Seleção balanceadora é definida como aquela que aumenta a variabilidade genética de populações em relação ao esperado sob neutralidade. Uma expectativa sobre seus efeitos é a redução da diferenciação populacional nos genes onde atua. Contudo, regimes que mantêm conjuntos distintos de alelos em diferentes populações poderiam resultar em aumento de diferenciação populacional. Com o objetivo de compreender melhor os efeitos da seleção balanceadora sobre a distribuição da variação genética entre populações, investigamos a diferenciação populacional em genes dos Antígenos Leucocitários Humanos (HLA, do inglês, Human Leukocyte Antigen), que são os genes mais polimórficos do genoma humano e o exemplo mais clássico de seleção balanceadora em humanos. As proteínas HLA são responsáveis pela apresentação de peptídeos aos linfócitos T, mediando uma etapa crítica da resposta imune. A vantagem da manutenção de variação nesses genes está possivelmente associada à capacidade de resposta a uma maior diversidade de patógenos. Neste estudo, analisamos dados do projeto 1000 Genomas (1000G), que sequenciou indivíduos de diferentes populações usando sequenciamento de nova geração (NGS, do inglês, Next Generation Sequencing). Essa técnica de sequenciamento é conhecidamente problemática quando aplicada a regiões altamente polimórficas, como os genes HLA. Por isso, avaliamos a confiabilidade dos genótipos e frequências alélicas estimados a partir dos dados do 1000G nos genes HLA, utilizando como padrão ouro dados de sequenciamento Sanger de 930 das 1092 amostras do 1000G. Encontramos um viés de superestimativa da frequência do alelo referência em alguns polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs, do inglês, Single Nucleotide Polimorphisms), indicando que viés de mapeamento é uma causa importante de erros nos dados do 1000G. Esses resultados são relevantes para a compreensão dos desafios do uso de dados de NGS em outras regiões de alta diversidade. Usando os resultados dessa análise, excluímos de nosso estudo de diferenciação populacional sítios com estimativas de frequências alélicas pouco confiáveis nos dados do 1000G. Em uma segunda etapa de controle metodológico, demonstramos o efeito do uso de dados ricos em variantes raras em estudos de diferenciação populacional. Controlando para esse efeito, e usando apenas sítios que demonstramos ser confiáveis em nossos dados, descobrimos que a diferenciação populacional de SNPs nos genes HLA é menor que a diferenciação de SNPs em outras regiões do genoma. Esse resultado aponta para um papel predominante de pressões seletivas globais na distribuição da variação genética de HLA entre populações. Contudo, apresentamos também evidências de que a diferenciação populacional de haplótipos nos genes HLA pode ser maior do que a observada no nível dos SNPs, sugerindo que pressões locais podem influenciar a distribuição de haplótipos entre populações. Nossos achados indicam que é possível reconciliar baixa diferenciação populacional em SNPs com maior diferenciação em haplótipos, possivelmente sujeitos a pressões seletivas locais. / Balancing selection is defined as any kind of selective regime that increases genetic variability in populations relative to what is expected under neutrality. Theory predicts that balancing selection reduces population differentiation. However, balancing selection regimes in which different sets of alleles are maintained in different populations could increase population differentiation. To better understand the effects of balancing selection on the distribution of genetic variation among populations, we investigated population differentiation at the Human Leukocyte Antigen (HLA) genes, which are the most polymorphic genes in the human genome, and constitute the most striking example of balancing selection in humans. The HLA molecules are responsible for the presentation of peptides to T cells, thus mediating a critical step of the immune response. The advantage of maintaining variation in those genes through balancing selection is possibly related to the increased ability of the immune system to respond to a wider variety of pathogens. In this study, we analysed the public dataset of the 1000 Genomes project (1000G), which sequenced 1092 individuals from different populations using Next Generation Sequencing (NGS) technologies. These sequencing techniques are known to be problematic when applied to highly polymorphic genomic regions, such as the HLA genes. Therefore, we evaluated the reliability of genotype calls and allele frequency estimates of the SNPs reported by 1000G at HLA genes, using Sanger sequencing data of 930 of the 1092 1000G samples as a gold standard. We found a bias towards overestimation of reference allele frequency for some single nucleotide polymorphisms (SNPs), indicating mapping bias is an important cause of error in frequency estimation in the 1000G data. These results provide insights into the challenges of using of NGS data at other genomic regions of high diversity. Using the results of this analysis, we selected a list of sites that have reliable allele frequency estimates in the 1000G data to be used in our population differentiation study. In another methodological control, we demonstrate the effect of using a dataset rich in rare variants in population differentiation studies. Controlling for this effect, and using only the sites which we demonstrated that were reliable, we found that population differentiation of single nucleotide polymorphisms (SNPs) at the HLA genes is lower than that of SNPs in other genomic regions. This suggests a predominant role of global selective pressures in shaping the distribution of variation at the HLA genes among populations. However, we also show evidence that population differentiation of HLA haplotypes may be higher than what we observe at the SNP level, suggesting that local selective pressures may influence the distribution of haplotypes among populations. Altogether, our results indicate that it is possible to reconcile low population differentiation at the SNP level - as predicted by theory - to higher differentiation at haplotypes, which are possibly under local selective pressures.

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Thèsis--Faculté des lettres de Paris. / Issued also as Memoires de la Société archéologique d'Eure-et-Loir, t. XI. Includes bibliographical references and index.

Submitted by Suethene Souza (suethene.souza@ufpe.br) on 2015-03-09T17:30:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Marco Antonio Granha.pdf: 1263356 bytes, checksum: 9dc72d1fa8943f95af039a3ad5c365bd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T17:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Marco Antonio Granha.pdf: 1263356 bytes, checksum: 9dc72d1fa8943f95af039a3ad5c365bd (MD5) Previous issue date: 2014-04-30 / O presente estudo teve como objetivo explicar como as empresas de serviços contábeis se adaptaram a NBC TG 1000 – Contabilidade para Pequenas e Médias Empresas para a preparação, elaboração e divulgação das demonstrações contábeis de seus clientes. Para alcançar esse objetivo, a pesquisa utilizou uma abordagem de métodos misto sequencial, sendo inicialmente aplicado um questionário de pesquisa para as 148 empresas de serviços contábeis associadas ao SESCAP-PE obtendo 35 respostas representando a etapa quantitativa do estudo. Em seguida, entrevistas semiestruturadas baseadas em um roteiro elaborado a partir dos resultados da etapa inicial, foram realizadas com 8 sócios de 7 empresas de serviços contábeis de reconhecida experiência e competência técnica, representando a etapa qualitativa do estudo. Os resultados da etapa inicial da pesquisa evidenciaram que a maioria das empresas pesquisadas não adotam plenamente ou não conhecem a norma. Na segunda etapa da pesquisa, onde se buscou o aprofundamento das questões apontadas na etapa inicial, os resultados revelaram que a adoção da NBC TG 1000 pelas empresas de serviços contábeis ocorreu de forma parcial, sendo utilizadas apenas as seções relativas a elaboração das demonstrações contábeis. Os principais fatores que dificultaram a adoção plena da norma evidenciados pela pesquisa foram: a complexidade do texto do pronunciamento e o prazo considerado muito curto entre a divulgação e sua obrigatoriedade de adoção, a necessidade de cumprimento das exigências fiscais, o conhecimento ainda em fase de consolidação dos profissionais da contabilidade, a falta de interesse e conhecimento dos clientes em relação a importância das demonstrações contábeis e a resistência para entrega das informações e documentações em tempo hábil para o registro tempestivo das transações. Embora os respondentes tenham adotado de forma parcial a norma, todos consideram positivo o processo de convergência ao padrão internacional de contabilidade.

α-Hydroxy alkanones were synthesised with high enantiomeric purity by stereoselective enzyme-catalysed diketone reduction. Both diketone reduction and cofactor regeneration were accomplished with purified carbonyl reductase from Candida parapsilosis (CPCR2). The reaction products were isolated by column chromatography and analysed by chiral GC measurements, 1H-NMR spectroscopy and determination of optical rotations. Preparative-scale biotransformations yielded 350–600 mg of pure aliphatic α-hydroxy ketones including the difficult to obtain (S)-2-hydroxypentane-3-one. For all the products good enantiomeric excesses in the range of 89–93% were achieved.

Syfte Syftet var att utvärdera om aktiv slutextension i knäleden kan påbörjas direkt postoperativt utan risk för ökad främre knälaxitet efter främre korsbandsrekonstruktion. Ett annat syfte var att ta reda på vilket sätt rörelseomfånget i knäleden påverkas av omedelbar aktiv slutextensionsträning efter främre korsbandsrekonstruktion. Metod Undersökningen är en prospektiv, randomiserad, kontrollerad studie baserad på data insamlade från 30 patienter (14 män och 16 kvinnor) som genomgått främre korsbandsrekonstruktion på Capio Artro Clinic. Deltagarna lottades till att utföra ett av två postoperativa hemträningsprogram, antingen gruppen med ”passiv slutextension” (kontrollgrupp) n=15, eller gruppen med ”aktiv slutextension” (interventionsgrupp) n=15. Materialet insamlades med början i mars 2013 och avslutades i december 2013. Utvärderingen genomfördes preoperativt, direkt postoperativt samt fyra månader postoperativt. Främre knäledslaxitet mättes med KT-1000 laxitetsmätare och knäledsrörligheten mättes med goniometer med lång skänkel. Resultat Ingen signifikant skillnad förelåg mellan grupperna vid mätning av främre knälaxitet preoperativt, direkt postoperativt samt 4 månader postoperativt. Ingen signifikant skillnad kunde uppmätas mellan grupperna avseende flexion och extension fyra månader postoperativt. Slutsats Aktiv knäextension i form av statiska quadricepskontraktioner och raka benlyft kan utföras direkt postoperativt efter främre korsbandsrekonstruktion med hamstringsgraft utan risk för ökad främre knälaxitet. Det krävs dock en större studie med fler patienter för att säkerställa power Nyckelord ACL-rekonstruktion, Anterior tibial translation, Knäextension, KT-1000 laxitetsmätare

Determination of erythrocyte count in cerebrospinal fluid (CSF-EPC) is used to exclude various intracranial hemorrhage, especially subarachnoid hemorrhage (SAH). SAH means a bleeding between the pia mater and arachnoidea which occurs due to rupture of an aneurysm in the subarachnoid space. Manual counting of erythrocytes in the cerebrospinal fluid with Bürkers chamber and microscopy has been the gold standard for the past decades, but the manual method is time consuming and requires great experience. The purpose of this study was to evaluate if manual analysis of  CSF-EPC with counting chamber, and light microscopy can be replaced by automated analysis of CSF-EPC with Hematology Analyzer XN-1000 (Sysmex). Fortyeight cerebrospinal fluid samples with various concentrations of erythrocytes ware prepared by diluting known concentration of erythrocytes in cell-free CSF. Prepared CSF-samples with added erythrocytes were analyzed first on the XN-1000. Thereafter, manual counting of erythrocytes was performed using Bürkers counting chamber. A linear regression was established to describe the correlation between the automated analysis of the CSF-EPC and manual analysis of the CSF-EPC. Imprecision in the analysis of the CSF-EPC on the XN-1000 (Sysmex) was assessed by within-run imprecision. A very good correlation (r = 0.999) was found between the XN-1000 and manual counting. For results in the lower range, 100 - 5000 (106/L), correlation was also good (r = 0.997). The coefficient of variation was 19,8 % at CSF-EPC of 370 x 106/L and 3.1 % at CSF-EPC of 25 950 x 106/L. The sensitivity for analysis of CSF-EPC on XN-1000 was 370 x 106/L. The conclusion is that the analysis of Csv-EPC on XN-1000 can be used for clinical diagnostics of CSF- samples. However, it should be noted that XN-1000 has poor sensitivity for low CSF-EPC values < 370 x 106/L. To ensure high diagnostic quality even in CSF-samples with low erythrocyte counts are recommended a reference limit of < 500 x 106/L as a practical cut off for supplemental microscopic counting in routine healthcare laboratories. / SAMMANFATTNING Bestämning av antalet erytrocyter i cerebrospinalvätska (Csv-EPK) används för att utesluta olika intrakraniella blödningar, särskilt subaraknoidalblödning (SAB). SAB betyder en blödning mellan pia mater och araknoidea som uppstår på grund av ruptur av ett aneurysm i subaraknoidalrummet. Manuell räkning av antalet erytrocyter i cerebrospinalvätska med Bürkers kammare och mikroskopi har varit den gyllene standarden under de senaste decennierna, men den manuella metoden är tidskrävande och kräver stor erfarenhet. Syftet med detta examensarbete var att utvärdera om manuell analys av Csv-EPK med räknekammare och ljusmikroskopi kan ersättas med automatisk analys av Csv-EPK med hematologianalysatorn XN-1000 (Sysmex). Fyrtioåtta cerebrospinalvätskeprover med varierande koncentrationer av antalet erytrocyter framställdes genom att späda kända koncentrationer av erytrocyter i cellfri Csv. Framställda Csv-prover med tillsatta erytrocyter analyserades först på XN-1000. Efter detta utfördes manuell räkning av erytrocyter i Bürkers kammare. En linjär regression upprättades för att beskriva korrelation mellan automatiserad analys av Csv-EPK och manuell analys av Csv-EPK. Imprecisionen avseende analys av Csv-EPK på XN-1000 (Sysmex) bedömdes genom inom-serie-imprecision. En mycket god korrelation (r = 0,999) fanns mellan XN-1000 och manuell räkning. För analysresultat inom det lägre område 100 - 5000 (106/L) var korrelationen också god (r = 0,997). Variationskoefficienten var 19,8 % vid Csv-EPK på 370 x 106/L respektive 3,1 % vid Csv-EPK på 25950 x 106/L. Känsligheten för analys av Csv-EPK på XN-1000 var 370 x 106/L. Slutsatsen är att analys av Csv-EPK på XN-1000 kan användas för klinisk diagnostik av Csv-prover. Däremot bör det noteras att XN-1000 har sämre känslighet för låga Csv-EPK värden < 370 x 106/L. För att kunna säkerställa hög diagnostisk kvalitet även på Csv-prover med låga erytrocytantal rekommenderas en referensgräns på < 500 x 106/L som praktisk cut off för kompletterande mikroskopisk räkning vid rutinsjukvårdslaboratorier.