Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2015 / A planta Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularmente conhecida como  timutu-pinheirinho , é uma planta característica da zona de campos do planalto catarinense e é tradicionalmente utilizada para tratar afecções dos rins, intestino e pulmões. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório desta espécie e analisar o provável mecanismo de ação de seu composto majoritário, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Com este objetivo, o material vegetal foi submetido a extração por maceração com etanol 96% a temperatura ambiente por 7 dias para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). O EBH foi então submetido a extração sólido-líquido com solventes de diferentes polaridades para obtenção de três diferentes frações, sendo elas: fração hexânica (Hex), fração acetonica (Ac) e fração metanólica (MeOH). O composto 7-preniloxi-6-metoxicumarina (PC) foi isolado da fração Ac, identificado comparando-se dados de RMN H1 e C13 com literatura já publicada e quantificado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Para avaliação do efeito anti-inflamatório desta espécie foi realizada a quantificação de leucócitos totais e neutrófilos, além da quantificação de exsudato na cavidade pleural. Além disso, técnicas padronizadas descritas na literatura foram empregadas com intuito de verificar o efeito da P. sabulosa sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA) e sobre as concentrações de metabólitos do óxido nítrico (NOx), e das citocinas pró-inflamatórias: fator necrose tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 1 beta (IL-1ß). Com intuito de propor o mecanismo de ação do composto majoritário desta espécie, a atividade da PC foi avaliada sobre a expressão de mRNA das citocinas TNF-a, IL-1ß e da enzima oxido nítrico sintase induzida (iNOS), além de sua capacidade inibitória sobre a fosforilação da subunidade p65 do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da proteína quinase induzida por mitógeno p38 (p38 MAPK). Todos os paramêtros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Em todos os experimentos realizados a dexametasona (Dex 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. Para análise estatística dos resultados utilizou-se o teste de análise variância ANOVA, complementados pelo pós teste Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EBH, as frações Hex, Ac e MeOH e o composto isolado PC foram capazes de reduzir a migração leucocitária para a cavidade pleural às custas da inibição de netrófilos, além da exsudação (p < 0,05). Com exceção do EBH que não foi capaz de inibir a exsudação em nenhuma das doses testadas (p > 0.05). Ainda, o EBH, frações e a PC inibiram de forma significativa as atividades da MPO (p < 0,01) e ADA (p < 0,01), e as concentrações de NOx (p < 0,01), além das citocinas TNF-a (p < 0,01) e IL-1ß (p < 0,01). Já o composto isolado PC foi capaz de reduzir a expressão de mRNA do TNF-a (p < 0,01), IL-1ß (p < 0,01) e iNOS (p < 0,01) quando comparado ao grupo Cg. Finalmente, o composto PC ainda inibiu significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p < 0,01) e a fosforilação da p38 MAPK (p < 0,05). Os resultados do presente estudo demonstraram que a P. sabulosa possui atividade anti-inflamatória importante e este efeito pode ser, ao menos em parte, atribuído a seu composto majoritário que demonstrou atividade inibitória sobre duas importantes cascatas de sinalização do processo inflamatório deflagrado pela carragenina, o NF-?B e a p38 MAPK.<br> / Abstract : Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularly known as "timutupinheirinho", is a characteristic species of the field area of Santa Catarina plateau and is traditionally used to treat diseases of the kidneys, intestines and lungs. The objective of this study was to investigate the antiinflammatory effect of this species and analyze the likely mechanism of action of its major compound in the pleurisy model induced by carrageenan in mice. To this end, the plant material was subjected to extraction by maceration with 96% ethanol at room temperature for 7 days to obtain the crude hydroalcoholic extract (CE). The CE was then subjected to solid-liquid extraction with solvents of different polarities to obtain three different fractions, namely: hexane fraction (Hex) acetonic fraction (Ac) and methanol fraction (MeOH). The compound 7- prenyloxi-6-methoxycoumarin (PC) was isolated from the Ac fraction, identified by comparing data from NMR H1 and C13 with published literature and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD). To evaluate the anti-inflammatory effect of this species the quantification of total leukocytes and neutrophils, in addition to the quantification of exudate in the pleural cavity were performed. In addition, standard techniques described in the literature were used in order to verify the effect of P. sabulosa upon the activity of the enzymes myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), upon the nitric oxide metabolites concentrations (NOx), and pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1 beta (IL-1ß). With intention to propose the mechanism of action of the major compound of this species, the PC activity was evaluated upon the mRNA expression of TNF-a, IL-1ß and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and its inhibitory ability upon the phosphorylation of the p65 subunit of nuclear factor kappa B (NF-kB) and the protein kinase-induced p38 mitogen (p38 MAPK). All inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, ip) was used as anti-inflammatory reference drug. For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. p values <0.05 were considered significant. The CE, Hex, Ac and MeOH fractions and the isolated compound, PC, were capable of reducing leukocyte migration into the pleural cavity due the inhibition of neutrophils, besides the exudation (p <0.05). With the exception of CE that was not able to inhibit exudation in any of the tested doses (p> 0.05). Further, the CE, fractions and PC significantly inhibited MPO (p <0.01) and ADA (p <0.01) activities and NOx concentrations (p <0.01), also the cytokines TNF-a (p <0.01) and IL-1ß (p <0.01). The isolated compound PC was able to inhibit mRNA expression of TNF-a (p <0.01), IL-1ß (p <0.01) and iNOS (p <0.01). Finally, the PC compound significantly inhibited the phosphorylation of the p65 subunit of NF-kB (p <0.01) and p38 MAPK
(p <0.05). The results of this study showed that P. sabulosa has important anti-inflammatory activity and this effect may be, at least in part, attributed to its major compound that shown inhibitory activity against two important signaling cascades in the inflammatory process produced by carrageenan, the NF-?B and p38 MAPK.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/135408 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Nascimento, Marcus Vinícius Pereira dos Santos |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Dalmarco, Eduardo Monguilhott |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 125 p.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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