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[en] DETERMINATION OF PLATINUM DERIVED FROM ANTI-CANCER DRUGS IN URINE SAMPLES BY ATOMIC ABSORPTION SPECTROMETRY / [pt] DETERMINAÇÃO DE PLATINA PROVENIENTE DE SUBSTÂNCIAS ANTINEOPLÁSICAS EM URINA POR GF AAS E HR-CS F AASANILTON COELHO COSTA JUNIOR 11 December 2007 (has links)
[pt] Devido à sua capacidade de inibição do processo de divisão
celular,
complexos de platina têm sido empregados na quimioterapia
do câncer desde o
final da década de 60, sendo a cisplatina e a carboplatina
as formas mais
utilizadas. Estudos farmacocinéticos e a estimativa da
quantidade de platina
acumulada no organismo durante o tratamento quimioterápico
ou devido à
exposição ao metal têm sido alvo de grande interesse.
Logo, são necessários
métodos analíticos adequados para o monitoramento de
platina em amostras
clínicas, apropriados para essas diferentes substâncias.
No presente trabalho,
foram desenvolvidos procedimentos analíticos rápidos,
simples e exatos para
determinação direta de platina, na forma de cisplatina e
carboplatina, em urina
humana, utilizando a espectrometria atômica. No caso da
absorção atômica em
forno de grafite, o programa de temperatura, o volume de
amostra e a
concentração do diluente (HNO3) foram definidos por um
planejamento
composto central. Nas condições otimizadas, os resultados
obtidos pelo
procedimento proposto não apresentaram diferenças
estatisticamente
significativas daqueles obtidos por procedimentos
comparativos independentes,
na análise de amostras de urina de paciente submetido ao
tratamento com
cisplatina. A calibração foi realizada por adição de
analito, com PtCl2. Com a
adição de NaCl ao meio diluente, os efeitos
multiplicativos de matriz puderam ser
contornados, permitindo a calibração externa com soluções
de calibração
preparadas no mesmo meio que o branco, utilizando sais
inorgânicos de platina.
Melhor sensibilidade também foi obtida, e recuperações de
98±4% foram
observadas para os vários níveis de concentração
estudados, assim como
coeficientes de variação de 1 a 10%, tanto para a cis como
para a carboplatina.
O limite de detecção (n=10, k=3) foi de 4 (mi)g L-1 de Pt
na amostra original. A
espectrometria de absorção atômica com fonte contínua de
alta resolução na
chama (HR-CS F AAS) também foi estudada. As condições da
chama foram
definidas por um planejamento multivariado D-optimal,
tomando-se como
resposta a soma dos coeficientes angulares das curvas de
adição de analito em
três urinas diferentes, assim como o desvio padrão
relativo dessas inclinações.
O limite de detecção foi de 55 Og L-1 (n=10, k=3), na
amostra original, em Pt,
cerca de uma ordem de grandeza melhor do que aquele obtido
utilizando-se um equipamento de fonte de linhas.
Calibração externa, com soluções de calibração
em urina livre de Pt, utilizando sal inorgânico de platina
(PtCl2), foi possível, e os
resultados obtidos por HR-CS F AAS não se mostraram
significativamente
diferentes daqueles encontrados por procedimentos
comparativos
independentes. / [en] Platinum coordination compounds have been used in cancer
chemotherapy
since the late 1960s. Cisplatin and carboplatin are the
most common platinum
based drugs used in cancer treatment. Pharmacokinetics
investigations, the
determination of the body burden during the treatment as
well as the baseline
levels of platinum in humans has attracted great interest.
Thus, accurate
analytical methods for fast and easy platinum monitoring
in clinical samples are
necessary. In the present work, atomic spectrometric
methods for the direct
determination of platinum as cisplatin and carboplatin in
human urine were
investigated. In relation to Graphite Furnace Atomic
Absorption Spectrometry the
optimum temperature program, sample volume and diluent
concentration were
defined by a central composite design optimization.
Analyte addition with PtCl2
was used for calibration, and no statistically significant
difference was observed
between the results obtained by the proposed and
comparative procedures in the
analysis of a set of urine samples. Multiplicative matrix
effects were overcome by
adding NaCl to the diluent solution. External calibration
with PtCl2 in blank
matched medium was then possible. The recoveries were
100±1%, and the
coefficient of variation ranged from 1 to 10%. The limit
of detection (LOD) was 4
ug L-1 of Pt in the original urine sample. High resolution
continuous source flame
atomic absorption spectrometry was also investigated. The
flame conditions were
optimized by a multivariate D-optimal design, taking as
response the sum of the
analyte addition calibration slopes and their standard
deviation. The LOD was 55
Og L-1 (n=10, k=3), in the original sample. Matrix matched
external calibration with
PtCl2, was possible, and the results obtained by the
proposed procedure were
also in good agreement with those obtained by independent
comparative
procedures.
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[en] DEVELOPMENT AND COMPARISON OF VOLTAMMETRIC METHODS FOR THE DETERMINATION OF CYCLOFENIL AND PRIMAQUINE IN PHARMACEUTICAL FORMULATIONS AND IN URINE / [pt] DESENVOLVIMENTO E COMPARAÇÃO DE MÉTODOS VOLTAMÉTRICOS PARA A DETERMINAÇÃO DE CICLOFENIL E PRIMAQUINA EM MEDICAMENTOS E EM URINAWAGNER FELIPPE PACHECO 13 July 2004 (has links)
[pt] Neste trabalho foram desenvolvidas metodologias
eletroanalíticas baseadas
na voltametria adsortiva de redissolução catódica com
varredura de potencial de
onda quadrada e de pulso diferencial para a determinação do
ciclofenil em urina e
em formulações farmacêuticas, e na voltametria anódica com
varredura de
potencial de onda quadrada e de pulso diferencial para a
determinação da
primaquina em formulações farmacêuticas. Comparando-se as
duas técnicas de
aquisição, a voltametria de onda quadrada foi escolhida
para realizar as
determinações do ciclofenil em urina e em formulação
farmacêutica por se
mostrar, além de uma técnica mais rápida, maior
sensíbilidade. Para a
determinação da primaquina a melhor técnica foi à
voltametria de pulso
diferencial.
As condições experimentais que possibilitaram um melhor
desempenho
analítico em termos da obtenção do menor limite de detecção
e maior
reprodutibilidade das leituras foram otimizados. No caso do
ciclofenil, o
composto mostrou ser instável no meio aquoso e orgânico
para determinação
voltamétrica, com sistemática diminuição da corrente
faradaica. Assim, fez-se uso
das propriedades eletroquímicas de um derivado estável
obtido pela derivatização
fotoquímica do composto (o composto foi irradiado com
irradiação UV por 45
minutos em um reator fotoquímico), a corrente máxima obtida
apresentou um
potencial a -1,28 V. As condições experimentais que
possibilitaram este sinal
foram obtidas com 30 s de tempo de deposição do analito
sobre o eletrodo de
mercúrio, solução Britton-Robbinson pH 9,0 como eletrólito
de suporte, potencial
de acumulação de -0,9 V, amplitude de 250 mV, incremento de
potencial de 2,0
mV no modo de onda quadrada.
Desta forma foi obtido limite de detecção da ordem de 10-8
mol L-1, faixa
linear dinâmica de 2 ordens de grandeza, condições estas
que possibilitaram a
determinação do composto tanto em formulações farmacêuticas
(Menopax)
como em amostra de urina enriquecida com o analito de
interesse. Foram feitos
testes com subtâncias concomitantes da formulação
farmacêutica e constatou-se
que não existia problema com interferência na análise nesse
tipo de amostra. Nas
determinações em urina não houve a necessidade de se fazer
tratamento prévio da
amostra, apenas a irradiação UV para estabilizar o
composto, as análises foram
realizadas com o método de adição de analito, de forma a se
corrigir a
interferência de matriz. Em ambos os casos os resultados
obtidos se encontram na
faixa de 93,6 a 106,5 por cento, dentro da faixa de recuperação
aceitável para este tipo de
problema analítico segundo estabelecido pela Farmacopéia
dos Estados Unidos da
América.
Usou-se ainda os resultados provenientes das voltametrias
de pulso
diferencial, de voltametria de onda quadrada e da
voltametria cíclica para se obter
informações sobre o processo redox que ocorria no eletrodo
de trabalho.
Constatou-se que a reação é reversível, com um processo de
controle adsortivo,
sendo que apenas o reagente adsorve no eletrodo de
trabalho, não ocorrendo
adsorção do produto da reação de redução. Constatou-se
também que o processo
envolve a transferência de apenas 1 elétron, e que a reação
não possuía
contribuição cinética.
No caso da primaquina o sinal de redução ocorre em região
anódica (0,592
V), foi portanto necessário utilizar um eletrodo de carbono
para se poder fazer a
determinação da primaquina. Visando a possibilidade do uso
do eletrodo de
mercúrio, tentou-se fazer uso da formação de derivados
complexos da primaquina
com vanádio, com cobre ou com íon iodeto (complexo de
tranferência de carga),
porém não foram observados sinal da reação redox na janela
de potencial
procurada. Nas condições experimentais otimizadas não se / [en] In this work, square-wave and differential pulse
voltammetric methods were
developed for the determination of cyclofenil and
primaquine in pharmaceutical
formulations and in urine samples. The use of the square-
wave acquisition
technique was found to enable better sensitivity and faster
analysis time compared
to the differential pulse technique.
Experimental and instrumental conditions were optimized to
allow the best
analytical performance in terms of limit of detection and
repeatability of the
readings. In the case of cyclofenil, its unstable behavior
in aqueous and organic
solvents, with systematic decreasing of analyte current
signal, makes impossible
any voltammetric determination. As an alternative way, the
electrochemical
properties of a stable photochemical derivative of
cyclofenil was used (the
compound was irradiated with UV radiation for 45 min) with
maximum current at
-1,28 V. This analyte photoderivative could also be
accumulated in the working
electrode. The experimental conditions that allowed the
maximum current was a
30 s of deposition time at the mercury electrode, Britton-
Robbinson (pH 9,0)
supporting electrolyte, accumulation potential of -0,9 V,
amplitude of pulse of
250 mV, scan increment 2,0 mV.
These optimized conditions allowed a limit of detection of
10-8 mol L-1 and
dynamic linear range of 2 orders of magnitude to be
achieved. These analytical
figures of merit made possible the determination of
cyclofenil either in a
pharmaceutical formulation (Menopax) and in urine samples
spiked with the
analyte of interest. The potential interferences from
concomitant substances used
in the pharmaceutical formulation were also evaluated. For
the analyte
determination in urine, only UV irradiation of sample was
necessary, in order to
obtain stable cyclofenil derivative. The analyte addition
method was used to
analyze urine in order to minimize matrix interferences.
Recovery results for the
analysis of Menopax and for the analysis of urine were
between 96,5 and 107,6
percent, within the acceptable recovery range established by the
United States
Pharmacopoeia.
Information concerning the analyte redox reaction and
electrode processes
was also obtained from differential pulse voltammetry,
square-wave voltammetry
and cyclic voltammetry. It was verified that the cyclofenil
photoderivative
eletrochemical reaction is reversible with adsorption of
only the reagent on the
surface of the electrode. The adsorption of the
electrochemical reduction product
does not occur. It was also verified that the process
involves the transference of
only one electron, and there is no kinetics contribution in
the reaction.
In the case of the primaquine the analyte reduction occurs
in anodic region
(0,592 V), therefore, it was necessary the use the carbon
glass electrode to allow
the determination of this analyte. The pre-concentration of
the analyte in the
working carbon glass electrode was also not attained with
the experimental
conditions used.
Several attempts were made to make possible the use of the
mercury
electrode, including the formation of charge transfer
complexes with iodine and
complexation with vanadium. However no success was obtained.
Using the carbon glassy electrode and DPV technique the
determination of
primaquine in pharmaceutical formulations and urine was
performed with average
recovery of 101.7 percent. Limit of detention of 1,0 x 10-6 mol L-
1 was obtained.
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[pt] DERRAME DE ÓLEO E SAÚDE HUMANA-METABÓLITOS DE HPAS EM URINA COMO TRAÇADORES DE EXPOSIÇÃO UTILIZANDO ESPECTROMETRIA DE MASSAS TANDEM / [en] OIL SPILLS AND HUMAN HEALTH - PAH METABOLITES IN URINE AS EXPOSURE TRACERS USING TANDEM MASS SPECTROMETRYLIVIA ARAUJO LOREDO 29 August 2023 (has links)
[pt] Um grande vazamento de óleo bruto ocorreu na costa brasileira em
2019 afetando uma extensão de 4.334 km de faixa litorânea, 11 estados e
várias localidades. Com isso, moradores locais entraram em contato direto
com óleo cru ficando expostos à contaminação por hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA). Os HPA são compostos orgânicos carcinogênicos
de origem petrogênica e pirogênica, que são ubíquos e persistentes.
Quando seres humanos são expostos a esses contaminantes, o organismo
pode metabolizar e gerar metabólitos desses HPA com prováveis efeitos
negativos à saúde humana. Com isso, este trabalho visou analisar a exposição de uma comunidade de pescadores (localizada em Canavierias, BA)
aos HPA provindos de derrames de petróleo através da análise de metabólitos de HPA em urina. Para isso, as 44 amostras foram extraídas por
extração em fase sólida (SPE) e analisadas por cromatografia líquida acoplada a espectrômetro de massas triplo quadrupolo (HPLC-MS/MS). Este
trabalho também contempla a comparação de diferentes métodos de extrações em 18 amostras de urina selecionadas. No Centro de Pesquisas, Desenvolvimento e Inovação Leopoldo Américo Miguez de Mello (CENPES)
realizou-se extração em fase sólida e a extração líquido-líquido, enquanto
na PUC-Rio foi realizada a extração por SPE. Os resultados referentes às
44 amostras analisada na PUC-Rio, demonstraram que 4 dos 11 metabólitos de interesse foram identificados e quantificados. Para o 1-OH-Nap a faixa de concentração foi (menor que LQ – 44 n mL(-1)
), (menor que LQ-21 ng mL(-1)
) para o 2-OHNap, (menor que LQ -5,4 ng mL(-1)
) para o 3,9-OH-Phe e (menor que LQ- 0,76 ng mL(-1)
) para o
6-OH-Chr. Ao comparar os resultados obtidos com trabalhos da literatura,
observou-se que os moradores da comunidade de Canavieiras apresentaram valores baixos de concentração dos metabólitos que foram quantificados. Mesmo assim, é importante a existência de trabalhos voltados para o
monitoramento destes compostos já que não somente o ambiente como
também apresentam-se como um risco à saúde humana. / [en] A major crude oil spill occurred off the coast of Brazil in 2019 affectinga 4,334 km stretch of coastline, 11 states and several localities. As a result,residents came into direct contact with crude oil and were exposed tocontamination by polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). PAHs arecarcinogenic organic compounds of petrogenic and pyrogenic origin, whichare ubiquitous and persistent. When humans are exposed to thesecontaminants, the organism can metabolize and generate metabolites ofthese PAHs with probable negative effects on human health. Therefore,this work aimed to analyze the exposure of a fishing community (located inCa-navierias, BA) to PAHs from oil spills through the analysis of PAHmetabolites in urine. For this, the 44 samples were extracted by solid phaseextraction (SPE) and analyzed by liquid chromatography coupled to triplequadrupole mass spectrometer (HPLC-MS/MS). This work also includes thecomparison of different extraction methods in 18 selected urine samples.Solid phase extraction and liquid-liquid extraction were performed at theLeopoldo Américo Miguez de Mello Research, Development and InnovationCenter (CENPES), while SPE extraction was performed at PUC-Rio. Theresults for the 44 samples analyzed at PUC-Rio showed that 4 of the 11metabolites of interest were identified and quantified. For 1-OH-Nap theconcentration range was (less than LQ - 44 n mL(-1)), (less than LQ-21 ng mL(-1)) for 2-OH-Nap,(less than LQ -5.4 ng mL(-1)) for 3,9-OH-Phe and (less than LQ- 0.76 ng mL(-1)) for 6-OH-Chr.When comparing the results obtained with literature works, it was observedthat the residents of the community of Canavieiras had low concentrationvalues of the metabolites that were quantified. Even so, it is important theexistence of works focused on the monitoring of these compounds since notonly the environment but also present themselves as a risk to human health.
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[en] DEVELOPMENT AND COMPARATIVE STUDY OF SPECTROFLUORIMETRIC AND VOLTAMMETRIC METHODOLOGIES FOR THE DETERMINATION OF THALIDOMIDE IN ONE COMMERCIAL FORMULATION, URINE AND BLOOD SERUM / [pt] DESENVOLVIMENTO E ESTUDO COMPARATIVO DE METODOLOGIAS ESPECTROFLUORIMÉTRICA E VOLTAMÉTRICA PARA A DETERMINAÇÃO DE TALIDOMIDA EM UM FÁRMACO, URINA E SORO SANGÜÍNEOCARLOS EDUARDO CARDOSO 21 July 2003 (has links)
[pt] No presente trabalho foram desenvolvidas duas metodologias
analíticas para a determinação de talidomida, um composto
de reconhecida importância farmacológica. As metodologias
espectrofluorimétrica e voltamétrica desenvolvidas foram
comparadas em termos de desempenho analítico.As
características fluorescentes e eletroquímicas da
talidomida foram estudadas para que se encontrassem
condições experimentais que fornecessem máximo sinal
fluorescente do analito em solução na temperatura ambiente e
possibilidade de pré-concentração do analito no eletrodo de
mercúrio.Nas condições experimentais otimizadas para a
talidomida, limites de detecção compreendidos entre 10-6 e
10-9 g L-1 foram obtidos para o método
espectrofluorimétrico e voltamétrico, respectivamente.
Faixas lineares dinâmicas entre 2 e 4 ordens de grandeza
foram alcançadas dependendo do método e do interferente
presente na amostra. Esses parâmetros de mérito se mostraram
adequados para o problema proposto. O possível efeito
interferente de substâncias geralmente usadas em
associação com o analito foi estudado, e estratégias para
minimização das interferências foram desenvolvidas.
Enquanto a tetraciclina não interferiu no método
espectrofluorimétrico, o uso combinado de meio ácido e
irradiação UV da amostra foi necessária para permitir a
quantificação do analito em presença de sulfanilamida. Na
voltametria, as interferências da tetraciclina e da
sulfanilamida puderam ser compensadas pelo uso da
quantificação pelo método de adição do analito.
Nas determinações dos fluídos biológicos, o uso da extração
em coluna de sílica C18 mostrou-se bastante eficiente na
separação do analito dos interferentes da matriz para o
método espectrofluorimétrico e para o voltamétrico, no caso
do soro sangüíneo. Para a urina, apenas a clarificação da
amostra com sulfato de amônio foi suficiente no caso da
determinação voltamétrica.Os métodos desenvolvidos foram
testados na dosagem de talidomida presente em uma
formulação comercial e em amostras de urina e soro sangüíneo
enriquecidas com o analito. Para tal, utilizaram-se os
procedimentos de curva de calibração (espectrofluorimetria)
e método da adição do analito (voltametria). Em todos os
casos, as recuperações obtidas estiveram compreendidas na
faixa de 96,5 a 107,6 %, dentro da faixa de recuperação
estabelecida pela Farmacopéia dos Estados Unidos da América. / [en] In the present work two analytical methodologies were
developed aiming the determination of thalidomide, an
important pharmacological compound. The developed
spectrofluorimetric and the voltammetric based analytical
methodologies were compared in terms of analytical
performance. The thalidomide fluorescent and the
electrochemical characteristics were studied in order to
find experimental conditions for maximum fluorescence in
solution and at room temperature and to allow analyte pre-
concentration on the mercury electrode. Using the optimized
experimental conditions, limits of detection between
10-6 to 10-9 g L-1 were achieved respectively for the
spectrofluorimetric method and for the voltammetric method.
Dynamic linear ranges between 2 and 4 orders of magnitude
were obtained depending on the method utilized and the
interferent substances present in the sample. Those
parameters of merit were suitable for this proposed
analytical problem. The potential interference effect from
substances usually used in association with thalidomide,
were studied and strategies for the minimization of such
interferences were developed. While no interference in the
spectrofluorimetric method was observed for tetracycline,
the combined use of acidic medium and UV irradiation of the
samples was necessary to allow the analyte determination in
the presence of sulfanilamide. For the voltammetric method,
interferences from tetracycline and sulfanilamide could be
compensated by quantifying thalidomide using the analyte
addition method. For the determination in biological
fluids, the use a solid-liquid extraction on a C18 column
was found to be very effective for the analyte separation
and elimination of matrix interferences for the
spectrofluorimetric method and for the voltammetric method
developed for blood serum. For urine samples, a clean-up
step using ammonium sulfate was found to be sufficient for
the voltammetric determination of thalidomide.
The developed methodologies were tested by determining the
thalidomide content in a commercial pharmaceutical
formulation and in analyte spiked biological fluids using
calibration curves (spectrofluorimetric) and analyte
addition method (voltammetric). In all cases, the
recoveries were between the 96,5 and 107,6 %, within the
recovery range considered adequate according to the
United States Pharmacopoeia.
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[en] MICELLAR LIQUID CHROMATOGRAPHY WITH FLUORIMETRIC DETECTION FOR THE DETERMINATION OF SIX B-CARBOLINE ALKALOIDS AND GALANTAMINE IN THE PRESENCE OF ITS MAJOR METABOLITES / [pt] DESENVOLVIMENTO DE MÉTODOS UTILIZANDO CROMATOGRAFIA LÍQUIDA MICELAR (MLC) COM DETECÇÃO FLUORIMÉTRICA PARA A DETERMINAÇÃO DE SEIS ALCALOIDES B-CARBOLINAS E PARA GALANTAMINA EM PRESENÇA DOS SEUS PRINCIPAIS METABÓLITOSANA PAULA LAMOUNIER 08 July 2016 (has links)
[pt] Métodos baseados na cromatografia líquida micelar (MLC) com detecção fluorimétrica foram desenvolvidos para dois estudos de caso. No primeiro deles, seis B-carbolinas (harmol, harmalol, harmane, norharmane, harmine e harmaline) foram plenamente separadas de modo a se aplicar o método para a determinação dos alcaloides em formulações de Passiflora incarnata L., extrato seco de Passiflora alata Dryander e em urina. A separação foi realizada em coluna cromatográfica C18, utilizando fase móvel tamponada (pH 8,0) contendo 220 mmol L-1 de dodecilsulfato de sódio (SDS)/acetonitrila (97/3 por cento v/v). A detecção fluorimétrica permitiu que se atingissem limites de detecção (LOD) abaixo de 3,6 ng g-1 com repetibilidade e precisão intermediária entre 0,1 e 5 por cento. As incertezas combinadas associadas à concentração das B-carbolinas ficaram entre 1 e 9 por cento. O método proposto foi comparado ao método baseado na cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) com detecção absorciométrica e os resultados com MLC se mostraram superiores do ponto de vista da capacidade de detecção (por serem os alcaloides naturalmente muito fluorescentes) e de recuperação. Para as amostras de fitoterápicos, o harmol foi quantificado tanto nas amostras de medicamento de Passiflora incarnata quanto em urina de voluntário após a administração de fitoterápico. O harmine foi detectado apenas na amostra de medicamento. Os alcaloides norharmane, harmine e harmaline foram identificados no chá misto de Maracujá, no qual continha em sua composição extrato seco de Passiflora alata Dryander. Na segunda abordagem, um método por MLC foi desenvolvido para a determinação de galantamina e de seus principais metabólitos (N-desmetil galantamina, O-desmetil galantamina, epigalantamina e N-óxido galantamina). A separação da galantamina e dos metabólitos foi feita utilizando coluna cromatográfica C18 com porosidade de 300 angstroms e fase móvel constituída de tampão (pH 5,0) contendo 25 mmol L-1 de SDS/acetonitrila (97/3 por cento v/v). A detecção fluorimétrica permitiu limites de detecção abaixo de 343 ng g-1,
repetibilidade e precisão intermediária entre 2,2 e 4 por cento. As incertezas combinadas associadas à concentração de galantamina e dos metabólitos ficaram entre 0,3 e 11 por cento. Ensaios de recuperação foram realizados em amostra de urina fortificada com padrões da galantamina e metabólitos e os resultados obtidos ficaram entre de 91,4 e 114,8 por cento. A comparação entre o método por MLC e o método por cromatografia líquida de alta eficiência com fase reversa foram feitas com amostras de medicamento cujo princípio ativo era o hidrobrometo de galantamina. Os resultados dos teores de galantamina e as variâncias das medidas obtidas por ambos os métodos foram estatisticamente iguais. A sensibilidade da curva analítica obtida por MLC foi duas vezes maior do que a encontrada por cromatografia por fase reversa. Análises de urina de ratos coletadas após a administração do medicamento foram realizadas com o método proposto, sendo que a galantamina mais os metabólitos N-óxido galantamina e N-desmetil galantamina foram identificados nas amostras. Para melhor avaliar o efeito de amplificação de fluorescência da galantamina pelo ambiente organizado, experimentos foram feitos com a separação cromatográfica de fase reversa e com a adição de solução rica em micelas de SDS após a passagem do analito pela coluna cromatográfica. As condições de separação incluíram o uso de coluna cromatográfica C18, fase móvel constituída por tampão (pH 5,0) contendo 2 por cento de propano-2-ol (v/v)/ acetonitrila (80/20 por cento v/v). A solução micelar de SDS (100 mmol L-1), misturada à fase móvel após a coluna cromatográfica, foi preparada com a mesma composição da fase móvel. A sensibilidade da curva analítica de galantamina foi três vezes maior quando o meio micelar foi usado. O resultado prova que o ambiente micelar favorece a medição fluorimétrica de galantam / [en] Methods based on micellar liquid chromatography (MLC) with fluorimetric detection have been developed for two case studies. In the first, six B-carbolines (harmol, harmalol, harmane, norharmane, harmine and harmaline) were fully separated allowing the application of the method for the determination of these alkaloids in Passiflora incarnata L. formulations, in Passiflora alata Dryander dry extract and in urine. The chromatographic separation was performed on a C18 column using a buffered mobile phase consisting of disodium hydrogen phosphate (pH 8.0) containing 220 mmol L-1 of sodium dodecyl sulfate (SDS)/acetonitrile (97/3 percent v/v). The fluorimetric detection allowed limits of detection (LOD) below than 3.6 ng g-1 to be achieved with intermediary precision and repeatability between 0.1 and 5 percent. The calculated combined uncertainties of the concentration of B-carbolines were between 1 and 9 percent. The proposed method was compared with the method based on micellar electrokinetic chromatography (MEKC) with absortionmetric detection. The MLC results were superior from the viewpoint of the detection power (since they are very fluorescent alkaloids) and also in terms of recovery. The harmol was quantified in Passiflora incarnata phitotherapic samples and in urine collected from a voluntary after of the administration of herbal medicine. The harmine was detected only in the phitotherapic sample. The norharmane, harmine and harmaline alkaloids were identified in Passion Fruit tea, which contained dry extract of Passiflora alata Dryander. In the second approach, a method for MLC was developed for the determination of galantamine and its main metabolites (N-demethyl galantamine, O-demethyl galantamine, epigalantamine and N-oxide galantamine). The separation was performed using a C18 chromatography column with porosity of 300 angstroms and with mobile phase consisting of buffer (pH 5.0) containing SDS (25 mmol L-1)/acetonitrile (97/3 percent v/v). The fluorimetric detection enabled LOD below 343 ng g-1 with intermediate precision and repeatability between 2.2 and 4 percent. Combined
uncertainties for concentration of galantamine and metabolites were between 0.3 and 11 percent. Recovery experiments were performed on urine samples fortified with galantamine standards and metabolites with results between 91.4 and 114.8 percent. A comparison between the proposed MLC method and reverse phase high performance liquid chromatography was made using medicine samples containing galantamine hydrobromide as the active principle. Galantamine levels and variances achieved with these methods were statistically equal. The analytical curve sensitivity by MLC was two times higher than that found with reverse phase high performance liquid chromatography. Analysis of rat urine, collected after the administration of the medicine, were performed with the proposed method enabling the identification of galantamine, N-oxide galantamine and N-demethyl galantamine. To better evaluate the fluorescence amplification effect of galantamine in the organized environment, experiments were made with conventional chromatographic separation and post-column addition of the aqueous solution rich in micelles. The separation conditions included the use of C18 chromatographic column, mobile phase consisting of buffer (pH 5.0) containing 2 percent of propan-2-ol (v/v)/acetonitrile (80/20 percent v/v). The micellar solution of SDS (100 mmol L-1), added after the chromatographic column, was prepared with the same composition of the mobile phase. The column temperature was 25 degrees C and the sample volume was 20 uL. The sensitivity of the analytical curve of galantamine was three times higher when the micellar solution was mixed, proving that the organized environment favors the galantamine fluorescence even at flow regime. Recoveries with or without post-column mixing with the micelle rich solution were between 97.5 and 102.2 percent.
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