Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à l’étude des infections à Anaplasmataceae chez les animaux et leurs tiques afin de caractériser au mieux ces infections animales et humaines et décrire de nouvelles espèces. Nous avons tout d’abord proposé un système de diagnostic moléculaire qui couple une qPCR suivie d’amplification et un séquençage ciblant le gène 23S ARNr. Puis, au long de ce travail, nous avons proposé d’autres amorces ciblant d’autres gènes incluant la sous unité ribosomal bêta (rpoB), la protéine du choc thermique (groEl), et le 16S ARNr. Notre objectif a été de sélectionner et d’identifier les différentes espèces impliquées ou non dans des pathologies chez les animaux et mettre en évidence leur vecteur. Au cours de ces travaux, nous avons eu accès à différents prélèvements de sang et des tiques en provenance de diverses régions du monde incluant la France métropolitaine et d’outre-mer, l’Algérie, le Niger, la Côte d’Ivoire, le Sénégal et le Pakistan. Nos investigations ont permis d’identifier différentes espèces d’Anaplasmataceae incluant de potentielles nouvelles espèces. Les prévalences rapportées dans chaque étude démontrent que les animaux sont les réservoirs de ces infections. Les recherches menées sur les tiques ont permis d’identifier de potentiels vecteurs d’Anaplasmataceae dans différentes régions du monde. Les potentielles nouvelles espèces identifiées sont caractérisées en ciblant différents gènes, et les analyses moléculaires démontrent qu’elles sont différentes des autres Anaplasmataceae connues jusqu’à maintenant. Ces différents travaux apportent donc davantage d’informations sur l’épidémiologie des Anaplasmataceae dans le monde. / In this work, we are interested in studying Anaplasmataceae infections in animals and their ticks. Our objective is to describe these infections in animals and to identify new species implicated in different pathology. First, we propose a molecular diagnostic approach that couples a qPCR followed by amplification and sequencing targeting the 23S rRNA gene. Then we propose other primers targeting other genes including the ribosomal subunit beta (rpoB), heat shock protein (groEl), and the 16S rRNA. Our goal was to screen and identify the different species involved, or not involved, in pathologies of animals and identify their vectors. During this work, we had access to different blood samples and ticks from different parts of the world including metropolitan France, France overseas, Algeria, the Republic of Niger, Côte d'Ivoire, Senegal and Pakistan. Our different investigations allowed to identify different species of Anaplasmataceae including potential new species. The prevalence reported in each study demonstrates that animals are the reservoirs of these infections. So, the research conducted on ticks has identified potential vectors of Anaplasmataceae in different regions of the world. Potentially new species were identified are characterized by different targeting genes. These studies provide further information on the epidemiology of Anaplasmataceae in the world.

Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2006. / Available online via OhioLINK's ETD Center; full text release delayed at author's request until 2007 Aug 10

No período de julho de 2004 a junho de 2012, foram realizadas 104 capturas de lobos-guará. Os animais foram contidos quimicamente para coleta de material biológico. Carrapatos foram encontrados em 94 lobos e enviados ao Laboratório de Doenças Parasitárias da FMVZ-USP, onde foram identificados com auxílio de estereomicroscópio e chaves taxonômicas. Das amostras analisadas, foram encontradas 72 larvas, 188 ninfas e 911 carrapatos adultos, pertencetes as espécies Rhipicephalus microplus, Amblyomma spp., Amblyomma cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma brasiliense, Amblyomma tigrinum. O presente trabalho registra pela primeira vez larva de R. microplus e adulto de A. brasiliense parasitando C. brachyurus no país, reforçando os achados prévios da literatura destas espécies de carrapatos utilizarem os lobos-guará como hospedeiros. Sangue e soro também foram coletados durante contenção química, 67 amostras de sangue total de lobos guará e 52 carrapatos adultos foram testados através da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para a pesquisa de DNA de Anaplasma spp., Babesia spp., Ehrlichia spp., Hepatozoon spp. e Rickettsia spp. Foi realizada a sorologia para a pesquisa de anticorpos anti-Rickettsia spp. para 210 amostras de soro de cães domésticos e 43 foram positivas. Quatro indivíduos apresentaram reação homóloga para R. parkeri, dois para R. rhipicephali, um para R. rickettsii. Alem disso, foram testadas 88 amostras de soro de lobo guará e, destas, 84 foram positivas para pelo menos uma das espécies de Rickettsia e indicaram reação homóloga para R. parkeri e R. rhipicephali. Foram testadas 84 amostras de soro de lobo-guará na sorologia para Ehrlichia canis e, destas, 16 foram positivas. Nos testes moleculares foi detectada e confirmada a presença de H. canis, H. felis, R. parkeri já descritas para os hospedeiros vertebrados e invertebrados testados no estudo e ainda o primeiro registro em A. tigrinum de Candidatus R. andeanae e Candidatus Midichloria mitocondrii / From July 2004 to June 2012, 104 maned wolves were captured. The animals were chemically restrained in order to collect biological material. Ticks were found in 94 wolves and sent to the Laboratory of Parasitic Diseases FMVZ USP, and were identified using a stereomicroscope and taxonomic keys. Of the samples analyzed, 72 were larvae, 188 nymphs and 911 adult ticks, from the species Rhipicephalus microplus , Amblyomma spp , A. cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma brasiliense e Amblyomma tigrinum. This paper reports for the first time larvae of R. b. microplus and adult of A. brasiliense parasitizing C. brachyurus in the country, reinforcing the findings in previous studies of these species of ticks using the maned wolves as hosts . Blood and serum samples were also collected during chemical restraint, 67 blood samples of maned wolves and 52 adult ticks were tested using the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) for the detection of DNA of Anaplasma spp., Babesia spp. Ehrlichia spp., Hepatozoon spp. and Rickettsia spp. Serology was performed for the detection of antibodies to Rickettsia spp. 210 serum samples of domestic dogs were tested and 43 were positive. Four individuals showed reaction homologous to R. parkeri, two for R. rhipicephali and one for R. rickettsia. In addition, we tested 88 serum samples of maned wolf and 84 were positive for at least one species of Rickettsia and indicated homologous reaction to R. parkeri and R. rhipicephali. 84 maned wolf serum samples were in serology for Ehrlichia canis and 16 were positive. In molecular tests was detected and confirmed the presence of H. canis, H. felis and R. parkeri had already been described for the vertebrate and invertebrate hosts tested in the study. This is also the first report of Candidatus R. andeanae and Candidatus Midichloria mitocondrii in A. tigrinum

O bioma Amazônia possui uma vasta dimensão territorial e grande abundância e diversidade de espécies e habitats, contudo pouco se sabe sobre a epidemiologia das doenças que acometem os animais silvestres, em especial os que possuem carrapatos como vetores. O presente estudo teve por objetivo fazer o levantamento epidemiológico dos agentes transmitidos por carrapatos (Rickettsia, Ehrlichia, Anaplasma, Hepatozoon, Babesia, Coxiella e Borrelia) e tripanossomatídeos (Trypanosoma e Leishmania) em animais silvestres dos estados do Mato Grosso (MT) e Pará (PA), de fevereiro de 2009 a junho de 2012, incluindo-se mamíferos, aves e répteis. Foram coletadas amostras de tecidos e carrapatos de 181 animais silvestres, sendo 49 do Mato Grosso e 132 do Pará, e estas foram submetidas à extração de DNA, PCR e sequenciamento dos produtos amplificados. Todas as amostras de tecido foram negativas para Borrelia, Coxiella, Rickettsia e Trypanosomatidae. No Mato Grosso, das 49 amostras, 5 (10,2%) foram positivas para o gênero Hepatozoon, 5 (10,2%) para ordem Piroplasmida, 4 (8,2%) para Anaplasma e 1 (2,0%) para Ehrlichia. No Pará, das 132 amostras testadas, 2 (1,5%) foram positivas para Hepatozoon, 11 (8,3%) para Piroplasmida, 13 (9,8% para Anaplasma e 3 (2,3%) para Ehrlichia. Do total de 232 carrapatos do estado do Mato Grosso testados pela PCR, 139 (59,9%) foram positivos. Dentre os 117 carrapatos procedentes do Pará, 27 (23,1%) foram positivos. As amostras foram sequenciadas, sendo detectadas Rickettsia amblyommii, Rickettsia rhipicephali e Rickettsia monteiroi-like, nas espécies Amblyomma cajennense, Haemaphysalis juxtakochi e Amblyomma naponense, respectivamente, no Mato Grosso, R. amblyommii em Amblyomma longirostre e Amblyomma humerale, Rickettsia bellii em A. humerale e A. naponense, Rickettsia felis em A. humerale e Rickettsia c. f. africae em A. naponense. No presente trabalho foram detectados patógenos dos gêneros Rickettsia e Hepatozoon, membros da família Anaplasmataceae e da ordem Piroplasmida em espécies animais e regiões ainda não estudadas, revelando o enorme potencial para pesquisas aplicadas a animais silvestres da fauna Amazônica, cuja literatura ainda é bastante escassa em relação à ocorrência de patógenos, bem como a interação parasita hospedeiro. / The Brazilian Amazon biome has a wide territorial dimension and great abundance and diversity of species and habitats, however little is known about the epidemiology of diseases affecting wild animals, especially those with ticks as vectors. This study aimed to survey epidemiological agents transmitted by ticks (Rickettsia , Ehrlichia, Anaplasma, Hepatozoon, Babesia, Borrelia and Coxiella) and trypanosomatids (Trypanosoma and Leishmania ) in wild animals in the states of Mato Grosso (MT) and Pará (PA), from February 2009 to June 2012 , including mammals, birds and reptiles. We collected tissue samples and ticks from 181 wild animals, 49 of Mato Grosso and Pará 132, and these were submitted to DNA extraction, PCR and sequencing of the amplified products. All tissue samples were negative for Borrelia, Coxiella, Rickettsia and Trypanosomatidae. We tested 49 samples from Mato Grosso and found 5 (10.2%) were positive for Hepatozoon, 5 (10.2%) for Piroplasmida, 4 (8.2%) to Anaplasma and 1 (2%) to Ehrlichia. We tested 132 samples from Pará and found 2 (1.5%) positive for the genus Hepatozoon, 11 (8.3%) to order Piroplasmida, 13 (9.8%) for Anaplasma and 3 (2.3 %) for Ehrlichia. Among 232 ticks coming from Mato Grosso, 139 (59.9 %) were positive and sequenced, detecting Rickettsia amblyommii, R. rhipicephali and Rickettsia monteiroi-like species in Amblyomma cajennense and A. auricularium, Haemaphysalis juxtakochi and A. naponense respectively. The samples tested from Pará (117) 27 were positive and sequenced detecting R. amblyommii in A. longirostre and A. humerale, R. bellii in A. humerale and A. naponense, R. felis in A. humerale and Rickettsia. c. f. africae in A. naponense. In this study were detected pathogens of the genus Rickettsia and Hepatozoon , family members Anaplasmataceae and order Piroplasmida in animal species and regions not yet studied, revealing the enormous potential for research applied to wildlife amazon fauna, whose literature is still quite scarce in relation to the occurrence of pathogens and the host parasite interaction.

O bioma Amazônia possui uma vasta dimensão territorial e grande abundância e diversidade de espécies e habitats, contudo pouco se sabe sobre a epidemiologia das doenças que acometem os animais silvestres, em especial os que possuem carrapatos como vetores. O presente estudo teve por objetivo fazer o levantamento epidemiológico dos agentes transmitidos por carrapatos (Rickettsia, Ehrlichia, Anaplasma, Hepatozoon, Babesia, Coxiella e Borrelia) e tripanossomatídeos (Trypanosoma e Leishmania) em animais silvestres dos estados do Mato Grosso (MT) e Pará (PA), de fevereiro de 2009 a junho de 2012, incluindo-se mamíferos, aves e répteis. Foram coletadas amostras de tecidos e carrapatos de 181 animais silvestres, sendo 49 do Mato Grosso e 132 do Pará, e estas foram submetidas à extração de DNA, PCR e sequenciamento dos produtos amplificados. Todas as amostras de tecido foram negativas para Borrelia, Coxiella, Rickettsia e Trypanosomatidae. No Mato Grosso, das 49 amostras, 5 (10,2%) foram positivas para o gênero Hepatozoon, 5 (10,2%) para ordem Piroplasmida, 4 (8,2%) para Anaplasma e 1 (2,0%) para Ehrlichia. No Pará, das 132 amostras testadas, 2 (1,5%) foram positivas para Hepatozoon, 11 (8,3%) para Piroplasmida, 13 (9,8% para Anaplasma e 3 (2,3%) para Ehrlichia. Do total de 232 carrapatos do estado do Mato Grosso testados pela PCR, 139 (59,9%) foram positivos. Dentre os 117 carrapatos procedentes do Pará, 27 (23,1%) foram positivos. As amostras foram sequenciadas, sendo detectadas Rickettsia amblyommii, Rickettsia rhipicephali e Rickettsia monteiroi-like, nas espécies Amblyomma cajennense, Haemaphysalis juxtakochi e Amblyomma naponense, respectivamente, no Mato Grosso, R. amblyommii em Amblyomma longirostre e Amblyomma humerale, Rickettsia bellii em A. humerale e A. naponense, Rickettsia felis em A. humerale e Rickettsia c. f. africae em A. naponense. No presente trabalho foram detectados patógenos dos gêneros Rickettsia e Hepatozoon, membros da família Anaplasmataceae e da ordem Piroplasmida em espécies animais e regiões ainda não estudadas, revelando o enorme potencial para pesquisas aplicadas a animais silvestres da fauna Amazônica, cuja literatura ainda é bastante escassa em relação à ocorrência de patógenos, bem como a interação parasita hospedeiro. / The Brazilian Amazon biome has a wide territorial dimension and great abundance and diversity of species and habitats, however little is known about the epidemiology of diseases affecting wild animals, especially those with ticks as vectors. This study aimed to survey epidemiological agents transmitted by ticks (Rickettsia , Ehrlichia, Anaplasma, Hepatozoon, Babesia, Borrelia and Coxiella) and trypanosomatids (Trypanosoma and Leishmania ) in wild animals in the states of Mato Grosso (MT) and Pará (PA), from February 2009 to June 2012 , including mammals, birds and reptiles. We collected tissue samples and ticks from 181 wild animals, 49 of Mato Grosso and Pará 132, and these were submitted to DNA extraction, PCR and sequencing of the amplified products. All tissue samples were negative for Borrelia, Coxiella, Rickettsia and Trypanosomatidae. We tested 49 samples from Mato Grosso and found 5 (10.2%) were positive for Hepatozoon, 5 (10.2%) for Piroplasmida, 4 (8.2%) to Anaplasma and 1 (2%) to Ehrlichia. We tested 132 samples from Pará and found 2 (1.5%) positive for the genus Hepatozoon, 11 (8.3%) to order Piroplasmida, 13 (9.8%) for Anaplasma and 3 (2.3 %) for Ehrlichia. Among 232 ticks coming from Mato Grosso, 139 (59.9 %) were positive and sequenced, detecting Rickettsia amblyommii, R. rhipicephali and Rickettsia monteiroi-like species in Amblyomma cajennense and A. auricularium, Haemaphysalis juxtakochi and A. naponense respectively. The samples tested from Pará (117) 27 were positive and sequenced detecting R. amblyommii in A. longirostre and A. humerale, R. bellii in A. humerale and A. naponense, R. felis in A. humerale and Rickettsia. c. f. africae in A. naponense. In this study were detected pathogens of the genus Rickettsia and Hepatozoon , family members Anaplasmataceae and order Piroplasmida in animal species and regions not yet studied, revealing the enormous potential for research applied to wildlife amazon fauna, whose literature is still quite scarce in relation to the occurrence of pathogens and the host parasite interaction.

No período de julho de 2004 a junho de 2012, foram realizadas 104 capturas de lobos-guará. Os animais foram contidos quimicamente para coleta de material biológico. Carrapatos foram encontrados em 94 lobos e enviados ao Laboratório de Doenças Parasitárias da FMVZ-USP, onde foram identificados com auxílio de estereomicroscópio e chaves taxonômicas. Das amostras analisadas, foram encontradas 72 larvas, 188 ninfas e 911 carrapatos adultos, pertencetes as espécies Rhipicephalus microplus, Amblyomma spp., Amblyomma cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma brasiliense, Amblyomma tigrinum. O presente trabalho registra pela primeira vez larva de R. microplus e adulto de A. brasiliense parasitando C. brachyurus no país, reforçando os achados prévios da literatura destas espécies de carrapatos utilizarem os lobos-guará como hospedeiros. Sangue e soro também foram coletados durante contenção química, 67 amostras de sangue total de lobos guará e 52 carrapatos adultos foram testados através da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para a pesquisa de DNA de Anaplasma spp., Babesia spp., Ehrlichia spp., Hepatozoon spp. e Rickettsia spp. Foi realizada a sorologia para a pesquisa de anticorpos anti-Rickettsia spp. para 210 amostras de soro de cães domésticos e 43 foram positivas. Quatro indivíduos apresentaram reação homóloga para R. parkeri, dois para R. rhipicephali, um para R. rickettsii. Alem disso, foram testadas 88 amostras de soro de lobo guará e, destas, 84 foram positivas para pelo menos uma das espécies de Rickettsia e indicaram reação homóloga para R. parkeri e R. rhipicephali. Foram testadas 84 amostras de soro de lobo-guará na sorologia para Ehrlichia canis e, destas, 16 foram positivas. Nos testes moleculares foi detectada e confirmada a presença de H. canis, H. felis, R. parkeri já descritas para os hospedeiros vertebrados e invertebrados testados no estudo e ainda o primeiro registro em A. tigrinum de Candidatus R. andeanae e Candidatus Midichloria mitocondrii / From July 2004 to June 2012, 104 maned wolves were captured. The animals were chemically restrained in order to collect biological material. Ticks were found in 94 wolves and sent to the Laboratory of Parasitic Diseases FMVZ USP, and were identified using a stereomicroscope and taxonomic keys. Of the samples analyzed, 72 were larvae, 188 nymphs and 911 adult ticks, from the species Rhipicephalus microplus , Amblyomma spp , A. cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma brasiliense e Amblyomma tigrinum. This paper reports for the first time larvae of R. b. microplus and adult of A. brasiliense parasitizing C. brachyurus in the country, reinforcing the findings in previous studies of these species of ticks using the maned wolves as hosts . Blood and serum samples were also collected during chemical restraint, 67 blood samples of maned wolves and 52 adult ticks were tested using the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) for the detection of DNA of Anaplasma spp., Babesia spp. Ehrlichia spp., Hepatozoon spp. and Rickettsia spp. Serology was performed for the detection of antibodies to Rickettsia spp. 210 serum samples of domestic dogs were tested and 43 were positive. Four individuals showed reaction homologous to R. parkeri, two for R. rhipicephali and one for R. rickettsia. In addition, we tested 88 serum samples of maned wolf and 84 were positive for at least one species of Rickettsia and indicated homologous reaction to R. parkeri and R. rhipicephali. 84 maned wolf serum samples were in serology for Ehrlichia canis and 16 were positive. In molecular tests was detected and confirmed the presence of H. canis, H. felis and R. parkeri had already been described for the vertebrate and invertebrate hosts tested in the study. This is also the first report of Candidatus R. andeanae and Candidatus Midichloria mitocondrii in A. tigrinum

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Catia Marques da Costa.pdf: 899456 bytes, checksum: b8d00f84cefd48cf338e385b27121da0 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) is a ricketsial hemoparasite responsible for causing great economic losses in cattle from tropical and subtropical regions. The objectives of this work were to produce the recombinant membrane proteins AM254, VirB9 and VirB10 and to evaluate its possible antigenicity. The genes am254, virB9 and virB10 were submitted to various experiments and were , linked to pET47 (b) plasmid. After the certification of the recombinant plasmid (pET-47-am254, pET-47-virB9 and pET-47- virB10), it was transformed into E. coli Rosetta cells for expression. The recombinant proteins produced, were analyzed by Western blot assay where the reaction of the anti-histidin monoclonal antibody against rAM254 (47kDa), rVirB9 (31kDa) and rVirB10 (60kDa) was observed. After the confirmation of the production of recombinant proteins the indirect Enzyme-Linked Immnunosorbent Assay (ELISA) was standardized with sera previously confirmed by PCR and ELISA (rMSP1 and rMSP5). The averages of the optic densities (OD) of the positive sera were of 1.339; 1.288 and 1.240 and of the negative sera of 0.470, 0.324 and 0.414 for AM254, VirB9 and VirB10 respectively with significant difference to the level of 5% between positives and negatives for each recombinant protein. The study demonstrated that the proteins rAM 254, rVirB9 and rVirB10 of A. marginale are recognized by sera of bovines immunized by different Brazilian isolates of the ricketsia (homologous and heterologous), showing the antigenicity potential of these proteins. / Anaplasma marginale (Ricktsialles: Anaplasmataceae) ? uma riquetsia intraeritroc?tica, respons?vel por ocasionar grandes perdas econ?micas na pecu?ria bovina das regi?es tropical e sub-tropical. O objetivo desse trabalho foi produzir as prote?nas de membrana recombinantes AM254, VirB9 e VirB10 e avaliar sua poss?vel antigenicidade. Os genes am254, virB9 e virB10 foram submetidos a v?rios procedimentos experimentais at? serem ligados ao plasm?deo pET-47b(+). Ap?s a certifica??o do plasm?deo recombinante (pET-47bam254, pET-47b-virB9 e pET-47bvirB10) este foi transformado em E. coli Rosetta para express?o. As prote?nas recombinantes produzidas foram analisadas pelo ensaio Western blot onde foi observada a rea??o do anticorpo monoclonal anti-histidina contra rVirB9 (31kDa), rVirB10 (60kDa) e rAM254 (47kDa). Ap?s a confirma??o da produ??o das prote?nas recombinantes realizou-se a padroniza??o do ensaio de imunoadsor??o enzim?tica (ELISA) indireto com soros oriundos de sangue total previamente confirmados por PCR; os mesmos soros tamb?m foram testados por ELISA (rMSP1 e rMSP5). As m?dias das densidades ?pticas (DO) dos soros positivos foram de 1,339; 1,288 e 1,240 e dos soros negativos de 0,470, 0,324 e 0,414 para AM254, VirB9 e VirB10 respectivamente com diferen?a significativa ao n?vel de 5% entre positivos e negativos para cada prote?na recombinante. O estudo demonstrou que as prote?nas rAM 254, rVirB9 e rVirB10 de A. marginale s?o reconhecidas por soros de bovinos imunizados com diferentes isolados brasileiros da riqu?tsia (hom?logo e heter?logos), revelando o potencial antig?nico dessas prote?nas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-21Bitstream added on 2014-06-13T20:44:55Z : No. of bitstreams: 1 dagnone_as_dr_jabo.pdf: 2655933 bytes, checksum: 8f6122da8b67a36f40a31689501140e2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo foi realizado objetivando-se detectar e identificar a presença de material genômico de agentes pertencentes à Família Anaplasmataceae em 55 cães com inclusões citoplasmáticas encontrados em células leucocitárias granulocíticas, monocíticas e plaquetas, compatíveis com infecção por Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, A. phagocytophilum, A. platys ou Neorickettsia risticii. A ocorrência natural de Babesia canis também foi avaliada pois vetor Rhipicephalus sanguineus, é o principal carrapato encontrado em cães no Brasil. Também objetivou-se realizar, através da utilização de técnicas de Seqüenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA, a caracterização parcial dos fragmentos das amostras positivas encontradas neste estudo, e comparar as seqüências dos fragmentos obtidos com as seqüências apresentadas previamente no GenBank, iniciando a realização de estudos filogenéticos das seqüências encontradas. Amostras de sangue foram colhidas de 25 e 30 cães atendidos nos Hospitais Veterinários da Universidade Estadual Paulista-Unesp, Câmpus de Jaboticabal-SP e Universidade para o Desenvolvimento do Estado e da região do Pantanal-UNIDERP, Campo Grande- MS, respectivamente. Dentre as inclusões citoplasmáticas encontradas neste estudo foi observado uma grande diversidade na morfologia, tamanho, coloração e localização das inclusões. DNA de agentes Família Anaplasmataceae foram detectados em 45/55 das amostras sangüíneas examinadas (81,8%), sendo destas 32 (58,18%) e 13 (23,63%) positivas para Ehrlichia canis e Anaplasma platys, respectivamente. Dez animais que foram incluídos neste estudo por apresentarem inclusões citoplasmáticas foram negativos quando uma segunda confecção de esfregaço de papa leucocitária corada pelo Giemsa foi realizada, e também... / The aim of this study was to evaluate the natural occurrence of Anaplasmataceae agents (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, A. phagocytophilum, A. platys and Neorickettsia risticii) using molecular techniques. For this purpose a group of fifty-five supposedly infected dogs from two different Brazilian states (São Paulo and Mato Grosso do Sul) that showed suggestive Anaplasmataceae agent intracitoplasmic inclusions in white blood cells and platelets were analysed. The natural occurrence of Babesia canis was also evaluated, because its vector is also Brazilian dog tick, Rhipicephalus sanguineus. Sequencing of a partial phragment of 16S rRNA gene from the positive samples were performed to conduct phylogenetic study. The evaluated blood cells of the studied dog population displayed a wide variety in shapes, sizes, stain pattern and localization of the inclusions. Anaplasmataceae DNA were amplified in 45/55 (81.8%) examined blood samples. Thirty-two samples were positive for E. canis (58.18%) and thirteen for Anaplasma platys (23.63%). Ten animals were negative by PCR and an analyses of a second Buffy coat smear. The obtained nucleotide sequences were analysed for similarity of the 16S rRNA gene sequence using Blast with other sequences available in the GenBank database. The sequences obtained from E. canis positive were closely related to E. canis from Spain (Acession number AY 394465) presenting an identity percentage of between 94.82% and 99.67%. Sequences from Anaplasma sp and Anaplasma platys positive samples were closely related to A. platys from Venezuela (Genbank Acession number AF 399917) presenting an identity betwwen 96.52% and 99.69%, and A. platys from Spain (Genbank Acession number AY 530 806\0 presenting... (Complete abstract, click electronic access below)

Submitted by JYAN LUCAS BENEVENUTE null (jyanbenevenutte@gmail.com) on 2017-04-18T12:52:17Z No. of bitstreams: 1 Jyan Lucas Benevenute DISSERTAÇÃO.pdf: 2243221 bytes, checksum: 73e247ea0e0661031eef2500c7ca6f1c (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 12 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 12 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-18T12:59:21Z (GMT) / Submitted by JYAN LUCAS BENEVENUTE null (jyanbenevenutte@gmail.com) on 2017-04-18T13:10:19Z No. of bitstreams: 1 Jyan Lucas Benevenute DISSERTAÇÃO.pdf: 2243221 bytes, checksum: 73e247ea0e0661031eef2500c7ca6f1c (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-18T13:12:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 benevenute_jl_me_jabo.pdf: 2243221 bytes, checksum: 73e247ea0e0661031eef2500c7ca6f1c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T13:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 benevenute_jl_me_jabo.pdf: 2243221 bytes, checksum: 73e247ea0e0661031eef2500c7ca6f1c (MD5) Previous issue date: 2017-02-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Embora novos genótipos de agentes Anaplasmataceae vêm sendo detectados em carnívoros selvagens, aves selvagens e cervídeos no Brasil, poucos são os estudos acerca da circulação destes patógenos em pequenos mamíferos em nosso território. O presente trabalho teve como objetivo investigar a presença de DNA de Ehrlichia e Anaplasma em roedores amostrados no Brasil. Entre 2000 e 2011, diferentes espécies de roedores [n = 60] foram capturadas em cinco biomas brasileiros. As amostras de baço de roedores foram submetidas a extração de DNA utilizando um kit comercial. A presença de DNA de Ehrlichia e Anaplasma foi investigada utilizando ensaios de PCR em tempo real e convencionais dirigidos a vários genes. Dentre as 458 amostras de baço de roedores testadas, 0,44% (2/458) mostraram-se positivas para Ehrlichia spp. e 2,40% (11/458) para Anaplasma spp., pelos ensaios de PCR em Tempo Real multiplex baseados no gene groESL. A quantificação média do número de cópias de um fragmento do gene groESL por microlitro variou de 1,071 x 102 a 2,808 x 102 cópias para Ehrlichia spp. e 1,123 x 100 a 1,310 x 102 para Anaplasma spp. Pelos ensaios de PCR convencional baseados no gene 16S rRNA, 1,09% (5/458) das amostras mostraram-se positivas para Ehrlichia sp. e 1,97% (9/458) para Anaplasma sp. Análises filogenéticas de máxima verossimilhança baseada em um fragmento de 546 pb do gene 16S rRNA posicionaram os genótipos de Anaplasma detectados em roedores próximos a A. phagocytophilum ou isolados de A. marginale e A. odocoilei. Por outro lado, os genótipos de Ehrlichia detectados em roedores amostrados mostraram-se intimamente relacionados com E. canis com base na análises filogenéticas de um fragmento de 358 pb do gene 16S rRNA. O presente estudo mostrou baixa ocorrência de Anaplasma e Ehrlichia em roedores no Brasil. / Although new genotypes of Anaplasmataceae agents have been detected in wild carnivores, wild birds and deer in Brazil, few reports have been done in order to assess the circulation of these pathogens in small mammals in our territory. The present work aimed to investigate the presence of Ehrlichia and Anaplasma in rodents sampled in Brazil. Between 2000 and 2011, different rodent species [n=60] were trapped in five Brazilian biomes. Rodents' spleen samples were submitted to DNA extraction using a commercial kit. The presence of Ehrlichia and Anaplasma DNA was investigated using real time and conventional PCR assays targeting several genes. Among 458 rodent tested spleen samples, 0.44% (2/458) were positive for Ehrlichia spp. and 2.40% (11/458) for Anaplasma spp., by a multiplex qPCR assay based on groESL gene. The mean quantification of the number of copies of 83pb groESL gene fragment per microliter ranged from 1,071 x 102 to 2,808 x 102 copies for Ehrlichia spp., and 1,123 x 100 to 1,310 x 102 for Anaplasma spp. Out of 458 samples tested, 1.09% (5/458) were positive for Ehrlichia sp. and 1.97% (9/458) for Anaplasma sp. by cPCR assays based on 16S rRNA gene. Maximum Likelihood phylogenetic analyse based on 546pb fragment of 16S rRNA gene positioned the Anaplasma genotypes detected in rodents near to A. phagocytophilum or A. marginale and A. odocoilei isolates. On the other hand, the Ehrlichia genotypes detected in sampled rodents were closely related to E. canis, according to the phylogenetic analyses based on 358pb 16S rRNA gene fragment. The present study showed a low occurrence of Anaplasma and Ehrlichia in rodents in Brazil. / CNPq: 133907/2015-5

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-11Bitstream added on 2014-06-13T20:36:41Z : No. of bitstreams: 1 sacchi_abv_me_jabo.pdf: 876901 bytes, checksum: bbd58ecdb2c29112b3d0b1112c51b549 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivo pesquisar no sangue de cervos-do-pantanal (B. dichotomus), a presença de DNA de agentes rickettsiais, tais como Ehrlichia chaffeensis, E. ewingiii, E. canis, Anaplasma phagocytophilum, A. marginale e Neorickettsia risticii, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), além de estudar a prevalência de anticorpos anti-E. chaffeensis e anti-A. phagocytophilum utilizando-se a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Os 143 animais utilizados foram capturados durante o desenvolvimento do Projeto Cervo-do-Pantanal (1998 a 2002) na área de inundação da Usina Hidrelétrica de Porto Primavera, no Rio Paraná, e divididos em quatro sub-populações de acordo com o local e momento da captura, em áreas denominadas MS01, MS02 (Mato Grosso do Sul, antes e após a inundação, respectivamente), PX (Rio do Peixe, depois da primeira cota de inundação) e AGUA (Rio Aguapeí, depois da inundação). Na avaliação sorológica, as freqüências de animais positivos para anticorpos anti-E. chaffeensis e anti-A. phagocytophilum foram de 76,76% e 20,20% em MS01, 88,88% e 22,22% em PX, 88,88% e 5,55% em MS02, e 94,12% e 5,88% em AGUA, respectivamente. Na pesquisa de DNA, dos 143 animais testados, 61 (42,65%) foram positivos para E. chaffeensis, sendo 38 (38,38%) de MS01, 4 (44,44%) de PX, 12 de MS02 (66,66%) e 7 (41,18%) de AGUA. Amostras positivas enviadas para seqüenciamento revelaram 100% de similaridade com amostras de Ehrlichia chaffeensis da Argentina e dos Estados Unidos (números de acesso no Genbank EU826516.2 e AF416764.1, respectivamente). Já para o genogrupo de A. phagocytophilum, 70 cervos (48,95%) foram considerados positivos. Destes, 51 (51,51%) são provenientes de MS01, 12 (66,66%) de MS02 e 7 (41,18%) de AGUA. Animais provenientes de PX foram todos negativos. Amostras positivas enviadas para seqüenciamento... / The present work had as objective to research in the blood of marsh deer (B. dichotomus), the presence of rickettsial agents DNA such as Ehrlichia chaffeensis, E. ewingii, E. canis, Anaplasma phagocytophilum, A. marginale e Neorickettsia risticii, by the Polimerase Chain Reaction (PCR), as well as studying the prevalence of anti-E. chaffeensis and anti-A. phagocytophilum antibodies using Indirect Imunofluorescence Reaction (IFA). The 143 animals that were used were captured during the development of the Marsh Deer Project (1998 to 2002) in the flood area of the Porto Primavera Hydroelectric Power Station, in Parana River, and divided in four sub-populations according to the local and moment of the capture, in areas denominated MS01, MS02 (Mato Grosso do Sul, before and after flood respectively), PX (Peixe’s River, after the first flood quota) and AGUA (Aguapeí River, after flood). In the serological avaliation, the frequency of positive animals for anti-E. chaffeensis and anti-A. phagocytophilum antibodies were 76,76% and 20,20% in MS01, 88,88% and 22,22% in PX, 88,88% and 5,55% in MS02, and 94,12% and 5,88% in AGUA, respectively. In the DNA research, from the 143 tested animals, 61 (42,65%) were positive for E. chaffeensis, 38 (38,38%) from MS01, 4 (44,44%) from PX, 12 from MS02 (66,66% and 7 (41,18%) from AGUA. Positive samples send to sequency demonstrate 100% of similarity with samples of Ehrlichia chaffeensis from Argentina and United States (numbers of access in Genbank EU826516.2 and AF416764.1, respectively). For the A. phagocytophilum genogroup, 70 deers (48,95%) were considered positive. Of these, 51 (51,51%) come from MS01, 12 (66,66%) from MS02 and 7 (41,18%) from AGUA. The animals that come from PX were all negative. Positive samples send to sequencing demonstrated 99% of similarity with a sample of Anaplasma... (Complete abstract click electronic access below)