Orientadores: Jorge Humberto Nicola, Ester M. D. Nicola / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_EdmyrRosados_D.pdf: 1208079 bytes, checksum: 154a60eab72e8c40d6ecca77018a4121 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O presente trabalho mostra, experimentalmente, que é possível a utilização de glândulas harderianas de ratos Wistar para o estudo de fotodinâmica aplicada ao diagnóstico (PDD ¿ do inglês, Photo Dynamic Diagnosis) e tratamento médico (PDT ¿ do inglês, Photo Dynamic Therapy). No caso, a ação fotodinâmica tem como fotosensibilizador a protoporfirina IX (PpIX), abundantemente produzida na referida glândula, dispensando, portanto, a etapa de administração de substâncias exógenas, como nos estudos de PDD e PDT convencionais. No trabalho é mostrado que a fotodestruição tecidual (PDT) na glândula harderiana de tais ratos é acompanhada por alteração no padrão do espectro de fluorescência da mesma, indicando que as moléculas de PpIX não permanecem íntegras, caracterizando-se, portanto, como o processo fotodinâmico em que as células hospedeiras das moléculas de PpIX são destruídas em decorrência da transformação destas em fotoprodutos, conhecido como: Processo Tipo I. Adicionalmente mostra-se que, tal alteração no espectro de fluorescência original da PpIX é dependente da energia óptica utilizada (fluência), caracterizando-se pelo aparecimento de uma nova banda espectral e pela diminuição de intensidade do padrão fluorescente inicial. Em decorrência desta observação, propõe-se o acompanhamento de medidas de fluorescência em tempo real para o monitoramento da terapia propriamente dita, quando o processo for do Tipo I. O trabalho, portanto, propõe um modelo para estudos fotodinâmicos que é simples e de acesso fácil à maioria do laboratórios congêneres. Ressalta-se que foi utilizado, para o PDT, um laser de HeNe assim como uma fonte de luz de construção relativamente simples e, para o PDD, uma lâmpada de ultravioleta comercial. O espectrômetro utilizado, embora importado, também é de custo relativamente baixo / Abstract: The present work shows, experimentally, that the use of harderian glands of Wistar rats for the study of photodynamic applied to the diagnosis (PDD - of the English, Photo Dynamic Diagnosis) and medical treatment is possible (PDT - of the English, Photo Dynamic Therapy). In the case, the photodynamic action has as photo-sensitizer protoporphirin IX (PpIX), abundantly produced in the related gland, excusing, therefore, the stage of exogenous substance administration, as in the studies of conventional PDD and PDT. In the work it is shown that the tissue photodestruction (PDT) in the harderian gland of such rats is followed by alteration in the standard of the spectrum of fluorescence of the same one, indicating that the molecules of PpIX do not remain complete, characterizing itself, therefore, as the photodynamic process where the cells hostesses of molecules of PpIX are destroyed in result of the transformation of these in photoproducts, known as: Process Type I. Additionally we show that, such alteration in the spectrum of the original fluorescence of the PpIX is dependent on the optic energy (fluency) used, characterizing itself for the appearance of a new spectral band and for the reduction of intensity of the initial fluorescent standard. In result of this comment we consider the accompaniment of measures of fluorescence in real time for the monitoring of the therapy properly said, when the process will be of Type I. The work, therefore, considers a model for photodynamics studies that is simple and of easy access to the majority of the laboratories of same types. A laser of HeNe, as well as a source of light of relatively simple construction was used for the PDT, and for the PDD a commercial light bulb of ultraviolet. The used spectrometer, despite of imported is also of relatively low cost was used. / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / The aim of this study was to evaluate a formulation of methylene blue (MB) with ethanol to antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), used as an adjunct to mechanical treatment of experimental periodontitis induced in rats. Forty rats were randomized into five groups: without periodontitis (CN); and periodontitis without treatment (CP); periodontitis underwent three types of treatment: scaling and root planing and irrigation with saline (RAR); scaling and root planing and aPDT with MB diluted in water to 0.01% (aPDT/water); scaling and root planing and aPDT with MB diluted in 20% ethanol (aPDT/ethanol). Periodontitis was induced by placing ligature on the lower right first molar for seven days. Then, the ligatures were removed and the treatments applied. The animals were euthanized seven days after the treatment. The primary outcome was bone loss in the furcation region of the first molar evaluated histometrically. The secondary outcome was the number of osteoclasts immunohistochemically marked for tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP). Differences between groups were assessed by One Way ANOVA and post hoc Bonferroni. Thirty-seven rats were subjected to analysis. All three treatment groups showed statistically lower bone loss and smaller number of TRAP positive osteoclasts compared to the untreated group (CP) (P <0.05). No difference was observed for the outcomes between treatment groups (P> 0.05), and between treatments and the negative control (P> 0.05). Bone loss and osteoclastic activity were not changed by aPDT regardless of the inclusion of ethanol in methylene blue formulation when compared to RAR. Therefore, the aPDT did not result in additional benefit when used as adjunctive method to scaling and root planning, considering the parameters evaluated in this study. / O objetivo do presente estudo foi avaliar uma formulação de azul de metileno (AM) com etanol para terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), utilizada como coadjuvante ao tratamento mecânico da periodontite experimental induzida em ratos. Quarenta ratos foram randomizados em cinco grupos: sem periodontite (CN); com periodontite e sem tratamento (CP); com periodontite submetidos a três tipos de tratamento: raspagem e alisamento radicular e irrigação com solução salina (RAR); raspagem e alisamento radicular e TFDa com AM diluído em água a 0,01% (TFD/água); raspagem e alisamento radicular e TFDa com AM diluído em etanol 20% (TFDa/etanol). A periodontite foi induzida pela colocação de ligadura no primeiro molar inferior direito por sete dias. A seguir, as ligaduras foram removidas e os tratamentos aplicados. Os animais foram eutanasiados sete dias após o tratamento. O desfecho primário foi a perda óssea na região de furca do primeiro molar avaliada histometricamente. O desfecho secundário foi o número de osteoclastos imuno-histoquímicamente marcados para fosfatase ácida tartaratoresistente (TRAP). Diferenças entre grupos foram avaliadas por One Way Anova e post hoc Bonferroni. Trinta e sete ratos foram submetidos às análises. Os três grupos de tratamento demonstraram estatisticamente menor perda óssea e menor número de osteoclastos TRAP-positivos, quando comparados ao grupo sem tratamento (CP) (P<0.05). Nenhuma diferença foi verificada para os desfechos entre os grupos de tratamento (P>0,05) e entre os tratamentos e o controle negativo (P>0,05). A perda óssea e atividade osteoclástica não foram alteradas pela TFDa independentemente da inclusão do etanol na formulação do azul de metileno quando comparada a RAR. Portanto, a TFDa não resultou em benefício adicional quando utlizada como método coadjuvante à raspagem e alisamento radicular, considerando os parâmetros avaliados neste estudo.

Orientador: Marcos José Salvador / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T10:46:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lourenco_CarolineCaramanode_M.pdf: 7003473 bytes, checksum: 01a19e43e829c4233180019cb1a470d8 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Este estudo teve por objetivo a prospecção químico-farmacológica de fotossensibilizadores naturais para aplicação em terapia fotodinâmica (PDT) antimicrobiana e de substâncias bioativas acumuladas no extrato etanólico das folhas de Eugenia chlorophylla (Myrtaceae), bem como a caracterização química e da atividade antimicrobiana dos óleos essenciais das folhas, caule e flores desta espécie vegetal. Para tanto, procedeu-se o preparo do extrato vegetal bruto (hexânico e etanólico) a partir das folhas de E. chlorophylla e a avaliação da absorção de luz na região espectral do visível de interesse e útil para aplicação em PDT. O extrato bruto etanólico foi submetido a uma extração líquido-líquido com hexano, diclorometano e butanol. Os melhores resultados na avaliação da absorção de luz na região espectral do visível de interesse e útil para aplicação em PDT foram obtidos com o extrato bruto e com a fração diclorometânica da partição, para os quais foram avaliadas suas características fluorescentes em estado estacionário no modo de emissão e excitação (caracterização preliminar de suas propriedades fotoquímicas e fotofísicas). Desenvolveuse a adequação de metodologia para uma avaliação inicial da eficiência fotoquímica dos extratos e frações obtidos (produção de oxigênio singlete, ensaio, 1,3 - diphenylisobenzofuran (DPBF), bem como adequou-se os procedimentos para a realização dos bioensaios na presença e ausência de luz. Procedeu-se a avaliação da atividade antimicrobiana in vitro com o extrato bruto etanólico e suas frações da partição líquidolíquido, na ausência de irradiação laser, determinando-se os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) para as amostras bioativas e estimando-se os valores de concentração subinibitória que seriam usados na PDT atimicrobiana. Ainda, foram estabelecidos os procedimentos para a padronização do protocolo experimental de PDT antimicrobiana frente a bactérias (Gram positivas e Gram negativas) e leveduras in vitro e avaliou-se o efeito do extrato bruto etanólico e da fração diclorometânica como fotossensibilizadores naturais em PDT antimicrobiana, utilizando-se 11 cepas indicadoras. De acordo com os resultados obtidos o extrato bruto etanólico (ECB) e sua fração diclorometânica (ECD) apresentaram absorção de luz na região de 600 a 800 nm, demonstrou a capacidade de formar oxigênio singlete no ensaio com DPBF quando irradiados pelo laser e apresentou resultado efetivo na inativação de algumas das cepas indicadoras (bactérias e leveduras) em PDT antimicrobiana quando irradiados em sessão única por 5 min com laser diodo InGaAlP, ?=660nm. A partir dos resultados dos ensaios com DPBF e com a utilização de inibidores específicos do mecanismo fotoquímico em modelo biológico sugeriu-se que o mecanismo fotoquímico predominante para ECD é o do tipo II (mediado pela formação de oxigênio singlete). Deu-se inicio ao estudo fitoquímico monitorado pela absorção de luz na região do visível (400 a 830 nm), pela avaliação da eficiência fotoquímica e pelas atividades biológicas. Pelo resultado do estudo de desreplicação por ESI-MS/MS do extrato etanólico bruto e da fração ECD sugeriu-se a presença do ácido quínico nestas amostras. Como as folhas frescas de E. chlorophylla apresentavam odor intenso e neste projeto foi proposto também estudo para a prospecção de substâncias bioativas, realizou-se um estudo para a caracterização química e avaliação da atividade antimicrobiana dos óleos essenciais das folhas, caule e flores desta espécie vegetal. A caracterização química dos constituintes majoritários do óleo essencial foi realizada por cromatografia gasosa (CG-EM). Os óleos essenciais das folhas, caule e flores de E. chlorophylla foram obtidos por hidrodestilação e apresentaram rendimento de 0,01 a 0,1%. Setenta e cinco componentes foram identificados, representando mais de 85% do total do óleo. Os principais componentes detectados nos óleos essenciais foram Ecariofileno (flores), óxido de cariofileno (caule, flores e folhas), globulol (caules e folhas) e T-muurolol, 1-epi-cubenol e ?-cadinol (caule, flores e folhas). Todos os óleos mostraram leve a moderada atividade antimicrobiana (na ausência de radiação laser), sobre principalmente as bactérias Gram positivas e Candida albicans, sendo estes resultados similares ao observado na literatura para esta espécie vegetal, com exceção do óleo do caule, coletado em 2011, que não se mostrou ativo nas condições experimentais utilizadas e é composto, predominantemente (85,4%) por um constituinte alifático para o qual não foi possível identificar a estrutura química por CG-EM. Ainda, observou-se variação nos valores de concentração inibitória mínima frente às cepas bioativas dependendo do ano de coleta e armazenagem dos óleos essenciais obtidos / Abstract: This study aimed at making a chemical-pharmacological search for prospection of natural photosensitizers in photodynamic therapy (PDT) and of bioactive compounds accumulated in the ethanolic extract of leaves from Eugenia chlorophylla (Myrtaceae) and to study the chemical characterization and antimicrobial activity of essential oils from leaves, stems and flowers of this plant species. For this purpose, we carried out the preparation of the crude plant extract (hexane and ethanol) from the leaves of E.chlorophylla followed by the assessment of light absorption in the visible spectral region of interest could be useful for application in PDT. The crude ethanol extract was subjected to a liquid-liquid extraction with hexane, dichloromethane and butanol. The best results for the absorption of light in the visible spectral region of interest to gets with usefulness for application in PDT were obtained for the crude extract and dichloromethane fraction, which were evaluated for their characteristics in steady-state fluorescent emission mode and excitement (preliminary characterization of photochemical properties). Still, it has adequate methodology was developed for an initial assessment of the photochemical efficiency of extracts (production of singlet oxygen, DPBF test 1.3-diphenylisobenzofuran) as well as the adequate conformed for the achievement of bioassays in the presence and absence of light. Evaluation of antimicrobial activity was carried out in vitro with a crude ethanol extract and their fractions from liquid-liquid partition, in the absence of laser irradiation, determining the values of minimum inhibitory concentration (MIC) in antimicrobial testes for bioactive samples and estimating the sub-inhibitory concentration values which would be used in antimicrobial PDT. Standardization of the experimental protocol of in vitro antimicrobial PDT was carried out against Gram positive and Gram-negative bacteria and yeast the effect of the crude ethanol extract and the dichloromethane fraction evaluated as natural photosensitizes in antimicrobial PDT using 11indicator strains. According to results obtained from the crude ethanol extract (ECB) and its dichloromethane fraction (ECD) showed light absorption in the region from 600 to 800 nm, it was demonstrated that singlet oxygen was formed in the assay with DPBF when irradiated by laser ( ?=660nm) showed effective results in the inactivation of antimicrobial PDT in some of the indicator strains (bacteria and yeasts) when irradiated in a single session for 5 min with InGaA1P laser diode. Along with the test result with DPBF, research using specific inhibitors of the photochemical mechanism in a biological model suggests that the dominant photochemical mechanism for ECD is the type II (mediated by the formation of singlet oxygen). We carried out the phytochemical study monitored by light absorption in the visible region (400 to 830nm), in which the evaluation of photochemical efficiency and biological activities and the results of the study of dereplication of the crude ethanolic extract and the ECD fraction by ESI-MS/MS suggest the presence of quinic acid in these samples. Since the fresh leaves of E. chlorophylla have an intense smell and this project also contemplated a search for bioactive substances a study was carried out for the chemical characterization and antimicrobial activity of essential oils from leaves, stems and flowers of the plant species. The chemical characterization of the major constituents of the essential oil was performed by gas chromatography (GC-MS). Essential oils from leaves, stems and flowers of E. chlorophylla were obtained by hydrodistillation and presented a yield of 0.01 to 0.1%. Seventy-five compounds were identified, representing over 85% of the total oil. The main components were E-caryophyllene (flowers), caryophyllene oxide (stem, leaves and flowers), globulol (stems and laves) and T-muurolol, 1-epi-? cubenol, and ?-cadinol (stem, leaves and flowers). All essential oils studied showed mild to moderate antimicrobial activity mainly associated with Gram positive bacteria and Candida albicans with results similar to those observed in the literature for this plant species. An exception was the stem oil collected in 2011 that was not active in the experimental conditions used and is constituted predominantly (85.4%) for an aliphatic constituent not identified by GC-MS. Was verified variation in the minimum inhibitory concentration values of essential oils of E. chlorophylla with the year of collect and with storage time / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal

A TFD é considerada uma nova terapia minimamente invasiva destinada ao tratamento e destruição seletiva de diversos tipos de cânceres. Objetivo foi avaliar se os efeitos do azul de metileno fotoativado podem desencadear processos inflamatórios interferindo no desenvolvimento e na progressão tumoral. Os resultados demonstraram que o grupo tratado com 0.1% de azul de metileno+1J provocou um aumento estatísticamente significativo quando comparado em relação aos diferentes grupos tratados nos níveis e na expressão gênica dos diferentes marcadores inflamatórios, na geração EROS e MPO. Análise histológica complementou com os resultados anteriores, indicando que neste grupo há alterações morfológicas representadas por áreas de necrose na massa tumoral sólida com presença neutrofílica. Concluímos que há indícios que o tratamento 0.1% azul de metileno+ 1J foi capaz de gerar efeitos citotóxicos que por consequência aumentou a expressão dos mediadores inflamatórios promovendo inflamação e finalmente induzindo morte celular. / PDT is considered a new minimally invasive therapy for the treatment and selective destruction of various types of cancers. The objective was to evaluate the effects of methylene blue light activated may trigger inflammatory processes interfering with the development and tumor progression. The results showed that the group treated with 0.1 % methylene blue +1 J caused a statistically significant increase levels and gene expression of different inflammatory markers in ROS generation and MPO when compared at the different treat groups. Histological analysis complemented with previous results, indicating that there are morphological changes represented by areas of necrosis in the solid tumor mass with neutrophil presence in this group. We conclude that there is evidence that treatment 0.1 % methylene blue + 1J was able to generate cytotoxic effects therefore increased expression of inflammatory mediators, promoting inflammation and finally inducing cell death.

A TFD é considerada uma nova terapia minimamente invasiva destinada ao tratamento e destruição seletiva de diversos tipos de cânceres. Objetivo foi avaliar se os efeitos do azul de metileno fotoativado podem desencadear processos inflamatórios interferindo no desenvolvimento e na progressão tumoral. Os resultados demonstraram que o grupo tratado com 0.1% de azul de metileno+1J provocou um aumento estatísticamente significativo quando comparado em relação aos diferentes grupos tratados nos níveis e na expressão gênica dos diferentes marcadores inflamatórios, na geração EROS e MPO. Análise histológica complementou com os resultados anteriores, indicando que neste grupo há alterações morfológicas representadas por áreas de necrose na massa tumoral sólida com presença neutrofílica. Concluímos que há indícios que o tratamento 0.1% azul de metileno+ 1J foi capaz de gerar efeitos citotóxicos que por consequência aumentou a expressão dos mediadores inflamatórios promovendo inflamação e finalmente induzindo morte celular. / PDT is considered a new minimally invasive therapy for the treatment and selective destruction of various types of cancers. The objective was to evaluate the effects of methylene blue light activated may trigger inflammatory processes interfering with the development and tumor progression. The results showed that the group treated with 0.1 % methylene blue +1 J caused a statistically significant increase levels and gene expression of different inflammatory markers in ROS generation and MPO when compared at the different treat groups. Histological analysis complemented with previous results, indicating that there are morphological changes represented by areas of necrosis in the solid tumor mass with neutrophil presence in this group. We conclude that there is evidence that treatment 0.1 % methylene blue + 1J was able to generate cytotoxic effects therefore increased expression of inflammatory mediators, promoting inflammation and finally inducing cell death.