Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The purinergic system is known to be an important signaling pathway in different tissues. Among the components of this system have adenosine, a modulator of central nervous, circulatory and immune systems. The concentration of adenosine in the host is controlled by the enzyme adenosine deaminase (ADA), present in tissues, cells and fluids. As a result, the objectives of this study were (1) to determine the ADA activity in Trypanosoma evansi, (2) evaluate the activity of ADA in serum, erythrocytes, lymphocytes and brain of infected rats, and (3) determine the concentration of nucleotides and nucleosides in serum and cerebral cortex of rats infected with T. evansi. In the first study two mice were infected with T. evansi. When these animals showed high parasitemia (±108 parasites/uL) was performed with blood collection and separation of trypomastigotes by DEAE-cellulose column for performing the assays. Spectrometry was performed by the biochemical detection of ADA in the form trypomastigotes of T. evansi. In a second study, we used 39 rats divided into three groups: group A and B (infected) and group C (C1 and C2 control group) Samples of blood and brain samples were collected on day 4 PI (A and C1) and 20 PI (B and C2). From the blood (with anticoagulant) were separated lymphocytes and erythrocytes for measurement of ADA activity, since the serum was obtained from blood samples stored in tubes without anticoagulant. The brain was separated into cerebellum, cerebral cortex, hippocampus and striatum to evaluate the ADA activity in each structure. Decrease of ADA activity in serum and erythrocytes in rats infected with T. evansi when compared not-infected (P<0.05). ADA activity in lymphocytes was decreased at day 4 PI and increased in day 20 PI. There was no difference in ADA activity in the cerebellum. In the cerebral cortex caused a reduction of ADA activity on days 4 and 20 PI. Decrease of ADA activity in hippocampus and striatum in the day 4 and day 20 PI, respectively. In a third study, 24 rats were used, 12 used as a negative control and 12 infected with T. evansi. On day 4 (n = 6 per group) and 20 PI (n = 6 per group) were performed to obtain blood samples of serum and cerebral cortex for analysis. The samples were prepared for quantification of ATP, ADP, AMP and adenosine. This study found increased concentrations of ATP, AMP and adenosine in the brain and serum of rats infected with T. evansi in both periods, except that the levels of adenosine decreased on day 4 PI. The ADP concentration did not change in this study. Therefore, the infection by T. evansi purinergic system components can be changed, may be involved in immune response, in anemia and neurological signs. / O sistema purinérgico é conhecido por ser uma via de sinalização importante em diversos tecidos. Entre os componentes desse sistema destacamos a adenosina, um modulador do sistema nervoso central, circulatório e imunológico. A concentração de adenosina no hospedeiro é controlada pela enzima adenosina deaminase (ADA), presentes em tecidos, células e fluidos. Em virtude disso, os objetivos deste estudo foram (1) determinar a atividade da ADA no Trypanosoma evansi; (2) avaliar a atividade da ADA no soro, eritrócitos, linfócitos e encéfalo e (3) determinar a concentração de nucleotídeos e nucleosideos no soro e córtex cerebral de ratos infectados com T. evansi. Para um primeiro estudo foram infectados dois camundongos com T. evansi. Quando estes animais apresentavam elevada parasitemia (±108 parasito/μL) foi realizada a coleta de sangue e separação dos flagelados por coluna de DEAE-celulose, a fim realização dos ensaios enzimáticos no parasito. Atividade da ADA nas formas trypomastigotas de T. evansi foi determinada por espectofotometria. Em um segundo estudo foi utilizado 39 ratos, divididos em três grupos: grupo A e B (infectado) e grupo C (C1 e C2/controle). Amostras de sangue e encéfalo foram colhidas nos dias 4 pós-infecção (PI) (grupos A e C1) e 20 PI (grupos B e C2). A partir do sangue total colhido com anticoagulante foram separados os linfócitos e eritrócitos para mensuração da atividade da ADA, já o soro foi obtido de amostras de sangue armazenadas em tubos sem anticoagulante. O encéfalo foi separado em cerebelo, córtex cerebral, hipocampo e estriado para avaliar a atividade da ADA em cada estrutura. Então, observou-se redução da atividade de ADA no soro e eritrócitos em ratos infectados com T. evansi em comparação com não-infectados (P <0,05). A atividade de ADA em linfócitos estava diminuída no dia 4 PI e aumentou no dia 20 PI. Não houve diferença da ADA no cerebelo. No córtex cerebral, no hipocampo e estriado ocorreu redução da atividade da ADA nos dia 4 e 20 PI, respectivamente. Em todas as estruturas do encéfalo foi detectada a presença do parasito por PCR. Em um terceiro estudo foram utilizados 24 ratos, sendo 12 controles negativos e outros 12 infectados com T. evansi. Nos dias 4 (n=6 por grupo) e 20 (n=6 por grupo) foram realizadas as coletas de sangue para obtenção do soro e amostras do córtex cerebral para mensuração dos níveis de ATP, ADP, AMP e adenosina. Neste estudo, foi constatado aumento das concentrações de ATP, AMP e adenosina no encéfalo e soro de ratos infectados com T. evansi nos dois períodos avaliados, com exceção dos níveis de adenosina que reduziram no dia 4 PI. Não houve alteração na concentração de ADP. Portanto, na infecção por T. evansi os componentes do sistema purinérgico pode ser alterados, podendo estar envolvido na resposta imunológica, na anemia e nos sinais neurológicos.

Methylmercury (MeHg) is a potent neuro and nephrotoxicant in several animal species including humans, particularly during their development. The purpose of this study was to investigate the effects of aqueous seed extract of Syzygium cumini (L.) Skeels (Scc) on the acute MeHg treatment in neonatal rats. Neonatal rats (P2) received orally a single dose of MeHg (10 mg/kg) and also two doses of Scc. After two days, the effects of this treatment were investigated in the cerebral cortex, hippocampus, kidney, liver and urine samples of rats. We observed that N-Acetyl-β-d-glucosaminidase (NAG) activity in the kidney and urine was higher in MeHg-group when compared with the control group. Similarly, the lipid peroxidation levels were higher in the liver and kidney as well as the Adenosine deaminase (ADA) activity increased in the hippocampus, kidney and liver. These results indicate that increased NAG and ADA activities, as well as thiobarbituric acid reactive species (TBARS) levels may play a critical role in MeHg nephrotoxicity. The most relevant finding in our investigation was that acute MeHg treatment in neonatal rats caused liver and renal impairment and Scc was able to prevent such effects. It appears that mechanisms related to scavenging activity of Scc could be involved with its protection effect. Key words: Methylmercury; Syzygium cumini; N-Acetyl-β-d-glucosaminidase; rat; adenosine deaminase / O metilmercúrio (MeHg) é um agente tóxico potente tanto para o sistema nervoso central como para o renal. Provoca danos nos seres humanos e em ratos, particularmente durante o estágio de desenvolvimento. Neste estudo, ratos em desenvolvimento (P2) receberam uma dose única de MeHg (10 mg/kg), por via oral e/ou duas doses do extrato aquoso de sementes de Syzygium cumini (L.) Skeels (Scc). Após dois dias (P4), foram investigados os efeitos deste tratamento no córtex cerebral, hipocampo, rim, fígado e urina. Observamos que a atividade da N-acetil-β-d-glicosaminidase (NAG) nos rins e na urina foi maior no grupo que recebeu MeHg, quando comparado com o grupo controle. Da mesma forma, os níveis de peroxidação lipídica foram maiores no fígado e rim e a atividade da adenosina deaminase (ADA) encontrou-se elevada no hipocampo, rins e fígado, nos ratos tratados com MeHg. Estes resultados indicam que o aumento da atividade da NAG e da ADA, bem como os níveis das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), desempenham um papel importante como marcadores de nefrotoxicidade causada pelo MeHg. Assim, o achado mais relevante na nossa investigação foi a de que o tratamento agudo com MeHg em ratos neonatos pode provocar nefrotoxicidade e a administração do Scc pode reverter estes efeitos provavelmente devido as propriedades antioxidantes de Scc.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diabetes mellitus (DM) is a metabolic disorder of multiple etiology characterized by chronic hyperglycemia resulting from deficiency of production and / or insulin action. This state of hyperglycemia may cause a variety of cardiovascular, renal, neurological and eye complications. Adenosine deaminase (ADA), ecto-5 'nucleotidase (5'NT) and Acetylcholinesterase (AChE) are important enzymes responsible for regulating the levels of adenosine (ado) and acetylcholine (ACh) respectively, and changes in their activities have been demonstrated in various diseases, including Diabetes. Syzygium cumini is a plant mostly used for the treatment of DM and presents hypoglycemic, anti-inflammatory, antipyretic and antioxidants properties. The aim of this study was to verify the effect of aqueous leaf extract of Syzygium cumini (ASc) in 100 and 200μg/mL concentrations, in vitro, on enzymes 5'NT in platelets, ADA in erythrocytes and platelets and AChE in erythrocytes, as well as on parameters of oxidative stress in samples of Type 2 diabetic patients. The results showed an increase in the activity of ADA and 5'NT in platelets from diabetic (n=30) compared to the control group (n=17), as well as in the levels of thiobarbituric acid reactive species (TBARS). ASc at concentrations of 100 and 200 μg / mL was able to reverse these effects. Correlations between 5 NT activity and triglycerides levels, as well as between ADA activity and glucose levels were also found in this work. An increase in the activity of enzymes ADA and AChE in erythrocytes of patients with type 2 diabetes (n=30) compared to the control group (n=20), as well as changes in parameters of oxidative stress, such as increased levels of TBARS and decrease in superoxide dismutase (SOD) activity and levels of non-protein sulfhydryl groups (NP-SH) in these cells also were observed. Likewise, ASc reduced the ADA and AChE activities and lipid peroxidation, and reversed the effect of the evaluated oxidative parameters. Still, there were found significant positive correlations between levels of Vitamin C and protein sulfhydryl groups (P-SH), plasma glucose and levels of P-SH and NP-SH, levels of P-SH and ADA activity, besides a negative correlation between TBARS and NP-SH levels. Therefore, it is possible to suggest that the ASc was able to promote a compensatory response in the platelet function and may act in the maintenance of adenosine levels and vasodilatation and thereby, contributes to the maintenance of the vascular integrity which is important in the hyperglycemic state. It is also possible that ASc might modulate the levels of ACh, interfering with oxidative stress and / or inflammatory processes from the diabetic state. So far, these results confirm the already known antioxidants properties of Syzygium cumini, which makes this compound present significant effects on the cellular metabolism, as well as the reduction and prevention of cardiovascular disease risk in diabetics. / O Diabetes mellitus (DM) é uma disfunção metabólica de múltipla etiologia caracterizado por hiperglicemia crônica resultante da deficiência da produção e/ou ação da insulina. Esse estado de hiperglicemia pode provocar uma série de complicações cardiovasculares, renais, neurológicas e oculares. A adenosina deaminase (ADA), ecto-5 nucleotidase (5 NT) e acetilcolinesterase (AChE) são importantes enzimas responsáveis por regular os níveis de adenosina (ado) e acetilcolina (ACh), respectivamente, e alterações nas suas atividades têm sido demonstradas em várias doenças, incluindo o DM. O Syzygium cumini é uma das plantas mais utilizadas no tratamento do DM, apresenta propriedades hipoglicêmicas, antiinflamatórias, antipiréticas e antioxidantes. O objetivo deste estudo foi verificar o efeito do extrato aquoso das folhas de Syzygium cumini (ASc), nas concentrações de 100 e 200 μg/mL, in vitro, sobre as enzimas 5 NT em plaquetas, ADA em eritrócitos e plaquetas e AChE em eritrócitos, bem como sobre parâmetros de estresse oxidativo em amostras de pacientes diabéticos Tipo 2. Os resultados demonstraram um aumento na atividade das enzimas ADA e 5 NT em plaquetas de diabéticos (n=30) em relação ao grupo controle (n=17), assim como nos níveis de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). ASc, nas concentrações de 100 e 200 μg/mL foi capaz de reverter estes efeitos. Correlações entre a atividade da 5 NT e os níveis de triglicerídeos, bem como entre a atividade da ADA e os níveis de glicose também foram encontradas nesse trabalho. Um aumento na atividade das enzimas ADA e AChE em eritrócitos de pacientes com Diabetes tipo 2 (n=30) em relação ao grupo controle (n=20), além de alterações nos parâmetros de estresse oxidativo, como aumento nos níveis de TBARS e redução na atividade da enzima Superóxido Dismutase (SOD) e nos níveis de grupamentos sulfidrílicos não protéicos (NP-SH) nessas células também foram observados. Igualmente, ASc reduziu a atividade das enzimas ADA e AChE e a lipoperoxidação, e reverteu o efeito dos parâmetros oxidantes avaliados. Ainda foram encontradas correlações positivas significativas entre os níveis de Vitamina C e grupamentos sulfidrílicos protéicos (P-SH), glicose plasmática e níveis de P-SH e NP-SH, níveis de P-SH e atividade da ADA, além de correlação negativa entre os níveis de TBARS e NP-SH. Portanto, é possível sugerir que o ASc foi capaz de promover uma resposta compensatória na função plaquetária, podendo atuar na manutenção dos níveis de adenosina e na vasodilatação e, assim, contribuindo para a manutenção da integridade vascular importante no estado hiperglicêmico, tendo em vista o papel cardioprotetor exercido pela mesma. Também é possível que ASc possa modular os níveis de ACh, interferindo no estresse oxidativo e/ou nos processos inflamatórios provenientes do estado diabético. Ao mesmo tempo esses resultados corroboram com as já conhecidas propriedades antioxidantes de Syzygium cumini, o que faz com que esse composto apresente efeitos significativos no metabolismo celular, bem como na redução e prevenção do risco de doença cardiovascular em diabéticos.