Τα ουδετερόφιλα κύτταρα του ανθρώπινου περιφερικού αίματος, ανήκουν σε μία
κατηγορία κυττάρων, τα οποία ονομάζονται επαγγελματίες φαγοκύτταρα και τα οποία
είναι υπεύθυνα για την πρόσληψη και θανάτωση των παθογόνων μικροοργανισμών
(Bessler et al.2002). Από παλαιότερες έρευνες της ερευνητικής μας ομάδας, έχει δειχθεί
η συμμετοχή των σηματοδοτικών μορίων FAK, Elk-1 και MAP κινασών στη ρύθμιση
της κυτταροφαγίας από τα εξειδικευμένα φαγοκύτταρα (πλασματοκύτταρα), που
βρίσκονται στην αιμολέμφο της μύγας της Μεσογείου, Ceratitis capitata. (Lamprou et al.
2007, Mamali et al. 2008). Είναι επίσης γνωστό ότι κατά την κυτταροφαγία παράγονται
διάφορες μορφές δραστικού οξυγόνου (ROS) και αζώτου (RNS), με κύριες το Η2Ο2
και
ΝΟ αντίστοιχα. Οι παραγόμενες ROS και RNS συμμετέχουν ως μόρια μεταγωγής
σήματος σε διάφορα ενδοκυτταρικά σηματοδοτικά μονοπάτια που ρυθμίζουν την
κυτταροφαγία από τα λευκοκύτταρα. Όμως τα βιβλιογραφικά δεδομένα στο πεδίο αυτό
είναι λιγοστά. Στην παρούσα εργασία, μελετήθηκε η συμμετοχή των FAK, Elk-1, MAP
κινασών και Η2Ο2
στην κυτταροφαγία των βακτηρίων E.coli και S.aureus από τα
ουδετερόφιλα κύτταρα του ανθρώπου καθώς και η αλληλεπίδραση μεταξύ των FAK,
Elk-1, MAP κινασών και του Η2Ο2 που παράγεται από τα κύτταρα λόγω της παρουσίας
των βακτηρίων E.coli και S.aureus. Με κυτταρομετρία ροής και τη χρήση του
εξειδικευμένου φθοροχρώματος διυδροροδαμίνη (DHR), πιστοποιήθηκε η παραγωγή
Η2Ο2 από τα ουδετερόφιλα κύτταρα του αίματος, παρουσία E.coli και S.aureus. Η
ενεργός συμμετοχή του παραγόμενου Η2Ο2 αποδείχτηκε όταν η μείωση της παραγωγής
υπεροξεικών ανιόντων με τη χρήση του εξειδικευμένου αναστολέα Ν-εθυλεν-μαλεϊμίδιο
(NEM), μείωσε την πρόσληψη βακτηρίων από τα κύτταρα. Η συμμετοχή των FAK και
Elk-1 στην κυτταροφαγία ελέγχθηκε με καταστολή της γονιδιακής τους έκφρασης με τη
χρήση μορίων siRNA, ενώ αντίστοιχα για τις MAP κινάσες χρησιμοποιήθηκαν
αναστολείς της φωσφορυλίωσης τους, οι οποίοι καταστέλλουν την ενεργότητα τους. Με
τη χρήση των ίδιων μεθόδων αναστολής για τα μόρια FAK, Elk-1 και MAPKs,
μελετήθηκε και ο ρόλος τους στην παραγωγή Η2Ο2
κατά την κυτταροφαγία των
βακτηρίων E.coli και S.aureus από τα ουδετερόφιλα κύτταρα του ανθρώπου. Τέλος,
ερευνήθηκε και ο ρόλος του Η2Ο2, σαν σηματοδοτικό μόριο κατά τη διαδικασία της
κυτταροφαγίας, μελετώντας με ανάλυση κατά western, την επίδραση της αναστολής της
παραγωγής του Η2Ο2, στην φωσφορυλίωση (ενεργοποίηση) των MAP κινασών. / Neutrophil cells from human peripheral blood belong in a group of cells, that are called
professional phagocytes and are responsible for the uptake and killing of pathogen
microorganisms (Bessler et al.2002). Research data from our lab, has shown that the
signaling molecules FAK, Elk-1 and MAP kinases participate in the regulation of
phagocytosis from the phagocytes of the Mediterranean fly, C.capitata (Lamprou et al.
2007, Mamali et al. 2008). It is also known, that during phagocytosis phagocytes produce
different forms of reactive oxygen species (ROS) and nitrogen species (RNS), mainly
Η2Ο2
and ΝΟ, respectively. Produced ROS and RNS, act as signaling molecules in
different intracellular signaling pathways that regulate phagocytosis in leykocytes. . In the
present work, we examined the participation of FAK, Elk-1, MAPKs and Η2Ο2 in the
phagocytosis of bacteria E.coli and S.aureus and also the interaction between FAK, Elk-
1, MAPKs and Η2Ο2 that is produced from the cells, due to the presence of the bacteria
E.coli and S.aureus. Using flow cytometry and the specialized fluorescent dye
Dihydrorodamine-123 (DHR), we certified the production of Η2Ο2 from the human
neutrophil cells, in the presence of E.coli and S.aureus. The participation of the produced
Η2Ο2 was shown, when the reduction of the produced Η2Ο2 with the use of the inhibitor
Ν-etheylen-maleimide (NEM), reduced the uptake of bacteria from the cells. The
participation of FAK and Elk-1 in phagocytosis was examined by suppressing their
expression with the use of siRNA molecules, while for the MAP kinases we used specific
activation inhibitors. By using the same inhibitng methods for the molecules FAK, Elk-1
and MAPKs we studied their role in the production of Η2Ο2 during the phagocytosis of
bacteria E.coli and S.aureus from human neutrophil cells. Finally, by reducing the
production of superoxide anions, thereby reducing the production of H2O2, by using the
specific inhibitor Ν-etheylen-maleimide (NEM), we examined the expression of the
phosphorylated forms of MAPKs, by western analysis, in human neutrophils in the
presence of the bacteria E.coli and S.aureus.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upatras.gr/oai:nemertes:10889/2536 |
| Date | 19 January 2010 |
| Creators | Καραγιάννης, Φώτης |
| Contributors | Λαμπροπούλου, Μαρία, Karagiannis, Fotis, Λαμπροπούλου, Μαρία, Κατσώρης, Παναγιώτης, Στεφάνου, Γεωργία |
| Source Sets | University of Patras |
| Language | gr |
| Detected Language | Greek |
| Type | Thesis |
| Rights | 0 |
| Relation | Η ΒΥΠ διαθέτει αντίτυπο της διατριβής σε έντυπη μορφή στο βιβλιοστάσιο διδακτορικών διατριβών που βρίσκεται στο ισόγειο του κτιρίου της. |
Page generated in 0.0026 seconds