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Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) representa um importante problema de saúde pública no Brasil. Podem acometer os seres humanos e mamíferos silvestres e domésticos, sob a forma de doenças infecciosas crônicas com uma ampla gama de manifestações clínicas. O diagnóstico laboratorial é requerido para confirmar a suspeita clínica. Atualmente as técnicas moleculares baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm demonstrado alta especificidade e sensibilidade. Na literatura existem diversos relatos da utilização da PCR com diferentes tipos de material clínico, alvos moleculares, conservação das amostras. Alguns autores consideram amostras congeladas mais vantajosas em relação às amostras fixadas em formol e embebidas em parafina (FFPE). No entanto, muitos pesquisadores defendem a importância das amostras FFPE devido à facilidade de conservação e possibilidade de utilização da PCR em estudos retrospectivos. O objetivo desse projeto foi avaliar a acurácia da qPCR realizada em amostras de pele íntegra congelada e parafinada. Trata-se de um estudo de validação, com 50 amostras de tecido congelado e 50 de tecido parafinado, provenientes de cães da cidade de Belém-PA. De cada animal foram coletados fragmentos de pele íntegra, sendo um dos fragmentos congelado e outro conservado por parafinização. As amostras de pele íntegra analisadas foram coletadas da região escapular utilizando punch de 3 mm. A qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum
A extração de DNA de amostras de pele íntegra FFPE foi realizada com o \201Ckit\201D comercial QIAamp® DNA FFPE Tissue (Qiagen, Califórnia, USA) de acordo com as recomendações do fabricante e para as amostras de tecido congelado foi utilizado o \201Ckit\201D IllustraTM Tissue & Cells Genomicprep Mini spin (GE Healthcare), seguindo as recomendações contidas no \201Ckit\201D. Os resultados obtidos demonstraram índices de sensibilidade e especificidade para as amostras FFPE de 63,7% e de 77,8%. Para as amostras congeladas foram de 100% e 45,9%, respectivamente. O índice Kappa obtido foi considerado fraco. A recuperação/concentração de DNA nas amostras FFPE foi baixa, mas os resultados obtidos indicam sensibilidade e especificidade moderados, demonstrando que é possível o diagnóstico da leishmaniose visceral canina com amostras FFPE / Visceral leishmaniasis (VL) is a significant public
health problem in Brazil. It affects humans,
wild and domestic mammals, in the form of chr
onic infectious disease with a wide range of
clinical manifestations. Laboratory diagnosis is
required to confirm the clinical suspicion of
VL. Currently, molecular techniques based on
polymerase chain reaction (PCR) have shown
high specificity and sensitivity. Some authors consider more advantageous the use of frozen
samples in PCR due to the better quality of DNA, in
relation to that of fixed in formalin and
embedded in paraffin (FFPE) samples. Howeve
r, many researchers argue describe the
importance of FFPE samples, due
to the facility of conservation and the possibility of using
PCR in retrospective studies. The aim of this
study was to evaluate the accuracy of the
quantitative polymerase chain reaction (qPCR)
performed on intact frozen and FFPE skin
samples. This is a validation study with 50 fr
esh tissue samples and 50 FFPE tissues of dogs
from Belém-PA. From each animal fragments of
intact skin were collected, being one of the
frozen fragments and another
saved by paraffinization. The samples analyzed were collected
from intact skin of the scapular region us
ing a 3 mm punch. The qPCR was oriented targets
kDNA of
Leishmania infantum
. The DNA extraction from FFPE samples of normal skin was
performed with the QIAamp ® DNA FFPE Tissu
e kit (Qiagen, California, USA) "kit"
business according to the manufacturer's recomme
ndations and for samples of frozen tissue
the "kit" used was IllustraTM Tissue & Cells
Genomicprep Mini spin (GE Healthcare),
according to the manufacturer's recommendations in "kit". The results showed sensitivity and
specificity for FFPE samples of 63.7 % and 77.8
%. For frozen samples were 100% and 45.9
%, respectively. The Kappa index obtained was
considered weak. The recovery/concentration
of DNA in FFPE samples was low, but the
results indicate moderate sensitivity and
specificity, demonstrating that it is possible th
e diagnosis of canine visceral leishmaniasis
from FFPE samples.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/11965 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Campos, Monique Paiva de |
| Contributors | Figueiredo, Fabiano Borges, Madeira, Maria de Fátima |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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