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Previous issue date: 2011-09-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Reactive oxygen species (ROS) are continuously generated and can be
derived from cellular metabolism or induced by exogenous factors, in addition, have
the capacity to damage molecules like DNA and proteins. BER is considered the
main route of DNA damage oxidative repair, however, several studies have
demonstrated the importance of the proteins participation of other ways to correct
these injuries. NER enzymes deficiency, such as CSB and XPC, acting in the
damage recognition step in the two subways this system influences the effectiveness
of oxidative damage repair. However, the mechanisms by which cells deficient in
these enzymes respond to oxidative stress and its consequences still need to be
better understood. Thus, the aim of this study was to perform a proteomic analysis of
cell lines proficient and deficient in NER, exposed to oxidative stress, in order to
identify proteins involved, directly or not, in response to oxidative stress and DNA
repair. For this, three strains of human fibroblasts, MRC5-SV, CS1AN (CSBdeficient)
and XP4PA (XPC-deficient) were treated with photosensitized riboflavin
and then carried out the differentially expressed proteins identification by mass
spectrometry. From the results, it was observed in MRC5-SV increase expression in
most of the proteins involved in cellular defense, an expected response to a normal
cell line subjected to stress. CS1AN showed a response disjointed, it is not possible
to establish many interactions between the proteins identified, may be one
explanation for their sensitivity to treatment with riboflavin and other oxidants and
increased cell death probably by induction of pro-apoptotic pathways. Already
XP4PA showed higher expression of apoptosis-blocking proteins, as there was
inhibition or reduced expression of others involved with the activation of this process,
suggesting the activation of an anti-apoptotic mechanism in this lineage, which may
help explain the high susceptibility to develop cancers in XPC individuals. These
results also contribute to elucidate action mechanisms of NER in oxidative damage
and the understanding of important routes in the oxidative stress correlation, repair
and malignant tumors formation / Esp?cies reativas de oxig?nio (EROs) s?o geradas, continuamente, podendo
ser provenientes do metabolismo celular ou induzidas por fatores ex?genos, al?m
disso, apresentam a capacidade de danificar mol?culas, como DNA e prote?nas.
BER ? considerada a principal via de reparo de danos oxidativos ao DNA,
entretanto, diversos estudos tem demonstrado a import?ncia da participa??o de
prote?nas de outras vias na corre??o destas les?es. A defici?ncia de algumas
enzimas da via NER, como CSB e XPC, que atuam na etapa de reconhecimento da
les?o nas duas subvias deste sistema, influencia na efic?cia do reparo de danos
oxidativos. Entretanto, os mecanismos atrav?s dos quais, c?lulas deficientes nestas
enzimas respondem ao estresse oxidativo e suas conseq??ncias ainda necessitam
ser mais bem esclarecidos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi realizar uma
an?lise prote?mica de linhagens celulares proficiente e deficiente em NER, expostas
ao estresse oxidativo, de modo a identificar prote?nas envolvidas, diretamente ou
n?o, na resposta ao estresse oxidativo e reparo de DNA. Para isto, tr?s linhagens de
fibroblastos humanos, MRC5-SV, CS1AN (deficiente em CSB) e XP4PA (deficiente
em XPC), foram tratadas com riboflavina fotosenssibilizada e, em seguida, foi
realizada a identifica??o das prote?nas diferencialmente expressas atrav?s do
seq?enciamento de pept?deos por espectrometria de massas. A partir dos
resultados, observou-se que a linhagem MRC5-SV apresenta aumento de
express?o na maioria das prote?nas envolvidas com a defesa celular, sendo uma
resposta esperada para uma linhagem celular normal submetida a estresse. A
linhagem CS1AN demonstrou uma resposta desarticulada, n?o sendo poss?vel
estabelecer muitas intera??es entre as prote?nas identificadas, podendo ser uma
explica??o para sua sensibilidade a tratamentos com riboflavina e outros agentes
oxidantes e aumento da morte celular provavelmente por indu??o das vias pr?apopt?ticas.
J? linhagem XP4PA apresentou maior express?o de prote?nas
bloqueadoras da apoptose, assim como, houve a inibi??o ou redu??o da express?o
de outras envolvidas com a ativa??o deste processo, sugerindo a ativa??o de um
circuito anti-apopt?tico nesta linhagem, o que pode ajudar a explicar a alta
susceptibilidade de indiv?duos XPC a desenvolvimento de c?nceres. Estes
resultados tamb?m contribuir?o para o esclarecimento dos mecanismos de atua??o
de NER em danos oxidativos e para a compreens?o de vias importantes na
correla??o do estresse oxidativo, reparo e forma??o de tumores mal?gnos
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/13078 |
| Date | 28 September 2011 |
| Creators | Timoteo, Ana Rafaela de Souza |
| Contributors | CPF:58024867320, http://lattes.cnpq.br/6644671747055211, Klamt, F?bio, CPF:91804612049, http://lattes.cnpq.br/3256932358053453, Lima, Jo?o Paulo Matos Santos, CPF:79332021368, http://lattes.cnpq.br/3289758851760692, Lima, Lucymara Fassarela Agnez, Uchoa, Adriana Ferreira |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Biol?gicas, UFRN, BR, Biodiversidade; Biologia Estrutural e Funcional. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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