Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T23:51:26Z No. of bitstreams: 1 JoaoGabrielDeMedeirosFarias_DISSERT.pdf: 8905998 bytes, checksum: 2e8f9fbe859066046fe01734d0151467 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T19:41:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JoaoGabrielDeMedeirosFarias_DISSERT.pdf: 8905998 bytes, checksum: 2e8f9fbe859066046fe01734d0151467 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T19:41:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoaoGabrielDeMedeirosFarias_DISSERT.pdf: 8905998 bytes, checksum: 2e8f9fbe859066046fe01734d0151467 (MD5) Previous issue date: 2014-03-25 / Estresses ambientais abi?ticos s?o fatores que causam respostas ao n?vel molecular, fisiol?gico e morfol?gico em plantas, dependendo tamb?m de sua intensidade e dura??o. ? visto que algumas esp?cies apresentam toler?ncia a condi??es estressantes e ao mesmo tempo s?o fontes naturais de mat?ria prima para ind?stria. Nesse contexto encontra-se a mamona (Ricinus comunnis L.), principal fonte de ?leo de r?cino valorizado por suas aplica??es farmac?uticas e principalmente industriais, vem sendo usada como cultura em regi?es onde a disponibilidade de ?gua ? reduzida, usada como fonte de renda para agricultura da regi?o nordeste brasileira. Visto que pouco se sabe sobre as respostas moleculares que levam essa planta a tolerar regi?es secas e como as sementes, principais foco de interesse, respondem a essa escassez, nesse trabalho foram constru?das duas bibliotecas de cDNAs, onde a partir de uma abordagem subtrativa, continham RNAs diferencialmente expressos em sementes de plantas mamona submetidas ao estresse h?drico durante 5 dias (biblioteca L7), e a outra RNAs diferencialmente expressos em sementes controle (biblioteca L5). A biblioteca L7 apresentou a maior variedade de transcritos com um total de 182. A maior parte das fun??es estabelecidas pelo sistema Gene Ontology - GO, foram direcionadas aos ?Processos Metab?licos? (526), em segundo ?Respostas a est?mulos? (57), o terceiro termo mais abundante foram referentes a ?Desenvolvimento?(26). J? na biblioteca L5, foram encontrados 91 transcritos, com maior parte de suas fun??es referentes a ?Processos Metab?licos?(413), em segundo ?Respostas a est?mulos? (8) e em terceiro Regula??o (6). Alguns dos transcritos da biblioteca L7 foram escolhidos para an?lise por repetirem-se mais de 3x e n?o aparecerem na biblioteca L5, o que indica uma poss?vel regula??o positiva sobre estresse. As an?lises sobre Metalotione?na (4x), mostraram que a sequ?ncia de proteica apresentava os dom?nios conservados que a caracterizava como tipo II, onde s?o encontrados dois dom?nios funcionais ricos em ciste?na com posi??es altamente conservadas, desempenhando a fun??o de ligar-se a metais pesados, correlacionadas assim como a atividade de elimina??o EROs e defesa contra o estresse oxidativo, al?m de apresentar homologia com a sequ?ncia de Bruguiera gymnorhiza, uma planta de mangue adaptada a ambientes salinos. Analisamos tamb?m os transcritos da referente a prote?na AUXIN-REPRESSED 12.5 KDA (3x), apontada como sendo reprimida pelo horm?nio auxina e associada ao processo de dorm?ncia da semente, ? descrito em uma fam?lia g?nica onde v?rios membros pertencem as vias de resposta ao estresse. Por ?ltimo, analisamos a prote?na GLUTELIN TYPE-A 3 (5x), uma importante prote?na de armazenamento com car?ter hidrof?lico, possivelmente direcionada para o vac?olo. Em nosso trabalho foi poss?vel observar um aumento de transcritos em rela??o a subtra??o controle, possivelmente reflexo do aumento do metabolismo da semente, tanto para resposta defensiva ao estresse h?drico quanto para o amadurecimento r?pido da semente onde foram observados transcritos referentes a resposta oxidativa, controle hormonal, prote?nas de reserva e produ??o de ?leo.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-10-10T21:54:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-13T20:44:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-13T20:44:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Species of Trichoderma are commercially applied as biological control agents and are antagonists of important plant pathogenic fungi (as Rhizoctonia, Sclerotinia and Fusarium species) due to its mycoparasitic characteristics. Research has been performed to have a better comprehension of molecular aspects of the biocontrol mechanisms performed by Trichoderma and to find isolates with high antagonistic potential against plant pathogens. In the present study the expression of mycoparasitism-related genes was performed T. asperellum T00 and T. harzianum ALL42 (Enzimologia group ICB/UFG fungal collection) that have great potential as biocontrol agent. Each chapter of this work refers to one of the species studied. In Chapter 1 T. asperellum isolate T00, known to produce high levels of cell wall degrading enzymes, has its β-1,3-glucanases enzymes and genes (tag83 and tag27) studied. The gene tag27 was cloned and characterized and codes to an 27kDa endo-β-1,3glucanase with and 285 aminoacids and 96% similar to a glucanases from T.atroviride. The enzyme was detected when T. asperellum was grown in Rhizoctonia solani or Sclerotinia sclerotiorum cell wall-containing media but not in Fusarium oxysporum cell wall-containing media. The tag83 and tag27 genes was repressed in media containing glucose as carbon source and upregulated in cell wall containing media and during plate confrontation tests with pathogenic fungi. Chapter 2 shows T. harzianum isolate ALL42 genes involved in mycoparasitism against R. solani or S. sclerotiorum detected using subtractive hybridization approach. T. harzianum was grown with R. solani or S. sclerotiorum cell wall as carbon source and the RNA used both as tester and driver in each of two subtractive library constructed. Sequencing analysis resulted in 47 genes related with growth in R. solani cell wall media and 114 genes related with growth in S. sclerotiorum cell wall media. To confirm the obtained data, 18 genes were tested by quantitative real time RT-PCR and 9 were differentially expressed in the same condition of the library they were detected. Five of these genes were also differentially expressed during plate confrontation assay with the respective pathogen, two of them expressed during contact with R. solani (cutinase and alginate lyase) and 3 during contact with S. sclerotiorum (hsp98, serin endopeptidase and a hypotetic gene). The results presented in this study provides additional information about the role of 1,3glucanase genes in mycoparasitism and of other genes related to antagonism against specific pathogens, providing helpful insights in the mechanism of biocontrol performed by Trichoderma. / Espécies do gênero Trichoderma são eficientes antagonistas de fungos fitopatogênicos, como as espécies Rhizoctonia, Sclerotinia e Fusarium, e são comercializados como agentes de controle biológico principalmente por sua característica de micoparasita. Muitos estudos têm sido feitos para compreender as bases moleculares dos mecanismos de biocontrole de Trichoderma e também para encontrar espécies com alto potencial de antagonismo contra fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi analisar a expressão de genes relacionados ao micoparasitismo de T. asperellum T00 e T. harzianum ALL42 (Enzimologia ICB/UFG) que possuem potencial para uso como agente de biocontrole. Este trabalho foi dividido em dois capítulos. O Capítulo 1 se refere ao fungo T. asperellum T00 e suas β-1,3-glicanases (TAG83 e TAG27) que degradam componentes da parede celular de fungos fitopatógenos. O gene tag27 codifica para uma endo-β-1,3glicanase de 27kDa que possui 285 resíduos de aminoácidos e apresentou 96% de similaridade com uma enzima de T. atroviride. A enzima foi secretada em meio de cultura contendo parede celular de Rhizoctonia solani e Sclerotinia sclerotiorum, mas não em meio com parede de Fusarium oxysporum. A expressão dos genes tag83 e tag27 foi reprimida na presença de glicose e ativada tanto na presença de parede celular dos fitopatógenos quanto durante o contato entre os fungos em placa. O Capítulo 2 trata do fungo T. harzianum isolado ALL42 e de genes identificados pela técnica de hibridização subtrativa relacionados especificamente ao biocontrole contra R. solani e S. sclerotiorum. Foram construídas duas bibliotecas subtrativas sendo que os RNAs utilizados como condição teste e controle da subtração foram obtidos de T. harzianum crescido em meio contendo parede celular de R. solani ou S. sclerotiorum. As bibliotecas foram sequenciadas resultando em 47 genes relacionados ao crescimento em meio com R. solani e 114 genes relacionados ao crescimento em meio com S. sclerotiorum. Dos 18 genes escolhidos para validação da biblioteca por RT-PCR em tempo real, 9 se mostraram diferencialmente expressos na condição correspondente à biblioteca em que foram identificados. Dentre estes, 5 genes se mostraram também diferencialmente expressos em experimento de confronto em placa, 2 deles mais expressos contra R. solani (cutinase e alginato liase) e 3 contra S. sclerotiorum (hsp98, serina endopeptidase e um de função hipotética). Os resultados obtidos com as duas linhagens fornecem informações adicionais sobre genes de β-1,3-glicanases, conhecidamente envolvidos no processo de micoparasitismo, e sobre genes relacionados ao antagonismo de patógenos específicos, além de contribuir para o conhecimento relacionado ao biocontrole realizado por fungos do gênero Trichoderma.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RenataKSE_DISSERT.pdf: 1992793 bytes, checksum: 77e111c6a7208973429d97e0cf1a51eb (MD5) Previous issue date: 2011-09-09 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Flowering is a fundamental process in the life cycle for plant. This process is marked by vegetative to reproductive apical meristem conversion, due to interactions between several factors, both internal and external to plant. Therefore, eight subtractive libraries were constructed using apical meristem induced or not induced for two contrasting species: Solanum lycopersicum cv. Micro-Tom and Solanum pimpinellifolium. Several cDNAs were identified and among these, were selected two cDNAs: one homologous cDNA to cyclophilin (LeCYP1) and the other to Auxin repressed protein (ARP). It has observed that LeCYP1 and ARP genes are important in the developmental process to plants. In silico analysis, were used several databases with the exclusion criterion E-value <1.0x10-15. As a result, conservation was observed for proteins analyzed by means of multiple alignments and the presence of functional domains. Then, overexpression cassettes were constructed for the ARP cDNA in sense and antisense orientations. For this step, it was used the CaMV35S promoter. The cDNA orientation (sense or antisense) in relation to the promoter was determined by restriction enzymes and sequencing. Then, this cassette was transferred to binary vector pZP211 and these cassettes were transferred into Agrobacterium tumefaciens LBA4404. S. lycopersicum cv. Micro-Tom (MT) and MT-Rg1 plants were transformed. In addition, seedlings were subjected to hormone treatments using a synthetic auxin (&#61537;- naphthalene acetic acid) and cyclosporin A (cyclophilin inhibitor) treatments and it was found that the hormone treatment there were changes in development of lateral roots pattern, probably related to decreases in auxin signaling caused by reduction of LeCYP1 in MT-dgt plants while cyclosporin A treatments, there was a slight delay in flowering in cv. MT plants. Furthermore, assay with real-time PCR (RT-qPCR) were done for expression level analysis from LeCYP1 and ARP in order to functionally characterize these sequences in tomato plants. / A flora??o ? fundamental no ciclo de vida de uma planta. Este processo ? marcado pela convers?o do meristema apical vegetativo em reprodutivo, devido a intera??es entre diversos fatores, tanto internos quanto externos ? planta. Diante disso, foram constru?das oito bibliotecas subtrativa utilizando ?pices meristem?ticos induzidos e n?o induzidos para a flora??o de duas esp?cies de tomateiro: Solanum lycopersicum cv Micro-Tom e S. pimpinellifolium. In?meros cDNAs foram identificados e dentre estes, foram selecionados o cDNA hom?logo a ciclofilina (LeCYP1) e a Prote?na Reprimida por Auxina (ARP) para a caracteriza??o in silico e funcional em esp?cie de tomateiro. Tem sido observado em outros sistemas vegetais que os genes LeCYP1 e ARP s?o importantes no processo de desenvolvimento da planta. Na an?lise in silico, foram utilizados diversos bancos de dados, tendo como crit?rio de exclus?o o E-value <1.0x10-15. Uma conserva??o para as prote?nas analisadas foi observada por meio dos alinhamentos m?ltiplos e a presen?a de dom?nios funcionais. Em seguida, foram realizadas constru??es de cassetes de superexpress?o para o cDNA hom?logo ? ARP em orienta??o senso e antissenso. Para esta etapa, foi utilizado o promotor forte CaMV35S presente no vetor intermedi?rio pBC (Stratagene). A orienta??o do cDNA (senso ou antissenso) em rela??o ao promotor foi determinada por meio de enzimas de restri??o e sequenciamento dos potenciais clones. Em seguida, este cassete foi transferido para o vetor bin?rio pZP211 e os clones obtidos foram confirmados pelo padr?o de restri??o utilizando diferentes enzimas. Subsequentemente, estes cassetes foram transferidos para a Agrobacterium tumefaciens LBA4404 e posteriormente transformado em plantas de S. lycopersicum cv. Micro-Tom (MT) e MT-Rg1. Em adi??o, pl?ntulas foram submetidas a tratamentos hormonais utilizando uma auxina sint?tica (?cido &#61537;-naftaleno ac?tico) e com ciclosporina A (inibidor de ciclofilina) e foi constatado que no tratamento hormonal houve altera??es no padr?o de desenvolvimento das ra?zes laterais, provavelmente relacionada ao d?ficit na sinaliza??o da auxina ocasionada pela redu??o de LeCYP1 em plantas MT-dgt, enquanto que no tratamento com ciclosporina A, ocorreu um atraso no florescimento de plantas cv MT. Al?m disso, ensaios de PCR em tempo real (RT-qPCR) foram efetuados para an?lise de express?o dos cDNAs hom?logos a LeCYP1 e ARP de modo a caracterizarmos funcionalmente estas sequ?ncias em plantas de tomateiro.