The gastrointestinal (GI) hormone, gastrin, promotes cancer progression and its down-regulation has been linked to reduced cancer stem cell numbers. Gastrin acts through the cholecystokinin-2 receptor (CCK-2R) and its biological effects are blocked by CCK-2R inhibitors. We investigated the regulation of the CCK-2R and its potential role in promoting survival of cancer stem cells (CSC). A panel of cancer cell-lines, including GI, glioblastoma and lung, with CCK-2R-transfected cells as a positive control, were grown either as monolayers, or, to provide a 3D in vitro tumour model, as spheres. Linear-after-the-Exponential (LATE)-PCR was used to quantify CCK-2R gene expression and this was validated using siRNAs. Flow cytometry was used to investigate receptor protein expression. Activity of CCK-2R promoter reporters was quantified using luciferase assays. LATE-PCR for CCK-2R gene expression is 10,000-fold more sensitive than the Taqman-based assay, and provides a highly precise method for detection of genes which have important biological functions but low expression. This assay showed that primary non-small-cell lung tumours have significantly more expression than normal lung tissue, indicating a potential therapeutic marker. CCK-2R siRNAs resulted in up to 97% (p<0.05) knockdown of the receptor in cancer cells, confirming the specificity of LATE-PCR and offering a therapeutic possibility. The CCK-2R promoter constructs were active in lung, glioma and colorectal cancer cell-lines, demonstrating a potential drug target; however, transcriptional activity did not correlate with gene expression suggesting post-transcriptional or translational regulation is a factor affecting CCK-2R expression. Flow cytometry suggests the presence of a small population of cells within each of these cell-lines which expresses CCK-2R very highly, which was not correlated to CSC markers. However, CCK-2R expression was enriched when cells were grown as spheres, and inhibition caused a delay in sphere-forming, implying that the CCK-2R may play a role in tumour, and CSC, expansion. Thus, CCK2R provides a potential target for therapeutic intervention in cancer.

La GD3 synthétase (GD3S) est une enzyme capable de synthétiser le ganglioside GD3, contrôlant ainsi la biosynthèse des gangliosides des séries b et c. Ces gangliosides sont principalement exprimés au cours de l’embryogenèse, dans le cerveau adulte, ainsi que dans certaines tumeurs. En particulier, le GD3 et le GD2 sont des marqueurs du mélanome et du neuroblastome, où ils jouent un rôle clef dans la progression tumorale. Une surexpression du gène codant la GD3S a également été observée dans les tumeurs de sein négatives pour le récepteur aux œstrogènes (ER-). Afin de déterminer le rôle de la GD3S dans la progression du cancer du sein, un modèle de cellules de cancer du sein MDA-MB-231 surexprimant la GD3S a été créé au laboratoire. Ces cellules se caractérisent par une prolifération et une migration accrues, dues à l’activation du récepteur c-Met. Dans le cadre de ma thèse, nous avons d’abord montré que le ganglioside GD2 induisait spécifiquement l’activation de c-Met et la prolifération des cellules GD3S+. Ensuite, nous avons étudié les mécanismes moléculaires responsables de la surexpression de ST8SIA1 dans les tumeurs ER-. Nous avons caractérisé le promoteur core essentiel à la transcription de ST8SIA1 dans les cellules de cancer du sein et nous avons montré que l’œstradiol réprime à la fois l’expression des ARNm de la GD3S et le promoteur core uniquement dans les cellules de cancer du sein exprimant le récepteur ERα. Ces résultats suggèrent que la forte expression de ST8SIA1 dans les tumeurs de sein ER-, suite à la perte de signalisation par ERα, pourrait augmenter l’expression des gangliosides tels que le GD2, et ainsi contribuer à l’agressivité de ce sous-type de tumeur. / The GD3 synthase (GD3S) is an enzyme that synthesizes the ganglioside GD3 from GM3. It is therefore the key enzyme for the biosynthesis of b- and c-series gangliosides. Essentially expressed during embryogenesis and in the adult brain, the expression of these gangliosides increases in several diseases including neuro-ectoderm derived cancer. In particular, GD3 and GD2 are oncofetal markers in melanoma and neuroblastoma, where they play a key role in tumor progression. Clinical studies have also showed a high expression of GD3S in Estrogen Receptor negative (ER-) breast tumors. In order to determine the role of GD3S in breast cancer progression, we have previously induced GD3S over-expression in MDA-MB-231 breast cancer cell line. The resulting GD3S+ cells displayed an increased migration and proliferative phenotype that directly proceed from the constitutive activation of c-Met receptor. During my thesis, we first demonstrated that GD2 is directly involved in the constitutive activation of c-Met in absence of the ligand HGF/SF. Secondly, we have undertaken the study of the molecular mechanisms responsible for ST8SIA1 over-expression in ER- tumors. We characterized the core promoter, essential for ST8SIA1 transcription in breast cancer cells and we showed that estradiol represses both GD3S mRNA expression and the core promoter only in ERα expressing breast cancer cells. Altogether, these results suggest that high expression of GD3S in ER negative tumours, due to the loss of ERα signalling, could increase complex gangliosides such as GD2 at the cell surface, and possibly enhance the aggressiveness of this tumour subtype.

Les facteurs environnementaux appelés « perturbateurs endocriniens (PE) » semblent avoir un rôle dans le développement et la progression des cancers de la prostate (PCa). Il est bien établi que l'homéostasie calcique et l'activité des canaux ioniques sont impliquées dans la cancérogénèse prostatique et il est possible que ces PE favorisent la cancérogénèse en modulant la signalisation calcique. Dans ce contexte, nous avons étudié l’effet du bisphénol A (BPA) et du Triclosan (TCS) sur la signalisation calcique des cellules cancéreuses prostatiques humaines. Nous avons ainsi montré que le BPA pouvait induire la migration des cellules cancéreuses épithéliales prostatiques, par le biais de la modulation de l'expression des canaux ioniques impliqués dans le phénomène de Store-Operated Calcium Entry, dont le canal calcique Orai1. Au niveau des cellules épithéliales cancéreuses, nous avons aussi mis en évidence un remodelage de l'expression des canaux ioniques et une résistance à l'apoptose de ces cellules sous l’effet du TCS. Ensuite, nous avons montré dans les cellules stromales de PCa que le TCS induisait une entrée de calcium importante via le canal TRPA1, ce canal étant préférentiellement exprimé dans les cellules stromales de PCa. Par ailleurs, l'augmentation de calcium induite par le TCS est corrélée avec une sécrétion plus importante de VEGF, un facteur mitogène qui pourrait favoriser la croissance des cellules épithéliales ou endothéliales. Ces résultats pourraient permettre d’envisager de nouvelles thérapies ou thérapies complémentaires ciblant les canaux et de mettre en place des mesures préventives dans le traitement des PCa qui prennent en compte l'impact de ces PE. / Environmental factors called "endocrine disruptors (ED)" appear to have a potential role in the development and progression of cancer of the prostate (PCa). It is well established that calcium homeostasis and the activity of ion channels are involved in prostate carcinogenesis and it is possible that these ED promote carcinogenesis by modulating the calcium signalling. In this context, we studied the effect of bisphenol A (BPA) and Triclosan (TCS) on calcium signaling in human PCa cells. We have thus shown that BPA could induce the migration of prostate epithelial cancer cells through the modulation of ion channels expression which are involved in the phenomenon of Store-Operated Calcium Entry, including the calcium channel Orai1. At the level of cancer epithelial cells, we have also highlighted a remodeling of ion channels expression and a resistance to apoptosis of these cells under the influence of TCS. Then, we showed in stromal cells of human PCa that TCS induces an important calcium entry through the TRPA1 channel, this channel being preferentially expressed in stromal cells of PCa. Moreover, the TCS-induced calcium increase is correlated with a greater secretion of VEGF, a mitogenic factor that could promote the growth of epithelial or endothelial cells. These results allow to consider new therapies or complementary therapies targeting ion channels, and/or to implement preventive measures in the treatment of PCa taking into account the impact of these PE.

Bien que le risque de développer un carcinome augmente avec le vieillissement, la sénescence reste considérée comme un mécanisme suppresseur de tumeurs. Contrairement aux fibroblastes de derme, les kératinocytes primaires humains (NHEK) ne sont pas bloqués irréversiblement au plateau de sénescence in vitro. Une fraction de NHEK sénescents échappe à la mort et génère de nouvelles cellules néoplasiques. Le développement des cancers peut être stimulé par leur micro-environnement vieillissant pro-inflammatoire produit principalement par les fibroblastes sénescents. Mon projet de thèse avait pour but de caractériser le sécrétome des fibroblastes sénescents de derme et d’en étudier l’impact sur l’émergence néoplasique des NHEK. Nous avons montré que les fibroblastes sénescents de derme produisent un sécrétome pro-inflammatoire : sécrétion de cytokines (MCP-1 ; IL-6), de facteurs de croissance (HGF/SF) et de métalloprotéases (MMP-1 ; -2…). Le conditionnement des cultures des NHEK par ce sécrétome des fibroblastes sénescents stimule la transition épithélium-mésenchyme et la migration des NHEK néoplasiques. Les MMP-1 et -2, sécrétées par les fibroblastes sénescents sont à l’origine des capacités migratoires de ces NHEK néoplasiques en activant leur récepteur à la thrombine PAR-1 (Proteases Activated Receptor), généralement associé aux stades tardifs. La caractérisation du sécrétome des fibroblastes sénescents par une analyse protéomique, montre aussi un défaut de sécrétion de plusieurs glycoprotéines de la matrice extracellulaire, aux propriétés anti-tumorales, provoqué par l’activation des voies de réponse au stress du réticulum endoplasmique associé à la sénescence. / While the risk to develop a carcinoma increased with aging, cellular senescence is consider as a potent barrier to tumorigenesis. Contrarily to the fibroblasts, senescence of normal human primary epidermal keratinocytes (NHEK) is not irreversible. Indeed, a fraction of NHEK spontaneously escapes from the senescence plateau and grows as neoplastic cells. Carcinoma development could be enhanced by the aging pro-inflammatory micro-environment produced principally by senescent fibroblasts. The aim of my thesis was to describe the characteristics of the secretome of senescent dermal human fibroblasts (NHDF) and then to determine whether it could enhanced early neoplastic step of keratinocytes. We showed that senescent NHDF produce a pro-inflammatory secretome with secretion of cytokines, growth factors and metalloproteinases (MMPs). Conditioning of keratinocytes by senescent NHDF secretome enhanced the early transformation of the neoplastic keratinocytes by promoting Epithelial-to-Mesenchymal Transition and migration ability. Particularly, MMP-1; -2 specifically secreted by senescent NHDF promote the early migratory capacity of these NHEK, by activating the protease-activated receptor-1 (thrombin receptor, PAR-1), up to now associated to more aggressive cancer. The characterization of senescent NHDF conditioned media by a proteomic analysis highlighted a loss of secretion of several extracellular matrix glycoproteins which have some important anti-tumoral proprieties. Finally, we demonstrated that the defective secretions of these glycoproteins by senescent NHDF are the result of a constitutive endoplasmic reticulum stress and activation of the Unfolded Response Pathway.

Le locus H19/IGF2 est soumis à l’empreinte génomique. A partir de l’allèle maternel, deux ARN non codants sont exprimés : H19 et 91H. L’ARN H19 est le précurseur de microARN (miR-675) dont aucune cible n’a été décrite dans la glande mammaire. Nous avons donc recherché et validé plusieurs cibles de ses microARN permettant d’expliquer les propriétés oncogéniques d’H19. En effet, le miR-675 régule l’expression des gènes c-Cbl, Cbl-b et FADD dans les cellules cancéreuses mammaires. Ces nouvelles régulations permettent l’augmentation de la prolifération cellulaire, la migration/invasion mais aussi la résistance aux apoptogènes. Dans cette étude, de manière inattendue et surprenante, nous avons également découvert un nouveau mécanisme de recrutement des microARN. Nous montrons que les protéines associées aux ARNm peuvent favoriser le recrutement du complexe RISC, mais surtout moduler l’action de celui-ci. De plus, dans certains cancers, l’ARN H19 peut s’associer aux protéines, notamment la protéine P53 dans les cancers gastriques, pour moduler leur fonction. Dans le cancer du sein, cette interaction empêche l’action de P53 et favorise sa dégradation. Cette nouvelle régulation de P53 peut être responsable de certaines résistances tumorales. Par ailleurs, l’implication d’H19 dans la formation et le maintien des cellules souches a été mise en évidence. Cette nouvelle fonction peut permettre à l’ARN H19 de promouvoir l’initiation ou la récidive tumorale. Les fonctions du long ARN non codant 91H dans les cellules cancéreuses mammaires ont également été étudiées. Cet ARN possède des propriétés oncogéniques et permet l’expression des gènes H19 et IGF2 en modulant la conformation de la chromatine au locus. Pour conclure, j’ai identifié plusieurs modes d’action de l’ARN H19 lui permettant de promouvoir l’apparition de la tumeur, sa progression et sa résistance aux thérapies. J’ai également défini le rôle de l’ARN 91H dans la tumorigenèse et au locus H19/IGF2. / The H19/IGF2 locus is submitted to the genomic imprinting. From the maternal allele, two long non-coding RNA are transcribed: H19 and 91H. The H19 RNA is a precursor of microRNA (miR-675). Few targets have been identified but neither in breast cancer cells lines. I have identified and checked three targets of miR-675 involved in H19 RNA oncogenic properties. Indeed, the miR-675 regulate expression of c-Cbl, Cbl-b and FADD mRNA. These new regulation promotes cell proliferation, cell migration/invasion and resistance of cell apoptosis. Moreover, surprisingly, in these studies, I have highlight new mechanism of microRNA recruitment and function. Indeed, I have established that proteins associated to mRNA regulate microRNA recruitment and function.In cancers, the H19 could be associated with protein, for example the P53 protein in gastric cancer, in order to regulate their function. In breast cancer cells, the H19/P53 association prevents the P53 function and promotes its degradation. This new P53 regulation could be involved in drug resistance in cancer. Otherwise, I have shown that H19 is involved in stem cell formation and maintenance. This new H19 function could be involved in tumor initiation or in tumor recurrence. To finish, I have also determined the function of the H19 antisense long non-coding RNA, 91H. In breast cancer cells, I have demonstrated that 91H acts as an oncogene and promotes H19 and IGF2 expression by modulating chromatin conformation at the locus. In conclusion, I have identified several H19 mechanism involved in tumor formation, progression or resistance to treatment. I have also decipher 91H function in tumorigenesis and at the H19/IGF2 locus.

Le cancer de la prostate (CaP) est le second cancer le plus fréquent chez l’homme. Le microenvironnement tumoral (MET) joue un rôle important dans la cancérogenèse prostatique et la formation de métastases indépendamment des androgènes. Il existe une communication étroite entre les cellules épithéliales tumorales et le stroma via la sécrétion de facteurs solubles permettant la survie et la métastase des cellules cancéreuses. La modulation de la sécrétion de ces facteurs pourrait donc constituer un moyen d’intervention thérapeutique dans le traitement des cancers prostatiques. Les canaux ioniques et le calcium intracellulaire sont connus pour moduler la sécrétion. Dans ce contexte, nous avons montré que le canal TRPA1 est exprimé au niveau des fibroblastes associés au cancer (CAF) de la prostate humaine. L’activation de ce canal par les facteurs épithéliaux conduit à une augmentation du taux de calcium intracellulaire favorisant l’expression et la sécrétion de facteurs de croissance. Nos données montrent que ces derniers induisent la transition épithélio-mésenchymateuse, la migration et la résistance aux agents chimiothérapeutiques des cellules cancéreuses. Enfin, nous avons mis en évidence des polymorphismes et des mutations du canal TRPA1 des CAF permettant son activation par des facteurs environnementaux et la sécrétion de facteurs de croissance induisant la résistance à l’apoptose des cellules cancéreuses prostatiques. L’ensemble de ces données suggèrent que le canal TRPA1 constitue une cible potentielle pour les thérapies futures des CaP en permettant d’interrompre les interactions épithélio-stromales du MET et d’empêcher l’évolution de ces cancers. / Prostate cancer (PCa) is the second most common cancer in men. The tumor microenvironment (TME) plays an important role in prostate carcinogenesis and metastasis independently of androgens. There is a close communication between tumor epithelial cells and stroma through the secretion of soluble factors promoting survival and metastasis of cancer cells. Modulating the secretion of these factors could therefore be a potential therapeutic option in the treatment of prostate cancers. Ion channels and the intracellular calcium are known to modulate secretion. In this context, we have shown that the TRPA1 channel is expressed in fibroblasts associated to cancers (CAF) in human prostate. Here, we describe that the activation of TRPA1 channel by epithelial factors leads to an increase in intracellular calcium levels promoting expression and secretion of growth factors. Our data show that these latter induce the epithelial-mesenchymal transition, migration and resistance to chemotherapeutic agents in cancer cells. Finally, we identified polymorphisms and mutations in TRPA1 channel allowing its activation by environmental factors and secretion of growth factors inducing resistance to apoptosis of prostate cancer cells. All these data suggest that TRPA1 channel constitutes a potential target for future therapies of PCa to interrupt the epithelial-stromal interactions of TME and prevent the development of these cancers.

L'identification des cellules souches cancéreuses (CSC) dans les tumeurs hématologiques et solides a conduit à de nombreuses études fondamentales et translationnelles. Les cellules cancéreuses présentent cependant une certaine plasticité. En effet, les cellules cancéreuses non souches (non-CSC) différenciées peuvent générer des CSC en réponse à divers stimuli. Ainsi, la radiothérapie (RT) entraîne l'induction de CSC à partir de non-CSC, in vitro. Cette reprogrammation pourrait participer aux résistances aux traitements et aux récidives. Malgré tout, les mécanismes à l'origine de la reprogrammation restent méconnus, et il paraît essentiel d'identifier des cibles pour prévenir l'apparition de CSC. Pendant ma thèse, j'ai montré que le milieu de non-CSC irradiées induit la reprogrammation en CSC mammaires. J'ai pu voir que la RT entraîne la sécrétion spécifique de chimiokines, dont CXCL1 et CCL5. Leur inhibition et le traitement par protéine recombinante ont permis de montrer l'implication de CXCL1, CCL5 et leurs récepteurs dans la reprogrammation in vitro. De plus, l'inhibition in vivo de CXCL1 et CCL5, combinée à la RT dans un modèle murin de xénogreffes induit une augmentation de la survie. Enfin, l'analyse transcriptomique des bases de données cliniques a démontré une corrélation entre l’expression des chimiokines et leurs récepteurs avec des signatures de CSC et de sous-types plus agressifs dans le cancer du sein, et une survie sans métastases diminuée. Mes résultats indiquent un rôle des chimiokines dans la reprogrammation de non-CSC en CSC et qu'elles peuvent constituer de nouvelles cibles thérapeutiques, en combinaison avec les traitements traditionnels. / Cancer stem cells (CSCs) identification in hematologic and solid tumors has paved the way to many fundamental and translational studies. However, recent studies have highlighted cancer cells plasticity. Indeed, differentiated non-cancer stem cells (non-CSCs) can generate CSCs upon various stimuli. In particular, radiotherapy (RT) induces CSCs from non-CSCs, in vitro. This reprogramming could be involved in treatments resistance and recurrence risk. Nevertheless, reprogramming mechanisms remain unknown, and identification of new targets seems essential to prevent CSC emergence. During my PhD thesis, I have shown that media from irradiated non-CSCs induces mammary CSC reprogramming. I have demonstrated that RT lead to specific chemokines secretion, as CXCL1 and CCL5. Inhibition and recombinant proteins treatments allowed me to demonstrate the involvement of CXCL1, CCL5 and their receptors in in vitro reprogramming. Moreover, in vivo inhibition of CXCL1 and CCL5, combined with RT, lead to an increased survival, in a xenografted mouse model. Finally, transcriptomic analysis of chemokines and receptors expression from clinical databases has shown a correlation with signatures of CSCs and more agressive breast cancer subtypes, as well as a decreased metastasis-free survival. These findings denote the involvement of chemokines in non-CSCs reprogramming into CSCs in breast cancer, and the potential of chemokines to constitute new therapeutics targets, in combination with conventional anti-cancer treatments.

Le laboratoire INSERM U908 a montré que le Nerve Growth Factor (NGF) et son précurseur, le proNGF, sont impliqués dans l’agressivité des tumeurs mammaires via des effets sur la croissance, l’angiogenèse ou encore la migration/invasion. Pour autant, aucunes thérapies ciblées n’a à ce jour été approuvée suite à des essais cliniques de traitements visant à inhiber les effets du (pro)NGF et de leurs récepteurs dans les cancers. Ces résultats indiquent que la phosphorylation de TrkA est nécessaire mais pas suffisante pour expliquer le(s) mécanisme(s) par lequel(s) le NGF ou son précurseur participe(nt) au développement tumoral. L’obtention de lignées tumorales résistantes au lestaurtinib est un phénomène rapide, nous avons donc émis l’hypothèse que la signalisation de TrkA indépendante de sa phosphorylation existe de façon « innée » dans les cellules tumorales. Par l’analyse protéomique, nous avons ainsi découvert que le NGF induit le recrutement de CD44 et d’une cascade de signalisation p115RhoGEF/RhoA/ROCK1 (Aubert L*, Guilbert M* et al, Oncotarget, 2015 ; *co-premier auteur). Nous avons ainsi montré que le NGF via le complexe TrkA/CD44 induit la migration et l’invasion des cellules cancéreuses de sein in vivo, et augmente la tumorigénicité in vivo. Quant au proNGF, j’ai pu observer qu’il induit l’internalisation de l’EGFR par la phosphorylation du résidu Y1068. Il en résulte une diminution des effets prolifératif et pro-invasif de l’EGF dans les cellules tumorales. Ces résultats fondamentaux sont tout à fait intéressants même s’ils nécessitent leurs consolidations et doivent permettre de démontrer le caractère pronostic de la détection de TrkA et ses corécepteurs dans le cancer. Ainsi nos études permettront le développement de thérapie ciblée par des firmes pharmaceutiques. / The INSERM U908 unit has showed that Nerve Growth factor (NGF) and its precursor (ProNGF) are implicated in tumor agressivness via their effects on growth, angiogenesis or migration/invasion and metastasis. Nevertheless, (pro)NGF and their receptors targeted therapies failed to demonstrate efficiency and clinical trial are disappointing. These results indicate that TrkA phosphorylation is not sufficient to explain molecular mechanisms of (pro)NGF effects on tumors. Indeed, we obtained lestaurtinib resistant cell lines within 3 weeks of treatment which indicated that resistant mechanisms are innate. So, by functional proteomics analyses, we described that NGF induced the formation of TrkA/CD44 complex and then the recruitment of p115RhoGEF/RhoA/ROCK1 signalling cascade (Aubert L*, Guilbert M* et al, Oncotarget, 2015 ; *equally contributed to this work). We showed that CD44 mediated effects participate to invasive effects of NGF in vitro, and in vivo, we demontrated that CD44 increases NGF induced tumoriginicity. In a second part, I observed that the proNGF regulated EGFR turn over through its phosphorylation on Y1068. This effect on EGFR decreased proliferative and pro-invasive effects of EGF in cancer cells. These fundamental results are interesting and need to be consolidated to ensure development of prognosis or targeted therapies.

L'adénocarcinome pancréatique (PDAC) est la forme la plus fréquente de néoplasme de cet organe puisqu’il représente environ 90% de toutes les tumeurs pancréatiques et constitue l'une des principales causes de décès par cancer chez l’Homme. Le taux de survie à 5 ans n’est que de 6%. L'une des raisons à cela est que, au début du développement du cancer du pancréas, il n'y a pas de symptômes, et donc la majorité des cas sont diagnostiqués à des stades tardifs métastatiques ou invasifs pour lesquels une intervention chirurgicale n’est plus possible. Il a été montré que les cellules du cancer du pancréas présentent plusieurs mutations génétiques qui conduisent à la prolifération incontrôlée des cellules, ainsi qu’à l'évasion de l'apoptose. Les changements de concentration du Ca2+ cytosolique jouent un rôle central dans de nombreux processus cellulaires fondamentaux, et la perturbation des mécanismes de régulation de l'homéostasie du Ca2+ conduit à une grande variété de pathologies graves, dont le cancer. C’est notamment le cas pour les canaux calciques de type SOC, qui régulent une variété de processus cellulaires dépendants du calcium. Cependant, bien que le rôle du Ca2+ et des canaux calciques soit bien établi dans de nombreuses voies de signalisation de différents types cellulaires, les informations sur le rôle des canaux calciques dans le PDAC sont limitées. Donc, l'identification de la nature moléculaire ainsi que des fonctions des canaux calciques revêt une grande importance dans ces cellules car elle pourrait à termes fournir de nouvelles approches relatives au traitement du cancer du pancréas par le ciblage des processus dépendants du calcium. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) representing the most prevalent pancreatic neoplasm accounting for about 90% of all pancreatic tumors, is one of the leading causes of cancer death in men and women. The current five-year relative survival rate is about 6% . One of the reasons of this is that early stage pancreatic cancer usually has no symptoms and thus the majority of cases are diagnosed at the late metastatic or invasive stages which are not suitable for surgery. Pancreatic cancer cells have been shown to exhibit a number of genetic mutations leading to uncontrolled cell proliferation, as well as evasion of programmed cell death (apoptosis). Changes in the cytosolic free Ca2+ concentration, play a central role in many fundamental cellular processes and disturbance of the Ca2+ homeostasis regulatory mechanisms leads to a vast variety of severe pathologies, including cancer. Among these, store-operated calcium channels (SOCs) have been shown to regulate a variety of calcium dependent cellular processes altered in different cancers. However, although the role of Ca2+ and calcium-permeable channels is well established in many signaling pathways in a variety of cell types, the information of the role of calcium-permeable channels in PDAC cells is limited. Therefore, identification of the molecular nature as well as functions of calcium-permeable channels in these cells is of great importance as it can reveal novel approaches for treating pancreatic cancer through targeting calcium-dependent processes.

Le carcinome du nasopharynx (CNP) est un cancer des voies aérodigestives supérieures qui est associé à une infection par le virus d’Epstein Barr (EBV) dans près de 100% des cas. Le microenvironnement dans le CNP se caractérise par la présence massive de lymphocytes T régulateurs (Treg) et d’exosomes tumoraux (exoCNP) aux propriétés immunosuppressives. Notre équipe a montré que ces exosomes synergisent avec les Treg et contribuent à l’échappement à l’immunosurveillance du CNP. Notre hypothèse est que les exoCNP isolés de la tumeur puissent induire des cellules dendritiques (DC) tolérogènes qui favorisent la tolérance en induisant des Treg. Des premiers résultats dévoilent que les exoCNP favorisent l’émergence de DC semi-matures (smDC). Outre le phénotype, des études fonctionnelles de l’enzyme immunosuppressive indoléamine 2,3-dioxygénase 1 (IDO1) ainsi que de la sécrétion de cytokines régulatrices (IL-10 et TGF-β) montrent que les smDC générées mettent en place un microenvironnement immunosuppressif. Des résultats encourageants témoignent de l’activité tolérogène des smDC, capables d’induire des Treg fonctionnels et d’inhiber la prolifération des lymphocytes T effecteurs. Enfin, nous avons également montré que les exoCNP sont à même d’attirer préférentiellement les DC tolérogènes vers le site tumoral par la chimiokine CCL20. Nos résultats prometteurs semblent confirmer que les exoCNP induisent des DC tolérogènes contribuant à l’échappement immunitaire de la tumeur. Notre projet devrait ainsi ouvrir de nouvelles voies d’immunothérapies anti-tumorales ciblant des facteurs impliqués dans l’émergence des Treg et donc de la progression du cancer. / Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a cancer of the upper aerodigestive tract that is associated in almost 100% of cases with an infection by the Epstein Barr virus (EBV). The tumour microenvironment is characterized by the overwhelming presence of regulatory T cells (Tregs) and tumour exosomes (NPCexo) that both have immunosuppressive properties. Our team has shown that these exosomes synergize with the Tregs and contribute to the escape of NPC to immune surveillance. Our hypothesis is that NPCexo secreted by the tumour can induce tolerogenic dendritic cells (DCs) that promote tolerance by inducing Tregs. First results reveal that NPCexo favour the emergence of semi-mature DCs (smDC). In addition to the phenotype, functional studies of the immunosuppressive enzyme indolamine 2,3-dioxygenase 1 (IDO1) as well as the secretion of regulatory cytokines (IL-10 and TGF-β) show that the generated smDCs establish an immunosuppressive microenvironment. Encouraging results demonstrate the tolerogenic nature of smDCs, capable of inducing functional Tregs and inhibiting the proliferation of effector T cells. Finally, we have also shown that NPCexo are able to preferentially attract tolerogenic DC to the tumour site in CCL20-dependant manner. Our promising results seem to confirm that NPCexo induce tolerogenic DCs that contribute to the tumour’s immune escape. Our project should open new leads for anti-tumour immunotherapy by targeting factors involved in the emergence of Tregs and thus the progression of cancer.