Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Rosane Cossich Furtado (rosanecossich@gmail.com) on 2010-05-11T14:09:01Z No. of bitstreams: 1 2008_MarcusMeloTeixeira.pdf: 3636528 bytes, checksum: 945b7e82264df2556c02eec37ab595f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-12T04:45:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_MarcusMeloTeixeira.pdf: 3636528 bytes, checksum: 945b7e82264df2556c02eec37ab595f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T04:45:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_MarcusMeloTeixeira.pdf: 3636528 bytes, checksum: 945b7e82264df2556c02eec37ab595f9 (MD5) Previous issue date: 2008-03-17 / A PCM é uma micose sistêmica que ocorre em vários países da América Latina, principalmente Brasil, Venezuela e Colômbia e, afeta principalmente indivíduos da população rural. Estudos de variabilidade genética de isolados do Paracoccidioides brasiliensis, utilizando diferentes tipos de marcadores moleculares, já mostraram uma alta variabilidade genética deste patógeno. O isolado Pb01, em especial, diverge das 3 espécies filogenéticas identificadas previamente (S1, PS2, PS3) e sua classificação taxonômica dentro do gênero Paracoccidioides ainda permanece não definida. Neste trabalho, foram identificados mais 16 isolados que apresentaram um genótipo semelhante ao Pb01, por análise de um marcador molecular presente no íntron1 do gene hsp70, os quais foram denominados “Pb01-like”. Utilizando a metodologia do reconhecimento de espécies filogenéticas pela concordância genealógica (GCPSR), este trabalho teve como objetivo investigar a existência de um grupo sistematicamente significante que abrigasse estes isolados do tipo “Pb01-like”, em uma amostragem total de 88 isolados. Para análise filogenética foram utilizados os métodos de máxima parcimônia e análise de Bayes de 13 loci polimórficos, tanto individuais ou concatenados, o que permitiu agrupar estes isolados “Pb01-like” em um grupo filogenético separado das 3 espécies filogenéticas S1, PS2 e PS3. Foi detectado um alto número de polimorfismos fixados entre os dois grupos geneticamente isolados, o que sugere um bloqueio do fluxo gênico entre eles. O evento de especiação do grupo filogenético “Pb01-like” é simpátrico uma vez que compartilha algumas regiões geográficas das outras 3 espécies filogenéticas. Os dois grupos, “Pb01-like” e S1,PS2,PS3, são altamente divergentes e o tempo médio estimado de isolamento genético entre eles foi de 19 milhões de anos atrás. A análise de recombinação possibilitou detectar que o evento de recombinação ocorre dentro das duas populações de forma separada, o que é compatível com o isolamento reprodutivo. De acordo com o critério do método de reconhecimento de espécies filogenéticas pela concordância genealógica (GCPSR) o grupo “Pb01-like” pode ser considerado uma nova espécie filogenética, diferente das três espécies filogenéticas previamente mencionadas (Matute et al., 2006), uma vez que o clado correspondente aos isolados “Pb01-like” aparece fortemente sustentado nas genealogias geradas a partir dos dados de polimorfismo de 13 loci analisados, tanto simples como concatenados, com valores de probabilidade posterior (1.0) e “bootstrap” (100%) altamente significantes. Análise sobre características morfológicas, possibilidade de cruzamento genético, características fenotípicas e da doença (PCM), utilizando isolados representativos dos 2 grupos, se encontram em andamento. Se forem confirmadas as características exclusivas e específicas para cada grupo aqui identificado, em conjunto com os dados de filogenia molecular, isto sustentaria fortemente a descrição formal de uma nova espécie para o gênero Paracoccidioides. e devido a grande relevância deste patógeno na área médica na América Latina seria importante nomear o clado “Pb01-like”. Uma nova nomenclatura pode facilitar a comunicação entre médicos patologistas e pesquisadores da área. Para a espécie filogenética correspondente aos isolados “Pb01-like” sugere-se a descrição formal de uma nova espécie: Paracoccidioides lutzii, em tributo ao médico micologista Adolpho Lutz, que foi o pioneiro a descrever o fungo patogênico humano P. brasiliensis há exatamente 100 anos atrás (1908). _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioidomycosis is a systemic illness with an area of occurrence covering most of Latin America, with highest prevalence in Brazil, Venezuela and Colombia, and that affects mainly individuals living in the countryside. Studies on difference isolates of the causative agent, Paracoccidoides brasiliensis, have revealed a great degree of genetic variability in this pathogen. The Pb01 isolate, in particular, differs from the three previously described phylogenetic species (S1, PS2 and PS3; Matute et al., 2006) and its taxonomic classification in the genus Paracoccidioides remains undefined. In the present work, sixteen isolates genotypically similar to Pb01 have been identified by analysis of a molecular marker from the first intron of the hsp70 gene; these isolates have been dubbed ‘Pb01-like’. Using the method of recognition of phylogenetic species by genealogic concordance (GCPSR), this work aimed at looking into the existence of a systematically significant group of ‘Pb01-like’ isolates from a total of 88 samples. For phylogenetic analysis the methods of maximal likelihood and Bayesian analysis were applied to thirteen polymorphic regions, including individual and concatenated loci. This allowed the grouping of the ‘Pb01-like’ isolates in a phylogenetic group distinct from S1, PS2 and PS3. A high number of fixed polymorphisms was identified between the ‘Pb01-like’ cluster and that composed of the other three species, which suggests a blockage of all genetic flow between them. The speciation event that defined the new phylogenetic group is sympatric relative to S1 and PS2. The group that includes S1, PS2 and PS3 and the ‘Pb01-like’ cluster are highly divergent and have been genetically isolated for about 19 million years. Recombination analysis revealed that recombination events occur independently inside the two groups, which suggests reproductive isolation. In keeping with GCPSR, the ‘Pb01-like group’ can be considered a new phylogenetic species distinct from the other three, since the clade corresponding to ‘Pb01-like’ isolates is strongly supported by all pedigrees independently generated from polymorphism data of the thirteen loci, with values of posterior probability (1.0) and of bootstrap agreement (100%) highly significant. Further analysis of morphological, phenotypical and pathogenic profiles, and of the possibility of mating, is under way for isolates representative of all species. If exclusive and specific characteristics are identified for the ‘Pb01-like’ group, this would justify, in conjunction with molecular phylogeny data, the formal description of a new species for the genus Paracoccidioides, which would be accompanied by a renaming of the group, in the light of the medical relevance of this pathogen in Latin America. A new nomenclature would obviously ease information exchange among pathologists and researchers. We suggest formally to name the phylogenetic species encompassing the ‘Pb01-like’ clade as Paracoccidioides lutzii, as a tribute to medical mycologist Adolpho Lutz, who first described human pathogen P. brasiliensis exactly one hundred years ago.

Expression of acquired immunity to gastrointestinal parasites usually breaks down during the periparturient period, which is characterised by an increased worm burden and nematode egg excretion. It is believed that this breakdown of immunity may have a nutritional basis, and that by reducing nutrient scarcity the lactating animal will be able to reduce her worm burden. Therefore, the aim of this thesis was to carry out four experiments to investigate the potential use of metabolisable protein as an alternative way to control gastrointestinal parasitism in periparturient animals. A lactating rat model was used to address this issue as lactating rats exhibit a breakdown of immunity to the gastrointestinal nematode Nippostrongylus brasiliensis. The first experiment (chapter two) aimed to verify that a reduction in worm burden is indeed related to changes in nutrient supply and not associated with changes in the gut environment. This was achieved by manipulating nutrient (litter) demand whilst nutrient supply was maintained constant. The results showed that the periparturient breakdown of immunity to N. brasiliensis (measured by a reduced worm burden) was sensitive to changes in nutrient demand and that these effects were independent of changes in the gut environment. The second experiment (Chapter Three) tested the effect of increased protein supply or reduced protein demand on the resistance to parasites in lactating rats whilst energy intake was kept constant. Under these conditions effects of protein supply could not be confounded with effects of any nutrient or energy intake. The results supported the view that under a restricted feeding regime, breakdown of immunity to N. brasiliensis (measured by a reduced number of eggs in the colon content) was sensitive to changes in protein scarcity. Following on from this, the next experiment (Chapter Four) assessed the effects of a gradual increase in protein supply on resistance and immune responses to N. brasiliensis in lactating rats. It was shown that as protein contents of the diets progressively increased, the number of worms and eggs present in the colon decreased. Although we found that differences in protein supply affected parasite burden, we found no affects of protein supply on local immune responses. This may have been due to the single sampling point used. Therefore, the objective of the last experiment (Chapter Five) was to assess temporal effects of increased protein supply on resistance and immune responses to N. brasiliensis. In agreement with previous experiments, the results showed that an increase in protein at times of protein scarcity improved resistance to N. brasiliensis, illustrated by a lower number of nematode eggs in the colon. The results also showed that local immune responses such as immunoglobulin levels (IgA, IgE & IgG2a), RMCP II levels and goblet cell counts were affected by differences in protein supply at various time points post secondary infection. The potential application of using a lactating rat as a suitable model to fully understand the underlying immunological basis of relaxation in immunity during the periparturient period and its sensitivity to nutrient scarcity is considered in the General Discussion (Chapter Six).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T18:41:14Z : No. of bitstreams: 1 hanna_sa_dr_botfm.pdf: 4239450 bytes, checksum: a2303b4b075a8f209a246b54d76deee8 (MD5) / A virulência microbiana é considerada uma propriedade complexa propiciando ao agente infeccioso condições para penetrar as barreiras protetoras do hospedeiro, sobreviver aos mecanismos de defesa, multiplicar-se e produzir a doença. A paracoccidioidomicose apresenta um amplo espectro de manifestações clínicas, onde o fungo, Paracoccidioides brasiliensis, pode atingir vários tecidos com ênfase ao pulmão. Os mecanismos de disseminação são baseados em evidências indiretas, porém observando-se os aspectos clínicos polimórficos pode-se sugerir que diferentes mecanismos de virulência estão envolvidos. A propriedade do patógeno de interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro é essencial para sua virulência e poucas informações são disponíveis no que se refere aos prováveis mecanismos de interação de P.brasiliensis às células. Assim, foram avaliadas a interação de P.brasiliensis e células epiteliais das linhagens Vero e A549, dando ênfase a interação com componentes da matriz extracelular e o envolvimento do citoesqueleto durante a cinética de interação fungocélula. A cinética da interação mostrou que a adesão do fungo ocorreu a partir de 30 minutos de contato nas duas linhagens celulares levando a um acréscimo no número de leveduras aderidas nos tempos subseqüentes. A presença dos fungos no interior das células ocorreu a partir de duas horas de contato com as células Vero e uma hora com as células A549. A interação de P.brasiliensis com as células epiteliais e componentes da matriz extracelular (MEC) foi avaliada por imunoperoxidase in situ e imunofluorescência indireta. O padrão de reconhecimento nas células epiteliais frente aos soros antifibronectina, anti-laminina e anti-colágeno tipo I foi de maneira diferenciada nas células infectadas. A distribuição característica da marcação... / Microbial virulence is a set of mechanisms that enable the infectious agent to penetrate the host protection barriers and then survive against the defense mechanisms, multiply and cause disease. Paracoccidioidomycosis presents a variety of clinical manifestations, and the fungus Paracoccidioides brasiliensis can reach many tissues, most importantly the lungs. Understanding of the mechanisms of dissemination is based on indirect evidence, and the polymorphic aspects of disease suggest that several virulence mechanisms are involved. The ability of the pathogen to interact with the host superficial structures is essential to its virulence, but little is known about interactions between cells and P.brasiliensis. For this reason, interactions between P.brasiliensis and epithelial Vero and A549 cells were evaluated, with the emphasis on interactions with extracellular matrix and the induction of cytoskeletal alterations during the interaction process fungus-cells. The kinetics of interaction showed that adhesion occurred after 30 minutes of contact between the two cell lines and the yeast, and the number of adhesion points increased on the cells after that. The fungus were inside the Vero cells after two hours and inside A549 after one hour. The interaction between P.brasiliensis and epithelial cells and the components of the extracellular matrix (MEC) were evaluated through immunoperoxidase in situ and indirect immunofluorescence. The recognition patterns of the infected cells against anti-fibronectin, anti-laminin and anti-collagen type I sera were different from those of the uninfected cells. Characteristic distributions of bound anti-fibronectin and anti-laminin on the surface of yeast cells were detected, indicating the presence of specific binding sites for each one. Cytochalasin D, an inhibitor of actin polymerization and colchicine... (Complete abstract click electronic access below)

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1965. / Typescript. Vita. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (M.S.)--University of Wisconsin--Madison, 1964. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Bibliography: l. 59-62.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Resumo: A virulência microbiana é considerada uma propriedade complexa propiciando ao agente infeccioso condições para penetrar as barreiras protetoras do hospedeiro, sobreviver aos mecanismos de defesa, multiplicar-se e produzir a doença. A paracoccidioidomicose apresenta um amplo espectro de manifestações clínicas, onde o fungo, Paracoccidioides brasiliensis, pode atingir vários tecidos com ênfase ao pulmão. Os mecanismos de disseminação são baseados em evidências indiretas, porém observando-se os aspectos clínicos polimórficos pode-se sugerir que diferentes mecanismos de virulência estão envolvidos. A propriedade do patógeno de interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro é essencial para sua virulência e poucas informações são disponíveis no que se refere aos prováveis mecanismos de interação de P.brasiliensis às células. Assim, foram avaliadas a interação de P.brasiliensis e células epiteliais das linhagens Vero e A549, dando ênfase a interação com componentes da matriz extracelular e o envolvimento do citoesqueleto durante a cinética de interação fungocélula. A cinética da interação mostrou que a adesão do fungo ocorreu a partir de 30 minutos de contato nas duas linhagens celulares levando a um acréscimo no número de leveduras aderidas nos tempos subseqüentes. A presença dos fungos no interior das células ocorreu a partir de duas horas de contato com as células Vero e uma hora com as células A549. A interação de P.brasiliensis com as células epiteliais e componentes da matriz extracelular (MEC) foi avaliada por imunoperoxidase in situ e imunofluorescência indireta. O padrão de reconhecimento nas células epiteliais frente aos soros antifibronectina, anti-laminina e anti-colágeno tipo I foi de maneira diferenciada nas células infectadas. A distribuição característica da marcação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microbial virulence is a set of mechanisms that enable the infectious agent to penetrate the host protection barriers and then survive against the defense mechanisms, multiply and cause disease. Paracoccidioidomycosis presents a variety of clinical manifestations, and the fungus Paracoccidioides brasiliensis can reach many tissues, most importantly the lungs. Understanding of the mechanisms of dissemination is based on indirect evidence, and the polymorphic aspects of disease suggest that several virulence mechanisms are involved. The ability of the pathogen to interact with the host superficial structures is essential to its virulence, but little is known about interactions between cells and P.brasiliensis. For this reason, interactions between P.brasiliensis and epithelial Vero and A549 cells were evaluated, with the emphasis on interactions with extracellular matrix and the induction of cytoskeletal alterations during the interaction process fungus-cells. The kinetics of interaction showed that adhesion occurred after 30 minutes of contact between the two cell lines and the yeast, and the number of adhesion points increased on the cells after that. The fungus were inside the Vero cells after two hours and inside A549 after one hour. The interaction between P.brasiliensis and epithelial cells and the components of the extracellular matrix (MEC) were evaluated through immunoperoxidase in situ and indirect immunofluorescence. The recognition patterns of the infected cells against anti-fibronectin, anti-laminin and anti-collagen type I sera were different from those of the uninfected cells. Characteristic distributions of bound anti-fibronectin and anti-laminin on the surface of yeast cells were detected, indicating the presence of specific binding sites for each one. Cytochalasin D, an inhibitor of actin polymerization and colchicine... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2008. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-09-25T14:12:57Z No. of bitstreams: 1 2008_CeciliaLiviaFalcomerFraga.pdf: 1242140 bytes, checksum: bf9492049c683e72ee9d8b3235ce68f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-19T12:30:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_CeciliaLiviaFalcomerFraga.pdf: 1242140 bytes, checksum: bf9492049c683e72ee9d8b3235ce68f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-19T12:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_CeciliaLiviaFalcomerFraga.pdf: 1242140 bytes, checksum: bf9492049c683e72ee9d8b3235ce68f1 (MD5) Previous issue date: 2008 / O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da micose sistêmica paracoccidioidomicose, cuja região endêmica restringe-se a América Latina, sendo o Brasil, a Colômbia e a Venezuela os países com alta freqüência na incidência de casos. O desenvolvimento da doença depende diretamente da interação entre o P. brasiliensis e o hospedeiro, aspectos como a virulência do fungo e o tipo de resposta imune que ele induz no hospedeiro são importantes para compreender as diferenças nas formas clínicas desta doença. Um aspecto importante a ser considerado nesta interação são as diferenças genéticas, observadas entre os grupos filogenéticos, do gênero Paracoccidioides. Assim, neste trabalho avaliamos as diferenças morfológicas entre dois isolados P. brasiliensis (Pb01 e Pb18), como também, observamos a interação destes isolados com macrófagos in vitro. Além de realizar a caracterização da resposta imune induzida por diferentes vias de infecção em camundongos. As células do isolado Pb01 apresentaram um menor diâmetro em relação à do Pb18 e com o formato circular predominante tanto para células mães como para os brotamentos, enquanto Pb18 variou sua morfologia entre a forma elíptica e circular. As leveduras Pb01 são fagocitadas mais rápido e numa porcentagem maior que as do Pb18, as quais sobrevivem por um tempo maior dentro dos macrófagos e induzem uma menor produção óxido nítrico. Na infecção sistêmica, os animais inoculados com Pb01 apresentaram uma resposta linfoproliferativa mais eficiente até 30 dias após infecção. Após este período a resposta tornou-se similar com a do Pb18, no qual ocasiona supressão da resposta linfoproliferativa. Neste tipo de infecção observou-se uma resposta imunológica predominantemente Th1. Mas, na infecção pela via intratraqueal houve uma resposta imunológica mista (Th1 e Th2) nos animais infectados, porém nas duas formas de infecção, houve uma baixa carga fúngica recuperada do tecido pulmonar e não apresentou a formação da resposta inflamatória granulomatosa. Os animais infectados com o isolado Pb18, nas duas formas de infecção, houve predomínio da resposta Th2, como também, uma quantidade crescente na carga fúngica recuperada do pulmão e uma resposta inflamatória granulomatosa neste órgão. Portanto, o isolado Pb01 possui uma menor patogenicidade em relação ao Pb18, como também, induz uma resposta imunológica mais efetiva nos animais experimentais. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The dimorphic fungus Paracoccididoides brasiliensis is the etiologic agent of systemic mycosis paracoccidioidomycosis, it is restrict to Latin American. It is frequently diagnosed in Brazil, Colombia and Venezuela. The evolution of this disease depends directly on the interaction between P.brasiliensis and host. Aspects of fungus’s virulence and the immune type response of host that is caused by fungi are important to understand differences on the clinical form’s disease. An important aspect to be considerated on this interaction are genetic differences, observed between phylonegetics groups from Paracoccidioides genus. In this work we analyzed morphological differences of two isolate of P. brasiliensis (Pb01 and Pb18) and studied the interaction of these isolate and macrophages in vitro. Immune response induced by distinct ways of infection in murine was caracterizated. The isolate Pb01 cells showed mainly a circular shape and a littlest diameter either to mother’s cells and budding compared to Pb18 that presented an elliptical and circular shape. Yeasts Pb01 are phagocyted fastly and in a major quantity than Pb18. Yeasts Pb18 survived for more time inside macrophages and induced a little oxide nitric’s production. In systemic infection, inoculated animals with Pb01 presented more efficient linfoproliferative response until 30 days after infection. After this period, the response became similar to Pb18, which causes suppression of linfoproliferative response. In this kind of infection we observed an immunological response predominantly Th1. But, in infection by intratracheally way occurred a mixed immunological response (Th1 e Th2) in infected animals, however in two types of infection, a low fungic’s load was recovered from lung’s tissue and did not present formation of inflammatory granulomatosa response. Infected animals with isolate Pb18, in both ways of infection, occurred mainly response Th2 and a crescent increase on quantity of fungal burden recovered from lungs and an inflammatory granulomatosa in this organ. Then, the isolate Pb01 has a minor pathogenicity in relation to Pb18 and induces an immunological response more efficient in model animals.

Carrapatos são artrópodos hematófagos com ampla distribuição mundial, sendo capazes de parasitar quase todos os animais vertebrados terrestres. Estes parasitos causam grandes impactos em saúde pública e na produção animal por serem vetores de diversas doenças infecciosas e, também, pelos distúrbios diretos associados ao parasitismo. O Ornithodoros brasiliensis, conhecido popularmente como carrapato mouro, é uma espécie de carrapato somente encontrada no Brasil, e com distribuição restrita à região dos Campos de Cima da Serra no Rio Grande do Sul (RS). Desde os primeiros relatos, O. brasiliensis tem sido considerado um potencial risco à saúde pública no RS devido a ocorrência de parasitismo em humanos. Somado a isto, alguns relatos indicam que sua picada é capaz de induzir distúrbios locais e sistêmicos severos nas pessoas e animais parasitados, possivelmente enquadrando-se na definição de toxicose induzida pela picada de carrapatos. Depois de mais de 50 anos sem relatos sobre O. brasiliensis, recentemente, novos casos de parasitismo humano e animal foram observados na mesma região onde este carrapato foi originalmente descrito. O objetivo deste trabalho é caracterizar o parasitismo pelo carrapato O. brasiliensis, bem como a síndrome tóxica desencadeada nos hospedeiros parasitados. Com esta finalidade, neste trabalho realizamos: (i) um estudo epidemiológico sobre o parasitismo por O. brasiliensis, determinando sua prevalência em propriedades situadas nos municípios de São Francisco de Paula e Jaquirana (regiões de ocorrência natural), descrevendo características de seu habitat e determinando possíveis fatores de risco associados à sua ocorrência; (ii) a descrição de casos retrospectivos de parasitismo em humanos e animais domésticos; (iii) a descrição de um caso clínico de toxicose induzida por O. brasiliensis em cão naturalmente parasitado; (iv) a caracterização clínico-patológica do parasitismo e da toxicose experimentalmente induzida pela picada de O. brasiliensis em ratos; (v) a caracterização dos efeitos do conteúdo salivar sobre o processo de cicatrização in vivo e sobre células endoteliais. Entre as propriedades incluídas na amostragem, em 16,7% foram coletados exemplares de O. brasiliensis. O. brasiliensis foram encontrados perto das habitações humanas e enterrados no solo em pequenas áreas com grande densidade de parasitos, em uma espécie de “ninho”. A análise dos fatores de risco demonstrou que somente duas das 17 variáveis estudadas (falta de higiene e a presença de porão com chão de terra na propriedade) aumentam a probabilidade de ocorrência deste carrapato. Foram identificadas 28 pessoas e 11 cães previamente parasitados. A partir de relatos foi possível identificar os principais sintomas associados ao parasitismo: prurido, eritema, edema, dor, lesão de lenta cicatrização. Evidências indicam que, além do homem e do cão, Conepatus chinga (zorrilho) e Dasypus hybridus (tatu-mulita) podem servir de hospedeiros. A síndrome associada à picada do O. brasiliensis foi caracterizada em detalhes através do registro do progresso clínico de um cão naturalmente exposto ao carrapato, e em ratos experimentalmente infestados. Os achados decorrentes destas observações são compatíveis entre si e com as descrições dos casos retrospectivos em humanos, e evidenciam a severidade do quadro induzido pela picada de O. brasiliensis. Por fim, foi demonstrado que o extrato de glândula salivar de O. brasiliensis inibe a cicatrização in vivo, possivelmente por inibir a proliferação endotelial e por ser citotóxico. Esta atividade relaciona-se diretamente a uma das características marcantes da picada por O. brasiliensis: a indução de uma lesão de lenta cicatrização. O conjunto dos resultados aqui mostrados fornece novos subsídios para a compreensão das peculiaridades evolutivas, de habitat, biológicas e ecológicas do O. brasiliensis, bem como dos efeitos desencadeados pelo seu parasitismo. / Ticks are blood-sucking arthropods distributed worldwide and able to parasitize almost all terrestrial vertebrate animals. Ticks are considered a great hazard for both public health and animal breeding due to their ability to transmit infectious diseases and to induce direct toxic effects leading to clinical disturbances. Ornithodoros brasiliensis, popularly known as mouro tick, is a specie only found in highlands region of Rio Grande do Sul state, Southern Brazil. Since initial reports, O. brasiliensis is considered a potential public health hazard in Rio Grande do Sul state due to the possibility of human parasitism. In addition, few reports indicate that O. brasiliensis bite is able to induce severe local and systemic disturbances in humans and animals. This clinical profile possibly fits in the definition of tick toxicosis syndrome. After more than 50 years without reports about O. brasiliensis, new cases of human and animal parasitism were recently reported in the same region of its original description. This work aimed to describe the characteristics of O. brasiliensis parasitism, as well as the toxicosis observed in bitten hosts. Thus, we performed: (i) an epidemiological study about O. brasiliensis parasitism in farms located in the municipalities of São Francisco de Paula and Jaquirana (endemic region) to determine its prevalence and risk factors, and also, to describe the characteristics of its habitat; (ii) an analysis of retrospective cases of human and animal parasitism; (iii) the report of a clinical case of tick toxicosis in a dog naturally parasitized; (iv) a clinico-pathological characterization of the toxicosis induced in experimentally bitten rats; (v) the evaluation of salivary glands effects on skin wound healing. in vivo and upon endothelial cells. Specimens of O. brasiliensis were collected in 16.7% of sampled farms. Ticks were found near human houses and buried in sand. They were found in a very restricted area and in great density, in a kind of tick “nest”. Risk factor analysis showed that only two of the 17 studied variables (insufficient sanitary conditions and presence of house basement with sand floor) were significantly associated with an increased probability to find O. brasiliensis. Twenty-eight people and eleven bitten dogs were identified by analysis of retrospective cases. This analysis also showed the most common symptoms associated to parasitism (pruritus, erythema, edema, pain and slow healing lesion). Our results indicate that in addition to human and dogs, Conepatus chinga (hog-nosed skunk) and Dasypus hybridus (long nosed armadillo) may serve as potential hosts. The toxicosis syndrome induced by tick bite was characterized registering the clinical progress of a naturally bitten dog, and in experimentally infested rats. The clinical findings both in the dog and in rats were similar, and also were compatible with the symptoms reported by bitten humans. The set of all clinical findings evinced the clinical severity of this syndrome. Finally, it was shown that salivary gland extract inhibit in vivo wound healing, possibly due to inhibition of endothelial cell proliferation and cytotoxicity. This biological activity may explain one of the most common symptoms of O. brasiliensis bite: the induction of a slow healing lesion. The set of all results showed here gives new evidences for the understanding of habitat distribution, biology, ecology and peculiarities of O. brasiliensis, as well as for the clinical signs induced by its parasitism.

Carrapatos são artrópodos hematófagos com ampla distribuição mundial, sendo capazes de parasitar quase todos os animais vertebrados terrestres. Estes parasitos causam grandes impactos em saúde pública e na produção animal por serem vetores de diversas doenças infecciosas e, também, pelos distúrbios diretos associados ao parasitismo. O Ornithodoros brasiliensis, conhecido popularmente como carrapato mouro, é uma espécie de carrapato somente encontrada no Brasil, e com distribuição restrita à região dos Campos de Cima da Serra no Rio Grande do Sul (RS). Desde os primeiros relatos, O. brasiliensis tem sido considerado um potencial risco à saúde pública no RS devido a ocorrência de parasitismo em humanos. Somado a isto, alguns relatos indicam que sua picada é capaz de induzir distúrbios locais e sistêmicos severos nas pessoas e animais parasitados, possivelmente enquadrando-se na definição de toxicose induzida pela picada de carrapatos. Depois de mais de 50 anos sem relatos sobre O. brasiliensis, recentemente, novos casos de parasitismo humano e animal foram observados na mesma região onde este carrapato foi originalmente descrito. O objetivo deste trabalho é caracterizar o parasitismo pelo carrapato O. brasiliensis, bem como a síndrome tóxica desencadeada nos hospedeiros parasitados. Com esta finalidade, neste trabalho realizamos: (i) um estudo epidemiológico sobre o parasitismo por O. brasiliensis, determinando sua prevalência em propriedades situadas nos municípios de São Francisco de Paula e Jaquirana (regiões de ocorrência natural), descrevendo características de seu habitat e determinando possíveis fatores de risco associados à sua ocorrência; (ii) a descrição de casos retrospectivos de parasitismo em humanos e animais domésticos; (iii) a descrição de um caso clínico de toxicose induzida por O. brasiliensis em cão naturalmente parasitado; (iv) a caracterização clínico-patológica do parasitismo e da toxicose experimentalmente induzida pela picada de O. brasiliensis em ratos; (v) a caracterização dos efeitos do conteúdo salivar sobre o processo de cicatrização in vivo e sobre células endoteliais. Entre as propriedades incluídas na amostragem, em 16,7% foram coletados exemplares de O. brasiliensis. O. brasiliensis foram encontrados perto das habitações humanas e enterrados no solo em pequenas áreas com grande densidade de parasitos, em uma espécie de “ninho”. A análise dos fatores de risco demonstrou que somente duas das 17 variáveis estudadas (falta de higiene e a presença de porão com chão de terra na propriedade) aumentam a probabilidade de ocorrência deste carrapato. Foram identificadas 28 pessoas e 11 cães previamente parasitados. A partir de relatos foi possível identificar os principais sintomas associados ao parasitismo: prurido, eritema, edema, dor, lesão de lenta cicatrização. Evidências indicam que, além do homem e do cão, Conepatus chinga (zorrilho) e Dasypus hybridus (tatu-mulita) podem servir de hospedeiros. A síndrome associada à picada do O. brasiliensis foi caracterizada em detalhes através do registro do progresso clínico de um cão naturalmente exposto ao carrapato, e em ratos experimentalmente infestados. Os achados decorrentes destas observações são compatíveis entre si e com as descrições dos casos retrospectivos em humanos, e evidenciam a severidade do quadro induzido pela picada de O. brasiliensis. Por fim, foi demonstrado que o extrato de glândula salivar de O. brasiliensis inibe a cicatrização in vivo, possivelmente por inibir a proliferação endotelial e por ser citotóxico. Esta atividade relaciona-se diretamente a uma das características marcantes da picada por O. brasiliensis: a indução de uma lesão de lenta cicatrização. O conjunto dos resultados aqui mostrados fornece novos subsídios para a compreensão das peculiaridades evolutivas, de habitat, biológicas e ecológicas do O. brasiliensis, bem como dos efeitos desencadeados pelo seu parasitismo. / Ticks are blood-sucking arthropods distributed worldwide and able to parasitize almost all terrestrial vertebrate animals. Ticks are considered a great hazard for both public health and animal breeding due to their ability to transmit infectious diseases and to induce direct toxic effects leading to clinical disturbances. Ornithodoros brasiliensis, popularly known as mouro tick, is a specie only found in highlands region of Rio Grande do Sul state, Southern Brazil. Since initial reports, O. brasiliensis is considered a potential public health hazard in Rio Grande do Sul state due to the possibility of human parasitism. In addition, few reports indicate that O. brasiliensis bite is able to induce severe local and systemic disturbances in humans and animals. This clinical profile possibly fits in the definition of tick toxicosis syndrome. After more than 50 years without reports about O. brasiliensis, new cases of human and animal parasitism were recently reported in the same region of its original description. This work aimed to describe the characteristics of O. brasiliensis parasitism, as well as the toxicosis observed in bitten hosts. Thus, we performed: (i) an epidemiological study about O. brasiliensis parasitism in farms located in the municipalities of São Francisco de Paula and Jaquirana (endemic region) to determine its prevalence and risk factors, and also, to describe the characteristics of its habitat; (ii) an analysis of retrospective cases of human and animal parasitism; (iii) the report of a clinical case of tick toxicosis in a dog naturally parasitized; (iv) a clinico-pathological characterization of the toxicosis induced in experimentally bitten rats; (v) the evaluation of salivary glands effects on skin wound healing. in vivo and upon endothelial cells. Specimens of O. brasiliensis were collected in 16.7% of sampled farms. Ticks were found near human houses and buried in sand. They were found in a very restricted area and in great density, in a kind of tick “nest”. Risk factor analysis showed that only two of the 17 studied variables (insufficient sanitary conditions and presence of house basement with sand floor) were significantly associated with an increased probability to find O. brasiliensis. Twenty-eight people and eleven bitten dogs were identified by analysis of retrospective cases. This analysis also showed the most common symptoms associated to parasitism (pruritus, erythema, edema, pain and slow healing lesion). Our results indicate that in addition to human and dogs, Conepatus chinga (hog-nosed skunk) and Dasypus hybridus (long nosed armadillo) may serve as potential hosts. The toxicosis syndrome induced by tick bite was characterized registering the clinical progress of a naturally bitten dog, and in experimentally infested rats. The clinical findings both in the dog and in rats were similar, and also were compatible with the symptoms reported by bitten humans. The set of all clinical findings evinced the clinical severity of this syndrome. Finally, it was shown that salivary gland extract inhibit in vivo wound healing, possibly due to inhibition of endothelial cell proliferation and cytotoxicity. This biological activity may explain one of the most common symptoms of O. brasiliensis bite: the induction of a slow healing lesion. The set of all results showed here gives new evidences for the understanding of habitat distribution, biology, ecology and peculiarities of O. brasiliensis, as well as for the clinical signs induced by its parasitism.

Muitos estudos têm demonstrado que extratos de Agaricus brasiliensis têm atividade citotóxica e antimutagênica, estes efeitos foram relacionados à β-glicana, um polissacarídeo constituinte de parede celular presente em um grande numero de organismos. No entanto, os mecanismos pelos quais este composto atua ainda não foram elucidados. O propósito deste trabalho foi identificar as possíveis vias de sinalização celular pelas quais a β-glicana induz os seus efeitos. Nós empregamos o inibidor da Proteína Cinase Ativada por Mitógeno p38 (MAPK p38) para avaliar a possível participação desta proteína de sinalização celular nas atividades citotóxica e antimutagênica da β-glicana. Os efeitos da β-glicana sobre a citotoxicidade (Sulforhodamine B – SRB – e thiazolyl blue tetrazolium bromide – MTT), antimutagênese (Micronúcleos), ciclo celular (Citometria de fluxo) e indução de apoptose (Vybrant® Apoptosis Assay Kit) foram verificados na linhagem celular H460 (Adenocarcinoma de efusões pleurais). Citotoxicidade foi observada com altas concentrações do polissacarídeo, porém estas concentrações não induziram a apoptose pelo ensaio Vybrant®. No entanto, as mesmas concentrações levaram a um grande acumulo de células em G2/M, indicando que a citotoxicidade da β-glicana resulta de sua capacidade de induzir a paradas de G2/M que podem inibir a proliferação celular. Por outro lado, concentrações não citotóxicas exibiram efeito antimutagênico, reduzindo o dano ao DNA induzido pelo MMS e permitindo a progressão do ciclo celular. Além disso, tanto a antimutagênese quanto a citotoxicidade da β-glicana foram inibidas pelo uso do inibidor da MAPK p38, demonstrando que estas duas diferentes atividades são dependentes de uma mesma via de sinalização celular. / Many studies have demonstrated that Agaricus brasiliensis has cytotoxic and antimutagenic activities; these effects were related to ß-glucan, a polysaccharide constituent of the cell wall present in a large number of organisms. However, the exact mechanisms by which ß-glucan acts are not yet elucidated. The purpose of this work was to better undestand the possible signaling pathways by which ß-glucan carries its effects. We employed a p38 Mitogen Activated Protein Kinase (p38 MAPK) inhibitor (SB 202190) to evaluate the possible involvement of this signaling protein in the antimutagenic and cytotoxic activities of ß-glucan. Its effects on cytotoxicity (Sulforhodamine B – SRB – e thiazolyl blue tetrazolium bromide – MTT), antimutagenesis (Micronucleus assay), cell cycle progression (Flow Cytometry) and apoptosis induction (Vybrant® Apoptosis Assay Kit) were evaluated in H460 (human, pleural effusion, adenocarcinoma) cell line. Cytotoxicity was only observed at high concentrations of the polysaccharide. These concentrations did not induce a significant induction of apoptosis. However, these same concentrations trigger a high G2/M arrest, indicating that cytotoxicity of ß-glucan in H460 results from its capacity to induce cell cycle arrest that could prevent cell proliferation. On the other hand, low concentrations showed antimutagenesis effect, reducing MMS-induced DNA damage and allowing cell cycle progression. Besides, both antimutagenesis and cytotoxicity were greatly abrogated by the use of p38MAPK inhibitor, showing that these different activities are dependent on the same signaling pathway.