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Previous issue date: 2010-03-11 / Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis
(PCM), a human systemic mycosis, prevalent in Latin America. Extracellular matrix
(ECM) is a complex net where collagens, laminin and fibronectin can be found and,
when exposed, is the first site for the fungus adhesion. Our aim was to study genes
involved in the adhesion process using Representational Difference Analysis (RDA).
RDA is a PCR-coupled subtractive method that allows the isolation of genes
differentially expressed in two different cDNA populations. Hence, cDNAs were
synthesized from RNAs extracted from P. brasiliensis yeast cells adhered to collagen
and fibronectin to identify overexpressed genes. Genes involved in a wide range of
cellular process were found and PbCtr3 (cooper transporter) and enolase (PbEno) were
chosen to further studies. A synthetic peptide (PbCTR3) and the recombinant enolase
(rPbEno) were utilized together with the anti-rPbEno polyclonal antibody in functional
analysis with ECM components and plasminogen. The studies suggest that P.
brasiliensis enolase, in the surface, is able to generate plasmin from plasminogen by
plasminogen activator. Therefore, it was also demonstrated that this protein is secreted
and able to promote fungus adhesion and invasion to cells. These findings clearly
establish the role of enolase in the patogenicity of P. brasiliensis. / Paraccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose
(PCM), uma micose sistêmica, prevalente na América Latina. A matriz extracelular
(MEC) é uma rede complexa formada por colágeno, laminina, fibronectina, entre outros
componentes, que, quando exposta, é o local inicial de adesão do fungo. Nosso objetivo
foi estudar genes envolvidos nesse processo de adesão utilizando Análise Diferencial
Representacional (RDA). RDA é um método de subtração acoplado a PCR que permite
o isolamento de genes diferencialmente expressos entre duas populações de cDNAs
diferentes. Assim, cDNAs foram sintetizados a partir de RNAs extraídos de células
leveduriformes de P. brasiliensis aderidos à colágeno e fibronectina para identificar
genes super-expressos nestas condições. Genes envolvidos com vários processos
celulares foram observados e PbCtr3 (transportador de cobre) e enolase (PbEno) foram
escolhidos para análises adicionais. Um peptídeo sintético (PbCTR3) e a proteína
recombinante (rPbEno) foram utilizados, juntamente com o anticorpo policlonal antirPbEno
em análises funcionais com componentes da MEC e plasminogênio. Os estudos
sugerem que a enolase de P. brasiliensis, localizada na parede celular, é capaz de gerar
plasmina a partir do plasminogênio mediada pelo ativador de plasminôgenio. Além
disso, foi também demonstrado que esta proteína é secretada sendo capaz de promover a
adesão e invasão do fungo a células. Esses estudos claramente estabelecem o papel da
enolase na patogenicidade de P. brasiliensis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tde/1563 |
| Date | 11 March 2010 |
| Creators | NOGUEIRA, Sarah Veloso |
| Contributors | SOARES, Célia Maria de Almeida |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Doutorado em Medicina Tropical, UFG, BR, Ciências da Saúde |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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