A neuropatia autonômica que se manifesta em animais portadores de diabetes mellitus (DM) compromete vários órgãos. A nível gastrointestinal pode acarretar diarréia, constipação, estase e dilatação gástrica, levando a anorexia, perda de peso e vômito. Embora os mecanismos que desencadeiam esses distúrbios não estejam totalmente esclarecidos, parece que alterações do plexo mioentérico estão envolvidas. O estresse oxidativo juntamente com o aumento do sorbitol resultante das alterações metabólicas presentes no DM resultam em edema e lesão neuronal e, entre as conseqüências desta lesão, tem sido descrita alterações nos neurônios mioentéricos. O ácido ascórbico (AA) além da ação antioxidante pode reduzir a concentração de sorbitol atuando, desse modo, como neuroprotetor. O presente trabalho teve como objetivos investigar possíveis alterações no número e no tamanho dos neurônios mioentéricos NADH-diaforase reativos (NADH-dr) do estômago de ratos diabéticos e o efeito da suplementação com AA (1g/L de água) nos referidos parâmetros. Para tanto, 15 ratos (Rattus norvegicus) foram separados em três grupos (n = 5): controle (C); diabético (D); e diabético suplementado com AA (DS). O DM foi induzido por estreptozootocina (35 mg/kg de peso corporal). Após 120 dias de experimento, os animais foram anestesiados, sacrificados e seus estômagos retirados. Os neurônios mioentéricos foram evidenciados pelo método da NADH-diaforase. Por meio de microscópio de luz foram contados os neurônios NADH-dr e, pelo programa computadorizado para análise de imagens, foi mensurado o perfil do corpo celular (PCC) desses neurônios. As regiões aglandular e glandular do estômago foram analisadas separadamente. O número de neurônios NADH-dr foi maior (P<0,05) na região glandular do grupo DS quando comparado com o grupo D. A média dos PCCs foi maior (P<0,05) para os neurônios dos grupos D e DS do que para o grupo C. Ocorreu aumento na incidência de neurônios com PCC superior a 200 &micro;m2 no grupo D quando comparada aos grupos DS e C. Os resultados sugerem que a suplementação com AA teve efeito neuroprotetor sobre os neurônios mioentéricos NADH-dr representado pelo aumento no número de neurônios e diminuição de neurônios grandes na região glandular do grupo DS. / The autonomous neuropathy present in animals with diabetes mellitus (DM) compromises several organic systems. On the gastrointestinal tract it may provoke diarrhea, constipation, estase and gastric dilation, leading to anorexia, weight loss and vomit. Although the triggering mechanisms of these disturbances are not completely clear, it seems that alterations of the myenteric plexus may be involved. The oxidizing stress - together with the sorbitol increase resulting from the metabolic alterations due to dm - results in an edema and in a neuronal lesion. Among the consequences of this lesion, alterations in the myenteric neurons have been described. The ascorbic acid (AA), besides its antioxidant effect, may also reduce the sorbitol concentration working as a neuroprotector. The aims of the present work were to investigate the possible alterations in the number and size of nadh-dr stained myenteric neurons of the stomach of diabetic rats and the effect of the aa-supplementation (1g/l of water). In order to do so, 15 rats (rattus norvegicus) were divided into three groups (n = 5): controls (C); diabetic (D); and diabetic supplemented with AA (DS). DM was induced by streptozotocin (35 mg/kg of body weight). 120 days later, the animals were sacrificed for obtaining their stomachs. The myentric neurons were stained employing the nadh-diaforase method. We counted the nadh-dr neurons employing the light microscope and we measured the cellular body profile (CBP) using an image analysis software. The aglandular and glandular areas of the stomach were analyzed separately. The number of neurons nadh-dr was larger (p <0,05) in the glandular area of group ds when compared to group d. The average of cbps was larger (p <0,05) for neurons of groups d and ds than for group c. There was an increase in the incidence of neurons with cbps over 200 mm2 in group D when compared to groups DS and C. The results suggest that the AA supplementation had a neuroprotetor effect on the nadh-dr myenteric neurons represented by the increase in the number of neurons and the decrease of big neurons in the glandular area of group DS.

A neuropatia autonômica que se manifesta em animais portadores de diabetes mellitus (DM) compromete vários órgãos. A nível gastrointestinal pode acarretar diarréia, constipação, estase e dilatação gástrica, levando a anorexia, perda de peso e vômito. Embora os mecanismos que desencadeiam esses distúrbios não estejam totalmente esclarecidos, parece que alterações do plexo mioentérico estão envolvidas. O estresse oxidativo juntamente com o aumento do sorbitol resultante das alterações metabólicas presentes no DM resultam em edema e lesão neuronal e, entre as conseqüências desta lesão, tem sido descrita alterações nos neurônios mioentéricos. O ácido ascórbico (AA) além da ação antioxidante pode reduzir a concentração de sorbitol atuando, desse modo, como neuroprotetor. O presente trabalho teve como objetivos investigar possíveis alterações no número e no tamanho dos neurônios mioentéricos NADH-diaforase reativos (NADH-dr) do estômago de ratos diabéticos e o efeito da suplementação com AA (1g/L de água) nos referidos parâmetros. Para tanto, 15 ratos (Rattus norvegicus) foram separados em três grupos (n = 5): controle (C); diabético (D); e diabético suplementado com AA (DS). O DM foi induzido por estreptozootocina (35 mg/kg de peso corporal). Após 120 dias de experimento, os animais foram anestesiados, sacrificados e seus estômagos retirados. Os neurônios mioentéricos foram evidenciados pelo método da NADH-diaforase. Por meio de microscópio de luz foram contados os neurônios NADH-dr e, pelo programa computadorizado para análise de imagens, foi mensurado o perfil do corpo celular (PCC) desses neurônios. As regiões aglandular e glandular do estômago foram analisadas separadamente. O número de neurônios NADH-dr foi maior (P<0,05) na região glandular do grupo DS quando comparado com o grupo D. A média dos PCCs foi maior (P<0,05) para os neurônios dos grupos D e DS do que para o grupo C. Ocorreu aumento na incidência de neurônios com PCC superior a 200 &micro;m2 no grupo D quando comparada aos grupos DS e C. Os resultados sugerem que a suplementação com AA teve efeito neuroprotetor sobre os neurônios mioentéricos NADH-dr representado pelo aumento no número de neurônios e diminuição de neurônios grandes na região glandular do grupo DS. / The autonomous neuropathy present in animals with diabetes mellitus (DM) compromises several organic systems. On the gastrointestinal tract it may provoke diarrhea, constipation, estase and gastric dilation, leading to anorexia, weight loss and vomit. Although the triggering mechanisms of these disturbances are not completely clear, it seems that alterations of the myenteric plexus may be involved. The oxidizing stress - together with the sorbitol increase resulting from the metabolic alterations due to dm - results in an edema and in a neuronal lesion. Among the consequences of this lesion, alterations in the myenteric neurons have been described. The ascorbic acid (AA), besides its antioxidant effect, may also reduce the sorbitol concentration working as a neuroprotector. The aims of the present work were to investigate the possible alterations in the number and size of nadh-dr stained myenteric neurons of the stomach of diabetic rats and the effect of the aa-supplementation (1g/l of water). In order to do so, 15 rats (rattus norvegicus) were divided into three groups (n = 5): controls (C); diabetic (D); and diabetic supplemented with AA (DS). DM was induced by streptozotocin (35 mg/kg of body weight). 120 days later, the animals were sacrificed for obtaining their stomachs. The myentric neurons were stained employing the nadh-diaforase method. We counted the nadh-dr neurons employing the light microscope and we measured the cellular body profile (CBP) using an image analysis software. The aglandular and glandular areas of the stomach were analyzed separately. The number of neurons nadh-dr was larger (p <0,05) in the glandular area of group ds when compared to group d. The average of cbps was larger (p <0,05) for neurons of groups d and ds than for group c. There was an increase in the incidence of neurons with cbps over 200 mm2 in group D when compared to groups DS and C. The results suggest that the AA supplementation had a neuroprotetor effect on the nadh-dr myenteric neurons represented by the increase in the number of neurons and the decrease of big neurons in the glandular area of group DS.

A partição e purificação de ascorbato oxidase de abóbora (Cucurbita maxima) por extração líquido-líquido em sistema de duas fases aquosas (SDFA), pelos processos descontínuos e contínuos, utilizando coluna de discos rotativos perfurados (PRDC), foram estudadas. Foram utilizados planejamentos estatísticos para selecionar as variáveis significativas no processo descontínuo de purificação, e as variáveis estudadas foram massa molar e concentração do polietileno glicol (PEG), concentração de citrato, pH, concentração de NaCl, fator de diluição e massa total do sistema. Os melhores resultados (coeficiente de partição 1,72, recuperação 90,8% e aumento de pureza 3,12) foram obtidos nas seguintes condições: massa molar do PEG 20000 (g/mol), pH 6,0, concentração de PEG 25% (m/m) e concentração de citrato 10% (m/m). No valor de pH 6,0 e temperatura 35°C a ascorbato oxidase apresentou seus maiores valores de atividade, e manteve a estabilidade na faixa de pH 5,0 a 9,0 durante 36 horas e a temperaturas de até 40°C durante 1 hora. Experimentos também foram realizados para estimar as principais propriedades cinéticas e termodinâmicas da atividade e estabilidade da ascorbato oxidase, e esse estudo revelou que a enzima foi estável nas condições testadas. A PRDC mostrou um bom desempenho para extração da ascorbato oxidase em modo contínuo utilizando SDFA. A melhor condição operacional selecionada neste estudo foi selecionada com o auxílio de planejamentos estatísticos, sendo selecionadas as seguintes condições: massa molar do PEG 20000 (g/mol), concentração de PEG 20% (m/m), concentração de citrato 10% (m/m), velocidade de rotação dos discos de 80 rpm e velocidade da fase dispersa de 2 mL/min. Os melhores resultados em valores médios foram: coeficiente de partição 3,36, recuperação 152%, aumento de pureza 2,31, coeficiente de transferência de massa 0,045, eficiência de separação 43,7% e hold up 0,33. Os dados experimentais demonstram o potencial da aplicação do sistema de duas fases aquosas PEG/citrato para purificar a ascorbato oxidase utilizando coluna de discos rotativos perfurados. / The partition and purification of ascorbate oxidase from pumpkin (Cucurbita maxima) by liquid-liquid extraction in aqueous two-phase system (ATPS) by discontinuous and continuous process, using perforated rotating disc contactor (PRDC) was studied. Experimental designs were used to choose the significant variables for discontinuous process, and polyethylene glycol (PEG) molar mass and concentration, citrate concentration, pH, NaCl concentration, dilution factor and total mass of the system, were the variables studied. The better results (partition coefficient 1.72, recovery 90.8% and purification factor 3.12) were obtained with following conditions: PEG molar mass of 20000 g/mol, pH 6.0, PEG concentration of 25% (w/w) and citrate concentration of 10% (w/w). In the pH 6.0 and temperature of 35?C the ascorbate oxidase showed their high activity values and the enzyme was stable in the pH range of 5.0 to 9.0 during 36 hours and temperatures up to 40?C for 1 hour. Experiments were also conducted to estimate the main kinetic and thermodynamic properties of ascorbate oxidase activity and stability, and this study revealed the interesting stability of this enzyme. The PRDC showed a good performance for extracting in continuous mode using aqueous two-phase systems. The best operating condition was selected in this study for the extraction of ascorbate oxidase in the PRDC, and it was obtained with PEG molar mass of 20000 g/mol, PEG concentration of 20% (w/w) and citrate concentration of 10% (w/w), the disc rotational speed of 80 rpm and dispersed phase flowrate of 2 mL/min. The results in mean values were: partition coefficient 3.36, recovery 152%, purification factor 2.31, mass transfer coefficient 0.045, separation efficiency 43.7% and Hold up 0.33. The experimental data showed the potential application of aqueous two-phase systems PEG/citrate to purification ascorbate oxidase using perforated rotating disc contactor.

A partição e purificação de ascorbato oxidase de abóbora (Cucurbita maxima) por extração líquido-líquido em sistema de duas fases aquosas (SDFA), pelos processos descontínuos e contínuos, utilizando coluna de discos rotativos perfurados (PRDC), foram estudadas. Foram utilizados planejamentos estatísticos para selecionar as variáveis significativas no processo descontínuo de purificação, e as variáveis estudadas foram massa molar e concentração do polietileno glicol (PEG), concentração de citrato, pH, concentração de NaCl, fator de diluição e massa total do sistema. Os melhores resultados (coeficiente de partição 1,72, recuperação 90,8% e aumento de pureza 3,12) foram obtidos nas seguintes condições: massa molar do PEG 20000 (g/mol), pH 6,0, concentração de PEG 25% (m/m) e concentração de citrato 10% (m/m). No valor de pH 6,0 e temperatura 35°C a ascorbato oxidase apresentou seus maiores valores de atividade, e manteve a estabilidade na faixa de pH 5,0 a 9,0 durante 36 horas e a temperaturas de até 40°C durante 1 hora. Experimentos também foram realizados para estimar as principais propriedades cinéticas e termodinâmicas da atividade e estabilidade da ascorbato oxidase, e esse estudo revelou que a enzima foi estável nas condições testadas. A PRDC mostrou um bom desempenho para extração da ascorbato oxidase em modo contínuo utilizando SDFA. A melhor condição operacional selecionada neste estudo foi selecionada com o auxílio de planejamentos estatísticos, sendo selecionadas as seguintes condições: massa molar do PEG 20000 (g/mol), concentração de PEG 20% (m/m), concentração de citrato 10% (m/m), velocidade de rotação dos discos de 80 rpm e velocidade da fase dispersa de 2 mL/min. Os melhores resultados em valores médios foram: coeficiente de partição 3,36, recuperação 152%, aumento de pureza 2,31, coeficiente de transferência de massa 0,045, eficiência de separação 43,7% e hold up 0,33. Os dados experimentais demonstram o potencial da aplicação do sistema de duas fases aquosas PEG/citrato para purificar a ascorbato oxidase utilizando coluna de discos rotativos perfurados. / The partition and purification of ascorbate oxidase from pumpkin (Cucurbita maxima) by liquid-liquid extraction in aqueous two-phase system (ATPS) by discontinuous and continuous process, using perforated rotating disc contactor (PRDC) was studied. Experimental designs were used to choose the significant variables for discontinuous process, and polyethylene glycol (PEG) molar mass and concentration, citrate concentration, pH, NaCl concentration, dilution factor and total mass of the system, were the variables studied. The better results (partition coefficient 1.72, recovery 90.8% and purification factor 3.12) were obtained with following conditions: PEG molar mass of 20000 g/mol, pH 6.0, PEG concentration of 25% (w/w) and citrate concentration of 10% (w/w). In the pH 6.0 and temperature of 35?C the ascorbate oxidase showed their high activity values and the enzyme was stable in the pH range of 5.0 to 9.0 during 36 hours and temperatures up to 40?C for 1 hour. Experiments were also conducted to estimate the main kinetic and thermodynamic properties of ascorbate oxidase activity and stability, and this study revealed the interesting stability of this enzyme. The PRDC showed a good performance for extracting in continuous mode using aqueous two-phase systems. The best operating condition was selected in this study for the extraction of ascorbate oxidase in the PRDC, and it was obtained with PEG molar mass of 20000 g/mol, PEG concentration of 20% (w/w) and citrate concentration of 10% (w/w), the disc rotational speed of 80 rpm and dispersed phase flowrate of 2 mL/min. The results in mean values were: partition coefficient 3.36, recovery 152%, purification factor 2.31, mass transfer coefficient 0.045, separation efficiency 43.7% and Hold up 0.33. The experimental data showed the potential application of aqueous two-phase systems PEG/citrate to purification ascorbate oxidase using perforated rotating disc contactor.