albendazole 2-aminesulphone in bovine plasma. The compounds, (±)- albendazole sulphoxide, albendazole sulphone and 2-aminesulphone were extracted from bovine plasma using a octyl restricted access media bovine serum albumin column (C8-RAM-BSA) (5.0 x 0.46 cm i.d.) and analyzed on a chiral column containing amylose tris(3,5-dimethylphenylcarbamate) coated onto APS-Nucleosil support, as stationary phase (15.0 x 0.46 cm i.d.). The chromatographic separations of all target compounds were achieved using a mobile phase composed of phosphate buffer (0.01 M; pH 7.5):acetonitrile (60:40 v/v), flow rate of 0.5 mL/min and fluorescence detection at 290 nm and 320 nm, excitation and emission, respectively. The calibration curves were linear in the concentration range of 40.00-1280 ng/ml for each albendazole sulphoxide enantiomer, 10.0-320 ng/mL for albendazole sulphone and 10.0-320 ng/mL for albendazole 2-aminesulphone. The validated method showed linearity, precision, accuracy and adequate sensitivity, allowing it to be appropriate for pharmacokinetics studies after administration of albendazole by different routes. Moreover, two metabolites of albendazole, the albendazole sulphoxide and albendazole sulphone, were synthesized by oxidation reaction using the aquo(N-oxo of piridine) molybdenum (VI) oxo diperoxo complexe. / Este trabalho apresenta o desenvolvimento e validação de um método, sensível e enantiosseletivo, por Cromatografia Líquida Multidimensional de Alta Eficiência, para a determinação dos metabólitos do albendazol: o albendazol-sulfóxido, metabólito quiral, albendazol-sulfona e albendazol-2-aminosulfona, em plasma bovino. Os compostos (±)-albendazol-sulfóxido, albendazolsulfona e 2-amino-sulfona foram extraídos do plasma bovino através do emprego de uma coluna extratora da fase hidrofóbica C8, do tipo fase de acesso restrito de albumina sérica bovina (C8-RAM-BSA) (5,0 x 0,46 cm d.i.) e analisados em uma coluna quiral tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilose em sílica APS-Nucleosil (15,0 x 0,46 cm d.i.). A separação cromatográfica de todos os compostos de interesse foi obtida através do uso de uma fase móvel composta por tampão fosfato (0,01 M; pH 7,5):acetonitrila (60:40 v/v), com vazão de 0,5 mL/min e detecção por fluorescência, λexc e λem de 290 e 320 nm, respectivamente. As curvas de calibração foram lineares nas faixas de 40,00-1280 ng/mL para cada enantiômero do albendazol-sulfóxido, de 10,00-320,0 ng/mL para o albendazolsulfona e de 20,00-320,0 ng/mL para o albendazol-2-amino-sulfona. O método validado mostrou linearidade, precisão, exatidão e sensibilidade adequada para ser utilizado em estudos farmacocinéticos após administração do albendazol por diferentes vias. Ainda neste trabalho, foi realizada a síntese de dois dos metabólitos do albendazol, o albendazol-sulfóxido e albendazol-sulfona, através da oxidação do sulfeto com emprego do complexo aquo(N-óxido de piridina) oxo diperoxo molibdênio (VI).

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5628.pdf: 1395038 bytes, checksum: 50d9a83b9a58334f0e8e2735f43b4abd (MD5) Previous issue date: 2012-06-06 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work presents the in vitro metabolism of albendazole (ABZ) conducted with microsomal fractions obtained from Wistar rats and performed in analytical and semipreparative scale. Subsequent separation and purification of the major metabolites was accomplished using High Performance Chiral Liquid Chromatography in normal elution mode. The chromatographic separation of ABZ, albendazol sulphoxide (ABZ-SO), albendazole 2-aminesulphone (ABZ-NH2-SO2) and albendazole sulphone (ABZ-SO2) was achieved on a chromatographic chiral column containing amylose tris(3,5-dimethylphenylcarbamate) (15.0 x 0.46 cm i.d.) or (20.0 x 0.70 cm i.d.), hexane:ethanol (55:45) as mobile phase and = 290 nm. Different parameters in the in vitro biotransformation were evaluated in a univariate mode and the best conditions selected as follows: incubation time (6 hours), concentration of ABZ (1.5 mg/mL), concentration of proteins (20 mg/ml) and concentration of reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate dehydrogenase (NADPH; 20 mg/ml). For the NADPH regenerating system was used nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) 100 mmol/L, glucose-6-phosphate (G6P) 100 mmol/L and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) 100 U/mL. For the microsomal fractions both the calcium aggregation or ultracentrifugation methods were appropriate for microsome isolation. Ultracentrifugation provided the highest protein concentration for the extracted samples (35.2 mg/mL). The sample preparation was conducted by solid phase extraction and the recoveries were within 89 to 109%. The in vitro metabolism in milligram scale allowed the production of 1.0 mg of the (+)- ABZ-SO and 8.0 mg of the (-)-ABZ-SO. The ABZ-NH2-SO2 and ABZ-SO2 were not observed under the biotransformation conditions tested. The in vitro metabolism in milligram scale can be used for the production and purification of metabolites for further pharmacokinetics studies. / Este trabalho apresenta o metabolismo in vitro do albendazol (ABZ), realizado em frações microssomais de fígados de ratos Wistar, em escala analítica e semipreparativa. Posteriormente, a separação e isolamento dos metabólitos majoritários foi realizada com emprego de Cromatografia Liquida Quiral de Alta Eficiência no modo normal de eluição. A separação cromatográfica do ABZ, albendazol sulfóxido (ABZ-SO), albendazol 2-aminosulfona (ABZ-NH2-SO2) e albendazol sulfona (ABZ-SO2) foi obtida utilizando uma coluna cromatográfica quiral tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilose em sílica APS-Nucleosil (15,0 x 0,46 cm d.i.) ou (20,0 x 0,70 cm d.i.), fase móvel composta por hexano:etanol (55:45 v/v) e =290 nm. Diferentes parâmetros do processo de biotransformação in vitro foram avaliados, no modo univariado, e as melhores condições selecionadas, sendo estas: tempo de incubação (6 horas), concentração do ABZ (1,5 mg/mL), concentração proteica (20 mg/mL) e concentração de ß-nicotinamida-adenina-dinucleotídeoreduzida (NADPH; 20 mg/mL). Para o sistema regenerador de NADPH, utilizou-se ßnicotinamida- adenina-dinucleotídeo fosfato (NADP) 100 mmol/L, glicose-6-fosfato (G6P) 100 mmol/L e glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) 100 U/mL. Para a obtenção das frações microssomais, tanto o método de precipitação com cloreto de cálcio quanto o de ultracentrifugação, foram apropriados para o isolamento dos microssomas. A ultracentrifugação propiciou uma maior concentração protéica para as amostras extraídas (35,2 mg/mL). O preparo das amostras foi realizado por extração em fase sólida, com valores de recuperação de 89 a 109%. O metabolismo in vitro em escala miligrama propiciou a obtenção de 1,0 mg do (+)-ABZ-SO e 8,0 mg do (-)-ABZ-SO. O ABZ-NH2-SO2 e ABZ-SO2 não foram observados nas condições de biotransformação avaliadas. O metabolismo in vitro em escala miligrama pode ser utilizado para a produção e isolamento de metabólitos para posterior estudos farmacocinéticos.