Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-03T18:25:59Z No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-09T19:00:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T19:00:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) Previous issue date: 2018-07-03 / Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF). / Introdução: Os insetos da subfamília Phebotominae são vetores de vários protozoários do gênero Leishmania que produzem doenças como a leishmaniose visceral (LV) e a leishmaniose tegumentar americana (LTA). A fauna de flebotomíneos do Distrito Federal ainda é pouco conhecida com apenas 35 espécies registradas e as pesquisas sobre infecção natural destes vetores ainda é escassa. A Região Administrativa (RA) da Fercal é uma área situada entre a Bacia do Rio Maranhão e às margens da Área de Proteção Ambiental – APA Cafuringa, com grande potencial eco-turístico que apresenta uma expansão urbana desordenada, sendo considerada área de transmissão intensa para leishmaniose visceral humana e com elevada positividade canina para Leishmania spp. Objetivo e Metodologia: O presente estudo teve como objetivo identificar as espécies de flebotomíneos, assim como sua relação com as variáveis climáticas e estimar a infecção natural do gênero Leishmania nas espécies capturadas. As capturas foram realizadas na RA da Fercal/DF em 15 Unidades Domiciliares (UD) por meio de armadilhas CDC instaladas no intradomicílio e peridomicílio e armadilha de Shannon na área de mata. A análises de infecção natural foram realizada nas espécies Lutzomyia longipalpis e Nyssomyia whitmani por meio de PCR. Resultados: Foram identificadas um total de 27 espécies com 8 registros novos para o DF, dentre 1883 espécimes capturadas e Ny. whitmani foi a espécie predominante. Verificou-se diferença significativa entre a ocorrência de flebotomíneos capturados em área de mata e área urbana, com maior ocorrência nos domicílios (p<0,0001). Com relação a pluviosidade, temperatura e umidade não foram observadas associação com a maior ou menor abundância de flebotomíneos e a avaliação da infecção natural de 194 pools de flebotomíneos não apresentou resultados positivos. Conclusões: Atualiza-se para 43 as espécies de flebotomíneos registradas no Distrito Federal. O período de maior coleta para flebotomíneos ocorreu em agosto a setembro de 2014 e as espécies Ny. whitmani e Lu. longipalpis foram mais abundantes no peridomicílio. A avaliação da infecção natural apresentou resultados negativos para Leishmania sp. Essas informações são de fundamental importância para as ações de vigilância e controle da LV e LTA, no DF. / Introduction: Insects of the subfamily Phebotominae are vectors of several protozoa of the genus Leishmania that produce diseases such as visceral leishmaniasis (LV) and American cutaneous leishmaniasis (ACL). The phlebotomine fauna of the Federal District is still little known with only 35 species registered and the research on natural infection of these vectors is still scarce. The Fercal Administrative Region (RA) is an area located between the Maranhão River Basin and the APA Cafuringa Environmental Protection Area, with great potential for eco-tourism that presents a disorderly urban expansion, being considered an intense transmission area for human visceral leishmaniasis and with high canine positivity for Leishmania spp. Objective and Methodology: The objective of this study was to identify sandfly species, as well as their relationship with climatic variables and to estimate the natural infection of the genus Leishmania in the captured species. The catches were taken at RA of Fercal / DF in 15 Domiciliary Units (UD) by means of CDC traps installed in the intradomicile and peridomicile and trap of Shannon in the forest area. The analyzes of natural infection were carried out in the species Lutzomyia longipalpis and Nyssomyia whitmani by means of PCR. Results: A total of 27 species with 8 new records were identified for DF, among 1883 specimens captured and Ny. whitmani was the predominant species. There was a significant difference between the occurrence of sand flies captured in forest and urban areas, with a higher occurrence in the households (p <0.0001). Regarding rainfall, temperature and humidity, no association was observed with greater or less abundance of sand flies, and the evaluation of the natural infection of 194 sand flies did not present positive results. Conclusions: Up to 43 species of sand flies are recorded in the Federal District. The period of greatest collection for sandflies occurred in August to September 2014 and the species Ny. whitmani and Lu. longipalpis were more abundant in the peridomicile. The evaluation of the natural infection presented negative results for Leishmania sp. This information is of fundamental importance for the actions of surveillance and control of LV and LTA in the DF.

Introdução. Leishmanioses são zoonoses que têm como agentes etiológicos tripanossomatídeos de várias espécies do gênero Leishmania. Elas são transmitidas aos hospedeiros vertebrados por Phlebotominae (Diptera, Psychodidae). As infecções por Leishmania podem se manifestar nas formas visceral (LV) e tegumentar (LT); ambas são sérios problemas de saúde pública no Brasil, que se encontra entre os países do mundo com as mais altas incidências. Dentre as atividades de controle das leishmanioses, as da vigilância entomológica estão voltadas para a redução da taxa de contato dos vetores com os hospedeiros vertebrados e identificar áreas de risco de transmissão. Neste sentido, a detecção de fêmeas de flebotomíneos naturalmente infectadas por Leishmania constitui-se numa das estratégias. Essa detecção pode ser realizada apenas por meio de análises moleculares ou estas serem precedidas de dissecção das fêmeas para observação da presença de flagelados em seus tratos digestórios. A observação dessas formas no trato digestório pode indicar a capacidade do parasita em resistir aos processos de sua eliminação, dependendo do local onde se encontra, e a que subgênero (Leishmania ou Viannia) pertence. No Brasil, a LV tem sido associada a espécie Leishmania (Leishmania) infantum. A LT tem como agentes espécies de ambos os subgêneros. O presente projeto teve como objetivo desenvolver um manual no qual são descritos os processos para se realizar a investigação da infecção natural por flagelados em fêmeas de flebotomíneos. Materiais e Métodos. Para a elaboração do manual foram examinadas fêmeas selvagens e outras provenientes de colônias alimentadas em hamsters infectados experimentalmente por Leishmania braziliensis e, posteriormente, dissecadas e examinadas em microscópio. Os parasitas utilizados nos experimentos de infecção em laboratório são oriundos de cultivos mantidos em laboratório. As espécies examinadas foram Lutzomyia longipalpis, Nyssomyia neivai e Pintomyia fischeri. Foram descritos os cuidados necessários à preservação dos espécimes em campo e transporte ao laboratório, de modo a tornar viável a dissecção e exame dos espécimes. As capturas realizadas em campo para o estudo permitiram tanto a obtenção dos espécimes como a elaboração do item que trata dos cuidados com as amostras. A documentação das múltiplas etapas de dissecção e exame dos espécimes necessários para o estudo foram realizados por meio de câmera fotográfica acoplada a microscópio óptico. Resultados. São apresentados na forma de manual. Neste são descritos e ilustrados aspectos das técnicas de captura, cuidados com os insetos no campo e laboratório, transporte de amostras vivas, o processo de dissecção da fêmea e a observação de seu tubo digestório para a investigação da presença de flagelados, e de estruturas de sua genitália, para a identificação da espécie de flebotomíneo. Apresenta-se ainda um protocolo a ser utilizado na preservação dos espécimes que forem encontrados infectados para posterior análise molecular e identificação específica do parasita. Conclusões. Com os tópicos apresentados no manual, espera-se contribuir com o programa vigilância epidemiológica das leishmanioses, em atividades da vigilância entomológica voltadas para a identificação de áreas de risco de transmissão dessas doenças e obter evidências que apontem para o potencial de espécies que possam estar atuando como vetores permissíveis de Leishmania spp. / Introduction. Leishmaniases are zoonoses having trypanosomatids of several species of the genus Leishmania as etiological agents, transmitted to vertebrate hosts by the bite of females of Phlebotominae (Diptera, Psychodidae). These parasitoses can manifest in visceral (VL) and tegumentary (TL) forms, both being serious public health problems in Brazil, which is among the countries of the world with the highest incidence rates. Among the activities of control of leishmaniases, those of entomological surveillance are aimed at reducing the contact rate of the vectors with the vertebrate hosts and also to identify areas in risk of the disease transmission. In this sense, the detection of sand fly females naturally infected with Leishmania is one of the strategies. This detection can be carried out exclusively by means of molecular analyzes or these being preceded by dissection of the females to observe the presence of flagellates in their guts. The observation of flagellate forms in the gut indicates the ability of the parasites to resist the processes of their elimination, and also to identify the subgenus (Leishmania or Viannia) to which the parasites belong. In Brazil, the VL infection is attributed to Leishmania (Leishmania) infantum, while in TL, there are various agents belonging to both subgenera. Objective. To develop a manual in which the processes for the investigation of the natural infection by flagellates in sand fly females are described and illustrated. Material and Method. For the construction of the manual, observation of infection by flagellates was made through the dissection of wild or laboratory females of Lutzomyia longipalpis, Nyssomyia neivai and Pintomyia fischeri, experimentally infected with Leishmania braziliensis. The description of care in the preservation of the specimens in the field and in their transport to the laboratory, in order to make feasible the dissection, was made based on the collection undertaken in this project. The documentation was made by means of a photographic camera coupled to an optical microscope. Result. A manual is presented describing and illustrating aspects of collection techniques, insect care in the field and laboratory, transport of the live samples, the dissection process and observation, respectively, of the female gut for the investigation of the flagellate presence and genitalia structure for the identification of the phlebotomine species. Protocol is also presented to be used in the preservation of the specimens found infected for subsequent molecular analysis and the specific identification of the parasite. Conclusions. With the topics presented in this manual, we intend to contribute to the program of epidemiological surveillance of leishmaniases, in activities of entomological surveillance, in the identification of areas of risk of transmission of these diseases, as well as to obtain evidence about the potential of species that may act as permissible vectors of Leishmania spp.

Propôe-se classificação dos Phlebotominae, com ênfase para os da América, baseada em cladograma obtido pela análise de 101 caracteres. Os estudos foram desenvolvidos a partir do exame detalhado da morfologia dos adultos das espéciés-tipos dos gêneros e subgêneros americanos e das espécies denominativas ou representativas de seus grupos e séries de espécies. Quando possível, os estudos foram complementados pela observação de alguns caracteres em espécimens adicionais de cada grupo e informações bibliográficas. Incluiram-se, ainda, no estudo as espécies-tipos dos gêneros do Velho Mundo, Phlebotomus e Sergentomyia e, espécies dos gêneros Bruchomyia e Nemopalpus de Bruchomyiinae (grupo externo). Apresenta-se, segundo a classificação proposta até o nivel de série, o elenco das espécies e subespécies americanas, com a distribuiçâo geográfica. Descrevem-se os táxons novos: Blancasmyia, gen.n.; B1.(Blancasmyia), subgen.n.; B1. (Higonemyia), subgen.n.; Psychodopygus (Martinsimyia), subgen.n.; Ps.(Rodentophagus), subgen.n.; Sergentomyia (Coquillettimyia), subgen.n.;S.(Falcaomyia), subgen.n. e S.(Flochimyia), subgen.n. Acrescentam-se chaves para a identificação das categorias coletivas. / A classification of the American Phlebotominae is proposed based on phylogenetic analysis. 101 characters of the winged forms of the type-species of genera, subgenera, groups and series were analysed. When type-species were not available, other species of the taxon were studied. The type-species of the Old World genera Phlebotomus and Sergentomyia and, some species of Bruchomyiinae (out group) were also analised. New taxa described: Blancasmyia, gen. n.; B1. (Blancasmyia), subgen.n.; B1.(Higonemyia), subgen.n.; Psychodopygus (Martinsimyia), subgen.n.; Ps. (Rodentophagus) subgen.n.; Sergentomyia (CoquillettimyiaJ subgen.n.; S.(FalcaomyiaJ, subgen.n. and S. (FlochimyiaJ, subgen.n. A checklist of the taxa and keys to the collective categories are added.

Psathyromyia shannoni por um longo tempo foi considerada a espécie de flebotomíneo com a mais ampla distribuição nas Américas, desde os Estados Unidos até a Argentina. Contribuíram para isto a inclusão em sua sinonímia de quatro espécies: Phlebotomus limai, Ph. bigeniculatus, Ph. microcephalus e Ph. pifanoi. Em uma primeira fase deste estudo um grupo de espécies muito próximas à Pa. shannoni foi identificado e denominado de Complexo Shannoni e foi visto que Pa. limai e Pa. bigeniculata eram espécies válidas, Ph. pestanai era sinônimo-júnior de Pa. limai e havia ainda a necessidade de descrever Pa. ribeirensis. No entanto, questões sobre a validade dos demais sinônimos foram levantadas e ao conduzir o estudo, surgiram outras questões, como a delimitação do subgênero, composição da série Lanei e série Shannoni e a afinidade entre as suas espécies, que precisavam ser esclarecidas. Objetivos. Revisar a taxonomia das espécies do subgênero Psathyromyia e realizar uma análise filogenética. Material e métodos. Exemplares de todas as espécies do subgênero Psathyromyia depositados em coleções entomológicas foram examinados para obtenção de dados morfológicos e morfométricos para uma revisão taxonômica e análise filogenética. Dados foram levantados da literatura e dos espécimes depositados nas coleções para a construção de mapas sobre a distribuição geográfica das espécies objeto de estudo. Resultados e Conclusões. Com a revisão taxonômica Pa. baratai foi descrita e sua distribuição geográfica foi apresentada. Phlebotomus microcephalus foi excluída da sinonímia de Pa. shannoni e inserida como sinônimo-júnior de Pa. bigeniculata. Psathyromyia pifanoi também foi retirada da sinonímia de Pa. shannoni, teve sua fêmea descrita e Lu. cuzquena foi incluída como seu sinônimo-júnior. A distribuição geográfica de Pa. shannoni foi redefinida com a retirada das quatro espécies de sua sinonímia, o Complexo Shannoni foi ampliado para 11 espécies, Pa. pifanoi foi retirada deste e considerada isolada no gênero Psathyromyia. A série Lanei (3 spp.) e a série Shannoni foram mantidas em Psathyromyia s. str., no entanto, a série Shannoni passou a ser constituída somente das espécies do complexo (11 spp.), e as demais foram inseridas em outras duas séries propostas: Campbelli (2 spp.) e Volcanensis (4 spp.). Lutzomyia cultellata, Lu. tanyopsis, Lu. ignacioi e Lu. ponsi foram excluídas do gênero e subgênero Psathyromyia e transferidas para o gênero Lutzomyia permanecendo isoladas. Por fim, a análise filogenética demonstrou nas quatro árvores obtidas e uma de consenso estrito que as espécies das séries: Lanei, Campbelli e Shannoni são monofiléticas e a série Volcanensis parafilética. A série Lanei e Campbelli ficaram externas ao clado Psathyromyia s. str. Psathyromyia maya foi posicionada como a espécie mais basal do clado que se refere à subtribo Psychodopygina. Lutzomyia ignacioi, Lu. ponsi e Lu. tanyopsis foram posicionados na subtribo Lutzomyiina e gênero Lutzomyia, bem como Lu. cultellata, agrupada no subgênero Tricholateralis / Psathyromyia shannoni was for a long time considered the sand fly species of the widest distribution in the Americas, from the United States to Argentina. Contributing to this was the inclusion as synonyms of four species: Phlebotomus limai, Ph. bigeniculatus, Ph. microcephalus and Ph. pifanoi. In the preliminary phase of these studies, a group of species very close to Pa. shannoni was identified and denominated the Shannoni Complex and it was seen that Pa. limai and Pa. bigeniculata were valid species, Ph. pestanai was a junior synonym of Pa. limai and there was still a need to describe Pa. ribeirensis. However, questions about the validity of these synonyms have been raised and studies have been undertaken to investigate this issue. As we conducted the study, other questions such as the delimitation of the subgenus, composition of Lanei and Shannoni series\' and the affinity between its species arose that called for clarification. Objectives. To review the subgenus Psathyromyia and perform a phylogenetic analysis. Material and methods. Specimens of all species of the subgenus of Psathyromyia deposited in entomological collections were examined to obtain morphological and morphometric data for taxonomic revision and phylogenetic analysis. Data were collected from the literature and from the specimens deposited in the collections to make maps of the geographical distribution of the species object of study. Results and Conclusions. With the taxonomic revision, Pa. baratai was described and its geographical distribution was presented. Phlebotomus microcephalus was excluded from synonymy with Pa. shannoni and inserted as junior synonym of Pa. bigeniculata. Psathyromyia pifanoi was revalidated, its female was described and Lu. cuzquena was included as its junior synonym. The geographical distribution of Pa. shannoni was redefined with the withdrawal of the four species from their previous synonymy, the Shannoni Complex was expanded to include 11 species, Pa. pifanoi was removed from the Complex and considered isolated in the genus Psathyromyia. The Lanei (3 spp.) and Shannoni series were maintained in the subgenus Psathyromyia, however, the Shannoni series was reduced to the species of the Shannoni Complex (11 spp.), and the other species that had belonged to this series were inserted in two other proposed series: Campbelli (2 spp.) and Volcanensis (4 spp.). Lutzomyia cultellata, Lu. tanyopsis, Lu. ignacioi and Lu. ponsi were excluded from the genus Psathyromyia and transferred as isolated to the Lutzomyia genus. Finally, the phylogenetic analysis resulted in four trees and one of strict consensus in which the species of the Lanei, Campbelli and Shannoni series are monophyletic and the Volcanensis series is paraphyletic. The Lanei and Campbelli series remained outside the Psathyromyia s. str. clade. Psathyromyia maya was positioned as the basal species of the clade that related to the subtribe Psychodopygina. Lutzomyia ignacioi, Lu. ponsi and Lu. tanyopsis were placed in the Lutzomyiina subtribe and Lutzomyia genus, as well as Lu. cultellata, grouped in the subgenus Tricholateralis

Propôe-se classificação dos Phlebotominae, com ênfase para os da América, baseada em cladograma obtido pela análise de 101 caracteres. Os estudos foram desenvolvidos a partir do exame detalhado da morfologia dos adultos das espéciés-tipos dos gêneros e subgêneros americanos e das espécies denominativas ou representativas de seus grupos e séries de espécies. Quando possível, os estudos foram complementados pela observação de alguns caracteres em espécimens adicionais de cada grupo e informações bibliográficas. Incluiram-se, ainda, no estudo as espécies-tipos dos gêneros do Velho Mundo, Phlebotomus e Sergentomyia e, espécies dos gêneros Bruchomyia e Nemopalpus de Bruchomyiinae (grupo externo). Apresenta-se, segundo a classificação proposta até o nivel de série, o elenco das espécies e subespécies americanas, com a distribuiçâo geográfica. Descrevem-se os táxons novos: Blancasmyia, gen.n.; B1.(Blancasmyia), subgen.n.; B1. (Higonemyia), subgen.n.; Psychodopygus (Martinsimyia), subgen.n.; Ps.(Rodentophagus), subgen.n.; Sergentomyia (Coquillettimyia), subgen.n.;S.(Falcaomyia), subgen.n. e S.(Flochimyia), subgen.n. Acrescentam-se chaves para a identificação das categorias coletivas. / A classification of the American Phlebotominae is proposed based on phylogenetic analysis. 101 characters of the winged forms of the type-species of genera, subgenera, groups and series were analysed. When type-species were not available, other species of the taxon were studied. The type-species of the Old World genera Phlebotomus and Sergentomyia and, some species of Bruchomyiinae (out group) were also analised. New taxa described: Blancasmyia, gen. n.; B1. (Blancasmyia), subgen.n.; B1.(Higonemyia), subgen.n.; Psychodopygus (Martinsimyia), subgen.n.; Ps. (Rodentophagus) subgen.n.; Sergentomyia (CoquillettimyiaJ subgen.n.; S.(FalcaomyiaJ, subgen.n. and S. (FlochimyiaJ, subgen.n. A checklist of the taxa and keys to the collective categories are added.

Introdução. Leishmanioses são zoonoses que têm como agentes etiológicos tripanossomatídeos de várias espécies do gênero Leishmania. Elas são transmitidas aos hospedeiros vertebrados por Phlebotominae (Diptera, Psychodidae). As infecções por Leishmania podem se manifestar nas formas visceral (LV) e tegumentar (LT); ambas são sérios problemas de saúde pública no Brasil, que se encontra entre os países do mundo com as mais altas incidências. Dentre as atividades de controle das leishmanioses, as da vigilância entomológica estão voltadas para a redução da taxa de contato dos vetores com os hospedeiros vertebrados e identificar áreas de risco de transmissão. Neste sentido, a detecção de fêmeas de flebotomíneos naturalmente infectadas por Leishmania constitui-se numa das estratégias. Essa detecção pode ser realizada apenas por meio de análises moleculares ou estas serem precedidas de dissecção das fêmeas para observação da presença de flagelados em seus tratos digestórios. A observação dessas formas no trato digestório pode indicar a capacidade do parasita em resistir aos processos de sua eliminação, dependendo do local onde se encontra, e a que subgênero (Leishmania ou Viannia) pertence. No Brasil, a LV tem sido associada a espécie Leishmania (Leishmania) infantum. A LT tem como agentes espécies de ambos os subgêneros. O presente projeto teve como objetivo desenvolver um manual no qual são descritos os processos para se realizar a investigação da infecção natural por flagelados em fêmeas de flebotomíneos. Materiais e Métodos. Para a elaboração do manual foram examinadas fêmeas selvagens e outras provenientes de colônias alimentadas em hamsters infectados experimentalmente por Leishmania braziliensis e, posteriormente, dissecadas e examinadas em microscópio. Os parasitas utilizados nos experimentos de infecção em laboratório são oriundos de cultivos mantidos em laboratório. As espécies examinadas foram Lutzomyia longipalpis, Nyssomyia neivai e Pintomyia fischeri. Foram descritos os cuidados necessários à preservação dos espécimes em campo e transporte ao laboratório, de modo a tornar viável a dissecção e exame dos espécimes. As capturas realizadas em campo para o estudo permitiram tanto a obtenção dos espécimes como a elaboração do item que trata dos cuidados com as amostras. A documentação das múltiplas etapas de dissecção e exame dos espécimes necessários para o estudo foram realizados por meio de câmera fotográfica acoplada a microscópio óptico. Resultados. São apresentados na forma de manual. Neste são descritos e ilustrados aspectos das técnicas de captura, cuidados com os insetos no campo e laboratório, transporte de amostras vivas, o processo de dissecção da fêmea e a observação de seu tubo digestório para a investigação da presença de flagelados, e de estruturas de sua genitália, para a identificação da espécie de flebotomíneo. Apresenta-se ainda um protocolo a ser utilizado na preservação dos espécimes que forem encontrados infectados para posterior análise molecular e identificação específica do parasita. Conclusões. Com os tópicos apresentados no manual, espera-se contribuir com o programa vigilância epidemiológica das leishmanioses, em atividades da vigilância entomológica voltadas para a identificação de áreas de risco de transmissão dessas doenças e obter evidências que apontem para o potencial de espécies que possam estar atuando como vetores permissíveis de Leishmania spp. / Introduction. Leishmaniases are zoonoses having trypanosomatids of several species of the genus Leishmania as etiological agents, transmitted to vertebrate hosts by the bite of females of Phlebotominae (Diptera, Psychodidae). These parasitoses can manifest in visceral (VL) and tegumentary (TL) forms, both being serious public health problems in Brazil, which is among the countries of the world with the highest incidence rates. Among the activities of control of leishmaniases, those of entomological surveillance are aimed at reducing the contact rate of the vectors with the vertebrate hosts and also to identify areas in risk of the disease transmission. In this sense, the detection of sand fly females naturally infected with Leishmania is one of the strategies. This detection can be carried out exclusively by means of molecular analyzes or these being preceded by dissection of the females to observe the presence of flagellates in their guts. The observation of flagellate forms in the gut indicates the ability of the parasites to resist the processes of their elimination, and also to identify the subgenus (Leishmania or Viannia) to which the parasites belong. In Brazil, the VL infection is attributed to Leishmania (Leishmania) infantum, while in TL, there are various agents belonging to both subgenera. Objective. To develop a manual in which the processes for the investigation of the natural infection by flagellates in sand fly females are described and illustrated. Material and Method. For the construction of the manual, observation of infection by flagellates was made through the dissection of wild or laboratory females of Lutzomyia longipalpis, Nyssomyia neivai and Pintomyia fischeri, experimentally infected with Leishmania braziliensis. The description of care in the preservation of the specimens in the field and in their transport to the laboratory, in order to make feasible the dissection, was made based on the collection undertaken in this project. The documentation was made by means of a photographic camera coupled to an optical microscope. Result. A manual is presented describing and illustrating aspects of collection techniques, insect care in the field and laboratory, transport of the live samples, the dissection process and observation, respectively, of the female gut for the investigation of the flagellate presence and genitalia structure for the identification of the phlebotomine species. Protocol is also presented to be used in the preservation of the specimens found infected for subsequent molecular analysis and the specific identification of the parasite. Conclusions. With the topics presented in this manual, we intend to contribute to the program of epidemiological surveillance of leishmaniases, in activities of entomological surveillance, in the identification of areas of risk of transmission of these diseases, as well as to obtain evidence about the potential of species that may act as permissible vectors of Leishmania spp.

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-04T19:56:17Z No. of bitstreams: 2 Tese_Ronildo Baiatone Alencar.pdf: 23337860 bytes, checksum: f7042dfce6cb0d573fe028b81bd1c161 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T19:56:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Ronildo Baiatone Alencar.pdf: 23337860 bytes, checksum: f7042dfce6cb0d573fe028b81bd1c161 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-03-22 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The classification of the subfamily Phlebotominae has been going through several changes since the early twentieth century, and even with several studies employing old and new tools, including molecular markers, doubts still remain about the relationship and differences between their representantives. These differences reflect the lack of knowledge of the true evolutionary history of the sandflies. In parallel, the old and current classifications consider mostly only adult morphological data. However, is consensus among the authors on the importance of morphological data from all life stages. These conflicts demonstrate the need for new studies to provide hypotheses that can contribute to the phylogeny of this subfamily. In this respect, Lutzomyia derelicta represents a singular sandfly because the adult forms share characteristics common to species of the New and Old World. Thus, this study aimed to provide a phylogenetic analysis with the primary purpose of determining the phylogenetic position L. derelicta in Phlebotominae, using morphological and molecular data from immature (D2 region ribosomal DNA). In the morphological analysis were analyzed 40 taxa, two from the outgroup, and 47 external characters of eggs, larvae and pupae were numerically coded as binary and Multi-State, unordered and had equal weight. The array of characters was analyzed by the programs and Winclada NINTH, using heuristic search, TBR algorithm (tree- bisection-reconnection) with 1000 replicates and ACCTRAN optimization. Phylogenetic analysis with molecular markers was performed for 22 taxa, including outgroups, and inferred by maximum likelihood (ML) using the program Treefinder, with 1000 replicates under the evolutionary model GTR + I + G determined by the software jModelTest. As a result of the morphological phylogenetic analysis, a strict consensus tree was presented with CI = 0.5 and RI = 0.75. In this analysis, the monophyletic group formed by L. derelicta, L. maruaga and L. samueli appears in a polytomy with species of Phlebotomus and another monophyletic clade formed by other species of Lutzomyia and Sergentomyia. This result suggests that L. derelicta do not belong to the subtribe Sergentomyiina as proposed by Galati (1995). These results suggest that the morphological characters of immatures stages also represent important tools for inferring phylogenetic hypotheses. Since the molecular analysis, genetic distances indicated greater similarity between L. derelicta and other species of Lutzomyia and Sergentomyia than to species of the genus Phlebotomus. Molecular phylogeny indicated that L. derelicta, L. maruaga and Edentomyia piauiensis formed a monophyletic group within the same clade where were grouped the Old World species, including species of Sergentomyia. This finding supports the hypothesis of Freitas & Barrett (1999) that L. derelicta belong to a monophyletic group, whose ancestral is vicariant of the ancestor of a group of Old World sandflies. / A classificação da subfamília Phlebotominae tem sofrido inúmeras alterações desde o início do século XX, e mesmo com vários estudos empregando antigas e novas ferramentas, incluindo marcadores moleculares, dúvidas e divergências ainda permanecem sobre o relacionamento entre os seus representantes. Estas divergências refletem a falta de conhecimento da verdadeira história evolutiva dos flebotomíneos. Paralelamente, as antigas e as atuais classificações consideram na maioria das vezes apenas dados morfológicos de adultos. Entretanto, é consenso entre os autores a importância de dados morfológicos de todos os estágios de vida. Estes conflitos demonstram a necessidade de novos estudos para fornecer hipóteses que possam contribuir para a filogenia desta subfamília. Nesse sentido, Lutzomyia derelicta representa um flebotomíneo singular, pois na forma adulta são encontradas características comuns as espécies do Novo e Velho Mundo. Desse modo, objetivou neste estudo apresentar uma análise filogenética com a principal finalidade de determinar a posição filogenética de L. derelicta em Phlebotominae, utilizando caracteres morfológicos de imaturos e dados moleculares (região D2 do DNA ribossomal). Na análise morfológica foram analisados 40 táxons, sendo dois do grupo externo, e 47 caracteres externos de ovos, larvas e pupas que foram codificados numericamente como binários e multiestados, não ordenados e tiveram o mesmo peso. A matriz de caracteres foi analisada pelos programas Winclada e NONA, utilizando busca heurística, algoritmo TBR (tree-bisection-reconnection), com 1000 réplicas e otimização ACCTRAN. A análise filogenética com marcador molecular foi realizada para 22 táxons, incluindo o grupo externo; e inferida por máxima verossimilhança (MV) utilizando o programa Treefinder, com 1000 réplicas, sob o modelo evolutivo GTR+G+I determinado pelo programa jModelTest. Como resultado da análise filogenética morfológica uma árvore de consenso estrito foi apresentada com IC=0,5 e IR=0,75. Nesta análise, o grupo monofilético formado por L. derelicta, L. maruaga e L. samueli aparece em politomia com as espécies de Phlebotomus e outro clado monofilético formado pelas demais espécies de Lutzomyia e Sergentomyia. Neste resultado, L. derelicta não pertence à subtribo Sergentomyiina como proposto por Galati (1995). Estes resultados sugerem que os caracteres morfológicos dos imaturos também representam importantes ferramentas para inferir hipóteses filogenéticas. Considerando as análises moleculares, as distâncias genéticas sugeriram maior semelhança entre L. derelicta e as demais espécies de Lutzomyia e de Sergentomyia do que com as espécies do gênero Phlebotomus. Na análise da filogenia molecular, as espécies L. derelicta, L. maruaga e Edentomyia piauiensis formaram um grupo monofilético inserido no mesmo clado onde foram agrupadas as espécies do Velho Mundo, incluindo a espécie de Sergentomyia. Este resultado apóia a hipótese de Freitas & Barrett (1999) de que L. derelicta pertence a grupo monofilético, cujo ancestral é vicariante do ancestral de um grupo de flebotomíneos do Velho Mundo.

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-05T14:27:51Z No. of bitstreams: 2 Tese_Veracilda Ribeiro Alves.pdf: 13363682 bytes, checksum: 3a30c29032347744fc819e486c47fc5d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-05T14:27:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Veracilda Ribeiro Alves.pdf: 13363682 bytes, checksum: 3a30c29032347744fc819e486c47fc5d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-02-13 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Psychodopygus Mangabeira, 1941 belongs to the Phlebotominae (Diptera, Psychodidae) and is comprised of 35 species, which are mainly Neotropical, occurring from Mexico to the south of Brazil with larger number of species occurring mainly in the Amazon region. The similarity between the females of various species hampers the correct identification between them, although some studies of allocation of individuals of a particular sex to a given species are already available. In order to revise the species of Psychodopygus and present a hypothesis for the internal relationships of the genus, a phylogenetic analysis based on morphological characters of adults of 33 species was performed. A total of 54 morphological characters of head, thorax and both male and female terminalia were used. The phylogeny was estimated under parsimony criteria and all characters were analyzed using equal weights and polarized a posteriori based on rooting with outgroups. The analysis yielded a most-parsimonious tree (L = 112 steps, CI = 78, RI = 95), which resulted in four species forming a non-monophiletic group and four clades which were named with the names of the series of species proposed by previous authors. The monophyly of the genus is supported by seven synapomorphies. Psychodopygus was comprised of (Ps. matosi (Ps. arthuri (Ps. lloydi (Ps. bispinosus ((davisi clade, panamensis clade) (guyanensis clade (Ps. lainsoni (squamiventris clade))))))). Ps. matosi, Ps. arthuri, Ps. lloydi e Ps.bispinosus as more basal species of the genus and four clades: davisi (Ps. amazonensis (Ps. claustrei, Ps. davisi)), panamensis (Ps. panamensis ((Ps. carrerai, Ps. fairchildi, Ps. thula) (Ps. llanosmartinsi, Ps. recurvus) Ps. paraensis, Ps. joliveti, Ps. yucumensis, Ps. nocticolus, Ps. ayrozai (Ps. hirsutus, Ps. nicaraguensis))), guyanensis (Ps. francoisleponti, Ps. corossoniensis, Ps. geniculatus) and squamiventris (Ps. leonidasdeanei (Ps. killicki (Ps. complexus, Ps. wellcomei) ((Ps. squamiventris maripaensis, Ps. squam. squamiventris) Ps. chagasi (Ps. bernalei, Ps. fairtigi))))). The clade davisi is sister-group of the clade panamensis, and the clade guyanensis appears as the sister group of Ps. lainsoni + clade squamiventris. The branch comprised of Ps. lainsoni + clade squamiventris share eight sinapomorphies, while squamiventris species form a clade well supported by seven sinapomorphies. Two synonymies were proposed: Ps. douradoi and Ps. fairtigi, Ps. parimaensis and Ps. davisi and two nomina dubia, Ps. guyanensis and Ps. fairchildi. Key to species identification and maps of geographic records were provided. / Psychodopygus Mangabeira, 1941 pertence à Phlebotominae (Diptera, Psychodidae) e é representado por 35 espécies essencialmente neotropicais, ocorrendo desde o México até o sul do Brasil e com maior número de espécies ocorrendo principalmente na Amazônia. A correta identificação das espécies em alguns casos é prejudicada pela similaridade existente entre as fêmeas de diversas espécies. Com o objetivo de revisar as espécies de Psychodopygus e apresentar uma hipótese para as relações internas do gênero, foi realizada uma análise filogenética com base em caracteres morfológicos de adultos de 33 espécies. Um total de 54 caracteres da cabeça, tórax e terminálias de machos e fêmeas foram utilizados. A filogenia foi estimada por meio da análise de parcimônia, sendo todos os caracteres tratados com pesos iguais e polarizados a posteriori com base no enraizamento com grupo externo. Como resultado foi encontrado uma árvore mais parcimoniosa (L = 112, IC = 78, IR = 95), que resultou em quatro espécies não formando um grupo monofilético e quatro clados, os quais foram nominados com os nomes das séries de espécies propostas por autores anteriores. A monofilia das espécies do gênero é sustentada por sete sinapomorfias. Psychodopygus ficou constituído de (Ps. matosi (Ps. arthuri (Ps. lloydi (Ps. bispinosus ((clado davisi, clado panamensis)(clado guyanensis (Ps. lainsoni (clado squamiventris))))))). Ps. matosi, Ps. arthuri, Ps. lloydi e Ps.bispinosus ficaram como espécies mais basais do gênero e quatro clados: davisi (Ps. amazonensis (Ps. claustrei, Ps. davisi)), panamensis (Ps. panamensis ((Ps. llanosmartinsi, Ps. recurvus) Ps. ayrozai, Ps. joliveti (Ps. carrerai, Ps. thula) (Ps. hirsutus, Ps. nicaraguensis) Ps. nocticolus, Ps. paraensis, Ps. yucumensis))), guyanensis (Ps. francoisleponti, Ps. corossoniensis, Ps. geniculatus) e squamiventris (Ps. leonidasdeanei (Ps. killicki (Ps. complexus, Ps. wellcomei) ((Ps. bernalei, Ps. fairtigi) Ps. chagasi (Ps. squamiventris maripaensis, Ps. squam. squamiventris)))). O clado davisi é grupo-irmão do clado panamensis, e o clado guyanensis grupo-irmão de Psychodopygus lainsoni + clado squamiventris. O ramo constituído por Ps. lainsoni + clado squamiventris compartilha oito sinapomorfias, enquanto que as espécies de squamiventris formam um clado bem suportado por sete sinapomorfias. Duas sinonímias foram propostas para as espécies Ps. douradoi e Ps. fairtigi, Ps. parimaensis e Ps. davisi, além de dois nomina dubia, Ps. guyanensis e Ps. fairchildi. Também foi fornecida uma chave de identificação para as espécies e mapas de registros geográficos.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-10-18T14:25:32Z No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-11-24T15:00:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T15:00:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Phlebotominae (Dipetra: Psychodidae) é uma subfamília de insetos de grande importância em Saúde Pública por serem transmissores de espécies de Leishmania. O subgênero Lutzomyia merece uma atenção especial por conter a principal espécie vetora de Leishmania infantum, causadora de Leishmaniose Visceral nas Américas: Lutzomyia longipalpis. Esse subgênero possui um grupo de espécies crípticas que não podem ser diferenciadas por morfologia. No entanto, a identificação correta dessas espécies tem relevantes implicações epidemiológicas. Logo, a busca de mais caracteres taxonômicos e métodos para identificação torna-se fundamental e, nesse sentido, a morfometria geométrica de asas poderia auxiliar como uma técnica importante. O objetivo do presente estudo foi analisar as variações de forma e tamanho de asas das espécies do subgênero Lutzomyia que ocorrem no Brasil e avaliar se essas análises poderiam ser úteis para a separação dessas espécies. Foram analisadas asas de 18 espécies de flebotomíneos depositadas na Coleção da Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo e na Coleção do Centro de Pesquisas René Rachou, FIOCRUZ, Minas Gerais, pertencentes ao subgênero Lutzomyia. Outros gêneros e subgêneros foram utilizados como grupo externo. As asas foram fotografadas e seis marcos anatômicos foram digitalizados para obtenção das coordenadas cartesianas. Por meio da Análise Generalizada de Procrustes foi possível obter as variáveis de tamanho e forma. Análises de Componentes Principais, de Funções Discriminantes e de Análise de Variância foram realizadas para analisar as modificações na forma e tamanho das asas. Ainda foi utilizada uma análise baseada nas distâncias de Mahalanobis para verificar os agrupamentos formados por geometria alar. Os resultados obtidos mostraram significativa variação de tamanho e forma das asas de Lutzomyia (Lutzomyia) em comparação com outros subgêneros e gêneros de flebotomíneos. Considerando somente o subgênero Lutzomyia a morfometria alar diferenciou dois grupos. Um deles formado por Lu. ischnacantha, Lu. cavernicola, Lu. almerioi, Lu. forattinii, Lu. renei e Lu. battistinii no qual os valores de reclassificação correta das espécies foram muito altos (Kappa = 0,91) e o outro incluindo Lu. alencari, Lu. ischyracantha, Lu. cruzi, Lu. longipalpis, Lu. gaminarai e Lu. lichyi em que esses valores foram baixos (Kappa = 0,42), mesmo utilizando 10 marcos anatômicos das asas. Os agrupamentos gerados pela geometria das asas reforçaram a proposta de classificação de Galati (2003). A morfometria geométrica de asas foi útil para identificar padrões morfológicos de gêneros e subgêneros e auxiliar na identificação de algumas espécies de flebotomíneos do subgênero Lutzomyia, mas não permitiu a identificação de espécies crípticas como L. longipalpis and L.cruzi. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Phlebotominae (Diptera: Phlebotominae) is a subfamily of insects with great importance for Public Health as transmitters of Leishmania species. The Lutzomyia subgenus deserves special attention because contains the main vector species of Leishmania infantum, responsible for Visceral Leishmaniasis in the Americas: Lutzomyia longipalpis. This subgenus includes a group of sibling species that are not differentiated by morphology. However, the correct identification of these species has important epidemiological implications. Thus, the search for more taxonomic characters and methods for identification is fundamental and, in this sense, the wing geometry can help as an important tool. The objective of this study was to analyze the variations in size and shape of wings of Lutzomyia subgenus species occurring in Brazil and assess whether these analyzes can be useful to identify these species. Wings of 18 sand fly species from two Brazilian collections (Collection of the School of Public Health - University of São Paulo and Collection of the Research Center René Rachou - FIOCRUZ, MG) were analyzed. Other genera and subgenera were used as outgroups. The wings were photographed and six landmarks were scanned to obtain the cartesian coordinates. A Generalized Procrustes Analysis was performed to obtain variables of size and shape. Principal Component Analysis, Discriminant Functions and Variance Analysis were performed to analyze the changes in the shape and size of the wings. An analysis with the Mahalanobis distances was also performed to check the groups formed by wing geometry. The results showed significant variation in size and shape of species of Lutzomyia (Lutzomyia) wings when compared to other sandflies subgenera and genera. Considering only the Lutzomyia subgenus, the wing morphometry distinguished two groups. In the group 1 (Lu. ischnacantha, Lu. cavernicola, Lu. almerioi, Lu. forattinii, Lu. renei and Lu. battistinii) correct reclassification scores were very high (Kappa = 0.91), but in the group 2 (Lu. alencari, Lu. ischyracantha, Lu. cruzi, Lu. longipalpis, Lu. gaminarai and Lu. lichyi) lower reclassification scores were observed (Kappa = 0.42) even in analyses using ten wing landmarks. The clusters generated by wing morphometry were similar of those proposed by Galati (2003).The wing geometry proved to be useful to identify morphological patterns of Phlebotominae genera and subgenera and assist in the identification of some species of the Lutzomyia subgenus but the technique did not allow identification of sibling species such as L. longipalpis and L.cruzi.

Alguns táxons inseridos na série Shannoni do gênero Psathyromyia ((Diptera, Psychodidae, Phlebotominae) apresentam grande semelhança morfológica: Psathyromyia cuzquena, Pa. abonnenci, Pa. pestanai e Pa. shannoni o que têm levado a proposição de várias sinonímias e identificações errôneas. Psathyromyia shannoni apresenta vários sinônimos-júniores: Phlebotomus limai, Ph. bigeniculata, Ph. microcephala e Ph. pifanoi, e ampla distribuição geográfica, desde os Estados Unidos até a Argentina. Além destas espécies, uma afim de Pa. pestanai, ainda não descrita, foi encontrada no Vale do Ribeira. O objetivo foi discutir o status taxonômico e distribuição geográfica das espécies do complexo. Foram realizados estudos morfológicos e morfométricos de espécimes depositados em coleções e obtidos em coletas no alto e baixo Vale do Ribeira e Serra da Cantareira no Estado de São Paulo. Os espécimes foram analisados de forma individual, ignorando a identificação inicial contida na etiqueta de cada lâmina. Posteriormente foram separados em grupos de morfoespécie e após esse processo, foram feitas medidas as quais foram submetidas à análise de variância. A análise possibilitou revalidar as quatro espécies consideradas sinônimos júniores de Pa. shannoni e um sinônimojúnior foi proposto. Uma espécie nova é descrita e um táxon afim de Pa. microcephala foi identificado. Portanto, o complexo Shannoni passou a ter a seguinte composição: Pa. abonnenci, Pa. shannoni, Pa. microcephala stat. rev.; comb. nov., Pa. pifanoi stat. rev.; comb. nov., Pa. bigeniculata stat. rev.; comb. nov., Pa. limai stat. rev.; comb. nov. (Pa. pestanai syn. nov.) e Psathyromyia sp. nov. Psathyromyia cuzquena possivelmente é sinônimo-júnior de Pa. pifanoi, no entanto, mais estudos são necessários. O táxon que ocorre no baixo Vale do Ribeira corresponde a Pa. limai, e no alto Vale do Ribeira, pertence à nova espécie. O táxon afim de Pa. microcephala ocorre nas regiões Sul e Sudeste do Brasil, Argentina e Colômbia. A ampla distribuição de Pa. shannoni, em parte, corresponde a de Pa. bigeniculata, Pa. abonnenci, Pa. limai e Pa. aff. microcephala. O desconhecimento do atual local de depósito do tipo de Pa. microcephala e a descrição sucinta dos holótipo não possibilitam a sua diferenciação do táxon afim desta espécie. Estudos de espécimes da localidade-tipo de Pa. microcephala são necessários para definição do status de Pa. aff. microcephala. Uma chave para a identificação de machos e fêmeas das espécies do complexo Shannoni é apresentada / Some taxa included in the Shannoni series and Psathyromyia genus (Diptera, Psychodidae, Phlebotominae) show great morphological similarity: Psathyromyia cuzquena, Pa. abonnenci, Pa. pestanai and Pa. shannoni have led to misidentifications. Psathyromyia shannoni has several synonyms-junior: Phlebotomus limai, Ph. bigeniculata, Ph. microcephala and Ph. pifanoi, and wide geographic distribution, from the United States to Argentina. Besides these species, a similar of Pa. pestanai, not yet described, was found in the Ribeira Valley. The objective was to discuss the taxonomic status and the geographic distribution of the complex species. Morphological and morphometric studies were conducted from specimens deposited in collections and collected in the upper and lower Ribeira Valley and Serra da Cantareira in São Paulo State, Brazil. The specimens were analyzed individually, ignoring the initial identification on the label of each slide. Later they were separated into groups of morphospecies and after this process, measures were made to perform variance analysis. The analysis allowed to revalidate the four species considered junior synonyms of Pa. shannoni and one other junior synonyms was proposed. A new species is described and a similar taxa to Pa. microcephala was identified. Therefore, the complex Shannoni now has the following composition: Pa. abonnenci, Pa. shannoni, Pa. microcephala stat. rev.; comb. nov., Pa. pifanoi stat. rev.; comb. nov., Pa. bigeniculata stat. rev.; comb. nov., Pa. limai stat. rev.; comb. nov. (Pa. pestanai syn. nov.) and Psathyromyia sp. nov. Psathyromyia cuzquena is possibly a junior synonym of Pa. pifanoi, however, more studies are needed. The taxon that occurs at the lower part of the Ribeira Valley corresponds to Pa. limai, and that occurring at the upper Ribeira Valley belongs to a Psathyromyia sp. nov. A taxon similar to Pa. microcephala was identified in the South and Southeast of Brazil, Argentina and Colômbia. The wide distribution of Pa. shannoni partly corresponds to Pa. bigeniculata, Pa. abonnenci, Pa. limai and Pa. aff. microcephala. The unawareness of the local where the type of Pa. microcephala is deposited and its succinct description, does not allow distinguish it than Pa. aff. microcephala. Studies of specimens from the type-locality of Pa. microcephala are needed to define the status of Pa. aff. microcephala. A male and female identification key for the species of the Shannoni complex is presented