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Fernanda Oliveira Novais Avaliacao do papel....pdf: 2271339 bytes, checksum: eee5aa084065678cf55651296f356919 (MD5)
Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Linfócitos T CD8+
são células do sistema imune adaptativo capazes de induzir a morte de células infectadas através
de mecanismos citotóxicos. No modelo de infecção intradérmica por Leishmania revelou-se que
os linfócitos T CD8+ são responsáveis tanto pela indução de patogênese bem como pela
imunidade contra a infecção primária por L. major. Até o momento, o papel dos linfócitos T
CD8+ não foi estudado na infecção experimental por L. braziliensis. Neste estudo, investigamos o
recrutamento dos linfócitos T CD8+ para o sítio de infecção e determinamos a sua função. Cinco
semanas após a infecção intradérmica por L. braziliensis, camundongos BALB/c apresentaram
um aumento na porcentagem de linfócitos T CD8+ presentes na orelha infectada e estes
produziram, principalmente, IFN-g e Granzima B. Já no linfonodo de drenagem, estas células não
produzem granzima mas, sim, IFN-g e TNF-a. Utilizando o mesmo modelo de infecção,
camundongos BALB/c ou C57BL/6 depletados de linfócitos T CD8+ ou camundongos deficientes
em b2-microglobulina ou em CD8 apresentaram redução no tamanho da lesão ao longo da
infecção e menor carga parasitária cinco semanas após a infecção. A depleção de linfócitos T
CD8+ não induziu qualquer alteração no recrutamento e produção de IFN-g, TNF-a e IL-10 pelos
linfócitos T CD4+ no sítio de infecção ou no linfonodo de drenagem. Além disso, a capacidade
proliferativa ou a produção de citocinas específicas in vitro após estímulo com células dendríticas
infectadas por L. braziliensis não sofreram alteração. A ausência de linfócitos T CD8+ após a
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infecção por L. braziliensis também não alterou o recrutamento de monócitos inflamatórios nem
a sua diferenciação em células dendríticas. Por último, a análise histológica e de citometria de
fluxo mostrou aumento no recrutamento de neutrófilos para o sítio de infecção e este resultado
pode ser correlacionado com o controle da doença. Para confirmar o envolvimento dos linfócitos
T CD8+ no desenvolvimento de lesão por L. braziliensis, transferimos linfócitos T CD8+ de
camundongos naïve ou imunes, bem como linfócitos T CD4+ somente ou linfócitos T CD8+ e T
CD4+ para camundongos RAG-/-. Neste contexto, a transferência de linfócitos T CD8+ naïve ou
imunes induziu uma intensa patologia no sítio de infecção bem como a disseminação de parasitas
para outros sítios, como a orelha não infectada, pata e nariz. Camundongos RAG-/- controle e
aqueles que receberam linfócitos T CD8+ naïve ou imunes apresentam a mesma quantidade de
parasitas no sítio de infecção, embora o aspecto da lesão tenha sido muito diferente. A
transferência de linfócitos T CD4+ foi capaz de controlar a carga parasitária nestes animais e o
mesmo foi observado após transferência de linfócitos T CD4+ e T CD8+ em conjunto. Nestes
animais não observamos lesões em outros sítios, indicando que os linfócitos T CD8+ contribuem
para a disseminação dos parasitas. Por último, transferimos linfócitos T CD8+ provenientes de
camundongos selvagens ou deficientes de IFN-g e perforina e observamos que, na ausência de
perforina, a patologia e a disseminação parasitária são controladas. Portanto, este estudo sugere
envolvimento dos linfócitos T CD8+ na patogênese induzida por L. braziliensis devido ao seu
potencial citotóxico e, em paralelo, inibindo o recrutamento de neutrófilos para o sítio de
infecção. / CD8+ T lymphocytes are
part of the adaptive immune system and are considered cytotoxic because of their ability to
induce death in infected cells. Using the intradermal model of Leishmania infection, it has been
shown that CD8+ T cells play an essential role in both pathogenesis and immunity to primary
infection with L. major in the skin. So far, the role of these lymphocytes in the experimental
model of infection using L. braziliensis has not been evaluated. In this study we determined the
recruitment and function of these cells upon infection with L. braziliensis. Five weeks after
infection, the frequency of CD8+ T cells was increased in the dermal site and these cells produced
mainly IFN-g and granzyme B in infected mice. In the draining lymph nodes, these cells
produced high levels of IFN-g and TNF-a, but not granzyme B. Using the same intradermal
model of infection, we analysed the outcome of infection in the absence of CD8+ T lymphocytes
using both antibody depletion in BALB/c and C57BL/6 mice and mice deficient in b2-
microglobulin and CD8. In all groups, the absence of CD8+ T cells was correlated with better
control of lesion development and parasite load in both depleted BALB/c and in b2-microglobulin
deficient mice. In the absence of CD8+ T cells, CD4+ T lymphocytes were recruited to the same
extension and produced same levels of IFN-g, TNF-a and IL-10 both in the infected ear and in
draining lymph nodes when compared to infected mice that were not depleted. Also, there was no
change in the proliferative potential and in IFN-g production by these cells after re-stimulation
with infected dendritic cells. Analysis of inflammatory monocyte recruitment and differentiation
of these cells into dendritic cells were similar in both depleted and non-depleted mice. On the
other hand, histological and flow cytometric analyses showed increased neutrophil recruitment to
the site of infection and this can be correlated with disease control. To confirm the role of CD8+ T
cells in the lesion development of L. braziliensis infected mice, we then transferred CD8+ T cells
from naïve or immune mice, as well as CD4+ T cells alone or together with T CD8+ to RAG
deficient mice. The transfer of CD8+ T cells from immune or naïve mice into RAG recipients
induced an intense pathology upon infection with L. braziliensis in the infection site, but also in
uninfected tissues such as the uninfected ear, nose and footpad. Evaluation of parasite numbers in
the infected ear showed that RAG deficient mice without T cells and those transferred with CD8+
T cells from naïve or immune mice had similar number of parasites although the pathology was
very different. The transfer of CD4+ T cells alone or in association with CD8+ T cells induced
parasite control in the infection site. In these mice, we could not detect lesions in other sites and
we concluded that the transfer of CD8+ T cells alone induces parasite dissemination in RAG
deficient mice. Finally, the transfer of CD8+ T cells from perforin deficient mice led to control in
lesion development and in parasite dissemination. In this study we can conclude that CD8+ T
cells are involved in the pathogenesis of L. braziliensis due to their cytotoxic potential and by
inhibiting neutrophil recruitment to the infection site.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4200 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Novais, Fernanda Oliveira |
| Contributors | Oliveira, Camila Indiani de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Fernanda Oliveira Novais, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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