Visando fornecer novas alternativas para o controle do bicudo-do-algodeiro, Anthonomus grandis, Boheman, 1843 (Col.: Curculionidae), elaborou-se o presente trabalho. Os experimentos de campo foram conduzidos no município de Tietê/SP, e os de laboratório no Departamento de Biologia/UNESP, Campus de Ilha Solteira/SP. O trabalho constou da aplicação do feromônio "grandlure" em faixas, contornando a cultura do algodão, seguido da aplicação de inseticida, sobrepondo as faixas com feromônio. Constou ainda de outros ensaios com aplicação de inseticidas piretróides em formulações e doses diferentes. Os resultados obtidos permitiram concluir que o feromônio "grandlure" na dose de 250 g/ha atraiu adultos de A. grandis para áeas restritas, onde havia sido aplicado feromônio. A aplicação de feromônio seguida do inseticida Parathion metílico nas áreas tratadas com feromônio permitiu um atraso na infestação e surgimento de danos significativos da praga, em 60 dias, possibilitando uma redução no número de aplicações convencionais de inseticidas. A utilização dos produtos químicos Deltametrina 50 SC a 10g i.a/ha, Cipermetrina 200 SC a 50g i.a/ha, Ciflutrina 50 CE a 40g i.a/ha e Betaciflutrina 125 SC a 12,5g i.a/ha mostraram-se eficientes no controle do bicudo em 4 aplicações, espaçadas em 10 dias, e iniciadas aos 75 dias após a emergência da cultura.. As formulações de Deltrametrina e Cipermetrina em suspensão concentrada foram mais eficientes e tiveram maior efeito residual no controle do A. grandis que os mesmos produtos na formulação concentrada emulsionável. A manutenção do nível de dano do A.grandis em 10%, através do emprego de inseticidas, permitiu um acréscimo de 65% em média, na produtividade, em relação a áreas sem controle. / not available

Visando fornecer novas alternativas para o controle do bicudo-do-algodeiro, Anthonomus grandis, Boheman, 1843 (Col.: Curculionidae), elaborou-se o presente trabalho. Os experimentos de campo foram conduzidos no município de Tietê/SP, e os de laboratório no Departamento de Biologia/UNESP, Campus de Ilha Solteira/SP. O trabalho constou da aplicação do feromônio “grandlure” em faixas, contornando a cultura do algodão, seguido da aplicação de inseticida, sobrepondo as faixas com feromônio. Constou ainda de outros ensaios com aplicação de inseticidas piretróides em formulações e doses diferentes. Os resultados obtidos permitiram concluir que o feromônio “grandlure” na dose de 250 g/ha atraiu adultos de A. grandis para áeas restritas, onde havia sido aplicado feromônio. A aplicação de feromônio seguida do inseticida Parathion metílico nas áreas tratadas com feromônio permitiu um atraso na infestação e surgimento de danos significativos da praga, em 60 dias, possibilitando uma redução no número de aplicações convencionais de inseticidas. A utilização dos produtos químicos Deltametrina 50 SC a 10g i.a/ha, Cipermetrina 200 SC a 50g i.a/ha, Ciflutrina 50 CE a 40g i.a/ha e Betaciflutrina 125 SC a 12,5g i.a/ha mostraram-se eficientes no controle do bicudo em 4 aplicações, espaçadas em 10 dias, e iniciadas aos 75 dias após a emergência da cultura.. As formulações de Deltrametrina e Cipermetrina em suspensão concentrada foram mais eficientes e tiveram maior efeito residual no controle do A. grandis que os mesmos produtos na formulação concentrada emulsionável. A manutenção do nível de dano do A.grandis em 10%, através do emprego de inseticidas, permitiu um acréscimo de 65% em média, na produtividade, em relação a áreas sem controle. / not available

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Alexandre Marinho Pimenta (alexmpsin@hotmail.com) on 2009-09-03T22:08:33Z No. of bitstreams: 1 Dissert_KarenReginaVilarinho.pdf: 2920480 bytes, checksum: bfe0c903f90d65be70e3169d37d13508 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-09-14T15:23:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_KarenReginaVilarinho.pdf: 2920480 bytes, checksum: bfe0c903f90d65be70e3169d37d13508 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-14T15:23:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_KarenReginaVilarinho.pdf: 2920480 bytes, checksum: bfe0c903f90d65be70e3169d37d13508 (MD5) Previous issue date: 2007-07 / O algodão é uma das fibras mais importantes do mundo. Além disso, pertence ao grupo das oleaginosas e por este motivo é considerado como um elemento importante para biocombustíveis alternativos. Os custos da produção de algodão são muito elevados devido às pragas que ameaçam sua produtividade, qualidade e lucratividade. No Brasil, a produção de algodão também figura entre as culturas agrícolas mais importantes. Um dos principais obstáculos na produção de algodão é a presença de pragas, tal como o bicudo do algodoeiro Anthonomus grandis (Coleoptera: Curculionidae). Esta praga foi introduzida em 1983, na região Sudeste do Brasil e atualmente está disseminada por todas as áreas produtivas de algodão. Embora as fêmeas adultas prefiram os botões florais, elas ovipositam dentro dos botões florais e das maçãs, reduzindo a produção e a qualidade da fibra. Medidas fitossanitárias aplicadas para o controle da praga dependem do uso intenso de pesticidas, os quais resultam em problemas ambientais. Estes pesticidas podem envenenar os trabalhadores, matar insetos benéficos e microorganismos do solo e contaminam a água. A exemplo do Programa de Área Livre de bicudo-doalgodoeiro utilizado em uma área da região do cerrado, eficientes medidas fitossanitárias integradas em outras regiões do país são muito importantes para diminuir a população, os prejuízos econômicos e eventualmente a erradicação da praga. Este estudo foi realizado na região do cerrado, em cinco áreas produtoras de algodão do DF, com o objetivo de avaliar a diversidade genética das populações de bicudo-do-algodoeiro. Nessas áreas, medidas fitossanitárias foram aplicadas semanalmente para o controle da população do inseto. Um grande número de bicudos-do-algodoeiro foi coletado em todas as áreas estudadas, mesmo com as intensas aplicações de inseticidas durante o desenvolvimento da cultura. Os resultados também confirmaram que nessas áreas o inseto teve um índice alto de sobrevivência, com várias gerações durante todo o ciclo do algodão, reproduzindo-se e migrando para as áreas de vegetação natural, que servem como refúgio para a população durante a entressafra da cultura. Análises moleculares de RAPD forneceram informações úteis para as cinco populações estudadas. Embora a maior distância geográfica entre as áreas de produção fosse de 13 km, os marcadores RAPD detectaram variabilidade genética entre as populações de bicudo-doalgodoeiro, mostrando dois subgrupos distintos. A análise intrapopulacional realizada em uma das áreas estudadas também apresentou dois subgrupos distintos: um formado pelas subpopulações da pré-floração e da floração; e outro da subpopulação pós-floração. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cotton is one of the most important fiber in the world. It is also in the category of oilseed group and therefore is now considered as an important element for biofuels alternatives. Cotton cost production is very high because of pests that threaten its productivity, quality and profitability. In Brazil, cotton production also figures among the most important cultivated crops. One of the major challenges of cotton production is the presence of pests such as the boll weevil, Anthonomus grandis (Coleoptera: Curculionidae). This pest was introduced in 1983, in the southeast region of Brazil and nowadays it has spread to all cotton production areas. Although adult females prefer squares, they oviposit into both squares and young bolls reducing yield and quality of the fiber. Phytosanitary measures applied to control the pest, depend heavily on hazard pesticides which in turn have been leading to environmental problems. These pesticides can poison farm workers, kill beneficial insects and soil microorganisms and contaminate ground and surface water. In spite of The Boll Weevil Free Area Program in progress in one area of the savanna region, efficient integrated phytosanitary management in others regions of the country is very important to bring the population down to specific economic injury levels and economic thresholds and eventually to eradication. This study was conducted in five cotton production areas of the savanna region, in DF, Brazil, with a goal to evaluate the genetic diversity of the boll weevil populations. In those areas, phytosanitary measures were applied weekly to control the insects’ populations. High numbers of boll weevils were collected in all fields studied in spite of insecticide applications during the growing season. The results also confirmed that in those areas the insect went through several overlapping generations during every crop season, reproducing and moving often to surrounding natural vegetation areas as a refuge to its population. Molecular analysis of RAPD technique provided useful information on the population collected in the five areas. Although the highest geographic distance among the production sites was of 13 km, the results revealed polymorphism between the weevil populations showing two distinct subgroups. Intrapopulation analysis realized in one of the sites studied also revealed two distinct subgroups of weevils, being one subgroup of cotton first bloom and early bloom populations and the other,peak bloom subgroup population.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-05-04T13:42:40Z No. of bitstreams: 1 PDF - Thiele da Silva Carvalho.pdf: 511949 bytes, checksum: 0f4ebd9e36dd151268ce66e48942d5d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:30:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Thiele da Silva Carvalho.pdf: 511949 bytes, checksum: 0f4ebd9e36dd151268ce66e48942d5d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:33:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Thiele da Silva Carvalho.pdf: 511949 bytes, checksum: 0f4ebd9e36dd151268ce66e48942d5d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Thiele da Silva Carvalho.pdf: 511949 bytes, checksum: 0f4ebd9e36dd151268ce66e48942d5d7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The cotton boll weevil, Anthonomusgrandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), is a very important pest for the Brazilian cotton due to the injuries caused on the squares, flowers and bolls. These injuries reduce the production and are responsible for causing great economic losses to the farmer. Among the alternatives for the management of this pest can highlight the control tactics based on plant resistance to insects. This research aimed to determine the morphophysiological mechanism involved in resistance of some primitive races of cotton against boll weevil. The work were conducted in the field, in an area infested by the bolls weevils, in the greenhouse and in the laboratory of Pathology and Molecular Biology of Insects at EmbrapaCotton, municipality of Campina Grande, state of Paraíba. Two experiments were conducted. The first experiment aimed to select the most promising lines for resistance to boll weevil among the lines TB 15, TB 41, TB 75, TB 80, TB 85, TB 87, TB 90, TB 91 originating fromprimitive races of cotton and BRS 187 8H (control).The experimental design was randomized blocks with nine treatments and 4 repetitions. The treatments were represented by lines and cultivar cited cotton. Data were submitted to analysis of variance a nd the means compared by Tukey test at 5% probability. Pearson correlation coefficients were estimated between the number of punctured squares to feed and oviposition by the boll weevil and the 2 average number of trichomes and gossypol glands per cm leaf, height and diameter of the cotton rods with 120 days old. The second experiment aimed at determining the preference for feeding and oviposition of boll weevil on the squares of the six most promising lines selected in the first experiment in test with and without chance of choice.In the choice test was used completely randomized design in a factorial scheme with six cotton lines (G1=TB 90, G2= TB87, G3= TB 80; G4= TB 75; G5= TB 41 and G6= Grandless) nine hours evaluation (15 min, 30 min, 1 hour, 2 hours, 4 hours, 6 hours, 8 hours, 12 hours and 24 hours) and ten replicates. In the test no choice, the experimental design was completely randomized, with five treatments, represented by boll weevil adults fed with cotton squares of the same lines of cotton used in the test of choice except to cultivate Grandless and five replications.The average number of trichomes and 2 2 gossypol glands per cm and teeth on bracts and the gossypol glands per cm on the sepals and of the nectaries in squares of cotton lines was determined to establish a correlation with the damage caused by feeding and oviposition of boll weevil on the squares. Data from tests with and without choice were subjected to analysis of variance (ANOVA) at 5% probability and the averages compared by Tukey test at 5% probability.In the field,the less preferred cotton line for ovipositionwasTB80. In the test-choice, the cottonlinewith smaller number of the boll weevil and punctured squares by feedingwasTB41. Under no chance of choice, the cultivarsTB80andTB41 wereless preferredfor food and line TB90showedsmaller number of punctured squares by oviposition.TheMorphophysiologicalmechanismsofresistanceprimitive racetested againstthe boll weevilare related tominor amounts of glands of the gossypol andnectariespresent, respectively, in the leaves and at the base of square. / O bicudo, AnthonomusgrandisBoheman (Coleoptera: Curculionidae), é uma praga de grande importância para a cotonicultura brasileira em função das injúrias provocadas sobre os botões florais, flores e maçãs do algodoeiro. Entre as alternativas para o manejo dessa praga pode-se destacar a tática de controle baseada na resistência de plantas aos insetos. Objetivou -se determinar o mecanismo morfofisiológico envolvido na resistência de algumas raças primitiva s de algodão ao bicudo. Foram realizados dois experimentos. O primeiro experimento visou selecionar as linhagens mais promissoras quanto à resistência ao bicudo entre as linhagens TB15, TB41, TB75, TB80, TB85, TB87, TB90, TB91 oriundas de raças primitivas de algodoeiros e a cultivar BRS 187 8H (testemunha). O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com nove tratamentos e 4 repetições. Os tratamentos foram representados pelas linhagens e a cultivar de algodoeiros citadas. O segundo experimento visou determinar a preferência para alimentação e oviposição do bicudo sobre os botões florais das seis linhagens mais promissoras selecionadas no primeiro experimento em teste com e sem chance de escolha. No teste com escolha, utilizou - se delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial com seis linhagens de algodoeiro (G1= TB90; G2= TB87; G3= TB80; G4= TB75; G5 = TB41 e G6= Grandless), nove horários de avaliação (15 min, 30 min, 1 hora, 2horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas e 24 horas) e dez repetições. No teste sem chance de escolha, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com cinco tratamentos, representados por adultos do bicudo alimentados com botões florais das mesmas linhagens de algodoeiros utilizadas no te ste de escolha, exceto a cultivar Grandless e cinco repetições.Os dados de ambos os experimentos foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey(P=0,05), utilizando-se o Sistema de Análises Estatíssticas e Genéticas (SAEG) da Universidade Federal de Viçosa. Foram estimados no experimento de seleção de linhagens de algodoeiros resistentes ao bicudo, os coeficientes de correlação de Pearson entre o número de botões florais com orifício de alimentação e oviposição pelo bicudo e os números médios de tricomas e de glândulas de 2 gossipol por cm das folhas e altura e diâmetro das hastes das plantas de algodoeiro com 120 dias de idade. No ensaio de preferência de alimentação e oviposição do bicudo foram estimados os coeficientes de correlação de Pearson entre o número de botões florais com orifício de alimentação e oviposição pelo bicudo e os números médios de tricomas e de glândulas de 2 2 gossipolpor cm e dos dentes nas brácteas, de glândulas de gossipol por cm nas sépalas e o de nectários nos botões florais das linhagens de algodoeiros.No campo, a linhagem de algodoeiro menos preferida para oviposição foi TB80. No teste de chance de escolha, a linhagem de algodoeiro com menor número de bicudos e de orifícios de alimentação foi TB41. Sob condições de confinamento, as cultivares TB80 e TB41 foram menos preferidas para alimentação enquanto que a linhagem TB90 apresentou menor número de orifícios de oviposição. Os mecanismos morfofisiológicos de resistência de raças primitivas testadas contra o bicudo estão relacionados às menoresquantidades de glândulas de gossipole de nectários presentes, respectivamente, nas folhas e na base dos botões florais.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-01. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:06Z : No. of bitstreams: 1 000858038.pdf: 2029297 bytes, checksum: 32eca951c39a9154e19ceffc8c5311f5 (MD5) / O bicudo-do-algodoeiro, Anthonomus grandis, é a principal praga da cotonicultura mundial e o conhecimento de sua bioecologia e distribuição na cultura é indispensável para realizar amostragens e determinar o momento adequado de seu controle. O objetivo deste trabalho foi estudar a dinâmica populacional, a distribuição vertical e espacial de A. grandis, bem como elaborar um plano de amostragem sequencial para essa praga. Os experimentos foram conduzidos nos anos agrícolas 2012/13 e 2013/14, na Estação Experimental da Fundação MS, em Maracaju, MS, em um campo de 10.000 m2, subdividido em 100 parcelas de 10 x 10 m. A cultivar utilizada foi FM 993, semeada com 80 cm de espaçamento entrelinha. Para a condução da cultura foram utilizados fungicidas, herbicidas e o regulador de crescimento, exceto inseticidas. Semanalmente foram avaliadas cinco plantas por parcela e registrou-se o número de botões florais com orifícios de alimentação, oviposição e de adultos de A. grandis em cada estrato das plantas (terço superior, médio e inferior). Para o estudo da dispersão da praga na área, foram utilizados os índices: razão variância/média, índice de Morisita, Coeficiente de Green e expoente k da distribuição Binomial Negativa. Para estudo dos modelos probabilísticos que descrevem a distribuição espacial dos insetos, foram testados os ajustes às distribuições de Poisson e Binomial Negativa. O plano de amostragem sequencial foi elaborado com base no Teste Sequencial da Razão da Máxima Verossimilhança, e foi utilizado o nível de controle de 10% dos botões florais atacados (alimentação + oviposição) e o nível de segurança de 5% de botões florais atacados (alimentação + oviposição). O valor do erro tipo I e do erro tipo II utilizado foi 0,05, o mais indicado para estudos com insetos. A distribuição espacial dos botões florais utilizados para alimentação e para oviposição foi de forma agregada até... / The cotton boll weevil Anthonomus grandis is the main pest of cotton crop worldwide, and the knowledge of its bioecology and distribution is essential to carry out sampling and determine the right time of your control. The main purpose of this study was to evaluate the population dynamics, vertical and spatial distribution of A. grandis and prepare a sequential sampling plan for this pest. The experiments were conducted in two seasons, 2012/13 and 2013/14, at the Experimental Station of the Foundation MS, in Maracaju, MS, in a field of 10,000 m2, divided into 100 plots of 10 x 10 m. The cultivar used was FM 993, seeded 80 cm rows apart. For the crop development were used fungicides, herbicides and growth regulators, except insecticides. Five plants per plot were weekly evaluated and recorded the number of flower buds with feeding and oviposition punctures, and adults of A. grandis in each part of five plants (upper, middle and lower). To dispersion study of A. grandis in the area, the following indexes were used: variance/mean ration, Morisita index, Green coefficient and k exponent of negative binomial distribution. To study the probabilistic models that describes the spatial distribution of insects, adjustments to Poisson and Negative Binomial distributions were tested. The sequential sampling plan was based on Maximum Likelihood Reason Sequential Test, and used the threshold level of 10% of attacked flower buds (feeding + oviposition) and the security level of 5% of attacked flower buds (feeding + oviposition). The values of type I and type II errors used was 0.05, the most suitable for insect studies. The spatial distribution of flower buds with feeding and oviposition was aggregate up to 85 DAE, with best fit to the Negative Binomial distribution, and as of this date was random, with best fit to the Poisson distribution. Adults of A. grandis are randomly distributed in the area, with best fit to Poisson distribution throughout ...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: capítulos I, II e III. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T16:49:59Z No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-20T12:06:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T12:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5) / O algodão é uma das principais commodities da economia brasileira, alavancando o País ao posto de quinto maior produtor mundial. Entre as diferentes pragas da cotonicultura, o bicudo-do-algodoeiro é o inseto-praga mais destrutivo. Pela biotecnologia, um dos métodos alternativos de controle de insetos-praga é o silenciamento gênico, por meio do RNA interferente. Contudo, em insetos, absorção do RNA fita dupla (dsRNA) produzidos por plantas é dificultada, principalmente em decorrência da clivagem do dsRNA na planta e da ação de nucleases presentes no intestino dos insetos. Assim, os objetivos do presente estudo foram estudar o papel de nucleases intestinais de Anthonomus grandis na degradação do dsRNA e aumentar a estabilidade das moléculas de dsRNA. Primeiramente, a atividade nucleásica ácida foi detectada no homogenato intestinal de A. grandis. Por meio da busca no transcritoma de A. grandis foram encontradas três contigs codificadores de nucleases, denominados AgNuc1, AgNuc2 e AgNuc3, cujas sequências foram caracterizadas e validadas por RNAi. As três sequências apresentaram similaridade acima de 50 % em relação às outras nucleases de insetos. A análise por qPCR demonstrou que AgNuc2 e AgNuc3 foram altamente expressas no intestino de A. grandis. O silenciamento específico de AgNuc2 culminou na redução da degradação do dsRNA; demonstrando ser a principal nuclease associada à degradação de dsRNA no lúmen intestinal de A. grandis. Além disso, visando aumentar a estabilidade do dsRNA, foram desenhados dsRNAs, baseados na arquitetura de viróide, que são resistentes à ação de nucleases. A análise do movimento de dsRNA-viróide marcado com Cy3 no sistema vascular de Arabidopsis thaliana demonstrou uma localização celular específica para a estrutura do dsRNA. O dsRNA baseado na arquitetura da família Pospiviroidae, foi localizado no núcleo das células, enquanto que o dsRNA, baseado na arquitetura da família Avsunviroidae, foi localizado nos cloroplastos das células. Os dsRNAs estabilizados mostraram uma capacidade de silenciamento gênico 8 vezes superior, quando comparado ao dsRNA linear não estruturado Os dados aqui gerados contribuem para o conhecimento do mecanismo de RNAi em insetos e demonstram que as moléculas de dsRNA estabilizados apresentam grande potencial para a aplicabilidade da tecnologia do RNAi visando o controle de insetos-praga. / Cotton is one of the most important Brazilian commodities and Brazil is the fifth largest world producer. Nonetheless, productivity is constantly crippled by a variety of agricultural pests. Among the different cotton insect pests, cotton boll weevil is the most destructive. By using biotechnology strategies, one of the alternative methods for controlling crop pests is gene silencing through RNA interference. However, in insects, the absorption of double stranded RNA produced by plants is hampered due to dsRNA cleavage in plants tissues and due to the presence of insect gut nucleases. In this context, the objects of this study were to investigate the dsRNA degradation by Anthonomus grandis gut nucleases and improve the stability of dsRNA. Nucleasic activity was detected in A. grandis intestinal homogenate. After searching in A. grandis transcriptome, three contigs codifying nucleases were found, called AgNuc1, AgNuc2 and AgNuc3, whose sequences were characterized and validated by RNAi. The three sequences showed similarity above 50% when compared to other insect nucleases. qPCR analysis showed that AgNuc2 and AgNuc3 are highly expressed in A. grandis midgut. AgNuc2 gene silencing resulted on reduction of dsRNA degradation; thereby, we concluded that AgNuc2 is the main nuclease associated with dsRNA degradation in A. grandis gut lumen. Additionally, in order to increase dsRNA stability, dsRNA with viroid architecture were designed, wich are resistant to plant nucleases. Viroid-dsRNA were marked with Cy3 and analysed regarding their movement in A. thaliana vascular system, wich showed that they are adressed to a specif cellular localization. dsRNA based on Pospiviroidae family architecture was located on cell nuclei while dsRNA based on Avsunviroidae family was located in chloroplasts. Moreover, these stabilized dsRNAs showed high gene silencing activity, eight times higher than linear dsRNA. The data here generated contribute to our understandings of RNAi mechanisms in insects and show that stabilized dsRNAs exhibit great pontential in RNAi applicability aiming crop insect pest control.

Orientador: Antonio Carlos Busoli / Coorientador: Marcos Gino Fernandes / Banca: José Carlos Barbosa / Banca: Raphael de Campos Castilho / Banca: Marcos Doniseti Michelotto / Banca: Crébio José Ávila / Resumo: O bicudo-do-algodoeiro, Anthonomus grandis, é a principal praga da cotonicultura mundial e o conhecimento de sua bioecologia e distribuição na cultura é indispensável para realizar amostragens e determinar o momento adequado de seu controle. O objetivo deste trabalho foi estudar a dinâmica populacional, a distribuição vertical e espacial de A. grandis, bem como elaborar um plano de amostragem sequencial para essa praga. Os experimentos foram conduzidos nos anos agrícolas 2012/13 e 2013/14, na Estação Experimental da Fundação MS, em Maracaju, MS, em um campo de 10.000 m2, subdividido em 100 parcelas de 10 x 10 m. A cultivar utilizada foi FM 993, semeada com 80 cm de espaçamento entrelinha. Para a condução da cultura foram utilizados fungicidas, herbicidas e o regulador de crescimento, exceto inseticidas. Semanalmente foram avaliadas cinco plantas por parcela e registrou-se o número de botões florais com orifícios de alimentação, oviposição e de adultos de A. grandis em cada estrato das plantas (terço superior, médio e inferior). Para o estudo da dispersão da praga na área, foram utilizados os índices: razão variância/média, índice de Morisita, Coeficiente de Green e expoente k da distribuição Binomial Negativa. Para estudo dos modelos probabilísticos que descrevem a distribuição espacial dos insetos, foram testados os ajustes às distribuições de Poisson e Binomial Negativa. O plano de amostragem sequencial foi elaborado com base no Teste Sequencial da Razão da Máxima Verossimilhança, e foi utilizado o nível de controle de 10% dos botões florais atacados (alimentação + oviposição) e o nível de segurança de 5% de botões florais atacados (alimentação + oviposição). O valor do erro tipo I e do erro tipo II utilizado foi 0,05, o mais indicado para estudos com insetos. A distribuição espacial dos botões florais utilizados para alimentação e para oviposição foi de forma agregada até... / Abstract: The cotton boll weevil Anthonomus grandis is the main pest of cotton crop worldwide, and the knowledge of its bioecology and distribution is essential to carry out sampling and determine the right time of your control. The main purpose of this study was to evaluate the population dynamics, vertical and spatial distribution of A. grandis and prepare a sequential sampling plan for this pest. The experiments were conducted in two seasons, 2012/13 and 2013/14, at the Experimental Station of the Foundation MS, in Maracaju, MS, in a field of 10,000 m2, divided into 100 plots of 10 x 10 m. The cultivar used was FM 993, seeded 80 cm rows apart. For the crop development were used fungicides, herbicides and growth regulators, except insecticides. Five plants per plot were weekly evaluated and recorded the number of flower buds with feeding and oviposition punctures, and adults of A. grandis in each part of five plants (upper, middle and lower). To dispersion study of A. grandis in the area, the following indexes were used: variance/mean ration, Morisita index, Green coefficient and k exponent of negative binomial distribution. To study the probabilistic models that describes the spatial distribution of insects, adjustments to Poisson and Negative Binomial distributions were tested. The sequential sampling plan was based on Maximum Likelihood Reason Sequential Test, and used the threshold level of 10% of attacked flower buds (feeding + oviposition) and the security level of 5% of attacked flower buds (feeding + oviposition). The values of type I and type II errors used was 0.05, the most suitable for insect studies. The spatial distribution of flower buds with feeding and oviposition was aggregate up to 85 DAE, with best fit to the Negative Binomial distribution, and as of this date was random, with best fit to the Poisson distribution. Adults of A. grandis are randomly distributed in the area, with best fit to Poisson distribution throughout ... / Doutor

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Banca: Vivian Boter Bergamasco / Banca: Jackson Antonio Marcondes de Souza / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito inseticida das proteínas Cry1Ia10 e Cry8 contra larvas de Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), buscando por potencial sinérgico. Para tanto, o gene cry8 foi amplificado por PCR a partir de um clone previamente construído, obtendo-se um fragmento de aproximadamente 3531 pb e subclonado no vetor de expressão pET-SUMO. Para a expressão dos genes cry1Ia10 e cry8, os DNAs recombinantes foram inseridos em células de Escherichia coli BL21 (DE3) e induzidos por isopropil-β-D-tiogalactopiranosídeo (IPTG), resultando em proteínas de 94 kDa e 143 kDa, respectivamente, visualizadas em SDS-PAGE. As proteínas foram quantificadas através do software ImageQuant TL 8.1" (GE Healthcare), para que fosse possível a realização dos cálculos de diluição nas respectivas concentrações incorporadas à dieta artificial, a fim de estimar a CL50 e CL90 das duas proteínas testadas sozinhas e em conjunto. Com base na sequência de aminoácidos de proteínas da classe Cry8, análises filogenéticas foram realizadas para investigar proximidade evolutiva da proteína Cry8 utilizada neste trabalho com as demais proteínas na mesma classe. Através dessas análises, sugerimos que a proteína em questão pertence à subclasse Cry8Pa devido a elevada proximidade filogenética e similaridade com a proteína Cry8Pa2. Observou-se que as proteínas Cry1Ia10 e Cry8 apresentaram ação inseticida contra larvas neonatas de A. grandis, obtendo-se as CL50 de 7,232 µg ml-1 e ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this work was to evaluate the insecticidal effect of Cry1Ia10 and Cry8 proteins against Anthonomus grandis Boheman larvae (Coleoptera: Curculionidae), searching for synergistic potential. To do so, the cry8 gene was amplified by PCR from a previously constructed clone, obtaining a fragment of approximately 3531 bp and subcloned into the pET-SUMO expression vector. For the expression of the cry1Ia10 and cry8 genes, the recombinant DNAs were inserted into Escherichia coli BL21 (DE3) and isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside (IPTG) cells, resulting in 94 kDa and 143 kDa proteins, respectively, visualized on SDS-PAGE. The proteins were quantified using ImageQuant TL 8.1 software (GE Healthcare) to allow the calculation of dilution in the respective concentrations incorporated into the artificial diet in order to estimate the LC50 and CL90 of the two proteins tested alone and together. Based on the amino acid sequence of Cry8 class proteins, phylogenetic analyzes were performed to investigate evolutionary proximity of the Cry8 protein used in this work with the other proteins in the same class. Through these analyzes, we suggest that the protein in question belongs to the subclass Cry8Pa due to its high phylogenetic proximity and similarity to the Cry8Pa2 protein. It was observed that the proteins Cry1Ia10 and Cry8 showed insecticidal action against neonatal larvae of A. grandis, obtaining the LC50 of 7.232 μg ml-1 and 4.422 μg ml-1 for Cry1Ia10 and Cry8 respectively. When combined the proteins at LC50 is reduced to 2,664 μg ml-1 and CL90 to 13,535 μg ml1 showed synergism, potentiating the insecticidal action of the same. This study concludes that A. grandis larvae are susceptible to Cry1Ia10 and Cry8 proteins and that the combination between them increa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:25:31Z : No. of bitstreams: 1 alves_mc_me_jabo.pdf: 784728 bytes, checksum: a9d8c2237ee21059f774f2a73b627b7f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O controle biológico utilizando microrganismos vem sendo estudado como uma alternativa ao uso de agroquímicos. Estes pesticidas poluem o ambiente, além de serem tóxicos a diversas espécies vegetais e animais. Diante disso, a bactéria Bacillus thuringiensis é um importante entomopatógeno que vem sendo utilizado na agricultura pelo fato de secretar proteínas que são tóxicas a insetos pertencentes a diversas ordens. Dentre os diversos genes de B. thuringiensis que codificam proteínas tóxicas, as classes vip1, vip2 e cry3 destacam-se como alternativa para o controle de insetos-praga da ordem Coleoptera. O presente trabalho objetivou a identificação e caracterização molecular, por meio da técnica de PCR-RFLP, dos genes cry3, vip1, vip2 e vip1/vip2 em uma coleção de B. thuringiensis, quanto a possíveis polimorfismos existentes, procurando relacioná-los à toxicidade em larvas de Anthonomus grandis. Da análise de 1078 isolados de B. thuringiensis, foram encontrados 151 isolados positivos para os genes em estudo e 14 perfis polimórficos, indicando a presença de subclasses destes genes. Os resultados obtidos nos ensaios de toxicidade indicam que os polimorfismos gênicos podem apresentar interferência na toxicidade das proteínas, sendo que a toxina Cry3 apresentou uma maior efetividade na mortalidade em larvas de A. grandis. Os resultados também evidenciaram que a PCR-RFLP mostrou-se apropriada para a detecção da variabilidade genética em B. thuringiensis, permitindo a identificação de haplótipos / Biological control using microorganisms is being studied as an alternative to the use of agrochemicals. These pesticides pollute the environment, being toxic to many species of plants and animals. For these reasons, the bacterium Bacillus thuringiensis is an important entomopathogen that has been used in agriculture, once it produces proteins that are toxic to many target insect orders. Among several genes from B. thuringiensis that encode toxic proteins there are vip1, vip2 and cry3 classes that stand as an alternative for controlling insect pests belonging the Coleoptera order. The objective of this work was to identify and characterize molecularly, through PCR-RFLP, the genes cry3, vip1, vip2 and vip1/vip2 in a collection of B. thuringiensis, for possible polymorphisms exist, trying to relate them to the toxicity in Anthonomus grandis larvae. Analysis of 1078 isolates of B. thuringiensis, were found 151 positive isolates for the genes under study and 10 polymorphic profiles, which indicate the presence of subclasses of the genes. These results obtained in tests toxicity indicate that polymorphisms gene may have interference with the toxicity of the protein, and the toxin Cry3 showed a greater effectiveness in mortality in A. grandis larvae. These results also showed that the PCR-RFLP proved to be suitable for the detection of genetic variability in B. thuringiensis, allowing the identification of haplotypes

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-03T14:46:13Z No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 1375046 bytes, checksum: c126bf586c468cd419bdfca6216af06b (MD5) / Rejected by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br), reason: Retirar o restante do capítulo 3. on 2015-06-03T18:28:49Z (GMT) / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-03T18:35:35Z No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 749097 bytes, checksum: f12f9942225d4a2704b22859efa25ac3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-03T19:22:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 749097 bytes, checksum: f12f9942225d4a2704b22859efa25ac3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-03T19:22:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RobertaRamosCoelho_Parcial.pdf: 749097 bytes, checksum: f12f9942225d4a2704b22859efa25ac3 (MD5) / O Brasil é o quinto maior produtor de algodão do mundo, e também um dos maiores produtores mundiais de fibra, contribuindo positivamente para a balança comercial. O algodão é atacado por uma série de pragas, sendo o bicudo-doalgodoeiro, Anthonomus grandis, um dos insetos-pragas mais destrutivos. Além do bicudo-do-algodoeiro, o nematoide das galhas Meloidogyne incognita é uma praga importante desta e de outras culturas. O presente trabalho foi realizado visando o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas para o controle destas duas pragas agrícolas. No caso de A. grandis, a técnica do silenciamento gênico por RNAi foi utilizada para estudar a importância da Vitelogenina (proteína envolvida na reprodução dos insetos) para este inseto-praga. A técnica de RNAi é utilizada como ferramenta de validação funcional de genes e para o controle de pragas, e vem sendo utilizada na nova geração de plantas transgênicas. Isto em vista, no presente trabalho foram avaliados os efeitos do silenciamento gênico da vitelogenina de A. grandis (Agvtg) na biologia e no desenvolvimento do inseto adulto e da progênie. Inicialmente, foi realizado um estudo para identificar os melhores genes referência a serem utilizados em estudos gerais de qRT-PCR com este inseto. Após esta identificação, foi determinado o padrão de expressão do gene Agvtg e verificou-se a presença de transcritos em diferentes fases do desenvolvimento do inseto através de qRT-PCR. A proteína (AgVtg) foi localizada, por imunocitoquímica, em oócitos em desenvolvimento. Após microinjeção de dsRNA para Agvtg (dsVtg) em fêmeas de A. grandis, foi verificada uma significativa diminuição no acúmulo de transcritos deste gene. Além disto, verificou-se que as fêmeas tratadas com o dsVtg são capazes de produzir ovos na mesma quantidade dos tratamentos controle, porém, a maior parte dos ovos era inviável. Estudos realizados por meio de microscopia dos ovos oriundos de fêmeas tratadas com dsVtg revelaram, ainda, diferentes fenótipos, correspondentes a paralização do desenvolvimento do embrião em diferentes estágios de desenvolvimento, indicando, provavelmente, diferentes níveis desilenciamento gênico. Os estudos realizados com M. incognita, por sua vez, foram feitos utilizando uma estratégia distinta da anterior. Sabe-se que o nematoide das galhas estimula o ciclo celular das células hospedeiras das plantas, assim, foram utilizadas linhagens de plantas de Arabidopsis thaliana superexpressando proteínas inibidoras do ciclo celular de plantas (KRPs) e mutantes que não expressam estas proteínas para avaliar o efeito no ciclo de vida do patógeno. Esse trabalho nos permitiu demonstrar a possível função de KRP3, KRP5 e KRP7 em galhas induzidas por nematoides. Nossos resultados demonstram que todos os membros desta família afetam a progressão do ciclo celular durante a formação de galhas de forma diferente, afetando o ciclo de vida do nematoide. Assim, os dados gerados neste trabalho certamente contribuirão consideravelmente para o desenvolvimento de novas técnicas e ferramentas para o controle da principal praga do algodão no país, o bicudo-do-algodoeiro, e do nematoide de galhas, Meloidogyne incognita. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil is ranked as the fifth world cotton producer, being also one of the largest fiber producers in the world, leading in high contribution to the commercial trade. Cotton is produced in monoculture system, and it is attacked by a large number of pests. The cotton boll weevil, Anthonomus grandis, is one of the most destructive pests of cotton. Also, the root-knot nematode Meloidogyne incognita is an important pest that infect many plants species including cotton. The present work was conducted to develop biotechnological tools for the control of these two agricultural pests. In the case of A. grandis, the technique of gene silencing by RNAi was used to study the importance of vitellogenin (protein involved in reproduction) for this insect pest. The RNAi technique is used as a tool for validation of gene function and pest control, and is used in the new generation of transgenic plants. The present study evaluated the effects of gene silencing of vitellogenin in A. grandis (Agvtg) in biology,development of the adult insect and its progeny. Initially, a study was conducted to identify the best reference genes to be used in general studies qRT-PCR with this insect. After, it was determined the expression pattern of Agvtg gene and the presence of transcripts at different stages of insect development was verified by qRT-PCR. The protein (AgVtg) was located by immunocytochemistry in developing oocytes. After microinjection of dsRNA for Agvtg (dsVtg) in A. grandis females, there was a significant decrease in transcripts accumulation of this gene. Furthermore, it was found that females treated with dsVtg are able to produce eggs in the same amount of control treatments, however, most of the eggs was not viable. Studies performed by microscopy of the eggs that came from females treated with dsVtg also revealed different phenotypes, corresponding to paralysis of embryo development in different stages of development, probably indicating different levels of gene silencing. Studies realized with M. incognita, were made using a different strategy from above. It is known that the root-knot nematode stimulates the cell cycle of the host cells in plants. So Arabidopsis thaliana lines overexpressing cell cycle inhibitory proteins from plants (KRPs) and also mutants which do not express these proteins were used to evaluate the effect the pathogen life cycle. This work allowed us to demonstrate the possible role of KRP3, KRP5 and KRP7 in galls induced by nematodes. Our results demonstrate that all members of this family affect cell cycle progression during gall formation differently, thus affecting the nematode life cycle. Thus, the data generated in this study will certainly contribute significantly to the development of new techniques and tools for the control of major cotton pest in the country, cotton boll weevil, and the root-knot nematode, Meloidogyne incognita.