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Previous issue date: 2015-04-20 / CAPES / FAPEMAT / Arbovírus são transmitidos por artrópodes hematófagos, representando um problema de saúde
pública em áreas tropicais. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade de espécies de
culicídeos e sua frequência de infecção por Alphavirus e Flavivirus em Cuiabá, MT. Foram
realizadas capturas com aspirador de Nasci e puçá entre janeiro e abril de 2013 em três locais
de 200 setores censitários, definidos aleatoriamente. Os culicídeos foram identificados com
chave dicotômica de Forattini, alocados em pools (1-20 mosquitos) segundo sexo, espécie, data,
local de coleta e armazenados a -80˚C. Pools de fêmeas foram submetidos à extração de RNA
e DNA total, à multiplex semi-nested-RT-PCR para cinco alphavírus e 11 flavivírus e Nested-
PCR para identificação de Culex (Cx.) quinquefasciatus. Amostras positivas para SLEV,
DENV-1, -4 e MAYV foram submetidas a single RT-PCR e sequenciamento nucleotídico.
Pools positivos para o MAYV foram inoculados em células Vero e submetidos a RT-PCR para
o gene de envelope E1 dos alphavirus. Pools positivos para flavivirus foram inoculados em
células C6/36 (Flavivirus). Calculou-se a taxa de infecção mínima (MIR). Foram capturados
11.090 mosquitos, 4.556 fêmeas de 14 espécies, perfazendo 610 pools. Foram analisados 171
pools de Aedes (Ae.) aegypti; 1 Ae. albopictus; 1 Aedes sp.; 5 Cx. bidens/interfor; 1 Cx.
spinosus; 403 Cx. quinquefasciatus; 1 Galindomyia sp; 6 Limatus sp; 2 Mansonia wilsoni; 5
Psorophora (Ps.) sp; 1 Ps. ciliata; 11 Ps. varipes/albigenu; 1 Sabethes chloropterus e 1
Uranotaenia sp. Encontrou-se 1/171 (MIR=0,92) pool de Ae. aegypti positivo para DENV-1;
1/403 (MIR= 0,2) Cx. quinquefasciatus para SLEV genótipo V-A, 12/403 (MIR=3,5) de Cx.
quinquefasciatus, 4/171 (MIR=3,67) de Ae. aegypti para MAYV; destes, cinco pools
apresentaram co-infecção com DENV-4. Um produto de 1,3 kb obtido com o protocolo para o
gene de envelope de três pools positivos para o MAYV resultou em sequências nucleotidicas
inespecíficas. O MAYV foi isolado de dois pools contendo duas fêmeas não ingurgitadas de
Ae. aegypti (#958) e duas de Cx. quinquefasciatus (#489). Positividade para DENV-4 foi
identificada em 58/171 (MIR=53,35) Ae. aegytpi, 105/403 (MIR=30,65) Cx. quinquefasciatus,
2/5 (MIR=400) Psorophora sp, 2/11 (MIR=142,85) Ps. varipes/albigenu, 1/1 (MIR= 1000)
Sabethes chloropterus, 2/5 (MIR=285.7) Cx. bidens/interfor e 1/1 (MIR=1000) Aedes sp. O
DENV-4 foi isolado de dois pools contendo três (#329) e 16 (#806) fêmeas de Cx.
quinquefasciatus não ingurgitadas. O SLEV, MAYV e os sorotipos do DENV foram
identificados em pacientes com suspeita de dengue na cidade de Cuiabá em estudos prévios do
Laboratório de Virologia. Experimentalmente, Culex e Aedes spp. são vetores competentes do
MAYV. A identificação do vírus em fêmeas não ingurgitadas sugere que estas espécies podem
estar envolvidas no ciclo urbano do MAYV em Cuiabá. Dentre os sorotipos do DENV, somente
o DENV-1 e o DENV-4 foram identificados em culicídeos. O DENV-4 tem produzido
importantes epidemias em MT desde 2012. A positividade para DENV-4 em diferentes espécies
de culicídeos pode ser decorrente de infecção natural ou da hematofagia em humanos, pois
muitos destes pools apresentavam fêmeas ingurgitadas. Cuiabá possui ecossistema favorável
para a ocorrência de arboviroses e proliferação de vetores. Estudos envolvendo vigilância
entomológica e virológica são importantes para estimar a situação epidemiológica dos arbovírus
no estado. / Arbovirus are transmitted by hematophagous arthropods, posing a public health issue in tropical
areas. The aim of this study was to investigate the diversity of culicidae and their frequency of
infection by arboviruses from Alphavirus and Flavivirus genus in Cuiabá, MT. To achieve that,
culicids were captured with Nasci aspirators and hand net between January and April 2013 in
three locations of 200 censitary sectors randomly defined. The specimens were identified using
the Forattini dichotomy key, allocated in pools (1-20 mosquitoes), according to sex, species,
day and place of capture, and stored at -80˚C. Female pools were subjected to total RNA and
DNA extraction and to multiplex semi-nested-RT-PCR for five alphaviruses and 11 flaviviruses
and Nested-PCR for Culex (Cx.) quinquefasciatus identification. The pools positive for SLEV,
DENV-1, -4 and MAYV were subjected to single RT-PCR and nucleotide sequencing. MAYVpositive
pools were inoculated in Vero cells and subjected to RT-PCR for the E1 envelope gene
of alphaviruses. Pools positive for flaviviruses were inoculated in C6/36 cells. The minimum
infection rate (MIR) was calculated. 11,090 mosquitoes were captured, 4,556 females
belonging to 14 species, comprising 610 pools, 171 pools of Aedes (Ae.) aegypti specimens; 1
Ae. albopictus; 1 Aedes sp.; 5 Cx. bidens/interfor; 1 Cx. spinosus; 403 Cx. quinquefasciatus; 1
Galindomyia sp.; 6 Limatus sp.; 2 Mansonia wilsoni; 5 Psorophora sp.; 1 Ps. ciliata; 11 Ps.
varipes/albigenu; 1 Sabethes chloropterus e 1 Uranotaenia sp. Among them, 1/171
(MIR=0.92) Ae. aegypti pool was positive for DENV-1 and 1/403 (MIR=0.3) Cx.
quinquefasciatus for SLEV genotype V-A. For MAYV, 12/403 (MIR=3.5) Cx.
quinquefasciatus, 4/171 (MIR=3.67) Ae. aegypti were positive, five of them were also infected
by DENV-4. A DNA product with 1.3 kb obtained from three pools positive for MAYV with
the protocol for the envelope gene resulted in unspecific nucleotide sequences. MAYV was
isolated from two pools, both containing two non-engorged females of Ae. aegypti (#958) and
Cx. quinquefasciatus (#489). DENV-4 was detected in 58/171 (MIR=53.35) Ae. aegytpi,
105/403 (MIR=30,65) Cx. quinquefasciatus, 2/5 (MIR=400) Psorophora sp., 2/11
(MIR=142.85) Ps. varipes/albigenu, 1/1 (MIR= 1000) Sabethes chloropterus, 2/5 (MIR=285.7)
Cx. bidens/interfor and 1/1 (MIR=1000) Aedes sp. DENV-4 was isolated from two pools
containing three (#329) and 16 (#806) non-engorged females of Cx. quinquefasciatus. The
SLEV, MAYV and the four DENV serotypes were identified in patients suspected of harboring
dengue infection in Cuiabá in previous studies of the Virology Laboratory. Experimentally,
Culex and Aedes spp. are competent vectors for MAYV. The identification of the virus in nonengorged
females suggests these species may be involved in the urban cycle of MAYV in
Cuiabá. Among the DENV serotypes, only DENV-1 and DENV-4 were identified in culicids
captured in the city. DENV-4 has been responsible for major outbreaks in MT since 2012. The
identification of DENV-4 in several mosquito species might be resultant either from natural
infection or hematophagy in humans, since several of these pools presented engorged females.
Cuiabá presents a favorable ecosystem for the occurrence of arboviruses and vector
proliferation. Studies involving entomological and virological surveillance are important to
estimate the epidemiological situation of arboviruses in the state.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:1/694 |
| Date | 20 April 2015 |
| Creators | Serra, Otacília Pereira |
| Contributors | Slhessarenko, Renata Dezengrini, Slhessarenko, Renata Dezengrini, Pavoni, Juliana Helena Chavez, Dantas, Elisangela Santana Oliveira, Miyazaki , Rosina Djunko |
| Publisher | Universidade Federal de Mato Grosso, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, UFMT CUC - Cuiabá, Brasil, Faculdade de Medicina (FM) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFMT, instname:Universidade Federal de Mato Grosso, instacron:UFMT |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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