COSTA, Patrícia Marçal da. Avaliação do potencial antitumoral e antiangiogênico de novos análogos ftalimídicos da talidomida. 2011. 147 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-05T13:43:59Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_pmcosta.pdf: 6733805 bytes, checksum: 2df0bf508787f29942832caf4924eb1a (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:26:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_pmcosta.pdf: 6733805 bytes, checksum: 2df0bf508787f29942832caf4924eb1a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:26:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_pmcosta.pdf: 6733805 bytes, checksum: 2df0bf508787f29942832caf4924eb1a (MD5) Previous issue date: 2011 / The thalidomide was previously used to relieve gastric discomforts during pregnancy, and currently it is used for cancer treatment and inflammatory illnesses. Various phthalimides analogues of thalidomide have been researched for its antiangiogenic and immunemodulatory activity. In previous studies, these analogues showed absence of immunesuppressor activity. In this context, this work initially determined the cytotoxic activity of eight phthalimides analogues of thalidomide, in a series of cancer cell lines and of isolated peripheral mononuclear blood cells (PMBC) after 72h of incubation. None of compounds revealed cytotoxic activity in vitro in cancer cell lines and hemolytic activity towards of PBMC. They also showed no potential damage to the DNA strand, therefore they were not considered genotoxic towards human PMBC. The antitumor effect (in vivo) of thalidomide along with eight analogues was analyzed in mice transplanted with the Sarcoma 180 tumor and treated in a dose of 50mg/Kg/7 days, i.p. The inhibition of the tumor growth was only significant in mice treated with thalidomide (53.5%) and the analogues SC-10 and SC-11 (67.9% and 67.4%, respectively), p< 0,05. The histopathological analysis of the animals’ organs showed mainly that thalidomide and its analogues cause moderate toxic effects, mostly in the liver, but these can be considered reversible. The studies concerning the mechanism of action were deepened using isolated cells from the Sarcoma 180, after 72 hours of incubation, in the doses of 10, 50 and 100µg/mL. The following flow cytometry assays were carried out: 1- Evaluation of the membrane integrity, cellular viability and concentration of cells; 2- Determination of the nuclear DNA content. All the compounds led to the loss of membrane cell integrity and it was found internucleossomal DNA fragmentation in the higher concentrations, indicating the presence of cells with late stage apoptotic characteristics or in the process of secondary necrosis. The evaluation of the antiangiogenic potential, with the Wound Healing assay revealed that for the endothelial cell line (HUVEC) the analogue SC-10 caused a greater inhibition (65.28% ± 1,58), whereas in the tumor cell line the highest effect was of the analogue SC-11 (98.51% ± 0,25). The thalidomide was not capable of reducing cellular migration in none of the tested cell lines. In the chorioallantoic membrane assay (CAM), an antiangiogenic potential was observed with analogous SC-10 and SC-11 (5mg/mL), where there was an inhibition in the number of vessels (12, 88% ± 2,3 and 14.81% ± 3,3), the area of neovascularization (13.14% ± 1,7 and 14.26% ± 1,7) and the total length of vessels in mm2 (9.19% ± 1,5 and 9.86% ± 1,9). The thalidomide was not capable of inhibiting embryonic vascularization. The antitumor effect (in alive) of thalidomide and the analogues SC-10 and SC-11 was analyzed in mice transplanted with the Sarcoma 180 tumor, treated with the dose of 50mg/Kg/10 days, i.p. It was observed inhibition of the tumor growth in the thalidomide treatment (56,6%) and for analogues SC-10 and SC-11 (48.2% and 41.3%, respectively), p< 0,05. The immunostaining of intratumor endothelial cells with CD-31, showed, in the form of microvascular density, reduction in the groups treated with analogues SC-10 and SC-11 (64.59% and 46.51%), but not in the groups treated with thalidomide. These results, along with previous studies of immunemodulation suggest antitumor and antiangiogenic immunity, T cells dependent, for the phthalimides analogues. / A talidomida, anteriormente usada para aliviar desconfortos gástricos da gravidez, atualmente é usada para tratamento do câncer e de doenças inflamatórias. Vários análogos ftalimídicos da talidomida tem sido pesquisados quanto a sua atividade antiangiogênica e imunomodulatória. Em estudos prévios, estes análogos mostraram ausência de atividade imunossupressora. O trabalho determinou, inicialmente, a atividade citotóxica, de oito análogos ftalimídicos da talidomida, frente a linhagens tumorais e de células mononucleadas isoladas de sangue periférico (CMSP) após 72h de incubação. Nenhum dos compostos desencadeou atividade citotóxica in vitro, indução de hemólise em eritrócitos e potencial em induzir dano à fita de DNA, portanto não foram genotóxicos em CMSP humanas. O efeito antitumoral (in vivo) da talidomida e dos oito análogos foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180 e tratados na dose 50mg/Kg/7 dias, via i.p. A inibição do crescimento tumoral foi significante apenas para talidomida (53,5%) e análogos SC-10 e SC-11 (67,9% e 67,4%, respectivamente), p<0,05. A análise histopatológica dos órgãos dos animais mostrou que a talidomida e seus análogos provocam efeitos tóxicos moderados, principalmente no fígado, mas esses podem ser considerados como reversíveis. Os estudos acerca do mecanismo de ação foram aprofundados usando células isoladas do Sarcoma 180, após 72 horas de incubação, nas doses de 10, 50 e 100µg/mL, por citometria de fluxo, através dos seguintes ensaios: 1- Avaliação da integridade de membrana, viabilidade celular e concentração de células; 2- Determinação do conteúdo de DNA nuclear da célula. Todos os compostos induziram a perda de integridade de membrana celular e fragmentação internucleossomal do DNA nas maiores concentrações, indicando presença de células apoptóticas em estágios finais ou em processo de necrose secundária. A avaliação do potencial antiangiogênico, pelo ensaio do Wound Healing revelou que para a linhagem endotelial (HUVEC) o análogo SC-10 causou uma inibição maior (65,28% ± 1,58), enquanto que na linhagem tumoral o efeito maior foi do análogo SC-11 (98,51% ± 0,25). A talidomida não foi capaz de reduzir a migração celular em nenhuma das linhagens testadas. No ensaio da membrana corioalantóide (CAM), potencial antiangiogênico foi observado para os análogos SC-10 e SC-11(5mg/mL), que inibiram o número de vasos (12, 88% ± 2,3 e 14,81% ± 3,3), a área de neovascularização (13,14% ± 1,7 e 14,26% ± 1,7) e o comprimento total de vasos em mm2 (9,19% ± 1,5 e 9,86% ± 1,9). A talidomida, não foi capaz de inibir a vascularização embrionária. O efeito antitumoral (in vivo) da talidomida e análogos SC-10 e SC-11 foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180, tratados na dose 50mg/Kg/10 dias, via i.p. A inibição do crescimento tumoral para a talidomida (56.6%) e para os análogos SC-10 e SC-11 (48,2% e 41,3%, respectivamente), p<0,05. A imunocoloração de células endoteliais intratumorais com CD-31, revelou-se, na forma de densidade microvascular, diminuída nos grupos tratados com análogos SC-10 e SC-11 (64,59% e 46,51%), mas não nos grupos tratados com a talidomida. Estes resultados, unidos a estudos prévios de imunomudulação sugerem imunidade antitumoral e antiangiogênica, dependente de células T, para os análogos ftalimídicos.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2018-07-04T16:56:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deize Evangelista Araújo - 2016.pdf: 3131730 bytes, checksum: 8e60767c3408e2e5dff1bb07362a2c80 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-05T10:40:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deize Evangelista Araújo - 2016.pdf: 3131730 bytes, checksum: 8e60767c3408e2e5dff1bb07362a2c80 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-05T10:40:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deize Evangelista Araújo - 2016.pdf: 3131730 bytes, checksum: 8e60767c3408e2e5dff1bb07362a2c80 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-05-06 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Candidiasis is a serious health problem that affects a large number of people arround the world. The treatment of this disease is carried out with antifungals, which do not provide an effective cure, besides having resistance reports and high toxicity. In this context, it is necessary to study new antifungal compounds. In addition, the delivery form of the compounds in the living organism is also target of research, since the controlled release of compounds in biological systems can improve the mode of action of many drugs. Therefore, nanostructured systems, such as nanoparticles of chitosan, have been widely studied as controlled delivery of drugs. Then, this study aimed to evaluate the antifungal potential against Candida albicans of thiosemicarbazide (TSC), thiosemicarbazide-camphene (TSC-C) and chitosan nanoparticles incorporated with thiosemicarbazide (nanoTSC). In in vitro assays, the compounds were effective to inhibit nearly 100% of the fungus in concentrations of 1,37 mM to TSC, 0,02 mM to TSC-C and 0,27 mM to nanoTSC, and the most effective compound was TSC-C. NanoTSC and empty nanoparticles were also evaluated as to cell toxicity, and the concentration able to inhibit the fungus showed no cytotoxic activity. To confirm the values observed in in vitro assays, experiments were conducted using an animal model for vulvovaginal candidiasis. The results showed that TSC-C was more efficient in inhibiting C. albicans compared with TSC and nanoTSC, but was less effective than miconazole. However, histopathological analysis showed that the groups treated with the compounds under study, showed less intensity of damage to the vaginal epithelium and inflammatory infiltrates, compared with the positive control and the group treated with miconazole. Thus, the results suggest that TSC, nanoTSC and TSC-C are promising compounds in the treatment of vulvovaginal candidiasis. / A candidíase constitui um sério problema de saúde, pois é uma doença que atinge uma grande parcela da população mundial. O tratamento dessa doença é realizado com antifúngicos, que, muitas vezes, não garantem uma cura efetiva, além de apresentarem relatos de resistência e alta toxicidade. Nesse âmbito, faz-se necessário o estudo de novos compostos antifúngicos. Aliado a isso, a forma de liberação de fármacos no organismo vivo é também alvo de pesquisas, uma vez que a liberação controlada de fármacos em sistemas biológicos pode melhorar a forma de ação dos mesmos. Para tanto, os sistemas nanoestruturados, como as nanopartículas de quitosana, têm sido amplamente estudados como meios de liberação controlada de princípios ativos. Sendo assim, esse trabalho teve como objetivo a avaliação do potencial antifúngico de tiossemicarbazida (TSC), tiossemicarbazida-canfeno (TSC-C) e de nanopartículas de quitosana incorporadas com tiossemicarbazida (nanoTSC) contra Candida albicans. Nos ensaios in vitro, os compostos foram eficientes em inibir quase 100% do crescimento do fungo em concentrações de 1,37 mM para TSC, 0,02 mM para TSC-C e 0,27 mM para nanoTSC, sendo que o composto mais eficiente foi TSC-C. NanoTSC e nanopartículas vazias também foram avaliadas quanto a toxicidade celular, sendo que não foi observada atividade citotóxica na concentração capaz de inibir o crescimento do fungo. Para avaliar a atuação dos compostos in vivo, foram realizados experimentos utilizando um modelo animal para candidíase vulvovaginal. Os resultados mostraram que TSC-C apresentou maior eficiência no tratamento de candidíase vulvovaginal em comparação com TSC e nanoTSC, porém foi menos eficiente do que miconazol. No entanto, a análise histopatológica mostrou que os grupos tratados com os compostos em estudo, apresentaram menor intensidade de danos ao epitélio vaginal e infiltrados inflamatórios, se comparados com o controle positivo e com o grupo tratado com miconazol. Dessa maneira, os resultados apresentados sugerem que TSC, nanoTSC e TSC-C são compostos promissores para o tratamento da candidíase vulvovaginal.

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-06T15:32:21Z No. of bitstreams: 1 denise_gj_batista_ioc_bp_0023_2009.pdf: 5405466 bytes, checksum: 0bb4fce7e31b0593bb33cff01fa3e688 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T15:32:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 denise_gj_batista_ioc_bp_0023_2009.pdf: 5405466 bytes, checksum: 0bb4fce7e31b0593bb33cff01fa3e688 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / No centenario da descoberta da doenca de Chagas (DC), esta parasitose negligenciada causada pelo Trypanosoma cruzi e importante causa de mortalidade e morbidade na America Latina, sem vacinas ou agentes quimioterapicos satisfatorios. Esta tese objetivou analisar atividade, seletividade e mecanismos de acao sobre o T.cruzi de 04 classes de compostos (fluorquinolonas - FQ, tiossemicarbazonas - TS, diamidinas aromaticas - DA e arilimidamidas – AIA – uma nova classe a partir de DA) in vitro e in vivo. FQ como NOR e SPAR sao antibioticos com ampla acao bactericida, atuando sobre o DNA via toposoimerases. Embora SPAR e NOR nao tenham sido ativas, seus complexos metalicos de cobre-fenantrolina foram efetivos sobre tripomastigotas e formas intracelulares de T.cruzi, (IC50 1,62 a 4,65µM). TS sao agentes anti-tumorais e microbicidas que atuam sobre ribonucleotideo redutases e cisteina proteases. Todas TS apresentaram baixa toxicidade (>200µM) sobre celulas de mamiferos. Embora N4-metil-4-nitrobenzaldeido-tiossemicarbazona, N4-metill-4-nitroacetofenona-tiossemicarbazona e seus complexos metalicos de manganes (Mn) não tenham sido ativos, o complexo de Mn da N4-metil-4-nitrobenzofenona-tiossemicarbazona revelou-se moderadamente ativo sobre formas sanguineas (IC50 19µM). A terceira classe foi DA, ligantes de DNA com excelente atividade sobre diversos patogenos. Embora todas tenham baixa toxicidade sobre cardiomiocitos, somente tres (DB1645, DB1582 e DB1651) foram ativas contra formas sanguineas e intracelulares (IC50 entre 0,15 a 13,3µM), com atividade relacionada a curvatura das moleculas (sendo as moleculas lineares as nao efetivas). Todas DA localizam-se no nucleo e kDNA dos parasitos, com maior acumulo na ulti Analise in vitro da AIA DB766 sobre T.cruzi revelou: (i) excelente atividade sobre formas sanguineas (60nM) e intracelulares (25nM), mantendo otima acao mesmo quando o parasito e incubado com 96% de sangue de camundongo, sugerindo assim, um potencial uso profilatico, (ii) ação sobre diferentes cepas (peridomiciliares/silvestres), incluindo as naturalmente resistentes ao benznidazole (BZ), com superior eficacia que BZ, (iii) localizacao em compartimentos ricos em DNA, induzindo danos ultra-estruturais na mitocondria. Com base no excelente indice de seletividade (>533 e 714), ensaios foram conduzidos durante a infeccao aguda experimental por T.cruzi (cepas Y e Colombiana), em doses diarias ou alternadas =100mg/kg/dia da DB766 sozinha ou associada ao BZ, administradas via ip ou p.o. por ate 20 dias, com primeira dose no inicio da parasitemia. DB766 (25 e 50mg/kg/dia ip e 100mg/kg/dia p.o.) reduziu (>90%) a carga parasitaria (sangue e tecido cardiaco) e protegeu 90-100% contra mortalidade, com semelhante eficacia ao BZ. AIA reverteu inflamacao e alteracoes eletricas cardiacas e protegeu contra lesoes hepaticas e musculares induzidas pela infeccao. Doses sub-otimas de BZ associado com a DB289 (DA - pro-droga da DB75 – via p.o.) ou com a DB766 (ip) resultaram em =99% reducao de parasitemia e 100% de protecao sobre mortalidade. BZ (p.o)+DB766 (ip) resultou em cura parasitologica (2 em 15 animais) avaliada por hemocultivo e PCR. AIA foi a mais ativa e seletiva sobre T. cruzi, estimulando a continuidade de ensaios pre-clinicos com representantes desta classe visando identificacao de novos farmacos para a DC / In the centenary of the discovery of Chagas' disease (AD), this parasitosis caused by Trypanosoma cruzi neglected and important cause of morbidity and mortality in Latin America, no vaccines or chemotherapeutic agents satisfactory. This thesis aims to analyze activity, selectivity and mechanisms of action of T. cruzi on the 04 classes of compounds (fluoroquinolones - CF thiosemicarbazones - TS, aromatic diamidines - DA and arilimidamidas - AIA - a new class from DA) in vitro and in vivo. CF as NOR and SPAR are antibiotics with broad antibacterial action, acting on the DNA via toposoimerases. Although SPAR and NOR have not been active, their metallic complexes of copper-phenanthroline were effective on trypomastigotes and intracellular forms of T. cruzi (IC50 1.62 to 4.65 mM). TS are anti-tumor agents and microbicides that act on ribonucleotide reductase and cysteine ​​proteases. All TS showed low toxicity (> 200μM) on cells of mammals. Although N4-methyl-4-nitrobenzaldehyde thiosemicarbazone, N4-methyl-4-nitroacetophenone thiosemicarbazone and its metal complex of manganese (Mn) were not active, the complex of Mn N4-methyl-4-nitrobenzophenone thiosemicarbazone revealed was moderately active on blood forms (IC50 19μM). The third class was DA, DNA binders with excellent activity against many pathogens. Although all have low toxicity cardiomyocyte, only three (DB1645, DB1582 and DB1651) were active against blood forms and intracellular (IC 50 from 0.15 to 13.3 mM), activity related to the curvature of the molecules (the molecules being the non-linear effective). OF all located in the nucleus and kDNA from parasites, with greater accumulation in the ulti In vitro analysis of EIA DB766 on T.cruzi revealed: (i) excellent activity against bloodstream forms (60nm) and intracellular (25nm), while maintaining optimal action even when the parasite and incubated with 96% blood of mice, thus suggesting a potential prophylactic use, (ii) act on different strains (peridomestic / wild), including naturally resistant to benznidazole (BZ), with higher efficacy than BZ, (iii) location compartments rich DNA damage inducing ultrastructural the mitochondria . Based on the excellent selectivity index (> 533 and 714), tests were conducted during experimental acute infection by T. cruzi (Y and Colombian strains) in daily doses or alternate = 100mg/kg/day of DB766 alone or associated with BZ, administered ip or po for up to 20 days with the first dose at the onset of parasitaemia. DB766 (25 100mg/kg/day and 50mg/kg/day ip and po) reduced (> 90%) the parasite load (blood and cardiac tissue) and 90-100% protected against mortality, with similar efficacy to the BZ. EIA reversed inflammation and cardiac electrical changes and protected against liver injury induced by infection and muscle. Sub-optimal doses of BZ associated with DB289 (DA - pro-drug of DB75 - via po) or DB766 (ip) resulted in ≥ 99% reduction of parasitemia and 100% protective on mortality. BZ (po) + DB766 (ip) resulted in parasitological cure (2, 15 dogs) assessed by blood culture and PCR. EIA was the most active and selective against T. cruzi, encouraging the continuation of pre-clinical trials with representatives of this class in order to identification of new drugs for AD

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_campos_ioc_dout_2014.pdf: 1838588 bytes, checksum: ec217383fd2574c1a377fc8a97dc5507 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os tratamentos disponíveis para a doença de Chagas e as leishmanioses não são eficientes e apresentam alta toxicidade. Diversos estudos mostram que há possibilidade de indução de resistência de Trypanosoma cruzi ao Benznidazol (BZ) o que pode interferir na eficácia do tratamento. O mesmo tem sido relatado com relação aos fármacos utilizados para o tratamento das leishmanioses, embora não exista um mecanismo de ação definido para a resistência a drogas nestes protozoários. Neste trabalho foram focalizados dois potenciais mecanismos: 1) atividade da glicoproteína-P (Pgp), uma proteína de membrana que atua como uma bomba de efluxo dependente de energia e associada ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR); 2) a enzima nitrorredutase presente em T. cruzi (TcNTR), reponsável pela redução de nitroderivados, como BZ, para obter o efeito tripanocida. Na busca de novos compostos seletivos contra T. cruzi e Leishmania amazonensis, nosso grupo vem estudando derivados da classe das tiossemicarbazonas. Em estudos prévios foi observado que o derivado 4-N-(2-metoxi-estiril)-tiossemicarbazona (2-MEOTIO) foi o composto mais efetivo sobre diferentes formas de T. cruzi, enquanto 4-N-(4\2019-hidroxi-3\2019-metoxi-estiril)-tiossemicarbazona (3-MEOTIO) se mostrou o mais eficiente contra L. amazonensis O mecanismo de resistência a estes compostos foi avaliado, e nossos resultados mostram a participação da Pgp na resistência a 2-MEOTIO e BZ em T. cruzi, e a 3-MEOTIO em L. amazonensis. Ainda, em T. cruzi a participação da Pgp parece estar associada não somente à membrana plasmática, como também à mitocôndria. Em T. cruzi, a perda da função do gene da TcNTR está relacionada à resistência ao BZ, no entanto, foi possível demonstrar que outros mecanismos de resistência estão atuando em conjunto nestes parasitos, e ainda, que os mecanismos são diferentes entre clones isolados de uma mesma população (B15). Também descrevemos nesta tese, a validação in vitro da expressão da luciferase em diferentes cepas de T. cruzi transfectadas com o gene red-shifted-luciferase, a serem utilizadas em futuros ensaios de imagem por bioluminescência in vivo. Os mecanismos de resistência a drogas em T. cruzi e L. amazonensis apresentados neste trabalho podem contribuir para a identificação de novos alvos nestes tripanosomatídeos, objetivando o desenho racional de novas drogas para o tratamento da doença de Chagas e leishmanioses / The available drugs for the treatment of Chagas disease and leishmaniasis are not efficient and cause toxic side effects. Several studies show the possibil ity of drug resistance induction to Benznidazol (BZ) in T rypanosoma cruzi, which may interfere with the treatment efficacy . The same has been observed regarding compounds used to treat leishmaniasis, although more studies on drug resistance mechanism are n eed ed . In the present study we focused on two potential drug resistance mechanisms: 1) P - glycoprotein (Pgp) activity, a membrane protein which acts as an efflux pump energy - dependent and is associated with the multidrug resistance fenotype (MDR); 2) the en zyme nitroreductase (TcNTR) found in T. cruzi, which is responsible for the reduction of nitroheterocyclic derivatives, such as Bz and Nifurtimox, generating metabolites with trypanocidal activity . In the search for new selective drugs for the treatment of Chagas disease and leishmaniasis, our group has been studying compounds from the class of the thiosemicarbazone s . Previous studies showed that the 4 - N - (2 - methoxy - styryl) - thiosemicarbazone (2 - MEOTIO) was the most efficient compound on different forms of T. cruzi, whereas 4 - N - (4’ - hidroxy - 3’ - methoxy styryl) - thiosemicarbazone ( 3 - MEOTIO ) was the most active on Leishmania amazonensis . Here we evaluated the drug resistance mechanism to both thiosemicarbazone derivatives, as well as, to BZ which was used as r eference drug for T. cruzi . Our results show the participation of P gp in the resistance to both 2 - MEOTIO and BZ in T. cruzi, as well as in the resistance in L. amazonensis to the compound 3 - MEOTIO . Interestingly, in T. cruzi the participation of Pg p is related to its localization not only in the plasma membrane but also in the mithocondri on . In addition, in T. cruzi , the loss of the TcNTR gene function is involved in BZ - resistance , however i t was also shown that other mechanisms of drug resistan ce a re also involved and that that these mechanisms may be different even among clones obtained from a single population (B15). We also described here the in vitro validation of the expression of luciferase in different T. cruzi strains transfectaded with the red - shifted - luciferase gene , which wil l be further used in bioluminescence imaging assays in vivo . The drug resistance mechanisms in T. cruzi and L. amazonensis shown here may be useful in the identification of parasite targets, aiming the rational design of new drugs to treat for Chagas disease and leishmaniasis