Orientador: Antonio Carlos Busoli / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Banca: Marcos Doniseti Michelotto / Resumo: Spodoptera cosmioides Walker, 1858 é uma espécie polífaga, resistente a inseticidas em várias regiões do país e, apesar de ocorrer em baixas densidades, é considerada uma praga potencial para as culturas de algodão, soja e feijão no cerrado. Neste trabalho, estudou-se a biologia comparada de S. cosmioides sobre a cultivar transgênica comercial NuOPAL (Bollgard I, Evento 531) e sobre a cultivar convencional DeltaOPAL, procurando-se detectar a influência da α -endotoxina CryIAc no desenvolvimento biológico dessa espécie. O experimento foi desenvolvido em condições de laboratório (26 ± 1ºC; UR: 70 ± 10%; fotofase: 12h), a partir de lagartas recém-eclodidas e individualizadas. Foram avaliadas a duração e a viabilidade das fases imaturas, duração do ciclo biológico, peso de pupas, razão sexual, porcentagem de deformação de adultos e de adultos não liberados dos invólucros pupais, longevidade dos adultos, fecundidade e viabilidade de ovos. Os parâmetros biológicos observados não diferiram significativamente em relação às duas variedades. Na cultivar NuOPAL verificou-se maior porcentagem de ovos inviáveis, de adultos deformados e de adultos não emergidos, o que indica que essa cultivar provavelmente afeta a fase adulta de S. cosmioides. / Abstract: Spodoptera cosmioides Walker, 1858 is a polyphagous species, presents resistance to insecticides in various regions of Brazil, and although it occurs at low densities, it's considered a potencial pest in the crop of cotton, soybeans and beans in the Brazilian cerrado. In this work was studied the comparative biology of S. cosmioides on the comercial transgenic NuOPAL (Bollgard I, Evento 351) and the conventional cultivar DeltaOPAL to detect the influence of endotoxin-α CryIAc on the biological development of this species. The experiment was conducted under specific conditions in a laboratory (26 ± 1º C; RH: 70 ± 10%; photoperiod: 12h), from newlyhatched and individualized larvae. The duration and viability of immature phases and biological cycle, weight of pupae, sex ratio, percentage of deformed adults and adults not released the pupal beg, longevity of adults, fecundity and viability of eggs were evaluated. The biological parameters observed showed that there weren't significant difference between two varieties studied. In NuOPAL cultivar there was a greater percentage of eggs unviable, deformed adults and adults not emerged, which indicates that this cultivar probably affects the adult phase of S. cosmioides. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-19Bitstream added on 2014-06-13T19:44:45Z : No. of bitstreams: 1 serra_me_dr_botfca.pdf: 858146 bytes, checksum: 84a2ab1f09b242594389dd1466b66b56 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O controle químico de pragas e doenças é uma prática imprescindível no manejo fitossanitário do algodoeiro para a redução das perdas de produtividade. Com o intuito de promover o uso racional dos produtos fitossanitários nessa cultura, esse trabalho teve por objetivo comparar três tecnologias de pulverização: assistida por ar, assistida por ar associada a gotas com carga elétrica e convencional (sem ar e carga elétrica) combinadas aos volumes de 50 e 100L.ha-1, sobre a deposição e cobertura da pulverização, controle de insetos pragas e doenças e produtividade da cultura do algodão. Os experimentos foram conduzidos no delineamento de blocos ao acaso com seis tratamentos e quatro repetições para avaliação da deposição, cobertura e controle de pragas e doenças. As pulverizações foram realizadas em dois estádios de desenvolvimento das plantas conduzidas nos espaçamentos de 0,45 m e 0,90 m entre linhas de semeadura da cultura. Para isso, utilizou-se um pulverizador autopropelido equipado com pontas de pulverização de jato cônico vazio, JA-1 (50L.ha-1) e JA-2 (100L.ha-1) na pressão de 828 kPa. Foi avaliado o efeito das respectivas tecnologias no controle de Pseudoplusia includens, Bemisia tabaci, Aphis gossypii, Spodoptera spp. e Thrips spp. e da doença fúngica Ramularia areola durante todo o ciclo de desenvolvimento da cultura, bem como a produtividade do algodoeiro no sistema de cultivo convencional. As dimensões das parcelas foram 24 m de largura x 100 m de comprimento em ambos os sistemas de semeadura, para os ensaios de deposição e cobertura. Para avaliação da deposição e cobertura foram escolhidas, ao acaso, 10 plantas e, de cada uma delas removida uma folha do ápice e outra folha da base da planta / Chemical control has been an essential practice on the pest management of cotton crop to reduce productivity losses. In order to promote rational use of pesticides, this work was aimed to compare three spray technologies: air-assisted, assisted by air associated with electrically charged droplets and conventional spraying (without air and electric charge) combined with volume rates of 50 and 100L.ha-1, on spray deposition, coverage and in the effect of control insect pests and disease. The trials were conducted in a randomized blocks design with six treatments and four replications for evaluation of the deposition, coverage and effect on pests and disease. The spraying was carried out on two growth stages of plants conducted in spacing of 0.45 m and 0.90 m between plant rows of culture. For this, were used a self-propelled sprayer equipped with spray nozzles hollow cone, JA-1 (50L.ha-1) and JA-2 (100L.ha-1) at 828 kPa of work pressure. The effect of these technologies was evaluated on controlling of Pseudoplusia includens, Bemisia tabaci, Aphis gossypii, Spodoptera spp. and Thrips spp. and a fungal disease Ramularia areola all the development cycle of the culture as well as the yield in conventional tillage. The dimensions of the plots were 24 m wide x 100 m length in both sowing systems for deposition and coverage tests. To evaluate the deposition and coverage were selected at random 10 plants and, of each one removed one leaf from the apex and another leaf of the lower part of plant. The tracer dye Brilliant Blue FD & C No. 1 (0.3%), fluorescent pigment ColorLight (0.15%) and Lignosulfonate Vixilperse (0.015%) were the tracer mixture. In experiments in which we evaluated the effect of the treatments on controlling pests and disease, were installed plots of 24 m wide x 250 m length and then weekly samplings were carried out as required spraying

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-07T12:19:44Z No. of bitstreams: 1 2017_MarceloHenriqueLisboaRennó.pdf: 483930 bytes, checksum: f71ab1a98d720224cd9ea980b3bfce6c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-12T19:02:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MarceloHenriqueLisboaRennó.pdf: 483930 bytes, checksum: f71ab1a98d720224cd9ea980b3bfce6c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T19:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MarceloHenriqueLisboaRennó.pdf: 483930 bytes, checksum: f71ab1a98d720224cd9ea980b3bfce6c (MD5) Previous issue date: 2017-09-12 / A incidência de doenças na cultura do algodoeiro tem restringido o aumento em produtividade em todas as regiões produtoras no Brasil. Dentre elas a Mancha de ramulária é a principal doença foliar do algodoeiro do Brasil. Com a expansão das áreas cultivadas para o Cerrado, a doença passou a se manifestar mais cedo provocando desfolha prematura, e consequentemente, a redução do potencial produtivo. O agente causal é tradicionalmente identificado como Ramularia areola, mas trabalhos recentes, com pouca representação de isolados nacionais transferiram o agente causal para Ramulariopsis pseudoglycines. Entretanto, uma amostragem representativa das populações brasileiras de R. areola ainda não foi estudada frente a esta classificação, para confirmar a identidade do agente causal no país. Além disso, a introdução recente de genótipos suscetíveis de algodão de origem australiana e americana, onde a doença é menos importante, tem levado a diversos surtos epidêmicos. O uso de defensivos químicos tem sido a principal forma de controle dessa doença, mas acarreta prejuízos ambientais. Além disso, aplicações intensivas de fungicidas podem induzir a seleção e prevalência de populações do patógeno resistentes aos princípios ativos mais empregados. A utilização de variedades resistentes é uma excelente alternativa de manejo, mas também induzem mudanças na composição da população do patógeno para superação de resistência do hospedeiro. O conhecimento das populações do patógeno predominantes em cada região produtora é fundamental para que os programas de melhoramento desenvolvam cultivares com resistência ampla e durável. Com base na ramificação dos conidióforos a partir da base o agente causal da doença foi transferido de Ramularia areola, para Ramulariopsis gossypii. Recentemente estudos moleculares revelaram a existência de uma nova espécie (Ramulariopsis pseudoglycines) associada com a mancha de ramulária. Adicionalmente, é possível que essa doença seja causada por um complexo de espécies, como descrito em outros patossistemas. Portanto uma amostragem representativa das populações brasileiras de Ramulariopsis spp. é fundamental para a identificação precisa do patógeno e consequentemente para o controle eficiente da doença. Diante disso esse trabalho teve como objetivos verificar a espécie predominante de Ramulariopsis que ocorre nas principais regiões produtoras de algodão no Brasil e avaliar isolados representantes de cada região, quanto a parâmetros epidemiológicos do patossistema algodão-ramularia. A caracterização molecular de 93 isolados representativos das principais regiões produtoras de algodão no país, revelou que todos os espécimes pertenceram a R. pseudoglycines. Nos ensaios de avaliação dos parâmetros epidemiológicos com cinco isolados, em condições controladas, os isolados do Mato Grosso do Sul e Mato Grosso causaram maiores incidência e severidade agressivos na cultivar susceptível cv. FM 975WS que os isolados do Maranhão, Bahia e Goiás. Além disso, o período de incubação dos isolados mais agressivos foi cinco dias menor que o dos isolados menos agressivos na cultivar susceptível. Quando avaliados na cultivar resistente cv. BRS 372 não foi superada por todos os isolados testados, com menores índices de doença. As cvs. TMG 47B2RF e DP 1648B2RF não apresentaram sintomas quando inoculados com quaisquer dos cinco isolados testados. / Incidence of cotton diseases restricts increases of crop yield in all Brazilian producing regions. Among these diseases, the Ramularia leaf spot is the most important foliar disease in cotton in Brazil. Due to the expansion of cultivated areas to the Cerrado region, the disease now arises earlier, causing premature defoliation and, consequently, reduction in yield. Causal agente is traditionally referred to as Ramularia areola, but recente work, with few representatives of Brazilian isolates transferred the causal agent to Ramulariopsis pseudoglycines. So far, a representative study of Brazilian R. areola isolates has not been undertaken. In addition, the recent introduction of cotton susceptible genotypes from Australia and the United States, where the disease is less important, has been associated to several epidemic outbreaks. Nowadays, the use of pesticides is the most important control strategy of this disease, but intensive use of chemicals lead to environmental risks. However, intensive sprayings of fungicides may lead to resistant pathogen populations. The use of resistant varieties is an excellent management alternative due to its high efficiency and low environment impact, but reliance on major host resistance genes also pressures pathogen population towards resistance breakdown. Understanding the mechanisms of resistance and the variability of the pathogen populations in co-evolution with the plant host are essential for breeding programs focused on developing resistant cultivars. Based on the ramification of the conidiophores, the causal agent of ramularia leaf spot was transferred from Ramularia aerola para Ramulariopsis gossypii, and recently, molecular characterization revealed still another entity associated to ramularia leaf spot, Ramulariopsis pseudoglycines. Additionally, it is possible that the disease is caused by a complex of species, as it has been described in other pathosystems. Thus, a study of a representative sample of the Brazilian populations Ramulariopsis spp. is fundamental for the precise identification of the pathogen and for the efficient disease management. Therefore, this work aimed to identifying the predominant species of Ramulariopsis occurring in the Brazilian cotton growing regions and to evaluate representative isolates of each locality as to epidemiological parameters of the cotton-ramularia pathosystem. Molecular characterization of 93 isolate representative of the main Brazilian cotton growing regions showed that all specimens belonged to R. pseudoglycines. In the assays for evaluation of epidemiological parameters, with five isolates, in controlled conditions, representatives of the states of Mato Grosso do Sul and Mato Grosso caused higher disease incidence and severity in the susceptible cv. FM 975WS than the isolates from the states Maranhão, Bahia and Goiás. Furthermore, period of incubation of the most aggressive isolates was five days shorter than the ones of the least aggressive isolates in the susceptible cultivar. When tested against the resistant cultivar BRS 372, resistance was overcame by all isolates, albeit with lower disease levels. Cultivars TMG 47B2RF and DP 1648B2RF did not show any disease symptoms when inoculated with any one of the five isolates studied.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-02T18:17:54Z No. of bitstreams: 1 2016_SandroCoelhoLinharesMontalvão_PARCIAL.pdf: 1518701 bytes, checksum: d86ee1aac30dfe2a9bb7f01f5ab7f320 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-06T17:55:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_SandroCoelhoLinharesMontalvão_PARCIAL.pdf: 1518701 bytes, checksum: d86ee1aac30dfe2a9bb7f01f5ab7f320 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-06T17:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_SandroCoelhoLinharesMontalvão_PARCIAL.pdf: 1518701 bytes, checksum: d86ee1aac30dfe2a9bb7f01f5ab7f320 (MD5) Previous issue date: 2017-10-06 / O algodoeiro é uma das espécies mais cultivadas no mundo. A cotonicultura brasileira tem destaque, ocupando o 5o lugar entre os produtores mundiais e 3o como exportador. Apresenta a maior média de produção por área cultivada (~5t/ha) em sequeiro no mundo. As pragas e doenças podem comprometer a produtividade. Assim, duas doenças merecem destaque, a meloidoginose (Meloidogyne incognita raças 3 e 4) e a murcha de fusário (Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum), pois podem ser destrutívas às plantas, tanto isoladamente como em associação. A dificuldade de se fazer um controle eficiente, é devido à capacidade dos patógenos de parasitarem uma ampla gama de hospedeiros e terem grande persistência no solo, dificultando o controle através de tratos culturais como a rotação de cultura e até mesmo a utilização de tratamentos químicos. A busca por alternativas como o uso de Bacillus sp. no controle de doenças de plantas é justificada. Assim, o objetivo geral desse trabalho foi selecionar e caracterizar estirpes de Bacillus antagonistas a M. incognita e F. oxysporum f. sp. vasinfectum (Fov). Para tanto, foi realizado um ensaio in vitro com 11 estirpes de Bacillus thuringiensis para verificar a atividade tóxica a Caenorhabditis elegans, e posteriormente contra J2 de M. incognita, em laboratório e em casa de vegetação. Também foram testados quatro produtos biológicos (Onix, Rizos, NemaControl e Nemix) e carbofuran – (Furadan 350 SC) para o controle de M. incognita em casa vegetação. Para isso, foi instalado um ensaio em delineamento inteiramente casualizado com seis repetições por tratamento e uma planta por vaso. Foram inoculados os ovos e eventuais J2 do nematoide, 20 dias após a emergência das plantas e as seguintes variáveis foram avaliadas: altura (cm), peso fresco da parte aérea (g), peso seco da parte aérea (g), peso fresco de raiz (g), peso seco de raiz (g) e fator de reprodução (FR). Para a histopatologia, foi selecionado o produto Onix (Bacillus methylotrophicus) inoculado em sementes de algodão. Vinte dias após a emergência das plântulas foi inoculada uma suspensão de J2 de M. incognita. As avaliações foram realizadas entre 2 e 45 dias após a inoculação, com o cálculo de fator de reprodução, acompanhamento da penetração de J2 durante os 12 primeiros dias após a inoculação dos nematoides e cortes histopatológicos da raiz para acompanhar o desenvolvimento do parasita. Para a realização dos ensaios de seleção de Bacillus contra Fov, foi realizada uma seleção prévia do meio de cultura, onde diferentes concentrações de meio EMBRAPA e meio BDA foram avaliadas. Nos testes de antagonismo, foi proposta uma escala de notas para facilitar as avaliações, onde com os testes e o auxilio da escala foram avaliados 178 isolados de Bacillus e selecionadas 13 estirpes para os ensaios de metabólitos solúveis em água e metabólitos voláteis. Por fim, foi realizado um teste em casa de vegetação para avaliar a eficiência dos isolados selecionados in vitro, onde as sementes de algodão foram sanitizadas, microbiolizadas com micélio e esporo de Fov colocadas em bandejas com substrato, inoculadas com os tratamentos e conduzidas em casa de vegetação por 25 d. Quatro estirpes de B. thuringiensis tóxicas a C. elegans também apresentaram atividade de controle in vivo sobre M. incognita; o produto Onix reduziu aproximadamente 50% o FR de M. incognita; para os testes de antagonismo contra Fov, as estirpes de Bacillus, GF267, S1301, S1823, S1967, S2535 e S2536 foram selecionadas. / Cotton crop is one of the most cultivated arround the world. The brazilian cotton production has grown, occupying 5th place among the world's producers and 3rd as exporter. Brazil presents the highest average production per cultivated area (~5t/ha) in non-irrigated land in the world. Pests and diseases can compromise the productivity. Thus, two diseases highlight: root-knot nematode (Meloidogyne incognita races 3 e 4) and Fusarium-wilt (Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum). These pathogens can be destructive to the plant, both singly as in association. The difficulty of making an efficient control, is due to the ability of the pathogens to infect a wide range of hosts and to have great persistence in soil, making difficult to control through cultural practices as the crop rotation and even the use of chemical treatments. The search for alternatives such as the use of Bacillus sp. in the control of plant diseases is justified. Thus, the overall objective of this work was to select and characterize strains of Bacillus antagonists to M. incognita and F. oxysporum f. sp. vasinfectum (Fov). For that, initialy an in vitro trial was conducted with 11 strains of Bacillus thuringiensis to evaluate their toxic activity to Caenorhabditis elegans, and later against J2 juvenilles of M. incognita, in laboratory conditions and under greenhouse. Were also tested four commercial products (Onix, Rizos, NemaControl and Nemix) and carbofuran – (Furadan 350 SC) for the control of M. incognita under greenhouse. This test was conducted in a completly randomized design with six replications per treatment and one plant per pot. Nematode eggs were inoculated, 20 d after emergence of plants and the following plant variables were evaluated: height (cm), shoot fresh weight (g), shoot dry weight (g), fresh root weight (g), root dry weight (g), the reproduction factor (RF). For the histopathological study was selected the product Onix (Bacillus methylotrophicus) inoculated in cotton seeds. Twenty days after cotton seed germination a suspension juvenilles of M. incognita was inoculated. The evaluations was carried out from 2 to 45 d after inoculation. The reproduction fator and penetration of J2 were evaluated and observed by histopathology tissue cuts. For the tests of selection of Bacillus against Fov, a prior selection of culture media was done, where different concentrations of culture medium EMBRAPA and BDA were evaluated. In tests of antagonism 178 isolates of Bacillus have been tested and 13 strains were selected for water-soluble metabolites and volatile metabolites. Finally, a greenhouse test was conducted to evaluate the efficiency of in vitro selected isolates, where the cotton seeds were inoculated with Fov and antagonists, and, cultivated under greenhouse for 25 d. Four strains of B. thuringiensis toxic to C. elegans also in vivo controled M. incognita; the product ‘Onix’ reduced around 50% of RF for M. incognita; in tests of antagonism against Fov, the strains of Bacillus, GF267, S1301, S1823, S1967, S2535 e S2536 were selected.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: capítulos I, II e III. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T16:49:59Z No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-20T12:06:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T12:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / O algodão é uma das principais commodities da economia brasileira, alavancando o País ao posto de quinto maior produtor mundial. Entre as diferentes pragas da cotonicultura, o bicudo-do-algodoeiro é o inseto-praga mais destrutivo. Pela biotecnologia, um dos métodos alternativos de controle de insetos-praga é o silenciamento gênico, por meio do RNA interferente. Contudo, em insetos, absorção do RNA fita dupla (dsRNA) produzidos por plantas é dificultada, principalmente em decorrência da clivagem do dsRNA na planta e da ação de nucleases presentes no intestino dos insetos. Assim, os objetivos do presente estudo foram estudar o papel de nucleases intestinais de Anthonomus grandis na degradação do dsRNA e aumentar a estabilidade das moléculas de dsRNA. Primeiramente, a atividade nucleásica ácida foi detectada no homogenato intestinal de A. grandis. Por meio da busca no transcritoma de A. grandis foram encontradas três contigs codificadores de nucleases, denominados AgNuc1, AgNuc2 e AgNuc3, cujas sequências foram caracterizadas e validadas por RNAi. As três sequências apresentaram similaridade acima de 50 % em relação às outras nucleases de insetos. A análise por qPCR demonstrou que AgNuc2 e AgNuc3 foram altamente expressas no intestino de A. grandis. O silenciamento específico de AgNuc2 culminou na redução da degradação do dsRNA; demonstrando ser a principal nuclease associada à degradação de dsRNA no lúmen intestinal de A. grandis. Além disso, visando aumentar a estabilidade do dsRNA, foram desenhados dsRNAs, baseados na arquitetura de viróide, que são resistentes à ação de nucleases. A análise do movimento de dsRNA-viróide marcado com Cy3 no sistema vascular de Arabidopsis thaliana demonstrou uma localização celular específica para a estrutura do dsRNA. O dsRNA baseado na arquitetura da família Pospiviroidae, foi localizado no núcleo das células, enquanto que o dsRNA, baseado na arquitetura da família Avsunviroidae, foi localizado nos cloroplastos das células. Os dsRNAs estabilizados mostraram uma capacidade de silenciamento gênico 8 vezes superior, quando comparado ao dsRNA linear não estruturado Os dados aqui gerados contribuem para o conhecimento do mecanismo de RNAi em insetos e demonstram que as moléculas de dsRNA estabilizados apresentam grande potencial para a aplicabilidade da tecnologia do RNAi visando o controle de insetos-praga. / Cotton is one of the most important Brazilian commodities and Brazil is the fifth largest world producer. Nonetheless, productivity is constantly crippled by a variety of agricultural pests. Among the different cotton insect pests, cotton boll weevil is the most destructive. By using biotechnology strategies, one of the alternative methods for controlling crop pests is gene silencing through RNA interference. However, in insects, the absorption of double stranded RNA produced by plants is hampered due to dsRNA cleavage in plants tissues and due to the presence of insect gut nucleases. In this context, the objects of this study were to investigate the dsRNA degradation by Anthonomus grandis gut nucleases and improve the stability of dsRNA. Nucleasic activity was detected in A. grandis intestinal homogenate. After searching in A. grandis transcriptome, three contigs codifying nucleases were found, called AgNuc1, AgNuc2 and AgNuc3, whose sequences were characterized and validated by RNAi. The three sequences showed similarity above 50% when compared to other insect nucleases. qPCR analysis showed that AgNuc2 and AgNuc3 are highly expressed in A. grandis midgut. AgNuc2 gene silencing resulted on reduction of dsRNA degradation; thereby, we concluded that AgNuc2 is the main nuclease associated with dsRNA degradation in A. grandis gut lumen. Additionally, in order to increase dsRNA stability, dsRNA with viroid architecture were designed, wich are resistant to plant nucleases. Viroid-dsRNA were marked with Cy3 and analysed regarding their movement in A. thaliana vascular system, wich showed that they are adressed to a specif cellular localization. dsRNA based on Pospiviroidae family architecture was located on cell nuclei while dsRNA based on Avsunviroidae family was located in chloroplasts. Moreover, these stabilized dsRNAs showed high gene silencing activity, eight times higher than linear dsRNA. The data here generated contribute to our understandings of RNAi mechanisms in insects and show that stabilized dsRNAs exhibit great pontential in RNAi applicability aiming crop insect pest control.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-07T14:18:13Z No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaSantanaSouzadaCosta.pdf: 5304298 bytes, checksum: 0aa869b4cb44917de0cfb5dfa7dc8eb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-11T09:54:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaSantanaSouzadaCosta.pdf: 5304298 bytes, checksum: 0aa869b4cb44917de0cfb5dfa7dc8eb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T09:54:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaSantanaSouzadaCosta.pdf: 5304298 bytes, checksum: 0aa869b4cb44917de0cfb5dfa7dc8eb7 (MD5) / Bioinseticidas à base de B. thuringiensis (Bt) são os mais comercializados e conhecidos emtodo o mundo por seu potencial no controle de insetos-praga. Porém seu efeito comoorganismo endofítico e promotor de crescimento são pouco estudados. Para avaliação dessesefeitos, foram realizados testes iniciais para verificar a ação de Bt sobre o crescimentovegetativo de plantas de algodão a partir da seleção de quatro estirpes de Bt (S1450, S1905,S2122 e S2124) por sua atividade tóxica sobre insetos da ordem Lepidoptera, três genótiposde algodão (BRS 8H, BRS Aroeira e BRS 286) e dois métodos de inoculação (via semente evia planta) em casa de vegetação. Os parâmetros analisados foram: germinação, altura,número de folhas, massa seca da parte aérea e radicular e comprimento de raiz. Ao final doexperimento as plantas foram oferecidas a larvas de S. frugiperda para avaliar a mortalidade.Com base nas análises dos resultados de eficiência em altura, massa seca e número de folhas,foi possível selecionar a estirpe S2122, a cultivar BRS 8H e o método de inoculação emsementes. Um segundo ensaio foi, então, planejado para dar continuidade dos estudos comdiferentes concentrações da estirpe S2122 de Bt e observação dos mesmos parâmetros. A cadasemana foi realizado um bioensaio oferecendo folhas destes tratamentos para larvas de S.frugiperda. Os resultados dos testes iniciais permitiram a conclusão de que o método deinoculação mais eficiente na promoção de crescimento de plantas de algodão foi via sementese que diferentes estirpes possuem padrões de interações diferenciados para determinadacultivar. Na segunda parte do trabalho, os resultados dos experimentos apresentaramdiferenças estatísticas na concentração 108 UFC/mL, mostrando incremento no crescimentovegetal das plantas de algodão e na produção de fitomassa. Embora tenha sido verificadabaixa mortalidade das lagartas nos bioensaios realizados semanalmente, as lagartas que sealimentaram de folhas dos tratamentos com Bt exibiram sintomas de intoxicação comaparência debilitada. Provavelmente as larvas destes insetos se alimentaram da proteínatóxica, porém em concentrações sub-letais. Estes sintomas de intoxicação foram observadosaté dezoito dias após a emergência das plantas. __________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bioinsecticides based on B. thuringiensis (Bt) are the most commercialized and well-knownones worldwide due to their potential for controlling insect pests. However, their effects as anendophytic organism and growth promoter have scarcely been studied. To evaluate theseeffects, initial tests were carried out to verify the action of Bt on the vegetative growth ofcotton plants, from the selection of four strains of Bt (S1450, S1905, S2122 and S2124), fortheir toxic activity on insects of the order Lepidoptera, using three cotton genotypes (BRS 8H,BRS Aroeira and BRS 286) and two methods of inoculation (via seed and via plant) in agreenhouse. The parameters analyzed were: germination, height, number of leaves, dry massof the aerial and root parts and length of the root. At the end of the experiment the plants wereoffered to larvae of S. frugiperda to evaluate the mortality rate. Based on the analyses of theresults for efficiency in terms of height, dry mass and number of leaves, it was possible toselect strain S2122, cultivar BRS 8H and the method of seed inoculation. A second assay wasthen planned, to continue the studies with different concentrations of strain S2122 of Bt andobservation of the same parameters. A bioassay was carried out each week, offering leavesfrom these treatments to larvae of S. frugiperda. The results of the initial tests led to theconclusion that the most efficient inoculation method in promoting cotton plant growth wasvia seeds, and that different strains have different patterns of interaction for each cultivar. Inthe second part of the work, the experimental results presented statistical differences at aconcentration of 108 UFC/mL, showing an increase in vegetative growth of cotton plants andin the production of plant mass. Although low mortality was seen for larvae in the weeklybioassays, those that fed on the leaves of treatments with Bt exhibited symptoms ofintoxication and a debilitated appearance. The larvae of these insects probably fed on the toxicprotein, but in sub-lethal concentrations. These symptoms of intoxication were observed until18 days after the plants emerged.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de ciências biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-26T15:13:15Z No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsMagalhaes.pdf: 2344391 bytes, checksum: 68933edb5741bb4bcd8c7ec8d6ec9f94 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-26T15:16:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsMagalhaes.pdf: 2344391 bytes, checksum: 68933edb5741bb4bcd8c7ec8d6ec9f94 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-26T15:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsMagalhaes.pdf: 2344391 bytes, checksum: 68933edb5741bb4bcd8c7ec8d6ec9f94 (MD5) / O bicudo-do-algodoeiro, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), é considerado uma das pragas-chave da cotonicultura brasileira devido ao prejuízo econômico causado por sua infestação, ausência de inimigos naturais eficientes e difícil controle por inseticidas. Uma das formas de monitoramento dessa praga tem sido feita através de armadilhas contendo feromônio de agregação e tem mostrado relativo sucesso. No entanto, estudos de campo revelaram que durante o período de floração do algodoeiro o número de insetos capturados nestas armadilhas diminui consideravelmente, sugerindo que voláteis produzidos pela planta neste estágio fenológico podem estar envolvidos na atração do bicudo. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil químico dos compostos orgânicos voláteis do algodoeiro nos diferentes estágios fenológicos e sob diferentes condições de herbivoria, bem como a atratividade destes para os adultos de A. grandis. Além disso, verificou-se a existência de sinergismo entre os voláteis liberados pelo algodoeiro e o feromônio de agregação emitido por machos de A. grandis. Assim, foram conduzidas coletas de voláteis de plantas de algodão, nos estágios vegetativo e reprodutivo, quando danificadas por insetos de diferentes guildas alimentares: o percevejo Euschistus heros Fabricius (Hemiptera: Pentatomidae), a lagarta Spodoptera frugiperda J. E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) e o besouro A. grandis. Os extratos contendo os voláteis do algodoeiro obtidos das aerações foram usados em bioensaios em olfatômetro em “Y” para avaliar a resposta de adultos de A. grandis e para análises químicas, por cromatografia gasosa e cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas. Os dados de olfatometria mostraram que os adultos de A. grandis foram atraídos pelos voláteis emitidos por plantas de algodão no estágio reprodutivo danificadas por co-específicos. Os voláteis induzidos por herbivoria do bicudo-do-algodoeiro em plantas no estágio reprodutivo apresentaram efeito sinérgico com o feromônio de agregação, aumentando o potencial de atração deste. Os voláteis induzidos por herbivoria de heteroespecíficos não foram atrativos para os adultos de A. grandis. As análises químicas mostraram que o algodoeiro produz diferentes perfis de liberação de voláteis de acordo com seu estágio fenológico e inseto que o ataca. Esse perfil foi qualitativamente semelhante, contudo apresentou diferenças quantitativas entre os tratamentos. O algodão no estágio vegetativo liberou voláteis em maior concentração quando comparado com o estágio reprodutivo. Em ambos os estágios, as maiores taxas de liberação de voláteis foram observadas nos tratamentos de herbivoria por A. grandis. Dessa forma, os resultados mostram que A. grandis usa os voláteis emitidos pelo algodoeiro danificado por co-específicos para a localização de hospedeiros e que compostos de origem terpênica estariam envolvidos em sua atratividade. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The boll weevil, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), is considered the major pest in cotton fields in Brazil, due to the economic losses caused by its infestation, absence of effective natural enemies and difficult to control through the insecticides usage. This pest has been successfully monitored throughout traps baited with aggregation pheromone with relative success. However, field studies showed that the number of insects caught in these traps was significantly reduced during the cotton blooming, suggesting that volatiles produced by plants in this phenological stage may be involved in the boll weevil’s attraction. The objectives of this study were evaluate the chemical profile of volatile organic compounds emitted by cotton plants at different phenological stages and under different infestation conditions, as well as the attractiveness of these volatiles to adults of A. grandis. In addiction, we verified if there is synergism between the volatiles released by cotton plants and the aggregation pheromone emitted by male boll weevils. Thus, headspace volatile were collected from cotton plants, in the vegetative and reproductive stages, and damaged by insects of different feeding guilds: the brown-stink bug Euschistus heros Fabricius (Hemiptera: Pentatomidae), the fall-armyworm Spodoptera frugiperda J. E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) and the boll weevil A. grandis. The cotton plant extracts obtained from headspace collections were used in “Y” tube olfactometer bioassays to evaluate the boll weevil’s response and for chemical analysis using gas chromatography and gas chromatography-mass spectometry. Olfactometry data showed that adults of A. grandis were attracted by volatiles emitted from cotton reproductive plants damaged by conspecific. Boll weevil’s herbivore-induced volatiles in cotton reproductive plants presented a synergistic effect with the aggregation pheromone, increasing its attracting potential. Volatiles induced by heterospecific herbivores were not attractive to adults of A. grandis. Chemical analysis showed that cotton plants produced different volatile profiles, based on their phenological stage and attacking insects. These profiles were qualitatively similar, but showed significant quantitative differences between treatments. Vegetative cotton plants released higher volatile concentrations compared to reproductive cotton plants. In both stages, the highest released volatile rates were observed in A. grandis herbivore treatments. Thus, the results showed that A. grandis uses conspecific herbivore induced volatiles to localize hosts plants and terpenic compounds may be involved in its attractiveness.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-09-30T17:28:01Z No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-02T16:40:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-02T16:40:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5) Previous issue date: 2007-06-25 / A lagarta Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) é uma praga de grande importância econômica em vários países do mundo. Por ser uma espécie polífaga que ataca severamente diferentes cultivos, ter uma grande capacidade de dispersão do adulto e apresentar uma ação voraz, esse lepidóptero ocasiona perdas na produção agrícola que variam de 15 a 34%. Uma importante ferramenta para melhorar as práticas de gerenciamento da praga e seu controle é a caracterização de diferenças genéticas entre populações. O objetivo desse trabalho foi analisar a variabilidade genética entre populações de S. frugiperda de ocorrência em diferentes regiões do Brasil nas culturas de milho e algodão utilizando-se marcadores RAPD e diferenciar essas populações por meio de um marcador do DNA mitocondrial. As amplificações do DNA das amostras de S. frugiperda utilizando 20 oligonucleotídeos para cinco populações produziram um total de 752 loci de RAPD. A análise por AMOVA revelou que a maior variabilidade genética (76,34 %) foi originária de variações dentro das populações e que entre as populações foi de 23,66 %. Através do dendrograma UPGMA observou-se dois agrupamentos distintos, os das populações de S. frugiperda do milho e os das populações desta praga na cultura de algodão. As análises de RAPD diferenciaram as populações de S. frugiperda por meio de fragmentos monomórficos presentes para todos indivíduos de determinadas populações. A análise da amplificação da região NADH-DH do DNAmt mostrou a presença de um fragmento de 600 pb para as populações de S. frugiperda na cultura do milho do Brasil e do México. No entanto, nas populações oriundas das culturas do algodão do Sul e do Mato Grosso do Brasil não houve amplificação desse fragmento. Os resultados obtidos mostraram que há variabilidade genética entre as populações de S. frugiperda coletadas nas culturas do milho e do algodão de diferentes regiões do Brasil e que foi possível diferenciar as populações desta praga nessas duas culturas por meio dos marcadores de RAPD e DNAmt. Com o auxílio desses marcadores, poderão ser desenvolvidas estratégias moleculares para o monitoramento da deriva genética, dinâmica da população e o controle da dispersão desse inseto. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The caterpillar S. frugiperda (J.E. Smith) is a pest of great economic importance in several countries around the world. Since it is a polyphagous species that severely attacks different cultures, has a great dispersion capacity by the adult and presents a voracious action, this lepidopteran causes losses in agricultural production that varies from 15% to 34%. An important tool to improve the practices of managing of the pest and its control is the characterization of genetic differences among populations. The objective of this work was to analyze the genetic variability among populations of S. frugiperda occurring in different regions of Brazil in the crops of corn and cotton, using RAPD markers and to differentiate these populations by the marker of DNAmt. The amplifications of the DNA from the samples of S. frugiperda using 20 primers to five populations produced a total of 752 RAPD loci . Analysis by AMOVA revealed that the greatest genetic variability (76.34%) was derived from variations inside the populations and that among the populations it was 23.66%. Through the dendrogram UPGMA there are two distinct groupings, one from the populations of S. frugiperda from corn and the second from the populations of this pest in the cotton crops. The RAPD analyses differenciated the populations of S. frugiperda by the monomorphic fragments present to in? all the individuals of some populations. The analysis of the profile of the mitochondrial DNA shows in the NADH-DH the presence of a fragment of 600 bp to the populations of S. frugiperda in the corn culture in Brazil and Mexico. However in the populations derived from cotton crops in the South and in Mato Grosso in Brazil there was no amplification of this fragment. The results showed that there is a genetic variability among the populations of S. frugiperda collected on from corn and cotton from different regions of Brazil from the marker RAPD and that it was possible to differentiate the populations of this pest in these two cultures through the markers of RAPD and DNAmt. This way, molecular strategies can be developed for the monitoring of genetic deriving, population dynamics and the dispersion control of this insect.

Orientador: Luiz Lonardoni Foloni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-08-03T12:20:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paradela_AndreLuis_D.pdf: 1337472 bytes, checksum: 45921ac403aac4bf8fd8fa22b4423796 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Orientador: Paulo Mazzafera / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T02:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Abrao_MarluciMundin_M.pdf: 2033158 bytes, checksum: 02bd87759812f0f20bce7ff1ed06a9d8 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Plantas de algodão (Gossypium hirsutum) dos cultivares Acala ( suscetível) e IAC-20 (tolerante) foram avaliadas quanto .ao crescimento e variações no conteúdo de açúcares solúveis, fenóis e clorofilas, e na atividade da redutase do nitrato, quando inoculadas com diferentes níveis de inoculo (0,500 e 5.000 ovos) de Meloidogyne incognita raça 3, ou quando inoculadas com apenas um nível, mas recebendo quantidades diferentes de duas fontes (nitrato e amônia) de nitrogênio. No primeiro experimento, no qual avaliaram-se as respostas a diferentes níveis de infecção, observou-se que o cultivar Acala é bastante suscetível e o cultivar IAC-20 é moderadamente resistente. Plantas inoculadas com 500 ovos ficaram mais ai tas e apresentaram maior acúmulo de massa seca na parte aérea e raízes. Também houve aumento da taxa fotossintética com a inoculação, ocorrendo o mesmo com a atividade da redutase do nitrato e o conteúdo de clorofila. As plantas inoculadas também foram submetidas a estresse hídrico controlado e foi determinado o potencial da água nas folhas. Nas plantas do cultivar Acala mediu-se potenciais da água maiores com o aumento do nível do inóculo. O contrário ocorreu com IAC-20. No experimento 2, no qual as plantas receberam diferentes fontes de N e em diferentes doses (água, solução de Hoagland sem N, Hoagland lxN-NO3, Hoagland 3xN-NO3, Hoagland lxN-NH4, Hoagland 3xN-NH4), também o cultivar IAC-20 mostrou-se bastante tolerante, ocorrendo o oposto com o cultivar Acala, independente da fonte e quantidade de nitrogênio utilizada. Os aumentos de massa seca de raizes e parte aérea repetiram-se, de certa forma. Além disso, houve resposta à adubação nitrogenada em função da quantidade aplicada, sendo observados os maiores aumentos nas plantas que receberam mais nitrogênio. Os teores de clorofila foram aumentados de acordo com o aumento de massa seca de folhas no cultivar Acala, sendo o aumento mais discreto quando a amônia era a fonte de N. O conteúdo de fenóis foi sempre maior nos tratamentos sem nitrogênio e água. A atividade da redutase do nitrato respondeu ao aumento do fornecimento de nitrogênio. No cultivar Acala, nitrato proporcionou maior a tividade do que amônia. De modo geral, a infecção levou a maior atividade da redutase de nitrato, sendo isto muito mais pronunciado no IAC-20 / Abstract: Growth and variation in the contents of soluble sugars, phenols and chlorophyll, and nitrate reductase activity were determined in cotton plants (Gossypium hirsutum) of cv. Acala (susceptible) and cv. IAC-20 (tolerant) inoculated with eggs (O, 500 e 5.000) of Meloidogyne incognita race 3. In a second experiment the same parameters were also determined in plants inoculated with 7.500 eggs of the nematode, which were fertilized with different amounts of nitrate or ammonium as the N source. In the first experiment it was determined that cvs. Acala and IAC-20 are, respectively, susceptible and tolerant to M. incognita race 3. Plants receiving 500 eggs were taller and accumulated more dry matter in the shoot and roots. They also showed increased values of photosynthesis, nitrate reductase activity and chlorophyll contento Inoculated plants were also subjected to controlled water stress and the leaf water potential determined with apressure pump. Lower potentials were observed in the plants of cv. IAC-20, which increase in root dry matter was lower (12%) than plants of cv. Acala (52%). In the second experiment the plants received: water, Hoagland solution without N, Hoagland 1xN-NO3, Hoagland 3xN NO3, Hoagland 1xN-NH4 or Hoagland 3xN-NH4. Here, IAC-20 was also tolerant to the nematode, independently of the N source and the amount applied. Increases of dry matter of shoot and roots were also observed for both cultivars. Plants receivinc more N accumulated more dry matter. Chlorophyll content waenhanced in Acala plants by N fertilization, however, less when ammonium was used. Phenols were always higher in plants receiving only water or nutrient solution -N. Nitrate reductase activity increase with N application. In general, nematode infection induced higher enzyme activity, this beinc more pronounced in cv. IAC-20 and plants receiving nitrate / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas