Submitted by Fernando Cesar Silva Junior null (ju_fcsj@hotmail.com) on 2016-03-11T04:12:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Fernando_Online.pdf: 4129284 bytes, checksum: 6fbd44eda2ee6b9b62753d8e00cd09a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-03-14T17:46:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silvajunior_fc_me_sjrp.pdf: 4129284 bytes, checksum: 6fbd44eda2ee6b9b62753d8e00cd09a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-14T17:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silvajunior_fc_me_sjrp.pdf: 4129284 bytes, checksum: 6fbd44eda2ee6b9b62753d8e00cd09a5 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Heteroptera é uma Subordem da Ordem Hemiptera, que possui cerca de 40 mil espécies distribuídas em oitenta famílias, dentre elas está a família Pentatomidae que se destaca por ser uma das maiores famílias com cerca de 4.100 espécies, representando, aproximadamente, 11% do total de espécies de Heteroptera. As espécies de Pentatomidae Chinavia impicticornis, Edessa meditabunda, E. collaris e Thyanta perditor foram estudadas nesse trabalho devido ao sua importância econômica, tendo em vista que são espécies fitófagas que causam grandes perdas em diversas culturas. Os machos das espécies foram coletados na região de São José do Rio Preto, os testículos foram fixados e posteriormente processados para analise em microscopia eletrônica de transmissão, os blocos obtidos foram trimados, cortados, contrastados e analisados com microscópio eletrônico de transmissão Leo – Zeiss, do Centro de Microscopia e Microanálise (IBILCE-UNESP, São José do Rio Preto, SP) e com o microscópio eletrônico de transmissão Jeol JEM - 100 CXII da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP-USP). As eletromicrografias das espécies estudadas apresentaram características ultraestruturais semelhantes às encontradas para diversos indivíduos de diferentes ordens, dentre essas características estão a formação do acrossomo, a partir de uma grande vesícula secretada pelo complexo de Golgi e que se localiza na região apical/lateral do núcleo. O núcleo, também, sofre transformações semelhantes às relatadas para grande parte dos insetos passando de um estado grande e esférico com a cromatina dispersa para um estado pequeno e fusiforme e com a cromatina extremamente condensada. Outra estrutura observada foi o adjunto do centríolo que se mostrou uma estrutura eletrondensa na região basal do núcleo. Também foi observada a migração das mitocôndrias para um polo celular e sua posterior fusão formando o complexo mitocondrial ou “Nebenkern”, que, posteriormente, se divide formando os dois derivados mitocondriais simétricos, com a presença de estruturas paracristalinas em seu interior. O padrão de microtúbulos encontrado no axonema, para todas as espécies, foi de 9+9+2, típico de insetos, sendo formado entre os derivados mitocondriais e acompanhado por estes ao longo de quase toda sua extensão. Morfologicamente, os derivados mitocondriais são diferentes entre C. impicticornis, E. meditabunda, E. collaris e T. perditor onde foi possível notar que os derivados de C. impicticornis se apresentaram grandes e arredondados, E. meditabunda pequenos e arredondados, E. collaris alongados e com extremidades arredondadas e T. perditor pequenos com uma extremidade arredondada e a outra angular podendo estas diferenças morfológicas serem características interessantes para futuros estudos filogenéticos ou sistemáticos para o grupo. Portanto, podemos concluir que a maioria das características analisadas é semelhante entre os insetos, com exceção da morfologia dos derivados mitocondriais que são diferentes, até mesmo, entre as espécies da família Pentatomidae. / Heteroptera is a suborder of the Hemiptera order, which has approximately 40,000 species distributed in eighty families, among them is the Pentatomidae family that stands out for being one of the largest families with approximately 4,100, representing approximately 11% of the total species of Heteroptera. The species of Pentatomidae Chinavia impicticornis, Edessa meditabunda, E. collaris and Thyanta perditor were studied in this work because of their economic importance, given that they are phytophagous species that cause great losses in several crops. Males of the species were collected in the region of São José do Rio Preto, the testes were fixed and then processed for analysis by transmission electron microscopy, the obtained blocks were trimmed, cut, contrasted and analyzed with transmission electron microscope Leo - Zeiss, of the Centro de Microscopia e Microanálise (IBILCE-UNESP, São José do Rio Preto, SP) and the transmission electron microscope Jeol JEM - 100 CXII of Faculdade de Medicina of Ribeirão Preto (FMRP-USP). The species have similar ultrastructural characteristics to those found in many individuals of different orders, among these features is the acrosome formation from a large vesicle secreted by Golgi apparatus and located in the apical/lateral area of the nucleus. The nucleus also undergoes changes similar to those reported for most insects, passing of a great and spherical state with chromatin dispersed to a small and fusiform state and highly condensed chromatin. Another structure was observed the centriolar adjunct that showed electrodense structure in the basal region of the nucleus. We also observe the migration of mitochondria for the cell and its subsequent fusion was observed forming the mitochondrial complex or “Nebenkern”, which later splits to form two symmetrical mitochondrial derivatives, with the presence of paracrystalline structures inside. The pattern of microtubules found on the axonema, for all species was 9+9+2, typical of insects, being formed between the mitochondrial derivatives and accompanied by such over almost its entire length. Morphologically, the mitochondrial derivatives are different between C. impicticornis, E. meditabunda, E. collaris and T. perditor where it was possible to note that C. impicticornis derivatives showed large and rounded, E. meditabunda small and rounded, E. collaris elongated and rounded ends and T. perditor smaller with one rounded end and the other angled being able these morphological differences are interesting features for future phylogenetic or systematic studies for the group. Therefore, we can conclude that the analyzed characteristics are most similar among the insects, with the exception of the morphology of the mitochondrial derivatives which are different even among the species of the Pentatomidae family.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA13MA112.pdf: 807586 bytes, checksum: b293744892841538c2ea9e0a5ae8325a (MD5) Previous issue date: 2013-07-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The in vitro production of pig embryos progressed significantly in the last decade. However, the embryo growing rates remain variable and with low embryonic quality. The chromosomal abnormalities as a result of high polyspermy rates and the inefficient culture systems are pointed as the main problems. Thus, the aim of this study was to improve the rates of monospermy, and also the hatching rates of in vitro produced porcine embryos. The first study investigated decreasing sperm concentrations combined with different incubation periods during in vitro fertilization (IVF). A total of 829 oocytes were matured and allocated in two experiments. In the first, oocytes were IVF using different sperm concentrations (62.5, 125, 187.5 or 250 x 103 sperm / mL). In the second experiment the oocytes were IVF using 62.5 x 103 sperm / mL pointed in experiment 1, for 2, 3 or 4 hours incubation time. Then the zygotes were cultured during twelve hours to evaluate the fertilization parameters, or during seven days to evaluate embryonic development. A third experiment was performed to evaluate the sperm acrosome reaction according to the incubation period. The higher sperm concentration reduced embryo production from 33.9% to 13.4%. The reduction of the incubation period from 4 to 3 or 2 hours significantly increased the rates of cleavage (42.1 to 71.6% and 73.3%), embryo development (14 to 34.7 and 38.9%) and hatching (25 to 66.7 and 65.7%. Increased sperm concentration and incubation period significantly altered the parameters related to fertilization, substantially impairing the monospermic embryos production. The number of sperm with reacted acrosome increased significantly as incubation time was increased. In the second study we evaluated the assisted hatching of porcine embryos IVP by zona pellucid incision or treatment with pronase. Oocytes were matured and in vitro fertilized with 62.5 x 103 spermatozoa / mL concentration for three hours. The zygotes were cultured for seven days, and then embryonic development and hatching rates evaluated. It was also determined the cell density and cell apoptosis rates of hatched embryos. Both the manual incision or pronase digestion were effective in weakening the ZP of embryos with high cell density. However, it was observed a reduction in the survival rates, and higher apoptosis rates in hatched embryos treated with Pronase. With basis on the data we concluded that a reduction in sperm concentration and incubation period decreases the incidence of polyspermy and improves the embryo development rates. This is probably due to reduction of capacitated /reacted sperm available for fertilization. Also, the weakening of the zona pellucid by incision improves significantly the number and quality of embryos hatched at the end of embryo culture / A produção in vitro de embriões suínos avançou significativamente na última década. Entretanto, os índices de desenvolvimento embrionário continuam inconstantes e a qualidade dos embriões extremamente baixa. A incidência de anormalidades cromossômicas decorrentes das altas taxas de polispermia e a ineficiência dos sistemas de cultivo são apontados como os principais impasses. Desta forma, este estudo buscou melhorar os índices de monospermia, e as taxas de eclosão dos embriões suínos produzidos in vitro. O primeiro estudo investigou a utilização de diferentes concentrações espermáticas e períodos de incubação dos gametas durante a fecundação in vitro (FIV). Para tanto, um total de 829 oócitos foram maturados e destinados à dois experimentos. No primeiro, os oócitos foram FIV utilizando diferentes concentrações espermáticas (62.5, 125, 187.5 ou 250 x 103 espermatozoides/mL). No segundo, os oócitos foram FIV utilizando 62.5 x 103 espermatozoides/mL durante duas, três ou quatro horas. Após a FIV os zigotos foram cultivados por doze horas para análise dos parâmetros da fertilização ou por sete dias para o estudo do desenvolvimento embrionário. Um terceiro experimento avaliou o número de espermatozóides com acrossoma reagido de acordo com o período de incubação. A máxima concentração de espermatozóides reduziu a produção embrionária (de 33.9% para 13.4%). Já a redução do período de incubação de quatro para três ou duas horas, aumentou significativamente as taxas de clivagem (42.1% para 71.6 e 73.3%), de desenvolvimento embrionário (14% para 34.7 e 38.9%) e de eclosão (25% para 66.7 e 65.7%). Tanto o aumento da concentração espermática, como o aumento período de incubação alteraram significativamente a maioria dos parâmetros relacionados a fecundação, prejudicando substancialmente a produção de embriões monospérmicos. O número de espermatozoides com acrossoma reagido aumentou significativamente com o pronlongamento da fecundação. No segundo estudo, investigou-se a indução da eclosão assistida de embriões suínos PIV através da incisão da zona pelúcida ou pelo tratamento com pronase. Os oócitos foram maturados e fecundados in vitro com uma concentração de 62.5 x 103 espermatozóides/mL por três horas. Os zigotos foram cultivados durante sete dias, então, avaliados quanto ao desenvolvimento embrionário e a incidência de eclosão. Determinamos também a densidade celular e os índices de apoptose celular dos embriões eclodidos. Tanto a incisão da zona como a digestão com pronase foram efetivos na fragilização da ZP dos embriões com alta densidade celular. Todavia, constatou-se uma redução da sobrevivência e aumento do índice de apoptose celular dos embriões eclodidos pelo tratamento com pronase. Com base nos dados obtidos concluímos que a redução da concentração de espermatozóides e do período de incubação diminuem a incidência de polispermia e melhoram o desenvolvimento embrionário. Isto é provavelmente devido a redução da disponibilidade de espermatozóides capacitados/reagidos para a fecundação. Da mesma forma, a fragilização da zona pelúcida através da incisão, melhora significativamente o número e a qualidade dos embriões eclodidos ao final do cultivo embrionário