Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-10-10T21:54:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-13T20:44:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-13T20:44:05Z (GMT). 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In Chapter 1 T. asperellum isolate T00, known to produce high levels of cell wall degrading enzymes, has its β-1,3-glucanases enzymes and genes (tag83 and tag27) studied. The gene tag27 was cloned and characterized and codes to an 27kDa endo-β-1,3glucanase with and 285 aminoacids and 96% similar to a glucanases from T.atroviride. The enzyme was detected when T. asperellum was grown in Rhizoctonia solani or Sclerotinia sclerotiorum cell wall-containing media but not in Fusarium oxysporum cell wall-containing media. The tag83 and tag27 genes was repressed in media containing glucose as carbon source and upregulated in cell wall containing media and during plate confrontation tests with pathogenic fungi. Chapter 2 shows T. harzianum isolate ALL42 genes involved in mycoparasitism against R. solani or S. sclerotiorum detected using subtractive hybridization approach. T. harzianum was grown with R. solani or S. sclerotiorum cell wall as carbon source and the RNA used both as tester and driver in each of two subtractive library constructed. Sequencing analysis resulted in 47 genes related with growth in R. solani cell wall media and 114 genes related with growth in S. sclerotiorum cell wall media. To confirm the obtained data, 18 genes were tested by quantitative real time RT-PCR and 9 were differentially expressed in the same condition of the library they were detected. Five of these genes were also differentially expressed during plate confrontation assay with the respective pathogen, two of them expressed during contact with R. solani (cutinase and alginate lyase) and 3 during contact with S. sclerotiorum (hsp98, serin endopeptidase and a hypotetic gene). The results presented in this study provides additional information about the role of 1,3glucanase genes in mycoparasitism and of other genes related to antagonism against specific pathogens, providing helpful insights in the mechanism of biocontrol performed by Trichoderma. / Espécies do gênero Trichoderma são eficientes antagonistas de fungos fitopatogênicos, como as espécies Rhizoctonia, Sclerotinia e Fusarium, e são comercializados como agentes de controle biológico principalmente por sua característica de micoparasita. Muitos estudos têm sido feitos para compreender as bases moleculares dos mecanismos de biocontrole de Trichoderma e também para encontrar espécies com alto potencial de antagonismo contra fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi analisar a expressão de genes relacionados ao micoparasitismo de T. asperellum T00 e T. harzianum ALL42 (Enzimologia ICB/UFG) que possuem potencial para uso como agente de biocontrole. Este trabalho foi dividido em dois capítulos. O Capítulo 1 se refere ao fungo T. asperellum T00 e suas β-1,3-glicanases (TAG83 e TAG27) que degradam componentes da parede celular de fungos fitopatógenos. O gene tag27 codifica para uma endo-β-1,3glicanase de 27kDa que possui 285 resíduos de aminoácidos e apresentou 96% de similaridade com uma enzima de T. atroviride. A enzima foi secretada em meio de cultura contendo parede celular de Rhizoctonia solani e Sclerotinia sclerotiorum, mas não em meio com parede de Fusarium oxysporum. A expressão dos genes tag83 e tag27 foi reprimida na presença de glicose e ativada tanto na presença de parede celular dos fitopatógenos quanto durante o contato entre os fungos em placa. O Capítulo 2 trata do fungo T. harzianum isolado ALL42 e de genes identificados pela técnica de hibridização subtrativa relacionados especificamente ao biocontrole contra R. solani e S. sclerotiorum. Foram construídas duas bibliotecas subtrativas sendo que os RNAs utilizados como condição teste e controle da subtração foram obtidos de T. harzianum crescido em meio contendo parede celular de R. solani ou S. sclerotiorum. As bibliotecas foram sequenciadas resultando em 47 genes relacionados ao crescimento em meio com R. solani e 114 genes relacionados ao crescimento em meio com S. sclerotiorum. Dos 18 genes escolhidos para validação da biblioteca por RT-PCR em tempo real, 9 se mostraram diferencialmente expressos na condição correspondente à biblioteca em que foram identificados. Dentre estes, 5 genes se mostraram também diferencialmente expressos em experimento de confronto em placa, 2 deles mais expressos contra R. solani (cutinase e alginato liase) e 3 contra S. sclerotiorum (hsp98, serina endopeptidase e um de função hipotética). Os resultados obtidos com as duas linhagens fornecem informações adicionais sobre genes de β-1,3-glicanases, conhecidamente envolvidos no processo de micoparasitismo, e sobre genes relacionados ao antagonismo de patógenos específicos, além de contribuir para o conhecimento relacionado ao biocontrole realizado por fungos do gênero Trichoderma.