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Previous issue date: 2010-10-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A 140,0 kDa lectin was purified and characterized from the mushroom Clavaria cristata. The purification procedures from the crude extract of the mushroom comprised gel filtration chromatography on Sephacryl s200 and ion exchange on Resource Q column. The purified lectin agglutinated all types of human erythrocytes with preference for trypsinized type O erythrocytes. The haemagglutinating activity is dependent of Ca 2+ ions and was strongly inhibited by the glycoprotein bovine submaxillary mucin (BSM) up to the concentration of 0, 125 mg/mL. The C. cristata lectin (CcL) was stable in the pH
range of 2,5-11,5 and termostable up to 80 ?C. CcL molecular mass determined by gel filtration on a Superose 6 10 300 column was approximately 140,3 kDa. SDS polyacrilamide gel electrophoresis revealed a single band with a molecular mass of
approximately 14,5 kDa, when the lectin was heated at 100 ?C in the presence or absence of ?-mercaptoethanol. CcL induced activation of murine peritoneal macrophages in vitro resulting in the release of nitric oxide (NO), reaching the maximum production at 24 h. In experimental paw oedema model in mice, CcL showed proinflammatory activity being able to induce oedema formation. Cell viability of HepG2, MDA 435 e 3T3 cell lines was examined after 72 h of incubation with CcL in different
concentrations (0,5-50 ?g/mL). CcL inhibited HepG2 cells growth with an IC50 value of 50 ?g/mL. In the present work, the observed immunomodulatory and antiproliferative
effects indicate CcL as a possible immunomodulator compound, interfering in the macrophages immune response, taking possible anti-parasitic, anti-tumoral effects or diagnostic and/or therapeutic / Uma lectina de 140,0 kDa foi purificada e caracterizada a partir do extrato prot?ico do fungo Clavaria cristata. O processo de purifica??o a partir do extrato bruto do fungo compreendeu uma cromatografia de gel filtra??o SEPHACRYL S200 e uma cromatografia de troca i?nica Resource Q em sistema FPLC-AKTA (Fast Protein Liquid Chromatography). A lectina de C. cristata (CcL) aglutinou todos os tipos de eritr?citos
humanos com prefer?ncia pelos do tipo O tratados com tripsina. A atividade hemaglutinante de CcL se mostrou dependente do ?on c?lcio e foi fortemente inibida pela glicoprote?na mucina bovina (BSM) at? a concentra??o m?nima de 0,125 mg/mL. CcL foi est?vel numa ampla faixa de pH, que variou entre 2,5-11,5 e termoest?vel at? 80?C por uma hora. A massa molecular da CcL, determ inada por cromatografia de gel
filtra??o Superose 6 10 300 GL em sistema de FPLC-AKTA foi de aproximadamente 140,3 kDa e uma eletroforese SDS-PAGE revelou uma ?nica banda com massa molecular de aproximadamente 14,5 kDa quando a lectina foi aquecida ? temperatura de 100 ?C. CcL induziu a ativa??o de macr?fagos murinos in vitro com conseq?ente libera??o de ?xido n?trico atingindo a m?xima produ??o de ?xido n?trico no tempo de 24
h. Em modelo experimental de edema de pata em camundongos, a lectina do fungo apresentou atividade pr?-inflamat?ria sendo capaz de induzir a forma??o do edema. A viabilidade celular das linhagens celulares HepG2, MDA 435 e 3T3 foi analisada ap?s
incuba??o por 72 h com concentra??es de CcL (0,5-50 ?g/mL). O valor do IC50 foi obtido com a concentra??o de CcL de 50 ?g/mL para linhagem de c?lulas HepG2. No presente trabalho, os efeitos imunomodulat?rios e antiproliferativos foram observados
apontando a CcL como um poss?vel imunomodulador, interferindo na resposta imune de macr?fagos levando a poss?veis efeitos anti-parasit?rios, anti-tumorais ou agente diagn?stico e/ou terap?utico
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/12566 |
| Date | 08 October 2010 |
| Creators | Cunha, Dayse Caroline Severiano da |
| Contributors | CPF:41305655400, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null, Lima, Jo?o Paulo Matos Santos, CPF:79332021368, http://lattes.cnpq.br/3289758851760692, Santos, Elizeu Antunes dos |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Bioqu?mica, UFRN, BR, Bioqu?mica; Biologia Molecular |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
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