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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A tripanossomíase americana também conhecida como doença de Chagas é um importante problema de saúde pública, uma doença de origem parasitária que afeta 8 milhões de pessoas na América Latina (OMS, 2013). Atualmente existem apenas dois fármacos utilizados na prática clínica: o benzonidazol e o nifurtimox. Esse último não é usado no Brasil. Esses fármacos apresentam efeitos colaterais e são confrontados com cepas resistentes (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Desta forma, torna-se necessária a busca de compostos que apresentem maior eficácia e menor toxicidade. No presente trabalho foi avaliado o efeito do composto derivado de β–lapachona, R72, em formas tripomastigotas de T. cruzi e em macrófagos infectados in vitro. Observamos que a R72 reduziu, significativamente (p<0,05), o número de parasitos viáveis, produzindo IC50 de 15 μM. A análise ultraestrutural revelou que a R72 causou danos na bolsa flagelar, cinetoplasto e mitocôndrias. Além disso, encontramos a presença de corpúsculos lipídicos e figuras de mielina no citoplasma do protozoário, indicando processos de autofagia, a qual foi confirmada pela sonda MDC. A análise por citometria de fluxo indicou morte por apoptose, necrose e produção de espécies reativas de oxigênio. Além disso, o composto não apresentou toxicidade para células de mamíferos em concentrações inferiores a 200 μM. A R72 reduziu, significativamente, a percentagem de macrófagos infectados pelo T. cruzi e o número de parasitos por macrófagos. Verificamos inibição da internalização de parasitos quando os macrófagos foram tratados previamente com o composto R72. Análise ultra-estrutural evidenciou um processo de autofagia caracterizado pela presença de vacúolo autofágico e formação de corpúsculos lipídicos. O mecanismo envolvido na formação de vacúolos autofágicos e corpúsculos lipídicos é independente da produção de óxido nítrico. Esses resultados ajudam a elucidar os mecanismos de ação de fármacos potenciais para a quimioterapia da doença de Chagas. / The American trypanosomiasis also known as Chagas disease is a major public health problem, a parasitic disease caused that affects 8 million people in Latin America (OMS, 2013). Currently there are only two drugs used in clinical practice: the benznidazole and the nifurtimox. The latter is not used in Brazil. These drugs are faced with considerable side effects and resistant strains (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Thus the search for drugs effective in the chronic phase of the disease and lower toxicity is required. In this study the effect of the β-lapachone derivative R72 in trypomastigote forms of T. cruzi and upon the infection of macrophage by T. cruzi in vitro. We observed that the R72 significantly inhibited (p<0,05) the number of viable parasites, producing IC50 of 15 μM. The ultrastructural analysis by transmission electron microscopy revealed that the R72 has caused damage to the flagellar pocket, kinetoplast and mitochondria. Furthermore, we found the presence of lipid bodies and myelin figures in the cytoplasm of the protozoan indicating autophagic process, which was confirmed by the MDC probe. Analysis by flow cytometry indicated death by apoptosis and necrosis and production of reactive of reactive oxygen species. Furthermore, the compound did not show toxicity to mammalian cells at concentrations below 200 μM. The R72 significantly reduced the percentage of infected macrophages and the number of number of T. cruzi parasites per macrophage. We observed inhibition of internalization of parasites when macrophage were pretreated with the compound R72. Ultrastructural analysis revealed a process of autophagy characterized by the presence of autophagic vacuoles and lipid body formation. The mechanism involved in the formation of autophagic vacuoles and lipid body is independent of nitric oxide. These results help elucidating the mechanisms action of potential drugs and provide new tools for chemotherapy of Chagas disease.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/10850 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Anjos, Danielle Oliveira dos |
| Contributors | Santos, Fabricio Rios dos, Soeiro, Maria de Nazaré, Macambira, Simone Garcia, Andrade, Sonia Gumes, Santos, Marcos André Vannier dos |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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