Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thais.pdf: 774762 bytes, checksum: aab7c8f9a2cbb52b94d59cd3cc962c07 (MD5) Previous issue date: 2011-10-24 / The sheep industry now occupies an important place of interest within the livestock farms, requiring the development of studies in the area related to sheep breeding on tropical climate. Most of the wool breed have reproductive seasonality, in other words, cycles are controlled by the fading light of the season, on the other hand crossbred sheep usually have already observed reproductive activity throughout the year. The ovarian cortex has follicles and corpus luteumin various stages of development, supported by connective tissue and smooth muscle fibers through the vessels and nerves. Te ovarian marrow is made up of fibroelastic tissue, nerves and arteries, being the innermost part of the ovary. In antral follicles, IGF stimulates the proliferation activity and differentiation of granulosa cells and steroidogenesis. The nucleolar organizer regions (NORs) are loops of deoxyribonucleic acid (DNA) responsible for synthesizing ribosomal ribonucleic acid (rRNA) during interphase, the period of protein synthesis and increase in volume, size and number of cell organelles. Its in the nucleolus, located in the cell nucleus, which has storage and production of rRNA, which will be linked to various proteins to form ribossomes. The AgNOR technique evaluates the NORs of active chromossomes during the cell cycle and the number or area of NORs show that proliferative activity, from the G1 phase of intense production of proteins and RNA, to the maximum in S phase, that have synthesis of DNA, of the cycle. / A ovinocultura atualmente ocupa um lugar de importância dentro dos criatórios de interesse zootécnico, sendo necessário o desenvolvimento de estudos na área de reprodução, relativos aos ovinos criados em clima tropical. Raças lanadas, em sua maioria possuem estacionalidade reprodutiva, ou seja, os ciclos são controlados pela diminuição da luminosidade da estação, já ovelhas mestiças geralmente possuem atividade reprodutiva geralmente observada durante todo o ano. A córtex ovariana possui os folículos e corpos lúteos em vários estádios de desenvolvimento, sustentada por tecido conjuntivo e fibras musculares lisas em meio a vasos e nervos. A medula ovariana é formada de tecido conjuntivo fibroelástico, nervos e artérias, compreendendo a parte mais interna do ovário. Em folículos antrais, o IGF estimula a proliferação, atividade e diferenciação das células da granulosa e a esteroidogênese. As regiões organizadoras de nucléolos (NORs) são alças de ácido desoxirribonucléico (DNA) responsáveis por sintetizar ácido ribonucléico ribossomal (RNAr) durante a intérfase, período de síntese protéica e de aumento de volume, tamanho e número de organelas da célula. É no nucléolo, localizado no núcleo celular, que há armazenamento e produção de RNAr, que ligados à várias proteínas irão formar os ribossomos. A técnica AgNOR avalia as NORs de cromossomos ativos durante o ciclo celular e o número ou área das NORs mostram essa atividade proliferativa, a partir da fase G1, de intensa produção de proteínas e RNA, até o máximo na fase S, de síntese do DNA, do ciclo.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thais.pdf: 774762 bytes, checksum: aab7c8f9a2cbb52b94d59cd3cc962c07 (MD5) Previous issue date: 2011-10-24 / The sheep industry now occupies an important place of interest within the livestock farms, requiring the development of studies in the area related to sheep breeding on tropical climate. Most of the wool breed have reproductive seasonality, in other words, cycles are controlled by the fading light of the season, on the other hand crossbred sheep usually have already observed reproductive activity throughout the year. The ovarian cortex has follicles and corpus luteumin various stages of development, supported by connective tissue and smooth muscle fibers through the vessels and nerves. Te ovarian marrow is made up of fibroelastic tissue, nerves and arteries, being the innermost part of the ovary. In antral follicles, IGF stimulates the proliferation activity and differentiation of granulosa cells and steroidogenesis. The nucleolar organizer regions (NORs) are loops of deoxyribonucleic acid (DNA) responsible for synthesizing ribosomal ribonucleic acid (rRNA) during interphase, the period of protein synthesis and increase in volume, size and number of cell organelles. Its in the nucleolus, located in the cell nucleus, which has storage and production of rRNA, which will be linked to various proteins to form ribossomes. The AgNOR technique evaluates the NORs of active chromossomes during the cell cycle and the number or area of NORs show that proliferative activity, from the G1 phase of intense production of proteins and RNA, to the maximum in S phase, that have synthesis of DNA, of the cycle. / A ovinocultura atualmente ocupa um lugar de importância dentro dos criatórios de interesse zootécnico, sendo necessário o desenvolvimento de estudos na área de reprodução, relativos aos ovinos criados em clima tropical. Raças lanadas, em sua maioria possuem estacionalidade reprodutiva, ou seja, os ciclos são controlados pela diminuição da luminosidade da estação, já ovelhas mestiças geralmente possuem atividade reprodutiva geralmente observada durante todo o ano. A córtex ovariana possui os folículos e corpos lúteos em vários estádios de desenvolvimento, sustentada por tecido conjuntivo e fibras musculares lisas em meio a vasos e nervos. A medula ovariana é formada de tecido conjuntivo fibroelástico, nervos e artérias, compreendendo a parte mais interna do ovário. Em folículos antrais, o IGF estimula a proliferação, atividade e diferenciação das células da granulosa e a esteroidogênese. As regiões organizadoras de nucléolos (NORs) são alças de ácido desoxirribonucléico (DNA) responsáveis por sintetizar ácido ribonucléico ribossomal (RNAr) durante a intérfase, período de síntese protéica e de aumento de volume, tamanho e número de organelas da célula. É no nucléolo, localizado no núcleo celular, que há armazenamento e produção de RNAr, que ligados à várias proteínas irão formar os ribossomos. A técnica AgNOR avalia as NORs de cromossomos ativos durante o ciclo celular e o número ou área das NORs mostram essa atividade proliferativa, a partir da fase G1, de intensa produção de proteínas e RNA, até o máximo na fase S, de síntese do DNA, do ciclo.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francislaine.pdf: 394781 bytes, checksum: a0d56232957fee86543512d568bcec4c (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Tea is an extremely popular drink, being the second most commonly consumed in the world. People ingest teas on average two to three times a day, the majority being derived from the Camellia sinensis plant. The beneficial health effects of the consumption of tea from this plant are well known, such as the prevention of cancer, cardiovascular disease and osteoporosis. Despite this, little is known about the action of white tea on reproduction. It is important to evaluate the possible consequences of consumption on luteal and endometrial development since the main catechin, epigallocatechin gallate (EGCG), present in the tea influences the gene expression of VEGF in tumors and this is an important angiogenic factor in the reproductive organs. This study aimed to verify the effects of prolonged intake of white tea on the relative abundance of VEGF mRNA and its receptors, as well as in cell proliferation in the endometrium of superovulated rats. For this purpose, the rats were divided into two groups, control group (n = 30), which received water, and white tea intake group (n = 30). The ovaries and uteri were collected from 10 animals in each group at the end of every month, for three consecutive months, stored in Trizol in a freezer at -80 ° C and the relative abundance of VEGF mRNA, Flt-1 and KDR were subsequently evaluated. In addition, the uteri were histologically analyzed using the silver staining method to detect cell proliferation. The data were evaluated for the assumption of normality (Shapiro-Wilk) and statistical comparisons were performed using the unpaired t test between groups at different collection moments (p <0.05). The relative abundance of VEGF mRNA and its receptors was changed by the tea consumption and there were a lower number of nucleolar organizer regions in endometrial cells. It was concluded that prolonged consumption of white tea interferes the expression of the VEGF system genes in the corpus luteum and decreases cell proliferation in the endometrium of Wistar rats. / O chá é uma das bebidas mais populares e a segunda mais consumida no mundo. A população ingere chás em média, de duas a três vezes ao dia, sendo em sua maioria oriundos da planta Camellia sinensis. São bem conhecidos os efeitos benéficos para a saúde do consumo dos chás provenientes dessa planta, como a prevenção de câncer, de doença cardiovascular e da osteoporose. Apesar disso, pouco se sabe sobre a ação do chá branco na reprodução, sendo importante avaliar as possíveis consequências do seu consumo no desenvolvimento luteal e endometrial. Visto que a principal catequina, a epigalocatequina galato (EGCG) presente neste chá influencia a expressão gênica do Vegf em tumores e este é um importante fator angiogênico dos órgãos reprodutivos, este estudo teve como objetivo verificar o efeito da ingestão do chá branco sobre a abundância relativa do mRNA do Vegf e dos seus receptores,sobre a proliferação celular do endométrio de ratas superovuladas. Para tanto, as ratas foram distribuídas em dois grupos, grupo controle (n=30) que recebeu água e grupo com ingestão de chá branco (n=30). Os ovários e os úteros foram coletados ao final de cada mês de ingestão de chá branco ou água de 10 animais de cada grupo, durante três meses consecutivos, sendo os ovários armazenados em trizol no freezer a -80ºC e posteriormente a abundância relativa de mRNA do Vegf, do Flt-1 e do Kdr foram avaliadas. Além disso, os úteros foram analisados histologicamente pelo método de coloração de prata para detecção de proliferação celular. Os dados foram avaliados quanto ao pressuposto de normalidade (Shapiro-Wilk) e as comparações estatísticas foram realizadas por meio dos testes t não pareado entre os grupos nos diferentes momentos de colheitas (p<0,05). A abundância relativa de mRNA do Vegf e dos seus receptores foi alterada pelo consumo de chá e houve um menor número de regiões organizadoras de nucléolo nas células do endométrio. Conclui-se que a ingestão prolongada de chá branco altera a expressão dos genes do sistema Vegf no corpo lúteo e diminui a proliferação celular do endométrio de ratas Wistar.

O processo de carcinogênese na cavidade bucal ocorre em etapas, apresentando alterações sobre o genoma celular, sendo muitas vezes precedido por lesões denominadas potencialmente malignas. Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do Câncer bucal são o fumo e o álcool. O desafio atual é identificar os pacientes com maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal através da utilização de métodos não invasivos e eficazes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade (LOH) no lócus 9p21, a atividade proliferativa celular, o padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: Controle (n=26), Álcool-Fumo (n=32), Leucoplasia (n=38) e grupo Carcinoma Espinocelular (CEC n=35). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR (velocidade de proliferação celular) e realização da técnica de Papanicolau para a análise do padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma das células. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que a frequência de LOH foi maior no grupo Leucoplasia. A velocidade de proliferação celular foi maior no grupo Leucoplasia em relação ao grupo controle Na análise de padrão de descamação, observamos maior quantidade de escamas anucleadas no grupo Leucoplasia, de superficiais no grupo controle e de células parabasais no grupo CEC. A relação núcleo/citoplasma foi maior no grupo CEC em comparação aos outros. Concluímos que a LOH e o AgNOR são métodos promissores para o rastreamento e monitoramento dos pacientes com maior risco para o desenvolvimento do Câncer bucal. / The carcinogenesis process in the bucal cavity occurs in stages, appearing on the cellular genome, and is often preceded by potentially malignant lesions. The main risk factors for the development of bucal cancer are smoking and alcohol intake. The current challenge is to identify patients at greatest risk for the development of bucal cancer through the use of non-invasive and effective methods. The objective of this work is to evaluate the loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus, the cell proliferative activity, the pattern of epithelial desquamation and the nucleus/cytoplasm ratio of the epithelial cells. For this purpose a cytopathological sample was collected from individuals of 4 groups: control (n = 26), alcohol-smoking (n = 32), leukoplakia (n = 38) and the squamous cell carcinoma group (SCC n = 35). From the cytological scraping, a slide was silver impregnate for AgNOR analysis (cell proliferation velocity), another slide was stained by the Papanicolau technique for the analysis of the desquamation pattern and nucleus/cytoplasm ratio of the cells. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and fragments sequencing. We observed that the cell proliferation velocity rate was higher in the Leukoplakia group compared to the Control group. The LOH frequency was higher in the Alcohol-smoking and Leukoplakia groups. We observed increased anucleated cells in the leukoplakia group, while the nucleated superficial predominated in the control group and the parabasal cells in the SCC group. An increased nucleus/cytoplasm was detected only in the CEC group. We conclude that LOH and AgNOR methods are promising for the screening and monitoring of individuals at higher risk for the development of bucal cancer.

O processo de carcinogênese na cavidade bucal ocorre em etapas, apresentando alterações sobre o genoma celular, sendo muitas vezes precedido por lesões denominadas potencialmente malignas. Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do Câncer bucal são o fumo e o álcool. O desafio atual é identificar os pacientes com maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal através da utilização de métodos não invasivos e eficazes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade (LOH) no lócus 9p21, a atividade proliferativa celular, o padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: Controle (n=26), Álcool-Fumo (n=32), Leucoplasia (n=38) e grupo Carcinoma Espinocelular (CEC n=35). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR (velocidade de proliferação celular) e realização da técnica de Papanicolau para a análise do padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma das células. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que a frequência de LOH foi maior no grupo Leucoplasia. A velocidade de proliferação celular foi maior no grupo Leucoplasia em relação ao grupo controle Na análise de padrão de descamação, observamos maior quantidade de escamas anucleadas no grupo Leucoplasia, de superficiais no grupo controle e de células parabasais no grupo CEC. A relação núcleo/citoplasma foi maior no grupo CEC em comparação aos outros. Concluímos que a LOH e o AgNOR são métodos promissores para o rastreamento e monitoramento dos pacientes com maior risco para o desenvolvimento do Câncer bucal. / The carcinogenesis process in the bucal cavity occurs in stages, appearing on the cellular genome, and is often preceded by potentially malignant lesions. The main risk factors for the development of bucal cancer are smoking and alcohol intake. The current challenge is to identify patients at greatest risk for the development of bucal cancer through the use of non-invasive and effective methods. The objective of this work is to evaluate the loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus, the cell proliferative activity, the pattern of epithelial desquamation and the nucleus/cytoplasm ratio of the epithelial cells. For this purpose a cytopathological sample was collected from individuals of 4 groups: control (n = 26), alcohol-smoking (n = 32), leukoplakia (n = 38) and the squamous cell carcinoma group (SCC n = 35). From the cytological scraping, a slide was silver impregnate for AgNOR analysis (cell proliferation velocity), another slide was stained by the Papanicolau technique for the analysis of the desquamation pattern and nucleus/cytoplasm ratio of the cells. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and fragments sequencing. We observed that the cell proliferation velocity rate was higher in the Leukoplakia group compared to the Control group. The LOH frequency was higher in the Alcohol-smoking and Leukoplakia groups. We observed increased anucleated cells in the leukoplakia group, while the nucleated superficial predominated in the control group and the parabasal cells in the SCC group. An increased nucleus/cytoplasm was detected only in the CEC group. We conclude that LOH and AgNOR methods are promising for the screening and monitoring of individuals at higher risk for the development of bucal cancer.

O processo de carcinogênese na cavidade bucal ocorre em etapas, apresentando alterações sobre o genoma celular, sendo muitas vezes precedido por lesões denominadas potencialmente malignas. Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do Câncer bucal são o fumo e o álcool. O desafio atual é identificar os pacientes com maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal através da utilização de métodos não invasivos e eficazes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade (LOH) no lócus 9p21, a atividade proliferativa celular, o padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: Controle (n=26), Álcool-Fumo (n=32), Leucoplasia (n=38) e grupo Carcinoma Espinocelular (CEC n=35). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR (velocidade de proliferação celular) e realização da técnica de Papanicolau para a análise do padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma das células. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que a frequência de LOH foi maior no grupo Leucoplasia. A velocidade de proliferação celular foi maior no grupo Leucoplasia em relação ao grupo controle Na análise de padrão de descamação, observamos maior quantidade de escamas anucleadas no grupo Leucoplasia, de superficiais no grupo controle e de células parabasais no grupo CEC. A relação núcleo/citoplasma foi maior no grupo CEC em comparação aos outros. Concluímos que a LOH e o AgNOR são métodos promissores para o rastreamento e monitoramento dos pacientes com maior risco para o desenvolvimento do Câncer bucal. / The carcinogenesis process in the bucal cavity occurs in stages, appearing on the cellular genome, and is often preceded by potentially malignant lesions. The main risk factors for the development of bucal cancer are smoking and alcohol intake. The current challenge is to identify patients at greatest risk for the development of bucal cancer through the use of non-invasive and effective methods. The objective of this work is to evaluate the loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus, the cell proliferative activity, the pattern of epithelial desquamation and the nucleus/cytoplasm ratio of the epithelial cells. For this purpose a cytopathological sample was collected from individuals of 4 groups: control (n = 26), alcohol-smoking (n = 32), leukoplakia (n = 38) and the squamous cell carcinoma group (SCC n = 35). From the cytological scraping, a slide was silver impregnate for AgNOR analysis (cell proliferation velocity), another slide was stained by the Papanicolau technique for the analysis of the desquamation pattern and nucleus/cytoplasm ratio of the cells. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and fragments sequencing. We observed that the cell proliferation velocity rate was higher in the Leukoplakia group compared to the Control group. The LOH frequency was higher in the Alcohol-smoking and Leukoplakia groups. We observed increased anucleated cells in the leukoplakia group, while the nucleated superficial predominated in the control group and the parabasal cells in the SCC group. An increased nucleus/cytoplasm was detected only in the CEC group. We conclude that LOH and AgNOR methods are promising for the screening and monitoring of individuals at higher risk for the development of bucal cancer.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / To determine the main factors influencing the biological behavior of 40 squamous cell carcinomas (SCC) of the upper digestive tract (UDT) of cattle associated with spontaneous ingestion of bracken fern (Pteridium aquilinum), morphological, including cell proliferation, and immunohistochemical aspects were studied. The aspects analyzed included anatomical localization of SCCs, degree of differentiation, occurrence and distribution of metastasis, intensity of the lymphoplasmocytic inflammatory infiltrate (LPII), of the desmoplastic reation, tumor-associated tissue eosinophilia, and the cell proliferation index evaluated through quantification of the argyrophilic nucleolar organizer regions (AgNORs). Forty two percent of SCCs were in the cranial region, 12.5% in the middle, and 45% in the caudal region of the UDT. The neoplasms were classified as well differentiated (WD-SCC; 67.5%), moderately differentiated (MD-SCC; 20%), or poorly differentiated (PD-SCC; 12.5%). When the degree of differentiation was correlated to the anatomical localization, it was observed in the cranial region that 88.2% were WD-SCC and 11.8% were MD-SCC. In the middle region, 60% were WD-SCC, 20% were MD-SCC, and 20% were PD-SCC. In the caudal region, 50% were WD-SCC, 27,8% were MD-SCC, and 22,2% were PD-SCC. Metastasis occurred in 57.75% of the cases, mostly to regional lymph nodes, and were observed in 58.82% of the cases with SCCs of the cranial region; in 40% of the middle region, and in 61.11% of the caudal region. Metastasis to regional lymph nodes and/or to distant organs were found in 44.44% of WDSCC, 75% of MD-SCC, and 100% of PD-SCC. Migration and invasion patterns were analyzed through the immunohistochemistry technique for cytokeratin. Islands and ribbons of neoplastic keratinocytes predominated in the WD-SCCs. The patterns varied greatly in the MD-SCCs, although small aggregates, ribbons, and cords predominated. PD-SCCS were characterized by small aggregates and individual cells. Lymphatic or hematogenous invasion were detected in 11/40 SCCs. There were SCCs originating from the ductal epithelium of the salivary glands. This finding was not previously reported. The intensity of the LPII was more accentuated in the BD-SCCs than in the MDs or PDs. The intensity of the desmoplastic reaction was quantified through the immunohistochemistry technique for vimentin, and was more severe in the PD-SCCs. The tumor-associated tissue eosinophilia (TATE) was measured in the SCCs and classified as mild, moderate, or severe. The only positive statistically significant association was established between TATE and LPII intensities. Cell proliferation was evaluated through quantification of the argyrophilic nucleolar organizer regions (AgNORs) on the neoplastic keratinocytes. AgNOR mean value and standard deviation (±sd) for WD-SCCs were 1.65 (±0.23), for MD-SCCs were 1.88 (±0.31), and for PD-SCCs were 2.39 (±0.26). The correlation between the AgNOR index and each histopathological grade was statistically significant. In conclusion, the factors which influenced the biological behavior of SCCs were the degree of cell differentiation, the patterns of migration and invasion, the intensity of LPII, TATE and desmoplastic reation, and the cell proliferation index measured through quantification of the AgNORs. / Aspectos morfológicos, incluindo proliferação celular, e imunoistoquímicos de 40 carcinomas de células escamosas (CCEs) do trato alimentar superior de bovinos que consumiram samambaia (Pteridium aquilinum) espontaneamente foram estudados, visando principalmente determinar os fatores que influenciam o comportamento biológico destes neoplamas. Os aspectos analisados incluíram localização anatômica dos CCEs, grau de diferenciação celular, ocorrência e distribuição de metástases, padrões de migração e invasão, intensidade do infiltrado inflamatório linfoplasmocítico (IILP), da reação desmoplásica e da eosinofilia tecidual associada a tumores (TATE), e o índice de proliferação celular avaliado através da contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas (AgNORs). Quanto a localização anatômica, 42% dos CCEs localizaramse na região cranial, 12,5% na média e 45% na caudal do trato alimentar superior (TAS). Os CCEs foram classificados quanto ao grau de diferenciação celular em bem (CCE-BD [67,5%]), moderadamente (CCE-MD [20%]) ou pouco diferenciados (CCE-PD [12,5%]). Quando relacionado o grau de diferenciação celular com a localização no TAS, verificou-se que na região cranial 88,2% eram CCEs-BD e 11,8% eram MD; na região média, 60% eram BD, 20% eram MD e 20% eram PD; na região caudal, 50% eram BD, 27,8% MD e 22,2% PD. Metástases ocorreram em 57,75% dos casos, principalmente para linfonodos regionais, e foram observadas em 58,82% dos CCEs na região cranial, em 40% dos da região média e em 61,11% dos da região caudal. Metástases para linfonodos regionais e/ou órgãos distantes foram encontradas em 44,44% dos CCEs-BD, em 75% dos MD e em 100% os PD. Foram analisados os padrões de migração e invasão com o auxílio da técnica de imunoistoquímica para citoqueratina. Nos CCEs-BD predominaram os padrões em ilhas e fitas de queratinócitos neoplásicos; nos MD os padrões variaram muito porém predominaram os agregados pequenos, fitas e cordões; nos PD predominaram os agregados e as células individuais. Invasão vascular linfática e/ou sangüínea foram observadas em 11/40 CCEs. Foram observados CCEs originando-se do epitélio dos ductos das glândulas salivares, aspecto este que não havia sido relatado anteriormente. Observou-se que a intensidade do IILP era muito mais acentuada nos CCEs-BD que nos MD e PD. A intensidade da reação desmoplásica foi quantificada através da imunistoquímica para vimentina e foi muito mais acentuada nos CCEs-PD. A TATE foi medida nos CCEs quanto à intensidade em leve, moderada ou acentuada. A única associação positiva estatisticamente significativa foi estabelecida entre a intensidade da TATE e a do IILP. A proliferação celular foi avaliada quantitativamente através da contagem das regiões organizadoras nucleolares argirofílicas (AgNORs) nos queratinócitos neoplásicos. A média e o desvio padrão (±DP) de AgNORs nos CCEs BD foi de 1,65 (±0,23), nos MD de 1,88 (±0,31) e nos PD foi de 2,39 (±0,26). A correlação entre o índice de AgNOR e cada grau de diferenciação celular foi estatisticamente significativa. Concluiu-se que os fatores que influenciaram no comportamento biológico dos CCEs foram o grau de diferenciação celular, os padrões de migração e invasão, a IILP, a TATE e da reação desmoplásica e o índice de proliferação celular avaliado através da contagem das AgNORs.

A carcinogênese na cavidade bucal é um processo de múltiplas etapas, apresentando alterações progressivas sobre o genoma celular. Portanto, o desenvolvimento do câncer na mucosa bucal muitas vezes é precedido por uma lesão potencialmente maligna. Os principais fatores de risco para o câncer bucal são o consumo de álcool e tabaco. O desafio atual é a busca de biomarcadores que demonstrem essas alterações precocemente, para que possam ser identificados os indivíduos de maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal. Uma das primeiras alterações no processo de carcinogênese é o aumento da atividade proliferativa celular, geralmente causado por mutações nos genes que controlam o ciclo celular. O gene CDKN2A, localizado no lócus 9p21, é um gene comumente mutado nos cânceres humanos e codifica a proteína p16, que desempenha um papel crítico na regulação do ciclo celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade no lócus 9p21 e a atividade proliferativa celular na carcinogênese bucal, assim como avaliar a possibilidade de utilização da citopatologia bucal como ferramenta para coleta e análise de DNA. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: controle (n=24), álcool-fumo (n=26), leucoplasia (n=13) e grupo carcinoma (n=14). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que os parâmetros de AgNOR e a frequência de mutações no lócus 9p21 foram maiores nos grupos expostos aos carcinógenos e com lesões em relação ao controle, porém sem diferenças estatisticamente significativas. O DNA obtido mostrou-se satisfatório em relação à concentração e à pureza. Os pacientes que apresentavam mutação em 9p21 apresentaram também maior velocidade de proliferação em relação aos pacientes sem mutações, embora essa diferença não tenha sido estatisticamente significativa. Concluímos que a citopatologia é um método útil para avaliação da atividade proliferativa e de mutações genéticas em pacientes com risco para transformação maligna em relação ao câncer bucal. / The carcinogenesis in the oral cavity is a multistep process, with progressive changes on the cellular genome. Therefore, the development of cancer in the oral mucosa is often preceded by a potentially malignant lesion. The main risk factors for oral cancer are alcohol and tobacco intake. The current challenge is the search for biomarkers that demonstrate these early changes, so higher risk individuals to the development of oral cancer can be identified. One of the earliest changes in the carcinogenesis process is the enhancement of cell proliferative activity, usually caused by mutations in cell cycle control genes. The CDKN2A gene, located in the 9p21 locus, is a commonly mutated gene in human cancers and encodes the p16 protein, which plays a critical role in cell cycle regulation. The objective of this study was to evaluate the frequency of loss of heterozygosity in the 9p21 locus and the cell proliferative activity in oral carcinogenesis. Moreover, to assess the possibility of using oral cytology as a tool for collecting and analyzing DNA. For this purpose was held cytopathologic collection of patients who were divided into the following groups: control (n=24), alcohol-smoking (n=26), leukoplakia (n=13) and carcinoma group (n= 4). From the cytology brush was made a slide for silver impregnation and AgNOR analysis. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and sequencing. We observed that the AgNOR parameters and the frequency of 9p21 locus mutations were higher in the groups exposed to carcinogens and injuries in the control, however without statistically significant differences. The DNA obtained was satisfactory in respect of concentration and purity. The patients with mutation in 9p21 also showed increased speed proliferation compared to patients without mutations, although this difference was not statistically significant. We conclude that the cytopathology is a useful method to evaluate the proliferative activity and gene mutations in patients with risk for malignant transformation to oral cancer.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:42:59Z : No. of bitstreams: 1 bertao_jm_dr_aracadg.pdf: 985938 bytes, checksum: 1c8d92b84eb72a2ea991ee245bd8aadc (MD5) / Realizamos um estudo clínico, histopatológico e histoquímico utilizando a técnica de coloração pela prata, para evidenciação das regiões organizadoras de nucléolos (Agnor). Foram analisados 81 casos de biópsias incisionais de carcinoma espinocelular de boca de regiões diferentes, ou seja, lábio, língua, assoalho, palato e retromolar. Foram observados e analisados os dados com relação a sexo, cor, idade, grau de diferenciação, estadiamento e hábitos de fumar e beber. Esses dados analisados entre si revelaram que a maior incidência de carcinoma espinoceluar em nossos estudos foi de carcinoma de assoalho bucal em torno de 30% contrariando a literatura que se refere à língua como local de maior freqüência; os outros dados analisados foram todos concordantes com a literatura de vários autores. A análise quantitativa e morfométrica das Nors foram realizadas por um sistema computadorizado, Imagelab 2000 que analisa as imagens capturadas de um microscópio por uma câmera e transfere para o sistema computadorizado, onde são analisadas. Usando esse sistema analisamos lâminas coradas pela técnica Agnor para verificação do número de Nors, área das Nors, número de Núcleos e área dos Núcleos das células presentes em tecidos removidos por biópsia incisional de boca, em áreas diferentes. Pelos resultados obtidos na análise histoquímica podemos verificar que existe uma diferença significativa na proporção do número de Nors/Núcleo para as diferentes áreas analisadas, mas que são coerentes com a literatura em carcionoma bem diferenciado e moderadamente diferenciado. Notamos ainda diferenças significativas entre as áreas das Nors, área dos Núcleos e números dos Núcleos entre as regiões diferentes analisadas e não conclusiva, portanto necessitando de outros estudos com a técnica de Agnor para aprimoramento da mesma, elucidação de resultados e uso mais freqüente em laboratórios de Anatomia Patológica. / We have carried out a clinical, histopathological and histochemical study using silver staining technique, to evidence the nucleolar organizing regions (Agnor). Eighty-one cases of incisional biopsies of oral squamous cell carcinoma from different regions of de mouth (lip, tongue, floor, palate and retromolar) have been observed and analyzed with regard to sex, race, age, degree of differentiation, staging and habit to smoke and to drink. The compared analyses of the data in our study indicated a greater incidence of oral floor cell carcinoma (about 30%) in disagreement with the current literature with mentions the tongue as the local of greater occurrence. The other analyzed data were all in agreement with the literature. The quantitative and morphometric analyses of the Nors have been carried out by a computerized system, Imagelab 2000 that analyzes the captured images of a microscope for a camera and transfers to the computerized system, where are analyzed. Using this system we have analyzed slides stained by the Agnor technique for verification of the number of Nors, area of the Nors, number of nuclei and area of the nuclei of the cells present in tissue removed by incisional biopsy of mouth in different areas. By the results gotten in the histochemical analysis we can verify that there is a significant difference in the ratio of the number of Nors/Nuclei for the different analyzed areas, but they are coherent with the literature for well differentiated and moderately differentiated carcinoma. We notice too significant differences between the areas of the Nors, area and de numbers of the nuclei among the different regions analyzed and not conclusive, therefore needing other studies with the Agnor technique for better interpretation of the results.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mast cell tumors (MCT) are neoplastic tumors of mast cells of unknown etiopathogenesis, representing up to 21% of all canine cutaneous cancers. This tumor varies widely in biological presentations and behaviors, ranging from benign to extremely aggressive, leading to metastasis and death. The cytological identification of MCT is a highly recommended method for initial detection of the tumor, it is inexpensive, can be performed with conscious animal and allows to suspect a tumor of high degree according to the cellular features. In addition to the histological grading, which is the gold standard for establishing the prognosis of MCT, additional markers are recommended, among them the AgNOR count, an indicator of cell proliferation. Additionally, some studies focus on the relationship between MCT and vitamin D, since mast cell tumors express vitamin D receptors (VDR). Thus, the aim of this research is to characterize the occurrence of canine MCT diagnosed by cytological examination in the region of Santa Maria/RS, to describe a protocol for determining AgNOR index in cytological samples of MCT and to investigate the relationship between vitamin D levels and AgNOR index in dogs with this tumor, since the AgNOR index is already consolidated as a prognostic marker for mastocytoma and vitamin D has been reported as a target for MCT management. Regarding to the occurrence profile of this tumor, we found results similar to those described in the literature, with some peculiarities referring to breeds and clinicopathological findings, allowing to suspected of MCT and planning more appropriate therapeutic interventions for each case. Referring to the AgNOR index, a protocol adapted from techniques already described was applied to cytological samples. Also has been observed that vitamin D and AgNOR index in dogs with MCT are negatively and moderatelycorrelated (P=0,011), suggesting that vitamin D levels can be measured in dogs with this tumor. In addition, follow-up studies of dogs with MCT and monitoring their outcoming are necessary, so that the vitamin D can be proposed as a prognostic marker and therapeutic agent for this neoplasm. / Mastocitomas são proliferações neoplásicas de mastócitos, de etiopatogênese desconhecida, que representam até 21% de todos os tumores cutâneos caninos. Este tumor possui uma grande variedade de apresentações e comportamentos biológicos, os quais vão desde benignos a extremamente agressivos levando à metástase e morte. A identificação citológica do mastocitoma um método bastante recomendado para detecção inicial do tumor, é de baixo custo, pode ser realizada com o animal consciente e permite suspeitar de um tumor de alto grau conforme as características celulares. Além da graduação histológica, que é o padrão-ouro para estabelecer o prognóstico do mastocitoma, marcadores adicionais são recomendados, como a contagem de AgNOR, um indicador de proliferação celular. Adicionalmente, alguns estudos enfocam a relação entre mastocitoma e vitamina D, uma vez que mastocitomas expressam receptores de vitamina D (VDR). Assim, a finalidade desta pesquisa é caracterizar a ocorrência de mastocitoma canino diagnosticado por exame citológico na região de Santa Maria/RS, descrever um protocolo para determinação de índice AgNOR em amostras citológicas de mastocitoma e investigar a relação entre níveis de vitamina D e índice AgNOR em cães com este tumor, visto que o índice AgNOR já é consolidado como marcador prognóstico para o mastocitoma e a vitamina D vem sendo apontada como alvo de intestigação neste tumor. Em relação ao perfil de ocorrência do mastocitoma canino, neste trabalho encontraram-se resultados semelhantes aos descritos na literatura, com algumas particularidades referentes a raças e achados clínico-patológicos, permitindo o direcionamento para suspeita de mastocitoma e planejamento de intervenções terapêuticas mais adequadas para cada caso. Referente ao índice AgNOR, foi especificado um protocolo adaptado, a partir de técnicas já descritas, aplicável a amostras citológicas. Também pode-se observar que a vitamina D e o índice AgNOR em cães com mastocitoma estão correlacionados de forma negativa e moderada (P=0,011), sugerindo-se que os níveis de vitamina D sejam avaliados nos cães com este tumor. Em adição, estudos de acompanhamento de cães com mastocitoma e monitoramento de seu tempo de sobrevida são necessários para que a dosagem de vitamina D possa ser proposta como marcador prognóstico e agente terapêutico para esta neoplasia