CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Este trabalho tem como objetivo avaliar a estabilidade de genes de referÃncia e a expressÃo das proteÃnas morfogenÃticas Ãsseas (BMP-2, 4, 6, 7 e 15), seus receptores (BMPR-IA, IB e II) e seus mensageiros intracelulares (SMADs-1, 5 e 8) em folÃculos caprinos antes e apÃs cultivo por 18 dias. Para avaliar a estabilidade dos genes de referÃncia e o nÃvel de expressÃo das BMPs, receptores e SMADs, folÃculos com aproximadamente 0,2, 0,5 e 1 mm foram isolados mecanicamente de ovÃrios caprinos. AlÃm disso, folÃculos com aproximadamente 0,2 mm foram isolados e cultivados por 18 dias em meio de cultura suplementado com FSH. ApÃs a extraÃÃo do RNA total e sÃntese de cDNA, foi realizada a quantificaÃÃo do RNAm, por PCR em tempo real, utilizando-se primers especÃficos para genes de referÃncia (β-actina, PGK, GAPDH, β-tubulina, UBQ, RPL-19, rRNA18S), e para as BMPs (2, 4, 6, 7 e 15) receptores de BMPs (BMPR-IA, IB e II) e SMADs (1, 5 e 8). Os resultados mostraram que β-tubulina e PGK sÃo os genes de referÃncia mais estÃveis em folÃculos frescos prÃ-antrais e antrais caprinos. Os RNAs mensageiros para as BMPs (2, 4, 6, 7 e 15), seus receptores (BMPR-IA, IB e II) e SMADs (1, 5 e 8) sÃo expressos em diferentes nÃveis em folÃculos prÃ-antrais e antrais caprinos, sendo que a expressÃo do RNAm para BMP-4, BMP-6 e BMP-7 em folÃculos de 1 mm sÃo significativamente maiores do que em folÃculos de 0,2 e 0,5 mm. Entretanto, os nÃveis de RNAm para BMP-2 foi reduzido em folÃculos de 1 mm, jà os nÃveis de BMP-15 nÃo diferiram entre as categorias foliculares analisadas. Os nÃveis de RNAm para BMPR-IB foram maiores em folÃculos de 0,2 mm do que em folÃculos de 0,5 e 1 mm, enquanto que o RNAm para BMPR-II foi significativamente maior em folÃculos de 0,5 mm do que em folÃculos de 0,2 e 1 mm. Por outro lado, nÃveis de RNAm para BMPR-1A nÃo diferiram entre folÃculos analisados. Os nÃveis de RNAm para SMAD-5 foram significativamente maiores em folÃculos de 0,2 mm do que em folÃculos de 0,5 e 1 mm. Contudo, folÃculos de 0,5 mm mostraram nÃveis maiores de RNAm para SMAD-8 do que folÃculos de 0,2 e 1 mm. Os nÃveis de RNAm para SMAD-1 nÃo diferiram entre os folÃculos. ApÃs as comparaÃÃes dentro de cada categoria folÃcular, BMP-15 foi mais expressa do que BMP-7 em folÃculos de 0,2 e 0,5 mm. Em folÃculos de 0,5 mm a expressÃo do BMPR-IB foi maior do que BMPR-II. Em todas as trÃs categorias foliculares estudadas, a expressÃo da SMAD-5 foi superior a SMAD-8. ApÃs o cultivo, os folÃculos apresentaram reduÃÃo dos nÃveis de RNAm para BMP-2, BMP-4, BMP-7, BMPR-IA e SMAD-5. Em conclusÃo, β-tubulina e PGK sÃo os dois genes housekeeping mais estÃveis para folÃculos frescos caprinos com 0,2, 0,5 e 1 mm de diÃmetro. BMPs, seus receptores e SMADs apresentam padrÃes de expressÃo especÃficos em cada categoria folicular estudada. No entanto, em folÃculos cultivados hà uma variaÃÃo na expressÃo dos componentes do sistema BMP, diferindo da expressÃo in vivo de folÃculos com o mesmo tamanho. / The aims this study to evaluate the stability of reference genes and the expression of bone morphogenetic protein (BMP-2, 4, 6, 7 and 15), their receptors (BMPR-IA, IB and II) and intracellular messengers (SMADs- 1, 5 and 8) in goat follicles before and after culture for 18 days. To evaluate the stability of reference genes and the expression of BMPs, receptors and SMADs, follicles of approximately 0.2, 0.5 and 1 mm were mechanically isolated from goats ovaries. In addition, approximately 0.2 mm follicles were isolated and cultured for 18 days in culture medium supplemented with FSH. Both fresh and cultured follicles were subjected to total RNA extraction and synthesis of cDNA, the quantification of mRNA was carried out by real-time PCR using specific primers for genes of reference (GAPDH, β-tubulin, β-actin, PGK, UBQ, RPL - 19, rRNA18S) and BMPs (2, 4, 6, 7 and 15) receptors of BMPs (BMPR-IA, IB and II) and SMADs (1, 5 and 8). Results showed that β-tubulin and PGK are the most stable reference genes in goats preantral and antral follicles. The messengers RNA for BMP (2, 4, 6, 7 and 15), their receptors (BMPR-IA, IB and II) and Smads (1, 5 and 8) are expressed at different levels in preantral and antral goats, and mRNA expression for BMP-4, BMP-6 and BMP-7 in 1-mm follicles are significantly higher than in follicles of 0.2 and 0.5 mm. However, the levels of mRNA for BMP-2 were reduced in follicles 1 mm, as BMP-15 did not differ between follicular categories. The levels of mRNA for BMPR-IB were higher in follicles of 0.2 mm than in follicles of 0.5 and 1 mm, whereas the mRNA for BMPR-II was significantly higher in follicles than 0.5 mm in follicles of 0.2 to 1 mm. Moreover, mRNA levels for BMPR-1A did not differ between follicles examined. The levels of mRNA for SMAD-5 were significantly higher in 0.2 mm follicles than in follicles of 0.5 and 1 mm. However, follicles of 0.5 mm showed higher levels of mRNA for SMAD-8 than follicles 0.2 and 1 mm. The levels of mRNA for SMAD-1 did not differ between follicles. After the comparisons within each category follicle, BMP-15 expression was higher than BMP-7 in follicles between 0.2 and 0.5 mm. Follicles 0.5 mm in the expression of BMPR-IB was greater than BMPR-II. In all three follicular categories studied, the expression of SMAD-5 was superior to SMAD-8. After culture, follicles showed reduced levels of mRNA for BMP-2, BMP-4, BMP-7, BMPR-IA and SMAD-5. In conclusion, β-tubulin and PGK genes are the two most stable housekeeping for fresh goat follicles 0.2, 0.5 to 1 mm in diameter. BMPs, their receptors and SMADs have specific expression patterns in each category follicular studied. However, in cultured follicles showed a variation in the variation in the expression of BMP system components, differing from in vivo expression of follicles with the same size.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:4347 |
| Date | 21 February 2011 |
| Creators | Josà Jackson do Nascimento Costa |
| Contributors | Josà Roberto Viana Silva |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Biotecnologia (Campus da UFC em Sobral-CE), UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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