Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-25T20:08:15Z No. of bitstreams: 1 Tese - Joelma M Alcântara.pdf: 5002740 bytes, checksum: e3d00764f38c58fe29393cd15071a051 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-25T20:08:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Joelma M Alcântara.pdf: 5002740 bytes, checksum: e3d00764f38c58fe29393cd15071a051 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-25T20:08:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Joelma M Alcântara.pdf: 5002740 bytes, checksum: e3d00764f38c58fe29393cd15071a051 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T20:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Joelma M Alcântara.pdf: 5002740 bytes, checksum: e3d00764f38c58fe29393cd15071a051 (MD5) Previous issue date: 2015-08-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Species of the Annonaceae family, characterized by the presence of alkaloids, diterpenoids and acetogenins, are also known for their essential oils that have as main constituents caryophyllene oxide, -caryophyllene, spathulenol, germacrene D and bicyclogermacrene. These essential oils have different biological activities, including antileishmaniasis, antimicrobial, anti-inflammatory and antinociceptives effects. Several members of this family are of great importance in popular medicine; however, the number of species that have been examining is extremely low, about 10% of the 2400 existing species. In order to minimize the lack of chemical and biological studies of this family and considering chemical and pharmacological potential, this work aims to study of the chemical composition and the therapeutic potential of essential oils of Amazonian species. For this study were selected 19 species belonging to the genera Anaxagorea (1), Annona (4), Bocageopsis (1), Ephedranthus (1), Guatteria (8), Unonopsis (2) and Xylopia (2) collected in the Campus of INPA and/ or UFAM. The essential oils from leaves, branches and fruits were obtained by hydrodistillation and analyzed for their chemical compositions by GC-FID, GC-MS and 1H and 13C NMR. Caryophyllene oxide was the major constituent of most oils: leaves of Annona insignis (35.4%), Guatteria blepharophylla (55.7%), G. foliosa (33.7%), G. olivacea (31.2% and 18.5%), G. scytophylla (21.4%) and the branches of G. blepharophylla (51.0%); followed by spathulenol in leaves of Anaxagorea brevipes (19.1%), Bocageopsis multiflora (20.3%), Ephedranthus amazonicus (16.9%), G. schomburgkiana (19.7%), Unonopsis stipitata (26.8%) and Xylopia aromatica (21.5%). Other major constituents were β-caryophyllene (14.7% in the leaves of A. amazonica and 22.2% in the leaves of A. exsucca collected in the INPA), ar-curcumene (33.7% in the leaves and 10.0% in the branches of G. guianensis), exo-2-norborneol acetate (10.3% in the branches of B. multiflora), elemicin (71.9% in the branches of U. guatterioides), 1-epi-cubenol (12.7% in the branches of G. scytophylla), selin-11-en-4α-ol (50.0% in the leaves of U. guatterioides), β-eudesmol (8.2% in the leaves of G. friesiana), linalool (11.4% in the branches of A. amazonica), γ-muurolene (20.2% in the leaves of A. exsucca collected in the UFAM), (Z)-nerolidol (38.2% in the fruits of A. mucosa), α-pinene (13.3% in the fruits of X. aromatica) and β-pinene (20.2% in the leaves of G. hispida and 15.8% in the leaves of X. benthamii). Considering that most of the major constituents of essential oils have proven cytotoxic in tumor cell and antimicrobial activities, essential oils were subjected to these two pharmacological tests. The essential oils more cytotoxic by cell viability assay were of the leaves of E. amazonicus, G. blepharophylla and G. friesiana. The antimicrobial activity by microdilution method for Gram-positive bacteria was significant, but for Gram-negative bacteria was weak compared to the positive control. This work presents the unpublished study of the chemical composition of fifteen essential oils. / As espécies da família Annonaceae, caracterizadas pela presença de alcaloides, diterpenoides e acetogeninas, são conhecidas também por seus óleos essenciais que possuem como principais constituintes o óxido de cariofileno, -cariofileno, espatulenol, germacreno D e biciclogermacreno. Estes óleos essenciais apresentam diversas atividades biológicas, entre elas a atividade antileishmaniose, antimicrobiana, anti-inflamatória e efeitos antinociceptivos. Vários membros dessa família são de grande importância na medicina popular, no entanto, o número de espécies que têm sido investigadas é extremamente reduzido, cerca de 10% das 2400 espécies existentes. Visando minimizar a carência de estudos químicos e biológicos desta família e considerando a sua potencialidade químico-farmacológica, este trabalho tem por objetivo o estudo da composição química e do potencial terapêutico dos óleos essenciais de espécies amazônicas. Assim, foram selecionadas para esse estudo, 19 espécies pertencentes aos gêneros Anaxagorea (1), Annona (4), Bocageopsis (1), Ephedranthus (1), Guatteria (8), Unonopsis (2) e Xylopia (2) coletadas no Campus do INPA e/ou UFAM. Os óleos essenciais das folhas, galhos e frutos, obtidos através da hidrodestilação, foram analisados quanto as suas composições químicas por CG-DIC, CG-EM e RMN de 1H e 13C. O óxido de cariofileno foi o constituinte majoritário da maioria dos óleos: folhas de Annona insignis (35,4%), Guatteria blepharophylla (55,7%), G. foliosa (33,7%), G. olivacea (31,2% e 18,5%), G. scytophylla (21,4%) e nos galhos de G. blepharophylla (51,0%); seguido de espatulenol presente nas folhas de Anaxagorea brevipes (19,1%), Bocageopsis multiflora (20,3%), Ephedranthus amazonicus (16,9%), G. schomburgkiana (19,7%), Unonopsis stipitata (26,8%) e Xylopia aromatica (21,5%). Outros constituintes majoritários foram β-cariofileno (14,7% nas folhas de A. amazonica e 22,2% nas folhas de A. exsucca coletada no INPA), ar-curcumeno (33,7% nas folhas e 10,0% nos galhos de G. guianensis), acetato de exo-2-norborneol (10,3% nos galhos de B. multiflora), elemicina (71,9% nos galhos de U. guatterioides), 1-epi-cubenol (12,7% nos galhos de G. scytophylla), selin-11-en-4α-ol (50% nas folhas de U. guatterioides), β-eudesmol (8,2% nas folhas de G. friesiana), linalol (11,4% nos galhos de A. amazonica), γ-muroleno (20,2% nas folhas de A. exsucca coletada na UFAM), (Z)-nerolidol (38,2% nos frutos de A. mucosa), α-pineno (13,3% nos frutos de X. aromatica) e β-pineno (20,2% nas folhas de G. hispida e 15,8% nas folhas de X. benthamii). Tendo em vista que a maioria dos constituintes majoritários destes óleos possuem atividade citotóxica em células tumorais e antimicrobianas comprovadas, os óleos essenciais foram submetidos a estes dois ensaios farmacológicos. Os óleos essenciais mais citotóxicos pelo ensaio de viabilidade celular foram os das folhas de E. amazonicus, G. blepharophylla e G. friesiana. Para as bactérias Gram-positivas a atividade antimicrobiana foi expressiva, porém frente as bactérias Gram-negativas a atividade foi fraca comparada com o controle positivo, pelo método de microdiluição. Este trabalho apresenta o estudo inédito da composição química de quinze óleos essenciais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work was designed to isolate the active compounds responsible for the central activity detected for the essential oil of Aloysia gratissima (EOA) in silver catfish (Rhamdia quelen). The AChE (acetylcholiesterase) activity under the influence of EOA was also investigated. Silver catfish were submitted to anesthesia bath with EOA (90, 300, 450 or 900 mg L-1), their fractions and isolated compounds to determine time of anesthetic induction and recovery. Eugenol (50 mg L-1) was used as positive control. EOA was effective as anesthetic at concentrations of 300 to 900 mg L-1. However, silver catfish presented involuntary muscle contractions during induction and recovery. AChE activity was not inhibited by EOA. The bio-guided fractionation of EOA furnished E-(-)-pinocamphone, (-)-caryophyllene oxide, (-)- guaiol and (+)-spathulenol, which were identified by mass spectrometry (MS), 1H- and 13CNMR. E-(-)-pinocamphone caused the same side effects observed to the EOA. (-)- Caryophyllene oxide, (-)-guaiol and (+)-spathulenol showed only sedative effects at concentrations proportional to those of the constituents in EOA. (-)-Caryophyllene oxide was also sedative in higher concentration (40 mg L-1) than present in EOA while (+)-spathulenol (51.2 mg L-1) promoted deep anesthesia without side effects. EOA showed anesthetic properties, however, should be used with caution in silver catfish due to observed side effects. A higher concentration of (+)-spathulenol, and lower or absent amounts of E-(-)- pinocamphone could contribute to improve the activity of the EO of A. gratissima. (+)- Spathulenol showed potent sedative and anesthetic activities in silver catfish, and could be considered as a promising anesthetic compound. / Este trabalho foi desenvolvido visando isolar os compostos ativos responsáveis pela atividade anestésica detectada para o óleo essencial de Aloysia gratissima (OEA) em jundiás (Rhamdia quelen). A atividade da acetilcolinesterase (AChE) sob a influência do OEA também foi investigada. Jundiás foram submetidos a banho de anestesia com OEA (90, 300, 450 ou 900 mg L-1), suas frações e compostos isolados, a fim de determinar o tempo de indução e recuperação anestésica. Eugenol (50 mg L-1) foi utilizado como controle positivo. OEA foi eficaz como anestésico nas concentrações de 300 a 900 mg L-1. No entanto, os jundiás apresentaram contrações musculares involuntárias durante a indução e recuperação. Atividade da AChE não foi alterada pelo OEA. O fracionamento bio-guiado do OEA forneceu E-(-)-pinocafona, (-)-óxido de cariofileno, (-)-guaiol e (+)-espatulenol, os quais foram identificados por espectrometria de massas (EM), 1H e 13C-RMN. E-(-)-pinocafona causou os mesmos efeitos adversos observados para o OEA. (-)-Óxido de cariofileno, (-)-guaiol e (+)- espatulenol apresentaram apenas efeitos sedativos em concentrações proporcionais às dos constituintes no OEA. (-)-Óxido de cariofileno também foi sedativo em maior concentração (40 mg L-1) que a presente no OEA, enquanto (+)-espatulenol (51,2 mg L-1) promoveu anestesia profunda, sem efeitos adversos. OEA apresentou propriedades anestésicas, no entanto, deve ser utilizado com cuidado em jundiás devido aos efeitos adversos observados. Uma maior concentração de (+)-espatulenol, e menor quantidade ou ausência de E-(-)- pinocafona poderiam contribuir para melhorar a atividade do OE de A. gratissima. (+)- Espatulenol apresentou potente atividade sedativa e anestésica em jundiás, e pode ser considerado um composto anestésico promissor.

Species belonging to the Asteraceae family are an important source of terpenoids with biological activity. Senecio bonariensis Hook. et Arn., popularly known as margarida-do-banhado-de-Buenos Aires is native from South America and can be found in south Brazil, blooming from October to December. This plant is known for contain furanoeremophylanes, steroids and pyrrolizidines alkaloids (PAs) with toxic activities. This work describes the isolation and identification of three compounds present in the CH2Cl2 extract of the aerial parts of Senecio bonariensis Hook at Arn. Leaves of this plant were collected in Eldorado do Sul, RS, Brazil, in April 2004 and identified by Prof. Dr. Nelson Ivo Matzenbacher. Voucher specimen Nº SMDB 9519 is preserved in the Herbarium of the Departamento de Botânica, Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria, RS, Brazil. The fresh leaves of S. bonariensis (2.3 kg) were extracted by maceration with CH2Cl2. The CH2Cl2 extract was evaporated under vacuum to yield an viscous residue (13.5 g), which gave a yield of 0.64%. The crude extract was fractionated by flash chromatography over silica-gel, using CH2Cl2, and CH2Cl2: EtOH mixture of increasing polarity, (stepwise, 99:1 to 80:20) to yield 15 fractions. The fraction 1 col. 1 (1 g) was chromatographed over silica-gel impregnated with AgNO3 (10%) eluting with hexane-acetone (99:1), to yield 13 news fractions. Fraction 10 col. 2 (253 mg) was chromatographed on silica-gel impregnated with AgNO3 (10%), eluting with hexane: ethyl ether (95:5) and purified to afford 104 mg of CS1 (caryophyllene) and 16 mg of CS2 (caryophyllene oxide). Fraction 11 col. 2 (83.5 mg) was also chromatographed on silica-gel impregnated with AgNO3 (10%), eluting with hexane: ethyl ether (98:2) and purified to afford 5 mg of CS3 (germacrene-D). The compounds obtained were analyzed by GC-EI-MS, IR, 1H and 13C NMR. The antimicrobial activity of CS1 and CS2 were evaluated by the microdilution method based on M27-A2 and M7-A4 (NCCLS). Both compounds sowed no antimicrobial activity at the tested concentrations. / Espécies pertencentes à família Asteraceae, são uma importante fonte de terpenóides com várias atividades biológicas já descritas. Senecio bonariensis Hook. et Arn., popularmente conhecida como margarida-do-banhado-de-Buenos Aires é um arbusto nativo da América do Sul, que pode ser encontrado no sul do Brasil e floresce de outubro a dezembro. Esta planta é conhecida por apresentar furanoeremofilanos, esteróides e alcalóides pirrolizidínicos, com atividades tóxicas. Este trabalho descreve o isolamento e identificação de três constituintes químicos presentes no extrato CH2Cl2 das partes aéreas de Senecio bonariensis Hook. et Arn. As folhas de S. bonariensis foram coletadas em abril de 2004, no município de Eldorado do Sul-RS. A espécie foi localizada e identificada pelo Prof. Dr. Nelson Ivo Matzenbacher, do Programa de Pós Graduação em Botânica da UFRGS. Material testemunha encontra-se depositado no Herbário do Departamento de Biologia da UFSM sob o registro n° SMDB 9519. As folhas frescas de S. bonariensis (2,3 kg) foram extraídas por maceração com CH2Cl2. O extrato bruto foi evaporado sob pressão reduzida, resultando num resíduo pastoso (13,5 g), com rendimento de 0,64%. O extrato bruto foi fracionado por cromatografia em coluna do tipo flash sobre gel de sílica, usando CH2Cl2 e misturas de CH2Cl2 : EtOH, em gradiente, nas proporções de 99:1 até 80:20, sendo obtidas 15 frações (1 a 15 col. 1). A fração 1 col. 1 (1g) foi cromatografada sobre gel de sílica impregnado com AgNO3 (10%), eluída com hexano: acetona (99:1), obtendo-se 13 novas frações (1 a 13 col. 2). A fração 10 col. 2 (253 mg) foi cromatografada sobre gel de sílica impregnado com AgNO3 (10%), eluída com hexano:éter etílico (95:5), obtendo-se 104 mg de CS1(cariofileno) e 16 mg de CS2 (óxido de cariofileno). A fração 11 col. 2 (83,5 mg) também foi cromatografada sobre gel de sílica impregnado com AgNO3 (10%), eluída com hexano:éter etílico (98:2) e forneceu 5 mg de CS (germacreno-D). Os compostos isolados foram analisados por CG-EM-IE, IV, RMN 1H e RMN 13C e seus dados espectroscópicos foram comparados com os obtidos da literatura. Além disso, foi determinada a atividade antimicrobiana do cariofileno e do óxido de cariofileno, através do método de microdiluição em caldo, baseado nos documentos M27-A2/NCCLS para fungos e M7-A4/NCCLS para bactérias. Os compostos não apresentaram atividade antimicrobiana nas concentrações testadas.