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Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Leptina é um hormônio/citocina produzido pelo tecido adiposo que inibe a ingestão alimentar e o metabolismo lipídico. É altamente expressa na obesidade, sem no entanto intensificar seu efeito de inibição do apetite. Dentre outras funções, regula a imunidade inata e adaptativa. Sabe-se que a leptina ativa macrófagos, induzindo a produção de mediadores inflamatórios, como TNF-\F061, IL-1, IL-6 e LTB4. A leptina parece ainda regular a participação de neutrófilos em respostas inflamatórias. No entanto, não estão esclarecidos os mecanismos pelos quais a leptina seria capaz de regular migração ou ativação de neutrófilos, uma vez que estes não apresentam o principal receptor funcional de leptina, ObRb. Estudos in vitro não são conclusivos quanto aos efeitos serem diretos ou indiretos, enquanto estudos in vivo não se detém a estudar efeitos quimiotáticos de leptina sobre neutrófilos. O objetivo deste trabalho é investigar a sinalização por leptina envolvida na migração de neutrófilos. Para isso, foi realizada estimulação de animais C57Bl/6, bem como knockout de TNFR1-/-, MIP-1\F061-/-, 5-LO -/-, PI3K\F067-/-, machos, com leptina i.p. por 1, 6 e 24 h para avaliação do influxo de neutrófilos para a cavidade peritoneal e quantificação de mediadores inflamatórios no sobrenadante de lavado peritoneal e plasma. Também foram realizados tratamentos com rapamicina, para inibição de mTOR, Zileuton e U-75302, para inibir a sinalização por LTB4, bem como anticorpos anti-KC
Foi observado que macrófagos incubados com leptina 20 nM in vitro produzem KC e TNF-\F061, mediadores que recrutam neutrófilos. In vivo, foi observado que a migração de neutrófilos por leptina é dependente de TNF-\F061, KC e PI3K\F067, e independente de 5-LO/LTB4, MIP-1\F061\F020e mTOR. Para avaliar o efeito de hiperleptinemia crônica na imunidade inata, foi estabelecido um modelo murino de obesidade induzida por dieta. Animais do grupo obeso foram alimentados com dieta hiperlipídica com 60% de teor calórico proveniente de gordura, enquanto a dieta controle possui 10% de teor calórico proveniente de gordura. Animais obesos apresentaram hiperglicemia e hiperleptinemia. A dieta hiperlipídica predispôs a ativação de macrófagos peritoneais por leptina, incrementando a produção de corpúsculos lipídicos. Os níveis de TNF-\F061 no sobrenadante de lavado peritoneal foram maiores em animais obesos não estimulados com leptina i.p., sendo a estimulação com leptina i.p. capaz de induzir recrutamento de neutrófilos em animais obesos. Tais eventos sugerem que a dieta hiperlipídica induziu background inflamatório, que, no entanto, não interferiu na capacidade da leptina induzir recrutamento neutrofílico. Tais dados sugerem que leptina promove recrutamento de neutrófilos por meio da ativação de macrófagos e produção de mediadores. Além disso, a obesidade experimental promove ativação subclínica de macrófagos, sem alterar o recrutamento de neutrófilos. Com este trabalho, espera-se contribuir para o melhor entendimento da participação da leptina na regulação do sistema imune inato / Leptin is an adipose tissue-produced hormone/cytokine which inhibits food intake and lipid metabolism. It is highly expressed in obesity without appetite inhibition enhancement. Also regulates innate and adaptive immunity. It is known that leptin activates macrophages inducing the production of inflammatory mediators such as TNF-\F061, IL-1, IL-6 and LTB4. Leptin regulates neutrophil functions in inflammatory responses. However, mechanisms by which leptin could induce neutrophils migration and activation are not elucidated, since they do not show the main functional leptin receptor, ObRb. In vitro studies are inconclusive about direct or indirect effects, while in vivo studies usually do not focus on leptin effects on neutrophil chemotaxis. This study aims to investigate leptin signaling involved in neutrophil migration. C57BL/6 and knockout TNFR1-/-, MIP-1\F061-/-, 5-LO-/-, PI3K\F067-/- male mice were stimulated with leptin ip for 1, 6 or 24 h for evaluation of neutrophil influx into peritoneal cavity and quantification of inflammatory mediators in the supernatant of peritoneal fluid and plasma. It was also performed treatments with rapamycin, for inhibition of mTOR, Zileuton and U-75302 for inhibition of LTB4 signaling, and anti-KC antibodies. Macrophages incubated with 20 nM leptin in vitro produce KC and TNF-\F061, neutrophil recruitment mediators. In vivo, neutrophil migration induced by leptin is dependent on TNF-\F061, KC and PI3K\F067, and independent on 5-LO/LTB4, MIP-1\F061 and mTOR
To evaluate the effect of chronic hyperleptinemia in innate immunity, we established a murine model of diet induced obesity. The obese animals were fed with high fat diet with 60% calories from fat content, while the control diet had 10% of caloric content derived from fat. Obese animals showed hyperglycemia and hyperleptinemia. The fat diet predisposed the activation of peritoneal macrophages by leptin, increasing the lipid bodies formation. The levels of TNF-\F061 in the supernatant of peritoneal fluid were higher in obese animals, not stimulated with leptin ip; leptin ip stimulus induced neutrophil recruitment in obese animals. Such events suggest that the high fat diet induced inflammatory background, which, however, did not affect the ability of leptin to induce neutrophil recruitment. These data suggest that leptin promotes neutrophils recruitment through the activation of macrophages and production of mediators. Furthermore, experimental obesity promotes subclinical activation of macrophages, without changing the recruitment of neutrophils. This thesis is expected to contribute to a better understanding of leptin role in the regulation of innate immune system
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/16353 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Almeida, Gláucia Souza de |
| Contributors | Monteiro, Carmen Penido, Savino, Wilson, Fidalgo, Thereza Christina Barja, Silva, Adriana Ribeiro, Melo, Christianne Bandeira de, Monteiro, Clarissa Menezes Maya |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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