CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As esponjas marinhas constituem uma rica reserva de substÃncias naturais, muitas delas de imenso interesse biotecnolÃgico. Elas compreendem um grupo promissor no fornecimento de compostos bioativos para a humanidade. Desta forma, pesquisas de novas drogas de fontes naturais sugerem que as esponjas marinhas possuem importantes compostos bioativos com ponteciais: farmacolÃgico, antimicrobiano; antitumoral; antiviral; antiinflamatÃrio; imunossupresor; cardiovascular; neurosupressor; relaxante muscular bem como biomarcador de poluiÃÃo. A anÃlise de proteÃnas expressas à uma abordagem importante para determinar a funÃÃo dessas molÃculas em um determinado organismo. Esse trabalho teve como objetivo bioprospectar proteÃnas expressas pela esponja marinha Aaptos sp. coletada no Icaraà de Amontada, CearÃ, que possam apresentar potencial biotecnolÃgico. Para a realizaÃÃo dessa abordagem, foram utilizadas como estratÃgias a eletroforese bidimensional (2-DE) e a bioinformÃtica. A 2-DE à uma ferramenta utilizada para separar proteÃnas de diversos organismos. Conhecendo-se as proteÃnas expressas na esponja estudada pode-se estabelecer padrÃes protÃicos caracterÃsticos da espÃcie em estudo. Com base no exposto, neste estudo foi utilizado 2DE para investigar as proteÃnas expressas de Aaptos sp. A fim de fazer a extraÃÃo de proteÃnas totais foi realizada a partir de 400 mg da esponja marinha Aaptos sp. Para anÃlise quantitativa e qualitativa das proteÃnas foi utilizado o mÃtodo de Bradford e SDS-PAGE, respectivamente. A partir das proteÃnas totais extraÃdas foi determinado o mapa bidimensional de referÃncia para a esponja marinha em estudo. O ajuste das imagens dos gÃis bidimensionais, a detecÃÃo de spots protÃicos e a avaliaÃÃo dos dados para determinaÃÃo massa molecular aparente (MM) e ponto isoelÃtrico (pI) dos spots foi feito pelo programa ImageMaster 7. ProteÃnas expressas foram identificadas utilizando os valores de pI e MM do spot contra um banco de dados de proteÃnas UniProt disponÃvel no servidor ExPASy. O nÃmero mÃdio de spots protÃicos das replicas dos gÃis 2DE foi de 124. A maior abundÃncia de proteÃnas foi observada nos gÃis 2DE na faixa de pH de 4 a 6,7 e com MM entre 13 a 119,67 quilodalton (kDa). A partir do gel 2DE de referencia foi identificado 122 proteÃnas das quais 61, 46 e 15 pertencem aos tÃxon cnidÃria, deuterostomia e porÃfera, respectivamente. As proteÃnas identificadas de porÃfera pertencem a categoria funcional: ligante de ATP, componente estrutural do ribossomo, atividade catalÃtica, ligante de GTP, ligante de Ãon de cÃlcio e atividade dissulfeto oxidoredutase. Sendo a categoria funcional ligante de ATP e de GTP com maior nÃmero de spots. Adicionadamente, houve proteÃnas expressas com importantes funÃÃes moleculares jà relada na literatura, porÃm nÃo em Aaptos sp., assim indicando a importÃncia destas esponjas marinhas como fonte de informaÃÃo proteica que poderÃo ser estudadas no futuro quanto ao seu potencial uso como ferramentas biotecnolÃgicas em diversas Ãreas, podendo ser empregadas em estudos que possam elucidar as vias metabÃlicas bem como o desenvolvimento de fÃrmacos contra possÃveis patologias. / Marine sponges are a rich reserve of natural substances, many of them of immense biotechnological interest. They comprise a promising group in providing bioactive compounds for humanity. Thus, research on new drugs from natural sources suggest that marine sponges have important bioactive compounds ponteciais: pharmacological, antimicrobial; antitumor; antiviral; anti-inflammatory; immunosuppressive; cardiovascular; neurosupressor; muscle relaxant and pollution biomarker. Analysis of expressed proteins is an important approach to determine the function of these molecules in a given organism. This study aimed to bioprospect proteins expressed by the marine sponge Aaptos sp. collected in Icarai de Amontada, CearÃ, who may have biotechnological potential. For the realization of this approach were used as strategies the two-dimensional electrophoresis (2-DE) and bioinformatics. The 2-DE is a tool used to separate proteins from different organisms. Knowing the proteins expressed in the study sponge can be established Protein patterns characteristic of the species under study. Based on the above, this study used 2DE to investigate the expressed protein Aaptos sp. In order to make the extraction of total proteins was performed using 400 mg of the marine sponge Aaptos sp. For qualitative and quantitative analysis of proteins was used the method of Bradford and SDS-PAGE, respectively. From the total protein extract was determined the two-dimensional reference map for marine sponge in the study. The adjustment of images of two-dimensional gels, the protein spot detection and evaluation of data to determine apparent molecular weight (MW) and isoelectric point (pI) of the spots was made by the ImageMaster software 7. Expressed proteins were identified using the values of pI and MM spot against a UniProt protein database available on the ExPASy server. The average number of protein spots of replicas of the gels 2DE was 124. The highest abundance proteins was observed in 2DE gels in the pH range of 4 to 6.7 and with MM between 13 to 119.67 kilodalton (kDa). From the 2DE reference gel was identified 122 proteins of which 61, 46 and 15 belong to the Cnidaria taxon deuterostomia and Porifera, respectively. The proteins identified Porifera belong to functional category: ATP binding, structural component of the ribosome, catalytic activity, GTP binding, calcium ion binding and disulfide oxidoreductase activity. The functional category binding of ATP and GTP with more spots. Adicionadamente, was expressed proteins with important molecular functions already hued in the literature but not in Aaptos sp., thus indicating the importance of these marine sponges as a source of protein information that may be studied in the future for their potential use as biotechnological tools in several areas and can be used in studies to elucidate the metabolic pathways and the development of drugs against possible pathologies.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:8998 |
| Date | 06 February 2015 |
| Creators | Maria Gleiciane De Queiroz Martins |
| Contributors | Kyria Santiago do Nascimento, Benildo Sousa Cavada, Francisco Nascimento Pereira JÃnior, Wladimir Ronald Lobo Farias, Creuza Maria Silveira de AraÃjo Farias |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Engenharia de Pesca, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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