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Previous issue date: 2002 / Oligonucleotídeos foram construídos com base na sequência primária do
gene codificando o rRNA de Plasmodium para amplificar DNA de P. falciparum,
P. vivax, P. malariae e P. ovale, de maneira gênero-específica. Três sistemas
de PCR foram utilizados: PCR simples, hemi-nested PCR convencional e
hemi-nested PCR em um único tubo, desenvolvidos em nosso laboratório. Na
PCR simples, composta de 30 ciclos, foram utilizados os oligonucleotídeos GJ1
e HR842 (20 pmol/50μl), já testados por nosso grupo. Na hemi-nested PCR
convencional utilizou-se três oligonucleotídeos (GJ1, PGFO3 e HR842), em
duas reações sequenciais, sendo o PGFO3 construído durante o
desenvolvimento do presente trabalho, visando a detecção do gênero
Plasmodium. O par GJ1 e HR842 foram utilizados como oligonucleotídeos
externos na primeira reação, e o PGFO3 como interno, ancorado ao HR842 na
segunda reação. A hemi-nested PCR em um único tubo consistiu em 60
ciclos (92ºC, 30s; 58ºC, 30s e 72ºC, 45s), e concentrações limitantes de
oligonucleotídeos externos (4 pmols/50μl) participavam da PCR sem
competição com os oligonucleotídeos internos durante os primeiros 15 ciclos
da reação e 40 pmol/50μl de primers internos (imobilizados na face interna da
tampa do microtubo) foram introduzidos na PCR no 16º ciclo. As concentrações dos outros componentes da reação foram as mesmas utilizadas nas reações
convencionais de PCR. Observou-se que a quantidade mínima de DNA
genômico detectada pela PCR simples, hemi-nested PCR e hemi-nested
PCR em um único tubo foi de 10 pg; 0,01 pg e 0,1 pg, respectivamente. Apesar
da hemi-nested PCR em um único tubo ter sido menos sensível que a heminested
PCR convencional, é muito mais simples e conveniente, já que o risco
de contaminação cruzada é bem menor. Esses sistemas moleculares de
diagnóstico podem ser usados em situações quando se requer uma alta
sensibilidade e especificidade, tais como na avaliação da eficiência de
quimioterapia, detecção precoce de infecção e prevenção de transmissão a
partir de pacientes hipoparasitêmicos
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/4956 |
| Date | January 2002 |
| Creators | Maria Lapa Montenegro, Lílian |
| Contributors | Charifker Schindler, Haiana |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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