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Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Study Rationale: Oral potentially malignant disorders (OPMDs) consist of morphologically altered tissues, which present a greater risk of malignant transformation than normal tissue. The most frequently found OPMDs are leukoplakia (OL) and actinic cheilitis (AC). It is now known that mutated or genetically altered cells have developed immunomodulatory strategies which allow them to escape antitumor immune response. The immune escape mechanisms used by mutated cells include the expressions of HLA-G, HLA-E and PD-L1 molecules and the IL-10 and TGF-β cytokines. Objective: To evaluate tissue and salivary expressions of HLA-G, HLA-E and PD-L1 molecules and IL-10 and TGF-β1, -β2 e -β3 cytokines in OPMDs, and relate such immunomodulatory mediators with antitumor immune response and potential for malignant transformation of lesions. Methods: Samples of patients with OL (n= 80) were submitted to immunohistochemistry and ELISA techniques to evaluate tissue and salivary expressions of the HLA-G, HLA-E, PD-L1, IL-10, TGF-β1, TGF-β2 and TGF-β3. In addition, samples of patients with QA (n= 30) were submitted to immunohistochemistry technique to evaluation tissue expression of HLA-G, HLA-E, PD-L1 and IL-10. Control group (n= 20) consisted of saliva and tissue of healthy individuals. The immunostained tissue samples were measured using a semi-quantitative method in association with staining intensity. The expression of these molecules and cytokines were related with the malignant potential of the lesions (epithelial dysplasia grading, proliferation- Ki-67 and apoptosis index- mutated p53). Moreover, the association with the density of granzyme B (GB+) cells and regulatory T cells FOXP3+ was investigated. The statistical tests used were: Fisher’s exact or Pearson Chi-Squared, Mann-Whitney and Kruskal- Wallis tests. The significance level was set at P < 0.05. Results: Fifteen samples showed severe dysplasia, twenty moderate, thirty-two mild and thirteen non-dysplasia. Forty samples (50%) of OL presented combined high Ki-67/p53. Irrespective of the severity of epithelial dysplasia and proliferation/apoptosis index in OL, an overexpression of HLA-G, -E, PD-L1, IL-10, TGF-β2 and -β3 was found in OL when compared with control (P < 0.05). The number of GB+ and FOXP3+ cells in OL was similar to control. Salivary concentration of sHLA-G, IL-10 and TGF-β did not allow distinction between OL patients and healthy individuals (P > 0.05). As regards to AC, we showed that this lesion had an increase in expression of HLA-G, HLA-E, IL-10 and PD-L1 when compared to control; however this increase was statistically significant only for PD-L1 (P= 0.04). Conclusion: The OL showed a reduced cytotoxic immune response (low number of GB+ cells) associated with a high expression of immunomodulatory mediators; however, this expression was independent of epithelial dysplasia grading, proliferation and apoptosis index. Regarding AC we also showed an increase in expression of HLA-G, -E, IL-10 and PD-L1 when compared to the control. Thus, our findings suggest that this lesion present an immunosuppressive microenvironment which favors the escape of mutated keratinocytes in any stage dysplastic, proliferation or apoptosis which this disease finds itself. / Justificativa do estudo: As desordens potencialmente malignas (DPMs) de boca consistem em tecidos morfologicamente alterados, os quais apresentam maior risco de transformação maligna que o tecido normal. Dentre as DPMs de boca, as mais frequentes são a leucoplasia (LE) e a queilite actínica (QA). Atualmente, sabe-se que células mutadas ou geneticamente alteradas são capazes de desenvolver estratégias imunomodulatórias que lhes permitem a evasão à resposta imune antitumoral. Dentre esses mecanismos, pode-se citar a expressão das moléculas HLA-G, HLA-E e PD-L1 e das citocinas IL-10 e TGF-β. Objetivo: Avaliar a expressão tecidual e salivar das moléculas HLA-G, HLA-E e PD-L1 e das citocinas IL-10 e TGF-β1, -β2 e -β3 em DPMs de boca e relacionar tais mediadores imunomodulatórios com a resposta imune antitumoral e com o potencial de transformação maligna dessas lesões. Metodologia: Amostras de pacientes acometidos pela LE (n= 80) foram submetidas às técnicas da imunoistoquímica e ELISA para avaliação da expressão tecidual e salivar, respectivamente, das proteínas supracitadas. Adicionalmente, amostras de pacientes acometidos pela QA (n= 30) foram submetidas à técnica da imunoistoquímica para avaliação da expressão tecidual das proteínas HLA-G, HLA-E, PD-L1 e IL-10. O grupo controle (n= 20) consistiu de tecido e saliva de indivíduos saudáveis. As amostras teciduais imunomarcadas foram mensuradas por um método semi-quantitativo associado à intensidade de marcação. A expressão dos mediadores imunomodulatórios foi associada com o potencial de malignização das lesões (gradação de displasia epitelial, índice de proliferação celular- Ki-67 e apoptose- p53 mutado). Além disso, a associação com a densidade de células granzima B+ (GB+) e células T regulatórias FOXP3+ foi investigada. Os testes estatísticos utilizados foram: teste exato de Fisher ou qui-quadrado de Pearson, Mann-Whitney e Kruskal- Wallis. O nível de significância foi estabelecido em P < 0,05. Resultados: No que se refere a LE, o presente estudo demonstrou que 15 amostras apresentaram displasia severa, 20 moderada, 32 leve e 13 sem displasia. Quarenta amostras (50%) apresentram o combinado alto Ki-67/p53. Independente da severidade da displasia epitelial e do índice de proliferação celular/ apoptose, observou-se uma expressão aumentada de HLA-G, HLA-E, PD-L1, IL-10, TGF-β2 e -β3 quando comporado ao controle (P < 0.05). O número de células GB+ e FOXP3+ nas LE foi similar ao controle. Os níveis salivares de HLA-G solúvel (HLA-Gs), IL-10 e TGF-β não nos possibilitou uma diferenciação entre os pacientes com LE e indivíduos saudáveis (P > 0,05). Em relação aos resultados obtidos para QA, evidenciou-se que essa lesão teve um aumento na expressão de HLA-G, HLA-E, IL-10 e PD-L1 em comparação ao controle, todavia esse aumento só foi estatisticamente significativo para o PD-L1 (P= 0,04). Conclusão: As LEs apresentaram uma reduzida resposta imunológica citotóxica (baixo número de células GB+) associada a uma elevada expressão de mediadores imunomodulatórios; todavia essa expressão não possui relação com a gradação de displasia epitelial e índice de proliferação celular e apoptose. Em relação à QA, nós também evidenciamos uma maior expressão de HLA-G, HLA-E, IL-10 e PD-L1 se comparado ao controle. Desta forma, nossos achados sugerem que tais lesões apresentam um microambiente imunossupressor que favorece a evasão de queratinócitos mutados em qualquer estágio de alteração displásica, proliferação ou apoptose que essa doença se encontre.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/6953 |
| Date | 20 February 2017 |
| Creators | Gonçalves, Andréia de Souza |
| Contributors | Batista, Aline Carvalho, Batista, Aline Carvalho, Yamamoto, Fernanda Paula, Alves, Pollianna Muniz, Silva, Tarcilia Aparecida, Loyola, Patrícia Resende Alo Nagib |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Odontologia (FO), UFG, Brasil, Faculdade de Odontologia - FO (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -2325576619034292269, 600, 600, 600, 600, -5569154581575113691, -1816740449898491657, 2075167498588264571 |
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