A leishmaniose é uma ameaça para cerca de 350 milhões de pessoas em 88 países no mundo. No município de Bandeirantes, estado do Paraná, Brasil, foram notificados 183 casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) entre 2000 a 2013. Objetivos: Descrever e analisar os casos de LTA ocorridos no município de Bandeirantes Paraná, entre 2007 e 2013 e investigar os fatores de risco associados à ocorrência da doença, considerando-se fatores socioeconômicos, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais e de lazer, conhecimento sobre a LTA na população de estudo e algumas práticas; investigar a presença de anticorpos anti Leishmania sp. na população canina e descrever as características socioeconômicas, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais, de lazer nos casos que evoluíram para óbitos bem como as características clínicas. Métodos: estudo caso-controle não pareado. A amostra constou de 104 casos autóctones de LTA notificados na Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes e 90 controles, residentes selecionados aleatoriamente que apresentassem reação de imunofluorescência indireta (RIFI) negativa. A amostra da população canina foi composta por animais presentes nas residências dos casos e dos controles. Foram investigados os óbitos entre os indivíduos que tiveram LTA no período do estudo. Resultados: O sexo feminino prevaleceu entre os casos (62,50 por cento ) e controles (68,89 por cento ), bem como a faixa etária maior ou igual a 60 anos em ambos os grupos (46,15 por cento e 33,33 por cento , respectivamente). Todavia estas condições não se mostraram como fatores de risco significante. Mostraram-se como fatores de risco significantes (p < 0,05) as seguintes variáveis: ser analfabeto (OR = 10,09), aposentados (OR = 2,35), praticar atividades de lazer relacionadas à zona rural (OR = 4,47), frestas na casa (OR = 2,15), presença de matos próximos ao domicílio (OR = 6,92), presença de plantas frutíferas no peridomicílio (OR=2,02), anexos peridomicilares (OR = 4,30), galinheiro (OR=2,15) e canil (OR = 3,90), dormir fora do quarto (OR=4,97), 8 combate a animais sinantrópicos (OR = 2,69), uso de repelente corporal (5,43) e conhecer o mosquito transmissor (OR = 3,48), a relação com outros animais (OR =2,51) e prevenção (OR = 2,24). Como fatores de proteção: renda familiar > 3 salários mínimo (OR = 0,22), casa de alvenaria e reboco (OR = 0,41), abastecimento de água de rede (OR = 0,41), presença de rede de esgoto (OR = 0,33), coleta de lixo pública (OR = 0,35). Os exames sorológicos realizados nos cães do estudo demonstraram que 38,23 por cento foram reagentes para os casos e 2,12 por cento nos controles. Os cães dos casos possuem 28,47 vezes mais chance de contrair a LTA quando comparados com os cães dos controles (p<0,0001). Foram investigados 14 óbitos, 35,71 por cento estavam em tratamento da LTA e 42,86 por cento apresentavam lesões compatíveis com a LTA. Conclusões: A ocorrência da LTA em Bandeirantes mostrou-se associada estatisticamente às variáveis: idade, escolaridade, renda familiar, atividades de lazer relacionadas à zona rural, presença de anexos domiciliares e vegetação próximo ao domicílio, assim como o uso de repelente corporal, dormir fora do quarto e conhecer o mosquito vetor da LTA e a sua forma de prevenção. / The leishmaniasis threat around 350 million people in 88 countries around the world. In Bandeirantes - Parana from 2000 to 2013 183 cases of American tegumentary leishmaniasis (ATL) were reported. Objectives: to describe and analyze the occurrence of ATL in human population in Bandeirantes - Parana, between 2007 and 2013; to investigate the risk factors associated with the disease considering socioeconomic factors, housing conditions and the surrounding residences, occupational and leisure activities, knowledge of the LTA in the study population and some practical; investigate the presence of antibodies against Leishmania sp. the canine population and describe the socio-economic characteristics, housing conditions and the surrounding residences, occupational activities, leisure in cases that evolved to death and the clinical characteristics. Methods: A not paired case-control study was performed in with 104 cases, individuals who had autochthonous ATL notified in the Municipal Health Department of Bandeirantes and 90 controls were randomly selected out of those who presented negative reaction of indirect immunofluorescence (IIF). The canine population was selected from the cases and controls. The deaths among those individuals who had ATL during the study period were investigated. Results: Females were more abundant in case (62,5 per cent ) and control groups (68.89 per cent ) with predominance of age equal or greater than 60 years in both groups (46,15 and 33.33 per cent respectively). However, these conditions were not significant risk factors. The significant risk factors (p < 0,05) were: illiterate people (OR = 10,09), those who receive one to three minimum wages (OR =4,48), retired people (OR=2,35), to practice leisure activities related to rural area (OR=4,47), openings on the house (OR=2,15), presence of forests near the domicilie (OR = 6,92), presence of fruit plants near the house (OR=2,02), attachments to the house (OR = 4,30), chicken stay (OR=2,15), kennel (OR = 3,90), to sleep out of the bedroom (OR=4,97), to combat urban plagues (OR = 2,69), to use repellent (5,43) and to know the phlebotomine (OR = 3,48) and its relation with other animals (OR =2,51), and prevention (OR = 2,24). The protective factors were house of masonry and plaster (OR = 0.41), water supply network (OR = 0.41), 10 presence of sewage (OR = 0.33), public garbage collection (OR = 0.35). The serological tests performed in dogs of the study showed that 38.23 per cent were reactive to the cases and 2.12 per cent to the controls. The dogs of the cases have 28.47 times more chance of catching the ATL when compared with the dogs of the controls (p< 0.0001). Fourteen deaths were investigated, out of which 35.71 per cent were in treatment of ATL and 42.86 per cent had lesions compatible with the ATL. Conclusions: The occurrence of ATL in Bandeirantes proved to be statistically associated with the variables: age, education, family income, leisure activities related to rural area, presence of attachments to the house and vegetation near the domicile, as well as the use of repellent, sleeping outside of the room and knowing the disease vector of ATL and its prevention.

A leishmaniose é uma ameaça para cerca de 350 milhões de pessoas em 88 países no mundo. No município de Bandeirantes, estado do Paraná, Brasil, foram notificados 183 casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) entre 2000 a 2013. Objetivos: Descrever e analisar os casos de LTA ocorridos no município de Bandeirantes Paraná, entre 2007 e 2013 e investigar os fatores de risco associados à ocorrência da doença, considerando-se fatores socioeconômicos, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais e de lazer, conhecimento sobre a LTA na população de estudo e algumas práticas; investigar a presença de anticorpos anti Leishmania sp. na população canina e descrever as características socioeconômicas, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais, de lazer nos casos que evoluíram para óbitos bem como as características clínicas. Métodos: estudo caso-controle não pareado. A amostra constou de 104 casos autóctones de LTA notificados na Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes e 90 controles, residentes selecionados aleatoriamente que apresentassem reação de imunofluorescência indireta (RIFI) negativa. A amostra da população canina foi composta por animais presentes nas residências dos casos e dos controles. Foram investigados os óbitos entre os indivíduos que tiveram LTA no período do estudo. Resultados: O sexo feminino prevaleceu entre os casos (62,50 por cento ) e controles (68,89 por cento ), bem como a faixa etária maior ou igual a 60 anos em ambos os grupos (46,15 por cento e 33,33 por cento , respectivamente). Todavia estas condições não se mostraram como fatores de risco significante. Mostraram-se como fatores de risco significantes (p < 0,05) as seguintes variáveis: ser analfabeto (OR = 10,09), aposentados (OR = 2,35), praticar atividades de lazer relacionadas à zona rural (OR = 4,47), frestas na casa (OR = 2,15), presença de matos próximos ao domicílio (OR = 6,92), presença de plantas frutíferas no peridomicílio (OR=2,02), anexos peridomicilares (OR = 4,30), galinheiro (OR=2,15) e canil (OR = 3,90), dormir fora do quarto (OR=4,97), 8 combate a animais sinantrópicos (OR = 2,69), uso de repelente corporal (5,43) e conhecer o mosquito transmissor (OR = 3,48), a relação com outros animais (OR =2,51) e prevenção (OR = 2,24). Como fatores de proteção: renda familiar > 3 salários mínimo (OR = 0,22), casa de alvenaria e reboco (OR = 0,41), abastecimento de água de rede (OR = 0,41), presença de rede de esgoto (OR = 0,33), coleta de lixo pública (OR = 0,35). Os exames sorológicos realizados nos cães do estudo demonstraram que 38,23 por cento foram reagentes para os casos e 2,12 por cento nos controles. Os cães dos casos possuem 28,47 vezes mais chance de contrair a LTA quando comparados com os cães dos controles (p<0,0001). Foram investigados 14 óbitos, 35,71 por cento estavam em tratamento da LTA e 42,86 por cento apresentavam lesões compatíveis com a LTA. Conclusões: A ocorrência da LTA em Bandeirantes mostrou-se associada estatisticamente às variáveis: idade, escolaridade, renda familiar, atividades de lazer relacionadas à zona rural, presença de anexos domiciliares e vegetação próximo ao domicílio, assim como o uso de repelente corporal, dormir fora do quarto e conhecer o mosquito vetor da LTA e a sua forma de prevenção. / The leishmaniasis threat around 350 million people in 88 countries around the world. In Bandeirantes - Parana from 2000 to 2013 183 cases of American tegumentary leishmaniasis (ATL) were reported. Objectives: to describe and analyze the occurrence of ATL in human population in Bandeirantes - Parana, between 2007 and 2013; to investigate the risk factors associated with the disease considering socioeconomic factors, housing conditions and the surrounding residences, occupational and leisure activities, knowledge of the LTA in the study population and some practical; investigate the presence of antibodies against Leishmania sp. the canine population and describe the socio-economic characteristics, housing conditions and the surrounding residences, occupational activities, leisure in cases that evolved to death and the clinical characteristics. Methods: A not paired case-control study was performed in with 104 cases, individuals who had autochthonous ATL notified in the Municipal Health Department of Bandeirantes and 90 controls were randomly selected out of those who presented negative reaction of indirect immunofluorescence (IIF). The canine population was selected from the cases and controls. The deaths among those individuals who had ATL during the study period were investigated. Results: Females were more abundant in case (62,5 per cent ) and control groups (68.89 per cent ) with predominance of age equal or greater than 60 years in both groups (46,15 and 33.33 per cent respectively). However, these conditions were not significant risk factors. The significant risk factors (p < 0,05) were: illiterate people (OR = 10,09), those who receive one to three minimum wages (OR =4,48), retired people (OR=2,35), to practice leisure activities related to rural area (OR=4,47), openings on the house (OR=2,15), presence of forests near the domicilie (OR = 6,92), presence of fruit plants near the house (OR=2,02), attachments to the house (OR = 4,30), chicken stay (OR=2,15), kennel (OR = 3,90), to sleep out of the bedroom (OR=4,97), to combat urban plagues (OR = 2,69), to use repellent (5,43) and to know the phlebotomine (OR = 3,48) and its relation with other animals (OR =2,51), and prevention (OR = 2,24). The protective factors were house of masonry and plaster (OR = 0.41), water supply network (OR = 0.41), 10 presence of sewage (OR = 0.33), public garbage collection (OR = 0.35). The serological tests performed in dogs of the study showed that 38.23 per cent were reactive to the cases and 2.12 per cent to the controls. The dogs of the cases have 28.47 times more chance of catching the ATL when compared with the dogs of the controls (p< 0.0001). Fourteen deaths were investigated, out of which 35.71 per cent were in treatment of ATL and 42.86 per cent had lesions compatible with the ATL. Conclusions: The occurrence of ATL in Bandeirantes proved to be statistically associated with the variables: age, education, family income, leisure activities related to rural area, presence of attachments to the house and vegetation near the domicile, as well as the use of repellent, sleeping outside of the room and knowing the disease vector of ATL and its prevention.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-29T14:12:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Doutorado -Andresa-Pereira de Oliveira-Mendes- 2015.pdf: 8328092 bytes, checksum: 5171c239f32fd47c0d02f30e0730fd54 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T14:12:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Doutorado -Andresa-Pereira de Oliveira-Mendes- 2015.pdf: 8328092 bytes, checksum: 5171c239f32fd47c0d02f30e0730fd54 (MD5) Previous issue date: 2015-03-05 / FACEPE / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é um problema de saúde pública, que afeta a produtividade e a vitalidade das pessoas. Embora estudos avaliem a resposta humoral na LTA, ainda não está completamente esclarecido o papel de anticorpos específicos na imunidade contra Leishmania. Além dos desafios sócio-econômicos que agravam ainda mais o problema da LTA, o diagnóstico da doença demonstra dificuldades, sendo freqüentemente necessário à correlação de vários elementos para se chegar ao diagnóstico definitivo. Dessa maneira, o objetivo desse estudo, foi avaliar o uso da citometria de fluxo, como uma metodologia alternativa na avaliação diagnóstica em indivíduos com LTA ativa (AT), como critério de cura pós-terapêutica em indivíduos após o tratamento (PT), naqueles com cura clínica espontânea (CE) e em indivíduos com outras doenças (doença de Chagas – DC, leishmaniose visceral–LV, hanseníase e esporotricose). A reatividade relatada pela citometria de fluxo, utilizando promastigotas vivas e fixadas de Leishmania (Viannia) braziliensis foi respectivamente, 86% e 90% de porcentagem de parasitas fluorescentes positivos (PPFP). Por análise comparativa, entre citometria de fluxo e imunofluorescência indireta, utilizando os pacientes AT, 1, 2 e 5 anos PT, verificou-se que a citometria de fluxo mostrou sensibilidade de 86% e especificidade de 77%, enquanto a IFI teve uma sensibilidade de 78% e especificidade de 85%. Contudo esta técnica teve confirmada a sua aplicabilidade no critério de cura da LTA. Analisando os resultados apresentados pelos pacientes CE, obtivemos um desempenho com 100% de especificidade. O diagnóstico diferencial da LTA que utiliza soros de pacientes DC e LV demonstrou reação cruzada, revelando resultados falso-positivos. No entanto, a utilização de soros de pacientes com esporotricose, tuberculose e hanseníase, demonstrou potencial para o uso da citometria de fluxo no diagnóstico diferencial. O estudo mostrou que os ensaios realizados utilizando anticorpos IgG, detectados por Leishmania (V.) braziliensis na citometria de fluxo, representam uma ferramenta alternativa para o diagnóstico da LTA e também abrem perspectivas para a utilização no monitoramento e critério de cura da LTA. / American tegumentar leishmaniasis (ATL) is a public health problem, affecting the productivity and vitality. Although there are studies to assess the humoral response in the ATL, is not yet fully understood the role of specific antibodies in immunity against Leishmania. In addition to the socioeconomic challenges that further aggravate the problem of ATL, the diagnosis shows difficulties and is often necessary to the correlation of various elements to reach a definitive diagnosis. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of flow cytometry as an alternative methodology in the diagnostic evaluation in patients with active ATL before treatment (BT), as post-therapy cure criteria in individuals after treatment (AT), those with spontaneous clinical cure (EC) and in individuals with other diseases (Chagas disease - CD, visceral leishmaniasis-LV, leprosy and sporotrichosis). The reactivity reported by flow cytometry, using live and fixed promastigotes of Leishmania (V.) braziliensis were respectively 86% and 90% percentage of positive fluorescent parasites (PPFP). A comparative analysis of flow cytometry and indirect immunofluorescence using patient AT, 1, PT 2 and 5 years, it has been found that the flow cytometry showed a sensitivity of 86% and specificity of 77% and had a sensitivity IIF of 78% and specificity of 85%. Though this technique has confirmed its applicability in the healing criterion of ATL, analyzing the results presented by the EC patients achieved a performance with 100% specificity. The differential diagnosis of ATL using sera from patients of CD and LV demonstrated cross-reactivity, revealing false-positive results. Moreover, the use of sera from patients with sporotrichosis, tuberculosis and leprosy showed potential for the use of flow cytometry in the differential diagnosis. The study showed that testing performed using IgG antibodies, detected by Leishmania (V.) braziliensis in flow cytometry, are an alternative tool for the diagnosis of ATL and also open up prospects for use in monitoring and in its cure criterion.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-11T13:35:46Z No. of bitstreams: 1 fabriciaaparecidarezendesoares.pdf: 1857440 bytes, checksum: f25c08dc77a5f4ef171b000924735ca2 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-14T17:09:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabriciaaparecidarezendesoares.pdf: 1857440 bytes, checksum: f25c08dc77a5f4ef171b000924735ca2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T17:09:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabriciaaparecidarezendesoares.pdf: 1857440 bytes, checksum: f25c08dc77a5f4ef171b000924735ca2 (MD5) Previous issue date: 2007-12-11 / Uma ATP difosfohidrolase foi identificada em promastigotas de Leishmania braziliensis, e resultado similar foi encontrado em outra cepa de Leishmania, pertencente ao Complexo Leishmania braziliensis. Hidrólise de nucleosídeos di- e trifosfatados sob estímulo de íons bivalentes, associada à inibição por azida sódica, sugeriram que atividade ATP difosfohidrolásica está presente em promastigotas. Western blots desenvolvidos com anticorpos anti-apirase de batata produzidos em coelho revelaram bandas de 48 e 43 kDa, possivelmente sub-unidades da mesma proteína. Estes anticorpos imobilizados em Proteína A-Sepharose depletaram aproximadamente 85% da atividade ATPásica ou ADPásica da ATP difosfohidrolase solubilizada em C12E9. O complexo imunoprecipitado (resina-anticorpo-antígeno) foi separado por SDS-PAGE. Através de western blots desenvolvidos com anticorpos anti-apirase de batata produzidos em camundongos, a mesma banda de 48 kDa foi identificada nas duas cepas, confirmando que as proteínas do parasito e da batata compartilham epítopos. Além disso, o peso molecular coincidente sugeriu que esta ATP difosfohidrolase corresponde a um nucleosídeo difosfatase identificada no genoma de L. braziliensis como pertencente à família das NTPDases. Estreita relação estrutural e evolucionária foram então demonstradas entre a apirase de batata e a NDPase de L. braziliensis por cladograma, alinhamento de seqüências de aminoácidos, predição de epítopos e modelagem molecular. Domínios específicos parecem estar potencialmente envolvidos na resposta imune do hospedeiro, conservados entre estes diferentes organismos. Devido a esta imunoreatividade cruzada observada entre a apirase de batata e a ATP difosfohidrolase de L. braziliensis, também sugerido por análises in silico, western blots foram desenvolvidos com soros de pacientes com LTA, e os resultados sugeriram que estes epítopos compartilhados são antigênicos para o humano. Os níveis de anticorpos contra a proteína vegetal ou contra o homogeneizado de L. braziliensis foram então analisados em 21 amostras de soros de pacientes com LTA. Aproximadamente 84% deles têm soropositividade de IgG para Lb ou apirase de batata. Correlação positiva foi observada entre os níveis de IgG e os níveis elevados dos subtipos IgG1 e IgG3 contra Lb, ambos com 76% de soropositividade em pacientes com LTA. Interessantemente, aumentos significativos dos níveis de IgG1 (71% de soropositividade) e IgG3 (43% soropositividade) contra a apirase de batata foram também observados. Elevada soropositividade de IgG4 para Lb (62%) e apirase de batata (48%), mas não de IgG2 (<24%), evidenciaram que a ATP difosfohidrolase do parasito é também capaz de estimular este subtipo de IgG. Soropositividade de IgA para Lb ou apirase de batata foi de 62% e 14%, respectivamente, enquanto para IgM ou IgE foi baixa em ambas preparações (<14%). Estes resultados sugerem que os domínios compartilhados entre a apirase de batata e a ATP difosfohidrolase de L. braziliensis contribuem com a elevação de IgG contra antígenos de promastigota, associada a maior produção de IgG1, IgG3 e IgG4. Esta é a primeira demonstração de uma ATP difosfohidrolase ativa em promastigotas de L. braziliensis, de sua imunoreatividade cruzada com anticorpos anti-apirase de batata, e de propriedades antigênicas dos domínios conservados entre elas em pacientes com LTA. Estudos destes domínios compartilhados poderão levar ao desenvolvimento de novas drogas, marcadores moleculares ou vacinas. / ATP diphosphohydrolase was identified in Leishmania braziliensis promastigote, and similar result was found in other Leishmania strain, typified as belonging to the Leishmania braziliensis Complex. The significant hydrolysis of di- or triphosphate nucleosides upon bivalent metal ion stimulus, associated to the inhibition promoted by sodium azide, suggested strongly that ATP diphosphohydrolase activity is present in promastigote preparations. Western blots developed with rabbit polyclonal anti-potato apyrase revealed bands of 48 and 43 kDa, possibly subunits of the same protein. These antibodies immobilized on Protein A-Sepharose depleted about 85% of the ATPase or ADPase activity from C12E9-solubilized ATP diphosphohydrolase. The immunoprecipitated resin-rabbit antibody-antigen complex was separated by SDS-PAGE, and Western blots developed with mouse polyclonal anti-potato apyrase antibodies identify the same 48 kDa band in the two promastigote strains, confirming that parasite and vegetable proteins share epitopes. Furthermore, the coincident molecular weigh suggested that this active ATP diphosphohydrolase corresponds to the putative nucleoside diphosphatase identified in L. braziliensis genome as belonging to NTPDase family, whose amino acid sequence was recently deposited in GeneBank database from NCBI. Evolutionary and closer structural relationships were then demonstrated between potato apyrase and Leishmania braziliensis NDPase by phylogenetic analysis, alignment of amino acid sequences, peptides prediction and molecular modeling. Specific protein domains are suggested to be potentially involved in the immune response. They also seem to be conserved during host and parasites co-evolution. Due to this cross-immunoreactivity between potato apyrase and ATP diphosphohydrolase from Leishmania (V.) braziliensis promastigotes, also suggested by in silico analyses, Western blots were developed with antibody present in sera from patients with American cutaneous leishmaniasis (ACL), and the results suggested that these shared epitopes are antigenic for host human. The antibody levels against the vegetable protein or against Leishmania braziliensis promastigote antigens preparation were then analyzed in 21 serum samples from patients with ACL. About 84% of them have IgG seropositivity for L. braziliensis promastigote antigens (Lb) or potato apyrase. Positive correlation was observed between IgG and the elevated IgG1 or IgG3 subtypes levels against Lb, both subtypes com 76% seropositivity in ACL patients. Interestingly, significant elevations of the IgG1 (71% seropositivity) and IgG3 (43% seropositivity) levels against potato apyrase were also observed. High IgG4 seropositivity for both Lb (62%) and potato apyrase (48%), but not of IgG2 (<24%), evidenced that parasite ATP diphosphohydrolase is also capable to stimulate this IgG subtype. IgA seropositivity for Lb or potato apyrase was 62% and 14%, respectively, while IgM or IgE antibody seropositivity was low for both preparations (<14%). These results suggest that the domains shared between potato apyrase and Leishmania braziliensis ATP diphosphohydrolase contribute with IgG antibody level elevation against promastigote antigens, associated to higher IgG1, IgG3 and IgG4 subtype production. It is the first demonstration of an active ATP diphosphohydrolase in Leishmania braziliensis promastigote form, of its cross-immunoreactivity with anti-potato apyrase antibody, and antigenic properties of conserved domains in ACL patients. Further studies of these shared domains could lead to the development of new drugs targets, molecular markers or implementation of vaccines.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-18T21:46:22Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Oliveira Novais Avaliacao do papel....pdf: 2271339 bytes, checksum: eee5aa084065678cf55651296f356919 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-18T21:46:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Oliveira Novais Avaliacao do papel....pdf: 2271339 bytes, checksum: eee5aa084065678cf55651296f356919 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Linfócitos T CD8+ são células do sistema imune adaptativo capazes de induzir a morte de células infectadas através de mecanismos citotóxicos. No modelo de infecção intradérmica por Leishmania revelou-se que os linfócitos T CD8+ são responsáveis tanto pela indução de patogênese bem como pela imunidade contra a infecção primária por L. major. Até o momento, o papel dos linfócitos T CD8+ não foi estudado na infecção experimental por L. braziliensis. Neste estudo, investigamos o recrutamento dos linfócitos T CD8+ para o sítio de infecção e determinamos a sua função. Cinco semanas após a infecção intradérmica por L. braziliensis, camundongos BALB/c apresentaram um aumento na porcentagem de linfócitos T CD8+ presentes na orelha infectada e estes produziram, principalmente, IFN-g e Granzima B. Já no linfonodo de drenagem, estas células não produzem granzima mas, sim, IFN-g e TNF-a. Utilizando o mesmo modelo de infecção, camundongos BALB/c ou C57BL/6 depletados de linfócitos T CD8+ ou camundongos deficientes em b2-microglobulina ou em CD8 apresentaram redução no tamanho da lesão ao longo da infecção e menor carga parasitária cinco semanas após a infecção. A depleção de linfócitos T CD8+ não induziu qualquer alteração no recrutamento e produção de IFN-g, TNF-a e IL-10 pelos linfócitos T CD4+ no sítio de infecção ou no linfonodo de drenagem. Além disso, a capacidade proliferativa ou a produção de citocinas específicas in vitro após estímulo com células dendríticas infectadas por L. braziliensis não sofreram alteração. A ausência de linfócitos T CD8+ após a 8 infecção por L. braziliensis também não alterou o recrutamento de monócitos inflamatórios nem a sua diferenciação em células dendríticas. Por último, a análise histológica e de citometria de fluxo mostrou aumento no recrutamento de neutrófilos para o sítio de infecção e este resultado pode ser correlacionado com o controle da doença. Para confirmar o envolvimento dos linfócitos T CD8+ no desenvolvimento de lesão por L. braziliensis, transferimos linfócitos T CD8+ de camundongos naïve ou imunes, bem como linfócitos T CD4+ somente ou linfócitos T CD8+ e T CD4+ para camundongos RAG-/-. Neste contexto, a transferência de linfócitos T CD8+ naïve ou imunes induziu uma intensa patologia no sítio de infecção bem como a disseminação de parasitas para outros sítios, como a orelha não infectada, pata e nariz. Camundongos RAG-/- controle e aqueles que receberam linfócitos T CD8+ naïve ou imunes apresentam a mesma quantidade de parasitas no sítio de infecção, embora o aspecto da lesão tenha sido muito diferente. A transferência de linfócitos T CD4+ foi capaz de controlar a carga parasitária nestes animais e o mesmo foi observado após transferência de linfócitos T CD4+ e T CD8+ em conjunto. Nestes animais não observamos lesões em outros sítios, indicando que os linfócitos T CD8+ contribuem para a disseminação dos parasitas. Por último, transferimos linfócitos T CD8+ provenientes de camundongos selvagens ou deficientes de IFN-g e perforina e observamos que, na ausência de perforina, a patologia e a disseminação parasitária são controladas. Portanto, este estudo sugere envolvimento dos linfócitos T CD8+ na patogênese induzida por L. braziliensis devido ao seu potencial citotóxico e, em paralelo, inibindo o recrutamento de neutrófilos para o sítio de infecção. / CD8+ T lymphocytes are part of the adaptive immune system and are considered cytotoxic because of their ability to induce death in infected cells. Using the intradermal model of Leishmania infection, it has been shown that CD8+ T cells play an essential role in both pathogenesis and immunity to primary infection with L. major in the skin. So far, the role of these lymphocytes in the experimental model of infection using L. braziliensis has not been evaluated. In this study we determined the recruitment and function of these cells upon infection with L. braziliensis. Five weeks after infection, the frequency of CD8+ T cells was increased in the dermal site and these cells produced mainly IFN-g and granzyme B in infected mice. In the draining lymph nodes, these cells produced high levels of IFN-g and TNF-a, but not granzyme B. Using the same intradermal model of infection, we analysed the outcome of infection in the absence of CD8+ T lymphocytes using both antibody depletion in BALB/c and C57BL/6 mice and mice deficient in b2- microglobulin and CD8. In all groups, the absence of CD8+ T cells was correlated with better control of lesion development and parasite load in both depleted BALB/c and in b2-microglobulin deficient mice. In the absence of CD8+ T cells, CD4+ T lymphocytes were recruited to the same extension and produced same levels of IFN-g, TNF-a and IL-10 both in the infected ear and in draining lymph nodes when compared to infected mice that were not depleted. Also, there was no change in the proliferative potential and in IFN-g production by these cells after re-stimulation with infected dendritic cells. Analysis of inflammatory monocyte recruitment and differentiation of these cells into dendritic cells were similar in both depleted and non-depleted mice. On the other hand, histological and flow cytometric analyses showed increased neutrophil recruitment to the site of infection and this can be correlated with disease control. To confirm the role of CD8+ T cells in the lesion development of L. braziliensis infected mice, we then transferred CD8+ T cells from naïve or immune mice, as well as CD4+ T cells alone or together with T CD8+ to RAG deficient mice. The transfer of CD8+ T cells from immune or naïve mice into RAG recipients induced an intense pathology upon infection with L. braziliensis in the infection site, but also in uninfected tissues such as the uninfected ear, nose and footpad. Evaluation of parasite numbers in the infected ear showed that RAG deficient mice without T cells and those transferred with CD8+ T cells from naïve or immune mice had similar number of parasites although the pathology was very different. The transfer of CD4+ T cells alone or in association with CD8+ T cells induced parasite control in the infection site. In these mice, we could not detect lesions in other sites and we concluded that the transfer of CD8+ T cells alone induces parasite dissemination in RAG deficient mice. Finally, the transfer of CD8+ T cells from perforin deficient mice led to control in lesion development and in parasite dissemination. In this study we can conclude that CD8+ T cells are involved in the pathogenesis of L. braziliensis due to their cytotoxic potential and by inhibiting neutrophil recruitment to the infection site.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarcosPGP_DISSERT_1-46.pdf: 4525391 bytes, checksum: cc4ce7722ce2492ebd954c9d1dfad7a8 (MD5) Previous issue date: 2010-04-28 / Sandflies stand out as important vectors of leishmaniasis. The females need to ingest blood meals, enabling them to transmit protozoa of the genus Leishmania, which may give rise to visceral leishmaniasis (VL) or American tegumentary leishmaniasis (ATL), in addition to transmitting other parasites. Leishmaniasis are important infirmities, distributed worldwide, whose infection results from the interaction of reservoir animals, the vector insect, parasitic protozoa and the healthy host. In the state of Rio Grande do Norte (RN), Brazil, these insects are important transmitters of VL, which usually presents in the most serious form. It occurs mainly in metropolitan areas, with the dog as its main reservoir and Lutzomyia longipalpis as the vector. ATL is most present in the highland areas of the state. In addition to hematophagia, engaged in by the females, both sexes need to ingest carbohydrates, which are essential to the sand flies energy requirements and may interfere in the development of Leishmania. The aim of this study was to determine the occurrence and abundance of sand flies in different environments on the farm belonging to the Empresa de Pesquisas Agropecu?rias do RN (Institute of Agricultural Research of RN), in the municipality of Parnamirim, in order to relate this occurrence with climatological and biological references and eating habits. Three consecutive monthly collections were carried out with CDC traps in a fragment of the Atlantic Forest, in a residence, on a goat breeding farm and on cashew, dwarf and giant coconut, mango, banana, eucalyptus, acacia and bean plantations. A total of 1241 sandflies from eight species (Lutzomyia evandroi, Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia shannoni, Lutzomyia sordellii Lutzomyia walkeri, Lutzomyia wellcomei, Lutzomyia whitmani, and Lutzomyia intermedia) were collected, most in the forest environment. L. longipalpis, the main VL transmitter, was confirmed as a species adapted to anthropic environments, whereas others such as L. wellcomei, the vector of ATL, occurred predominantly in forests. Carbohydrate characterization of the sand flies and plants of the region demonstrated that a number of exotic plants such as hay and eucalyptus may play some role in the adaptation of these species to modified environments. Breeding in laboratory showed a mean biological cycle of 53.5 days from egg to adulthood for L. shannoni and the possibility of diapause behavior in L. wellcomei. This study serves as a source of information that may contribute to the epidemiological vigilance of tegumentary and visceral leishmaniasis in the state, given that it analyzes the bioecology of transmitting species, as well as their potential to adapt to new environments / Os flebotom?neos se destacam como importantes transmissores das leishmanioses. As f?meas necessitam realizar repasto sangu?neo, o que as possibilita veicular protozo?rios do g?nero Leishmania, que podem originar a leishmaniose visceral (LV) ou a leishmaniose tegumentar americana (LTA), al?m de transmitirem outros parasitos. As leishmanioses s?o enfermidades de ampla import?ncia e distribui??o mundial, cuja infec??o ? conseq?ente da intera??o dos animais reservat?rios com o inseto vetor, o protozo?rio parasito e o hospedeiro sadio. No Rio Grande do Norte (RN) esses insetos s?o importantes transmissores da LV, que geralmente se apresenta de forma mais grave e ocorre principalmente na regi?o metropolitana, tendo o c?o como principal reservat?rio, e Lutzomyia longipalpis como vetor. A LTA est? mais presente nas ?reas serranas do estado. Al?m da hematofagia, exercida pelas f?meas, ambos os sexos necessitam ingerir carboidratos, que s?o essenciais para as necessidades energ?ticas dos flebotom?neos e podem interferir no desenvolvimento da Leishmania. O objetivo desse estudo foi levantar a ocorr?ncia e abund?ncia de flebotom?neos nos diversos ambientes da fazenda da Empresa de Pesquisas Agropecu?rias do RN, no Munic?pio de Parnamirim, buscando relacionar essa ocorr?ncia com referenciais climatol?gicos, biol?gicos e h?bitos alimentares. Foram realizadas 03 coletas consecutivas mensais com armadilhas CDC em um fragmento de Mata Atl?ntica, em uma resid?ncia, e em planta??es de cajueiro, de coqueiro an?o e gigante, de mangueira, de bananeira, de eucalipto, ac?cia, feij?o e em cria??o de caprinos. Foram coletados 1241 flebotom?neos de oito esp?cies, Lutzomyia evandroi, Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia shannoni, Lutzomyia sordellii Lutzomyia walkeri, Lutzomyia wellcomei, Lutzomyia whitmani, e Lutzomyia intermedia, sendo a maioria destes no ambiente de mata. L. longipalpis, principal esp?cie transmissora de LV, se confirmou como esp?cie adaptada a ambientes antr?picos, enquanto outras como L. wellcomei, vetora de LTA, se mostrou predominantemente silvestre. Foi feita caracteriza??o de carboidratos em flebotom?neos e vegetais da regi?o, visando relacion?-los, o que demonstrou que algumas plantas ex?ticas como capim e eucalipto podem ter algum papel no processo de adapta??o dessas esp?cies a ambientes modificados. Atrav?s da cria??o em laborat?rio, observou-se para L. shannoni ciclo biol?gico m?dio de 53,5 dias de ovo a adulto e ainda a possibilidade de diapausa em L. wellcomei. Esse estudo constitui uma fonte de informa??es que poder? contribuir com a vigil?ncia epidemiol?gica das leishmanioses tegumentar e visceral no Estado, uma vez que analisa a bioecologia das esp?cies transmissoras, assim como seu potencial de adapta??o a novos ambientes

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T11:00:36Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline do Carmo Gonçalves - 2015.pdf: 1858086 bytes, checksum: 7231813c18a0ebd7f161cec329ca3e86 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T11:03:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline do Carmo Gonçalves - 2015.pdf: 1858086 bytes, checksum: 7231813c18a0ebd7f161cec329ca3e86 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T11:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline do Carmo Gonçalves - 2015.pdf: 1858086 bytes, checksum: 7231813c18a0ebd7f161cec329ca3e86 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-05-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a neglected disease, caused by protozoa of the genus Leishmania, which affects organs (visceral leishmaniasis), skin and mucous (American tegumentary leishmaniasis, ATL). The treatment of ATL is effective, however causes several collateral effects, and the absence treatment or incomplete treatment is associated with relapse. Alternative treatments should, therefore, be explored, and low potency lasers indicate the possibility of a noninvasive therapy without collateral effects and that can act together with conventional therapy. LLLT (Low-Level Laser Therapy) was applied on experimental mice BALB/c lesions, caused by Leishmania (Leishmania) amazonensis (MAB-6) in order to evaluate the healing time. The cytokines profile expression was evaluated by real-time PCR and ELISA, and Immunohistochemistry was performed to quantify M2 macrophages using MP-23 antibody. In the lesions treated with laser, it was observed a lower healing time when compared with the group of animals with untreated injuries. Moreover, it was observed an increased expression of regulatory and anti-inflammatory cytokines in the inflammatory infiltrate. We evaluated the effect of laser on macrophages RAW264.7, differentiated or not for the M1 or M2 profile, and infected in vitro. Also, we evaluated the phagocytic activity by quantification of the infected macrophages and the number of amastigotes per infected macrophage at 4 and 24 hours after infection; and nitric oxide (NO) production. The laser treatment increased the NO production and phagocytic activity of macrophages in different profiles, including those macrophages that were not differentiated before the infection. The 660nm laser stimulates macrophages and accelerates the healing of experimental injuries caused by L. amazonensis. Depending on the stage of the infection that the treatment is initiated, the laser may affect the inflammatory phase for the elimination of the parasite or stimulate the proliferative phase regulators and anti-inflammatory cytokines. / A leishmaniose é uma doença negligenciada, causada por protozoários do gênero Leishmania, que acomete órgãos (leishmaniose viceral), pele e mucosas (leishmaniose tegumentar americana, LTA). O tratamento da LTA é eficaz, contudo causa inúmeros efeitos colaterais, e o não tratamento ou o tratamento incompleto está associado com casos de recidivas. Tratamentos alternativos, portanto, devem ser explorados, e os laseres de baixa potência apontam para a possibilidade de uma terapia não invasiva, sem efeitos colaterais e que podem atuar em conjunto com a terapia convencional. A LLLT (Low-Level Laser Therapy) foi aplicada sobre lesões experimentais de camundongos BALB/c, causadas por Leishmania (leishmania) amazonensis (MAB-6) e avaliado o tempo de cicatrização, por PCR em tempo real e ELISA o perfil de expressão de citocinas, e por Imunoistoquímica foi feita a quantificação de macrófagos M2 pelo anticorpo MP-23. Nas lesões tratadas com laser o tempo de cicatrização foi menor que no grupo de animais com lesões não tratadas. Além disso, foi constatada uma maior expressão de citocinas regulatórias e antiinflamatórias no infiltrado inflamatório. Avaliamos o efeito do laser sobre macrófagos RAW264.7 diferenciados ou não para o perfil M1 ou M2, e infectados in vitro. Foram avaliados os quesitos de atividade fagocítica através da quantificação de macrófagos infectados e número de amastigotas por macrófagos infectados às 4 e 24 horas após a infecção; e produção de óxido nítrico (NO). O tratamento com o laser aumentou a produção de NO e a atividade fagocítica nos diferentes perfis de macrófagos, inclusive naqueles macrófagos que não foram diferenciados antes da infecção. O laser de 660nm estimula os macrófagos e acelera a cicatrização. Dependendo da fase da infecção em que se inicia o tratamento o laser pode influenciar a fase inflamatória, para a eliminação do parasito, ou na fase proliferativa estimulando citocinas reguladoras e antiinflamatórias.. Palavras-chave: Leishmaniose tegumentar americana; Terapia com laser de baixa potência; Macrófagos; Cicatrização; Citocinas.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monicareginabocchi_dissert.pdf: 2907394 bytes, checksum: c48a0e16494a52698ca5ba65562e2c2a (MD5) Previous issue date: 2007-08-15 / The objectives included studying the occurrence of American tegumentary leishmaniasis (ATL) in the region of São José do Rio Preto, Brazil in the period between 1998 and 2005, to describe the reported variables, to reclassify notified cases of ATL over this period according to the probable location of infection and to spatially analyze and characterize the transmission areas. Methods: The study was developed from confirmed notifications of ATL in the region of São José do Rio Preto. The studied variables included: date of notification, age, gender, rural or urban zone, occupation and probable location of infection. Reinvestigations, reclassifications and visits to the probable infection sites were made for all suspected autochthony cases which were then georeferenced and photographed. Results and conclusions: The number of indecisive cases was reduced from 27.2% to 7.8%. The number of imported cases increased from 50.0% to 70.8%. Autochthones dropped from 22.8% to 21.4%, however with alterations in their probable infection sites. There was a change in the classifications in 31.1% of cases. The most affected age range was between 31 and 40 years old and men (68.2%) were infected more than women. Occupation was not associated with the disease in 89.9% of the cases. The foci presented with similar landscape, always with woods, even in the periurban areas (9.1%). / Estudar a ocorrência de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) nos municípios da região de São José do Rio Preto, entre 1998 e 2005. Descrever as variáveis das fichas de investigação. Reclassificar os casos de LTA notificados no período do estudo, segundo local provável de infecção. Analisar e caracterizar espacialmente as áreas de transmissão. Métodos: O estudo foi desenvolvido a partir das notificações de casos confirmados de LTA nos municípios da região de São José do Rio Preto. Variáveis estudadas: data da notificação, faixa etária, sexo, zona urbana ou rural, ocupação e local provável da infecção. Realizaram-se reinvestigação, reclassificação e visita aos locais prováveis de infecção dos casos com suspeita de autoctonia, os quais foram georreferenciados e fotografados. Resultados e conclusões: os casos indeterminados foram reduzidos de 27,2% para 7,8%. Os importados aumentaram de 50,0% para 70,8%. Os autóctones passaram de 22,8% para 21,4%, porém com alteração dos locais prováveis de infecção. Ocorreu alteração na classificação em 31,1% dos casos. A faixa etária mais acometida foi entre 31 e 40 anos (31,8%) e o sexo mais atingido foi o masculino (68,2%). A ocupação não teve relação com a doença em 89,9% dos casos. Os focos apresentaram paisagens semelhantes, sempre relacionadas à presença de matas, mesmo nos casos periurbanos (9,1%).

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T22:59:34Z No. of bitstreams: 1 cintia_x_mello_ipec_pesquisaclinicadi_0002_2011.pdf: 6418751 bytes, checksum: 25c0176616e7ab31ae6bd91f77c3fd69 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T22:59:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cintia_x_mello_ipec_pesquisaclinicadi_0002_2011.pdf: 6418751 bytes, checksum: 25c0176616e7ab31ae6bd91f77c3fd69 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa, causada por parasitas do gênero Leishmania, que apresenta características complexas em diferentes aspectos. O diagnóstico, sempre que possível, deve ser feito com base em evidências epidemiológicas, aspecto clínico e exames laboratoriais. Para pesquisa direta do parasito, são utilizados os procedimentos de escarificação e “imprint”, sendo a escarificação o método mais rápido, de menor custo e de fácil execução. Baseado nas características dos exames diretos para a confirmação dos casos de LTA, o Ministério da Saúde tem incentivado a implantação do procedimento de escarificação em todos os laboratórios centrais de saúde pública, sendo importantes tanto o conhecimento dos parâmetros de acurácia deste método quanto a padronização relacionada a forma de coleta e leitura, para que possa ser aplicado de forma uniformizada em todo o Brasil. Neste estudo, objetivamos avaliar a sensibilidade dos métodos diretos (“imprint”e escarificação), comparados com o teste padrão de referência (cultura). Além disso, buscamos estabelecer critérios de coleta e leitura com fins de uniformização do método para propor sua aplicação em diferentes regiões brasileiras. A população do estudo foi constituída de 110 pacientes com suspeita clínica de LTA que foram atendidos no Laboratório de Vigilância em Leishmanioses (VigiLeish/IPEC/Fiocruz) para avaliação clínica e coleta das amostras. Dentre os 110 pacientes analisados 40 foram confirmados com LTA. O “imprint” foi positivo em 28 pacientes conferindo sensibilidade de 70%, a escarificação realizada em borda externa foi positiva em 17 pacientes e em borda interna em 25 alcançando sensibilidade de 42,5% e 62,5% respectivamente. Além de mais sensível o material obtido da borda interna da lesão apresentou uma maior quantidade de células brancas e menos hemácias facilitando a leitura da lâmina. Os parâmetros de acurácia encontrados para os métodos diretos foram satisfatórios demonstrando que essas metodologias podem ser implantadas em todo o Brasil para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana. / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is an infectious disease caused by parasites of the genus Leishmania, which has complex characteristics in different aspects. The diagnosis, whenever possible, should be based on epidemiological evidence, clinical aspect and laboratory tests. Imprint and scraping procedures are used for direct detection of the parasite. Scraping is the quickest, low-cost and easy to conduct. Based on the characteristics of direct examination for the confirmation of ATL cases, the Brazilian Ministry of Health has encouraged the implementation of the scraping procedure in all Central public health laboratories. Thus the knowledge of the accuracy parameters of this procedure and the standardization of collection and reading methods are important for its application in a uniform manner throughout Brazil. In this study, we aimed to evaluate the sensitivity of direct methods (imprint and scraping), compared with the reference standard test (culture). Besides, we sought to establish collection and reading criteria with the purpose of standardizing the method to propose its application in different Brazilian regions. The study population comprised 110 patients with clinical suspicion of ATL who were treated at the Laboratory of Leishmaniasis Surveillance (VigiLeish/IPEC/Fiocruz) for clinical evaluation and sample collection. Among the 110 patients studied, 40 were confirmed with ATL. The imprint was positive in 28 patients granting sensitivity of 70%, scraping conducted in the outer edge was positive in 17 patients and in the inner edge in 25, reaching sensitivity of 42.5% and 62.5% respectively. The material obtained from the inner edge of the lesion was more sensitive and presented a larger amount of white cells and lesser red cells, favoring slide reading. Accuracy parameters found for the direct methods were satisfactory showing that they may be implemented in all Brazilian regions for the diagnosis of American tegumentary leishmaniasis.