Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-03-04T21:02:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305403.pdf: 936684 bytes, checksum: 9be7392224498394a02fbcfa26f5f1b8 (MD5) / A crescente incidência de alterações mal adaptativas como Transtorno do Pânico, Fobias e Transtorno do Estresse Pós-Traumático impulsiona pesquisadores a desvendar as bases biológicas de tais patologias. Neste contexto, diversos modelos animais tem sido desenvolvidos a fim de mimetizar aspectos dos transtornos de ansiedade, e camundongos são utilizados em estudos das bases genéticas e moleculares pelo conhecimento do seu genoma, além do amplo avanço nas técnicas aplicadas nesta espécie. Boa parte dos modelos de ansiedade baseia-se em princípios do condicionamento clássico, no qual animais adquirem uma memória traumática e exibem respostas emocionais às pistas deste evento. O Condicionamento Olfatório de Medo (COM) em ratos vem sendo amplamente utilizado para avaliar as repostas emocionais condicionadas a um estimulo olfatório. Tendo isto em vista, propõe-se o desenvolvimento de um modelo de Condicionamento Olfatório Aversivo (COA) em camundongos a fim de aumentar as possibilidades para estudos sobre as bases biológicas dos transtornos de ansiedade. Este protocolo permite um acompanhamento dos animais durante a aquisição, consolidação e expressão de memória aversiva. Durante os experimentos, foram avaliados o comportamento natural de camundongos na caixa de testes, a caracterização dos estímulos neutro, condicionado e incondicionado, além da influência de fatores como a novidade, familiarização à caixa de teste e idade dos animais. Ainda, a sensibilidade do modelo ao efeito da administração de agonista benzodiazepínico sobre a memória aversiva foi avaliada. O Estímulo Condicionado (EC) foi definido como 50 µL de solução 5% de acetato de amila, assim como o Estímulo Incondicionado (EI) foi padronizado em 5 choques elétricos de 0,4 mA, por 2 s, com intervalos de 40 s. Os resultados indicam que camundongos de 5 meses emitem respostas condicionadas ao EC, enquanto camundongos de 3 meses não, o que aponta a idade como fator importante no COA. A administração do agonista GABAérgico prejudicou a aquisição, enquanto não promoveu alterações significativas na consolidação e na expressão das respostas aversivas. Portanto, o modelo de COA em camundongos apresenta-se como alternativa para futuros estudos das bases biológicas dos transtornos de ansiedade. / The increase in incidence of maladaptive alterations as Panic Disorder, Phobias and Post-Traumatic Stress Disorder drives researchers to unravel the biological basis of these pathologies. In this context, animal models have been developed in order to mimic aspects of anxiety pathologies. Most of the models use principles from classical conditioning, in which animals acquire a traumatic memory and display emotional responses to specific cues of the event. The Olfactory Fear Conditioning (OFC) in rats has been widely used to study the conditioned emotional responses to an olfactory stimulus, although mice are the excellence animals in molecular and genetic studies by the large knowledge about their genome and advanced techniques applied to this species. With this in mind, it is proposed here the development of an Olfactory Aversive Conditioning model (OAC) in mice to increase the possibilities for studies on the biological basis of anxiety disorders. The protocol allows observation of animals during acquisition, consolidation and expression of aversive memory. While the protocol was being developed, the natural behavior of mice in the apparatus, the characterization of the neutral, conditioned and unconditioned stimuli, the influence of novelty, the familiarization to the chambers and age were analyzed. Moreover, pharmacologic interferences through GABAergic stimulation by benzodiazepine on the aversive memory were evaluated too. The Conditioned Stimulus (CS) was defined as 50 ìL of amyl acetate solution (5%), as Unconditioned Stimulus (US) was standardized in 5 electric shocks of 0.4 mA, for 2 s, in a 40 s interval. Results indicated that 5-month old mice emitted conditioned emotional responses to CS, while 3-month-old mice did not, pointing out to age as an important factor in OAC. The administration of GABA receptor agonist impaired acquisition, whereas did not affect consolidation and expression of aversive responses. Therefore, the OAC model in mice is presented as an effective alternative to incoming studies of the biologic basis of anxiety disorders.

Orientador: Mara Cristina Pinto / Coorientador: Danilo Ciccone Miguel / Banca: Anderson de Sá Nunes / Banca: André Gonzaga dos Santos / Resumo: As leishmanioses são zoonoses causadas por protozoários flagelados do gênero Leishmania, transmitidos por insetos hematófagos denominados flebotomíneos. Dentre as espécies de flebotomíneos, Nyssomyia neivai está entre os principais transmissores do agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no estado de São Paulo, sendo incriminado como vetor da LTA também em outras áreas da América do Sul. Para localização dos hospedeiros e realização do repasto sanguíneo, os insetos hematófagos utilizam compostos voláteis emanados pelos mesmos, denominados cairomônios. Embora existam evidências de que a Leishmania possa influenciar a quantidade de sangue ingerida e a frequência de alimentação sanguínea dos flebotomíneos, aumentando a taxa de transmissão, não se sabe ao certo como o parasita pode afetar o comportamento dos insetos frente a hospedeiros infectados. O objetivo deste estudo foi investigar se camundongos BALB/c não infectados e infectados com Leishmania (Viannia) braziliensis apresentam diferença na atratividade para Ny. neivai, e nos voláteis emitidos; além disso, buscou-se avaliar o volume de sangue ingerido por Ny. neivai nos camundongos infectados e não infectados. Para avaliação de uma possível diferença de atratividade dos flebotomíneos frente a hospedeiros infectados ou não, foram realizados três modelos de teste: (a) preferência alimentar dos flebotomíneos quando colocados dois camundongos na mesma gaiola e com auxílio do corante azul de Evans como marca... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis are zoonosis caused by flagellated protozoa of Leishmania genus, transmitted by hematophagous insects called sand flies. Among sand flies species, Nyssomyia neivai is one of the main vectors or etiological agent of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) in the state of São Paulo, being incriminated as vector of ACL also in other areas of South America. For location of hosts and blood meal, hematophagous insects use volatiles compounds released by the hosts, called kairomones. Although there are evidences that Leishmania may influence the quantity of blood ingested and the frequency of blood meal of the sand flies, increasing transmission rate, it is not known how the parasite can affect the behaviour of these insects against infected hosts. The aim of this study was to investigate if uninfected and Leishmania (Viannia) braziliensis infected BALB/C mice presents any difference of attractiveness to Ny. neivai, and in the released volatiles; besides that, was evaluated the blood volume ingested by Ny. neivai on infected and uninfected mice. To evaluate the attractiveness of sand flies to infected and not infected hosts, three types of trials were performed: (a) food preference of sand flies when placed two anesthetized mice in the same cage and Evans blue dye as a marker to help identification of the blood meal source of each sand fly; (b) mice as odour source in wind tunnel and (c) in Y-tube olfactometer. For the trials in the cages, feed females were individualized in micro tubes, macerated and homogenized for absorbance reading at 540 and 620 nm. Such reading allowed estimate the blood volume ingested for each feed female, from standard curves of absorbance versus blood volume previously obtained after... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (Doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T19:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T17:36:40Z : No. of bitstreams: 1 161166.pdf: 4638682 bytes, checksum: 832a7a110cc6be14d75f0cbb94e38a71 (MD5) / O modelo da [pleurisia] induzida pela [carragenina] (1%), apresenta resposta inflamatória bifásica (4 e 48 h) na cavidade pleural de [camundongos]. A L-NOARG, o HOE 140, o NPC 17731, a diacereína, a indometacina, o meloxicam, a nabumetona e a dexametasona administrados 30 min antes da [carragenina], inibiram a migração celular e os níveis da [mieloperoxidase] na primeira fase (4 h) desta resposta inflamatória. Todas as drogas, com exceção da diacereína, inibiram a exsudação. Além disso, a diacereína, a nabumetona, a L-NOARG e a L-NAME inibiram também os níveis de [nitrito/nitrato]. Em relação à segunda fase (48 h), observou-se que a dexametasona e a diacereína, inibiram os leucócitos, enquanto que a terfenadina reduziu apenas a exsudação. Nenhuma das drogas estudadas reduziu os níveis da [mieloperoxidase] ou do [nitrito/nitrato]. O NPC 17731, o HOE 140 e o NPC 18884 inibiram tanto a exsudação como a migração celular induzida pela [carragenina], 4 h. Neste modelo experimental observa-se a participação de [citocinas] com efeitos pró-inflamatórios (TNFa, IL-1b, IL-8) e antiinflamatórios (IL-6, IL-10), com base nos resultados de que tanto anticorpos-policlonais como citocinas-recombinantes, administrados diretamente na cavidade pleural juntamente com a [carragenina], reproduziram parcialmente seus efeitos pró-inflamatórios ou antiinflamatórios. Neste modelo de inflamação, o PDTC e a sulfasalazina (inibidores do fator de transcrição nuclear [NF-kB]), foram eficazes em inibir a resposta inflamatória induzida pela [carragenina] (4 h). Além disso, a associação de doses subliminares de drogas antiinflamatórias e dos inibidores (PDTC ou sulfasalazina) que isoladamente não foram eficazes, quando associados, mostraram efeito antiinflamatório sinergístico, inibindo tanto a migração celular como a exsudação na [pleurisia] induzida pela [carragenina] (4 h). Nestes experimentos observou-se também aumento da expressão de células [CD18] positivas, na cavidade pleural e no pulmão, na primeira fase (4 h) da resposta inflamatória induzida pela [carragenina]. Além disso, no modelo experimental estudado, não se observou resposta inflamatória sistêmica caracterizada por aumento da permeabilidade vascular nos pulmões e no baço, em que se pese o aumento da molécula de adesão [CD18] em células pulmonares.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pos-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 275439.pdf: 2261901 bytes, checksum: e2aefcb3dc4f72e77c617b673afe9cc5 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi investigar os possíveis mecanismos e mediadores envolvidos no comportamento de coçar causado pela administração intradérmica (i.d.), no dorso de camundongos, de agonistas do receptor ativado por proteinases-2 (PAR-2). Ambos os agonistas do PAR-2, tripsina e SLIGRL-NH2, causaram comportamento de coçar, sugestivo de prurido, de maneira dependente da dose. Esse efeito foi bloqueado pelo co-tratamento com o antagonista seletivo para o receptor PAR-2, FSLLRY-NH2, ou pela dessensibilização prévia deste receptor. A participação do sistema opióide foi verificada pelo tratamento com morfina ou naloxona, agonista e antagonista dos receptores opióides, respectivamente, que inibiram a coceira induzida pela tripsina. Além disso, o comportamento pruriginoso induzido por esta enzima foi previnido pelo tratamento com os antiinflamatórios, celecoxibe (inibidor seletivo para a COX-2) ou dexametasona (corticóide). A participação de mastócitos também foi observada, uma vez que o pré-tratamento com composto 48/80, degranulador de mastócitos, ou com cromoglicato de sódio, estabilizador de mastócitos, reduziu a prurido causado pela tripsina. Ademais, o modelo parece ser dependente da ativação do receptor histaminérgico H4, mas não dos receptores H1, H2 ou H3, ja que o antagonista não-seletivo H3/H4 (tioperamida), mas não os antagonistas seletivos H1 (pirilamina e loratadina), H2 (cimetidina e ranitidina) ou H3 (iodofempropite), bloqueou o efeito pruriginoso da tripsina. O antagonista misto dos receptores histaminérgicos/serotoninérgicos, ciproeptadina, e o inibidor não seletivo de proteases, gabexato mesilato, foram eficazes em reduzir o prurido causado pelos agonistas do PAR-2, sugerindo o envolvimento da serotonina e da liberação de proteases. Interessantemente, o tratamento neonatal com capsaicina, ou o tratamento do adulto com resiníferatoxina, estratégias que promovem desenssibilização e/ou destruição de fibras sensoriais, preveniram o comportamento pruriginoso evocado por ambos os agonistas do PAR-2. Similarmente, o tratamento com o antagonista seletivo para o receptor TRPV1, SB366791, ou a deleção do gene para este receptor, inibiram o prurido induzido pela ativação do PAR-2. Esta reposta também foi dependente dos neuropeptídeos substância P (SP), neurocinina B (NKB) e CGRP, uma vez que o tratamento com os antagonistas seletivos para os receptores NK1 (FK888, para SP), NK3 (SR142801, para NKB), ou CGRP1 (fragmento CGRP8-37, para o CGRP), reduziu a coceira induzida pelos ativadores do PAR-2. Por fim, o prétratamento com antagonistas seletivos para os receptores B2 (Hoe 140 ou FR173657) ou B1 (DALBK ou SSR240612) das cininas, ou a deleção gênica destes receptores, preveniu a coceira induzida por ambos os agonistas do PAR-2. Em conjunto, estes resultados sugerem que a injeção i.d. de agonistas do PAR-2 constitui um modelo experimental reprodutível para o estudo de mecanismos e de possíveis abordagens terapêuticas, relacionados a promoção da coceira mediada pela liberação de proteases e ativação do PAR-2. Diferentes mediadores e tipos celulares liberados ou localizados na pele parecem contribuir para este processo. De relevância, neste sentido ressalta-se o envolvimento de mediadores da inflamação neurogênica, de fibras sensoriais, do receptor TRPV1, e de ambos os receptores B2 e B1 para as cininas. / The aim of this study was to investigate some mechanisms and mediators underlying the scratching behaviour induced by intradermal (i.d.) injection of proteinase activated receptor-2 (PAR-2) agonists on the back of the mouse neck. Both PAR-2 agonists, trypsin and SLIGRL-NH2, were able to evoke a marked and dose-related scratching behaviour in mice. This response was widely reduced by the co-treatment with the selective PAR-2 receptor antagonist, FSLLRY-NH2, or by previous trypsin-induced PAR-2 receptor desensitization. Opioidergic system involvement was evaluated by the treatment with morphine or naloxone, a non-selective opioid receptors agonist and antagonist, respectively, which were both effective against trypsin-induced itch. Moreover, trypsin-induced scratching behaviour was blockaded by the pre-treatment with celecoxib (a selective COX-2 inhibitor) or dexamethasone (a corticoid). Also, contribution of mast cells was evident as the scratching behaviour induced by trypsin was prevented by the pre-treatment with compound 48/80, a mast cell degranulator, or disodium cromoglycate, a mast cell stabilizer. Furthermore, PAR-2 receptor activation-induced scratching behaviour seems to be dependent on histamine H4 receptor activation, but not histamine H1, H2 or H3 receptors, as the pre-treatment with the dual histamine H3/H4 receptors antagonist (thioperamide), but not with the selective histamine H1 (pyrilamine or loratadine), H2 (cimetidine or ranitidine) or H3 (iodophenpropit) receptor antagonists, was able to interfere with trypsin response. Pre-treatment with the mixed serotonergic/histaminergic receptor antagonist, cyproheptadine, or the non-selective protease inhibitor, gabexate mesylate, were capable of inhibiting trypsin-induced pruritus, suggesting the participation of serotoninergic receptors and protease release. Interestingly, both neonatal capsaicin treatment and resiniferatoxin administration to adult mice, to promote sensorial fiber desensitization and/or destruction, were able to suppress the itching response induced by PAR-2 agonists. Similarly, the selective TRPV1 receptor antagonist, SB366791, or the genetic deletion of TRPV1, greatly diminished the PAR-2-induced scratching behaviour. The pruritogenic response induced by PAR-2 agonists in mice is widely dependent on the release of neuropeptides substance P (SP), CGRP and neurokinin B (NKB), as the treatment with the selective NK1 (FK888, for SP), NK3 (SR142801, for NKB) or CGRP1 (fragment CGRP8-37, for CGRP) receptor antagonists caused a marked reduction of PAR-2-induced pruritus. Of note, the pretreatment with both kinin B2 (Hoe 140 or FR173657) and B1 (DALBK or SSR240612) receptor antagonists, or the genetic ablation of kinin receptors, significantly diminished the scratching behaviour evoked by PAR-2 agonists. Take together, the results of the present study suggest that i.d. injection of PAR-2 agonists on the back of the mouse neck seems to be a reproducible model to study the mechanisms and therapeutic strategies, related to itch transmission caused by proteinases release and PAR-2 activation. Besides, this response is widely dependent on mast cell activation and subsequently release of neurokinins, kinins and the TRPV1 receptor activation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T15:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224660.pdf: 451595 bytes, checksum: 3e0c71af98b488467aeb316ddc597ae0 (MD5) / Vacinas contra HIV que estimulem resposta imune de mucosas, especialmente no trato genital feminino, podem ser mais eficazes na prevenção ou contenção da infecção pelo HIV. Adenovírus humano (Ad) do sorotipo 5, que têm sido utilizados como vetores de vacinas contra HIV, apresentam como limitação a pré-existência de anticorpos neutralizantes na população. Para superar este problema foi desenvolvido um Ad recombinante a partir de um vírus de origem símia - AdC6gag. Este estudo avaliou a resposta imune celular específica contra HIV em sítios sistêmicos e de mucosa após a imunização intravaginal de camundongos BALB/c com AdC6gag. Demonstrou-se que imunização intravaginal foi capaz de induzir células T CD8+ Gag-específicas no trato genital, linfonodos ilíacos e baço. A resposta imune avaliada através da marcação intracelular de IFN- produzido por células T CD8+ estimuladas por 5 horas com peptídeo contendo Gag foi demonstrada utilizando-se diferentes doses do vetor, mas a dose de 105 PFU de AdC6gag foi capaz de induzir a melhor resposta no trato genital e linfonodos ilíacos 14 dias após a imunização intravaginal. 105 e 104 PFU de AdC6gag induziram a melhor resposta no baço 7 dias após a imunização. A imunização intravaginal com AdC6gag induziu melhor resposta de células T CD8+ no trato genital e linfonodos ilíacos que as imunizações intranasal e intramuscular. As freqüências de células T CD8+ Gag-específicas estimuladas no trato genital pela imunização intravaginal IV (3,8%) e intranasal IN (0,94%) aumentaram com uma estratégia de dose-reforço IN-IV (27,46%) quando se utilizou 105 PFU de AdC6gag. A resposta de células T CD8+ Gag-específicas induzidas com AdC6gag no trato genital e baço é de longa duração, podendo ser detectada 90 dias após a imunização. AdC6gag aumentou a população de células T no trato genital após imunização intravaginal com diferentes doses. As mulheres constituem hoje 50% dos indivíduos infectados e 70 a 80 % dos novos casos de HIV ocorrem através de transmissão heterossexual. A indução de células T CD8+ específicas na mucosa pode ser importante, uma vez que estas células estão implicadas no controle da replicação viral. Este estudo sugere que AdC6gag pode induzir eficientemente células T CD8+ no trato genital, e que estas freqüências podem pode ser aumentadas com uma estratégia de dose reforço com vias de mucosa distintas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226731.pdf: 602945 bytes, checksum: 0075e137862a7d8a18dcf2bfd893ba9e (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 287671.pdf: 12192705 bytes, checksum: 05f2ab062b5fcd2b7dc7705721b24271 (MD5) / Introdução: O micofenolato de mofetila (MMF) é um fármaco imunossupressor utilizado atualmente na clínica na rejeição de transplantes de órgãos e em algumas doenças auto-imunes, como na uveite e na glomerulonefrite. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e antioxidante do MMF administrado por via oral, na primeira (4 h) e segunda (48 h) fases da resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), no modelo da pleurisia, em camundongos. Materiais e Métodos: Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos suíços de 1 mês de idade. O modelo experimental utilizado foi o da pleurisia induzida pela Cg, segundo metodologia descrita por Saleh et al. (1996). A inflamação foi avaliada estudando-se alguns parâmetros da resposta inflamatória segundo metodologias já padronizadas e descritas na literatura (leucócitos e a exsudação), atividade das enzimas: mieloperoxidase (MPO), adenosina deaminase (ADA), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), as concentrações de: nitrito/nitrato (NOx) e das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Neste protocolo, também foram estudadas a influência do MMF sobre as concentrações das proteínas e sobre a transcrição do mRNA para o fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), interleucina-1 beta (IL-1?), fator de crescimento endotelial vascular alfa (VEGF-?), e interleucina 17A (IL-17A), utilizando-se as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Para a pesquisa da enzima óxido nítrico sintase induzida (ONSi) também foi utilizada a técnica de RT-PCR. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h e 48 h após a indução da pleurisia. Como fármacos de referência anti-inflamatória foram utilizados: a dexametasona (Dex, i.p.) e o ibuprofeno (Ibu, v.o.). Em alguns experimentos para avaliar a exsudação, os animais foram tratados 10 minutos antes da aplicação da Cg, com solução de azul de Evans (25 mg/kg, 0,2 mL, i.o.). Para a análise estatística dos resultados foi utilizado o teste paramétrico ANOVA complementado, quando necessário, pelo teste de Dunnett, teste t de Student e teste de correlação de Pearson. Diferençcas com P < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: Em ambas as fases (4 h e 48 h) da resposta inflamatória induzida pela Cg, o MMF na dose de 100 mg/kg administrado por via oral (v.o.) inibiu os leucócitos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), as atividades de: MPO (P < 0,05), ADA (P < 0,01), CAT (P < 0,05), SOD (P < 0,05), GPx (P < 0,01) e GST (P < 0.01), as concentrações de: nitrito/nitrato (ONx) (P < 0,01) e TBARS (P < 0,05). Além disso, o fármaco também inibiu aumento das concentrações e a transcrição do mRNA de: TNF-? (P < 0,01), IL-1? (P < 0,01), VEGF-? (P < 0,01) e IL-17A (P < 0,01), bem como a transcrição da enzima ONSi (P < 0,01). Conclusão: Os resultados demonstraram que o MMF possui importante efeito anti-inflamatório e antioxidante, inibindo mediadores e enzimas que participam da resposta inflamatória no modelo da pleurisia em camundongos. Este efeito parece ocorrer também em nível pré-transcripcional uma vez que o MMF foi capaz de inibir não somente as concentrações de citocinas formadas, mas também a transcrição do mRNA para estas proteínas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334652.pdf: 2332207 bytes, checksum: 62dc21cc8905637d24312db23ad9addf (MD5) Previous issue date: 2015 / A planta Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularmente conhecida como  timutu-pinheirinho , é uma planta característica da zona de campos do planalto catarinense e é tradicionalmente utilizada para tratar afecções dos rins, intestino e pulmões. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório desta espécie e analisar o provável mecanismo de ação de seu composto majoritário, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Com este objetivo, o material vegetal foi submetido a extração por maceração com etanol 96% a temperatura ambiente por 7 dias para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). O EBH foi então submetido a extração sólido-líquido com solventes de diferentes polaridades para obtenção de três diferentes frações, sendo elas: fração hexânica (Hex), fração acetonica (Ac) e fração metanólica (MeOH). O composto 7-preniloxi-6-metoxicumarina (PC) foi isolado da fração Ac, identificado comparando-se dados de RMN H1 e C13 com literatura já publicada e quantificado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Para avaliação do efeito anti-inflamatório desta espécie foi realizada a quantificação de leucócitos totais e neutrófilos, além da quantificação de exsudato na cavidade pleural. Além disso, técnicas padronizadas descritas na literatura foram empregadas com intuito de verificar o efeito da P. sabulosa sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA) e sobre as concentrações de metabólitos do óxido nítrico (NOx), e das citocinas pró-inflamatórias: fator necrose tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 1 beta (IL-1ß). Com intuito de propor o mecanismo de ação do composto majoritário desta espécie, a atividade da PC foi avaliada sobre a expressão de mRNA das citocinas TNF-a, IL-1ß e da enzima oxido nítrico sintase induzida (iNOS), além de sua capacidade inibitória sobre a fosforilação da subunidade p65 do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da proteína quinase induzida por mitógeno p38 (p38 MAPK). Todos os paramêtros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Em todos os experimentos realizados a dexametasona (Dex 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. Para análise estatística dos resultados utilizou-se o teste de análise variância ANOVA, complementados pelo pós teste Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EBH, as frações Hex, Ac e MeOH e o composto isolado PC foram capazes de reduzir a migração leucocitária para a cavidade pleural às custas da inibição de netrófilos, além da exsudação (p < 0,05). Com exceção do EBH que não foi capaz de inibir a exsudação em nenhuma das doses testadas (p > 0.05). Ainda, o EBH, frações e a PC inibiram de forma significativa as atividades da MPO (p < 0,01) e ADA (p < 0,01), e as concentrações de NOx (p < 0,01), além das citocinas TNF-a (p < 0,01) e IL-1ß (p < 0,01). Já o composto isolado PC foi capaz de reduzir a expressão de mRNA do TNF-a (p < 0,01), IL-1ß (p < 0,01) e iNOS (p < 0,01) quando comparado ao grupo Cg. Finalmente, o composto PC ainda inibiu significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p < 0,01) e a fosforilação da p38 MAPK (p < 0,05). Os resultados do presente estudo demonstraram que a P. sabulosa possui atividade anti-inflamatória importante e este efeito pode ser, ao menos em parte, atribuído a seu composto majoritário que demonstrou atividade inibitória sobre duas importantes cascatas de sinalização do processo inflamatório deflagrado pela carragenina, o NF-?B e a p38 MAPK.<br> / Abstract : Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularly known as "timutupinheirinho", is a characteristic species of the field area of Santa Catarina plateau and is traditionally used to treat diseases of the kidneys, intestines and lungs. The objective of this study was to investigate the antiinflammatory effect of this species and analyze the likely mechanism of action of its major compound in the pleurisy model induced by carrageenan in mice. To this end, the plant material was subjected to extraction by maceration with 96% ethanol at room temperature for 7 days to obtain the crude hydroalcoholic extract (CE). The CE was then subjected to solid-liquid extraction with solvents of different polarities to obtain three different fractions, namely: hexane fraction (Hex) acetonic fraction (Ac) and methanol fraction (MeOH). The compound 7- prenyloxi-6-methoxycoumarin (PC) was isolated from the Ac fraction, identified by comparing data from NMR H1 and C13 with published literature and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD). To evaluate the anti-inflammatory effect of this species the quantification of total leukocytes and neutrophils, in addition to the quantification of exudate in the pleural cavity were performed. In addition, standard techniques described in the literature were used in order to verify the effect of P. sabulosa upon the activity of the enzymes myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), upon the nitric oxide metabolites concentrations (NOx), and pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1 beta (IL-1ß). With intention to propose the mechanism of action of the major compound of this species, the PC activity was evaluated upon the mRNA expression of TNF-a, IL-1ß and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and its inhibitory ability upon the phosphorylation of the p65 subunit of nuclear factor kappa B (NF-kB) and the protein kinase-induced p38 mitogen (p38 MAPK). All inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, ip) was used as anti-inflammatory reference drug. For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. p values <0.05 were considered significant. The CE, Hex, Ac and MeOH fractions and the isolated compound, PC, were capable of reducing leukocyte migration into the pleural cavity due the inhibition of neutrophils, besides the exudation (p <0.05). With the exception of CE that was not able to inhibit exudation in any of the tested doses (p> 0.05). Further, the CE, fractions and PC significantly inhibited MPO (p <0.01) and ADA (p <0.01) activities and NOx concentrations (p <0.01), also the cytokines TNF-a (p <0.01) and IL-1ß (p <0.01). The isolated compound PC was able to inhibit mRNA expression of TNF-a (p <0.01), IL-1ß (p <0.01) and iNOS (p <0.01). Finally, the PC compound significantly inhibited the phosphorylation of the p65 subunit of NF-kB (p <0.01) and p38 MAPK (p <0.05). The results of this study showed that P. sabulosa has important anti-inflammatory activity and this effect may be, at least in part, attributed to its major compound that shown inhibitory activity against two important signaling cascades in the inflammatory process produced by carrageenan, the NF-?B and p38 MAPK.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:33:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302643.pdf: 2458387 bytes, checksum: d73ba48c5948eda11b2fc8eb89ea06e7 (MD5) / Nos últimos anos, evidências epidemiológicas, clínicas e experimentais indicam a associação entre a hipercolesterolemia e prejuízos cognitivos, como a demência associada à Doença de Alzheimer. Por outro lado, sabe-se que há uma importante participação da disfunção mitocondrial e estresse oxidativo na patogênese das doenças neurodegenerativas e da hipercolesterolemia. Neste contexto, nosso objetivo foi primeiramente avaliar a função cognitiva de camundongos deficientes para o receptor da lipoproteína de baixa densidade (LDLr-/-), um modelo de hipercolesterolemia; e sua relação com a função mitocondrial e antioxidante. Para este fim, camundongos controle C57Bl/6 e LDLr-/- foram expostos à uma dieta padrão ou hipercolesterolêmica durante 30 dias e então submetidos ao teste de localização de objeto. Os camundongos LDLr-/- apresentaram prejuízo de aprendizado e memória espacial independentemente da dieta adotada. Além disso, os camundongos LDLr-/- expostos à dieta hipercolesterolêmica apresentaram uma significativa diminuição na atividade dos complexos mitocondriais I e II no córtex cerebral, a qual foi negativamente correlacionada com os respectivos níveis de colesterol plasmático. Este evento foi acompanhado pela diminuição nos níveis de glutationa (GSH), aumento na lipoperoxidação e desequilíbrio na atividade das enzimas integrantes do sistema antioxidante dependente da GSH, glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR) no córtex cerebral. Estes resultados indicam uma significativa relação entre a hipercolesterolemia, prejuízo cognitivo, e disfunção mitocondrial/estresse oxidativo no córtex cerebral. Considerando que o composto (PhSe)2 vem demonstrando importante papel protetor para doenças cardiovasculares associadas a hipercolesterolemia, analisamos o seu possível efeito neuroprotetor frente ao estresse oxidativo induzido pela hipercolesterolemia no córtex cerebral de camundongos LDLr-/- expostos à dieta hipercolesterolêmica. Nossos resultados demonstraram que o tratamento oral com (PhSe)2 (1 mg/kg) durante 30 dias aumentou significativamente os níveis de GSH e diminuiu a lipoperoxidação no córtex cerebral dos animais hipercolesterolêmicos. Este efeito antioxidante possivelmente está relacionado à sua atividade mimética da GPx. Tomados em conjunto, os resultados apontam este modelo animal de hipercolesterolemia como uma abordagem útil para compreender os eventos moleculares envolvidos na patogênese de doenças neurodegenerativas, bem como o papel neuroprotetor do (PhSe)2.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-06-25T20:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 309597.pdf: 1943516 bytes, checksum: 883de2ef185e2b57b793608f01cd4703 (MD5) / A doença de parkinson (DP) é caracterizada por um processo neurodegenerativo lento e progressivo que acomete principalmente os neurônios dopaminérgicos da substancia negra parte compacta (SNpc). A causa primária da DP ainda não é conhecida, embora um crescente número de fatores genéticos e ambientais tenham sido propostos nos últimos anos, incluindo o trauma cranioencefálico (TCE). No presente estudo, nós investigamos se o TCE poderia representar um fator de predisposição às alterações comportamentais e bioquímicas relacionadas com a DP em camundongos submetidos ao modelo experimental da 6-hidroxidopamina (6-OHDA), uma neurotoxina incapaz de atravessar a barreira hematoencefálica (BHE). Os camundongos foram submetidos a um TCE moderado por meio de um aparato de queda livre de peso (12,5 g), sendo a gravidade do TCE confirmada através do escore neurológico de severidade (ENS). Cinco horas após a indução do TCE, alguns camundongos foram sacrificados para a análise da permeabilidade da BHE, enquanto outros receberam a administração intraperitoneal (i.p.) de salina ou 6-OHDA (100 mg/kg). Durante um período de 4 semanas, esses animais foram submetidos a uma bateria de testes comportamentais, incluindo o campo aberto, o rotarod, a catalepsia induzida por haloperidol, e os comportamentos de rotação e escalada induzidos por apomorfina. Finalizados os testes comportamentais, os animais foram sacrificados para a medida da expressão da enzima tirosina hidroxilase (TH) no estriado através da técnica de imunodetecção de proteínas. O TCE moderado aumentou a permeabilidade da BHE, sendo que na quarta semana após a indução do TCE foi observado um prejuízo significativo no desempenho dos animais do grupo TCE + 6-OHDA nos testes do campo aberto, rotarod e ENS. De maneira importante, estes prejuízos foram revertidos pela administração aguda de L-Dopa (25 mg/kg, i.p.). Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos nos testes da catalepsia induzida por haloperidol e na rotação induzida por apomorfina. Entretanto, foi observada uma redução no comportamento de escalada induzida por apomorfina, assim como uma diminuição na expressão de TH no estriado no grupo TCE + 6-OHDA. Em conjunto, os resultados do presente trabalho indicam que a indução de um TCE moderado aumentou a permeabilidade da BHE, levando a uma maior susceptibilidade às alterações motoras e neuroquímicas induzidas pela 6-OHDA em camundongos. Portanto, os achados deste estudo corroboram com dados epidemiológicos que indicam que o TCE pode representar um fator relevante de predisposição à DP, e sugerem que uma maior atenção deva ser dada para o risco em longo prazo para o desenvolvimento da DP após o TCE. / Parkinson's disease (PD) is characterized by a slow and progressive neurodegenerative process, particularly of the dopaminergic neurons of the substantia nigra pars compacta (SNpc). The primary cause of DP remains unknown, although an increasing number of genetic and environmental factors have been proposed, including the traumatic brain injury (TBI). In the present study, we have investigated whether TBI may represent a predisposing factor to PD-related alterations in mice submitted to the experimental model of 6-hydroxydopamine (6-OHDA), a neurotoxin unable to cross the blood-brain barrier (BBB). Mice were submitted to a moderate TBI by free weight-drop device (12.5 g) which was confirmed 1 h later through a neurological severity score (NSS) evaluation. Then, 5 h after TBI induction some mice were sacrificed for the analyses of BBB permeability, while others were injected intraperitoneally (i.p.) with saline or 6-OHDA (100 mg/kg). During a period of 4 weeks these animals were submitted to a battery of behavioral tests including the open field, rotarod, haloperidol-induced catalepsy and apomorphine-induced rotation and climbing behavior for the evaluation of motor performance and then they were sacrificed for the analysis of striatal tyrosine hydroxylase (TH) expression through western blot. The current moderate TBI increased BBB permeability of adult mice. On the 4th week after TBI induction, significant motor and neurological impairments in the open field, rota-rod and NSS tests were observed in the animals from the TBI plus 6-OHDA group, which were reversed by the acute L-Dopa administration (25 mg/kg, i.p.). No changes were observed in the haloperidol-induced catalepsy and the apomorphine-induced rotation tests. Remarkably, pronounced reductions in the apomorphine-induced climbing behavior and striatal TH expression were observed selectively in the TBI plus 6-OHDA group. Altogether, the current findings indicate that a previous moderate TBI event can disrupt the BBB, increasing the susceptibility to motor, neurological and neurochemical alterations induced by dopaminergic neurotoxins such 6-OHDA in mice. Therefore, our results corroborate previous epidemiological studies indicating that TBI may represent a relevant predisposing factor for PD, and suggest that a greater attention should be given to the long-term risk of PD following TBI.