Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5157_1.pdf: 8018238 bytes, checksum: 52fa3ddf77f265552b0b53471c950b6e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A inflamação representa uma condição de morbidade que acompanha todos os processos infecciosos que acometem o homem, inclusive o câncer e as doenças crônicas, como a artrite. Por outro lado, a clínica médica não dispõe atualmente de medicamentos adequados para melhorar a qualidade de vida dos pacientes, sobretudo aquelas condições crônicas. Os fármacos disponíveis são, via de regra, possuidores de sérios efeitos secundários, sobretudo aos níveis gastrintestinal e renal. Neste contexto, torna-se imperioso a busca de novas alternativas terapêuticas para combate à inflamação. Com esta finalidade e através do conhecimento da diversificada ação biológica do anel imidazolidínico, realizamos a síntese de novas moléculas candidatas a fármacos antiinflamatórios, as 3-(benzil ou fenacil)-5- benzilideno-2-(benzilsulfanil ou 2-fenil-2-oxo-etilsulfanil)-3,5-dihidro-imidazol-4-onas, dentre as quais três foram testadas para esta atividade e duas para a atividade analgésica. A síntese destes novos compostos foi realizada em quatro etapas: i) inicialmente foram obtidos ésteres a partir de uma condensação do tipo Knoevenagel; ii) estes ésteres reagiram na posição 5 da 2-tioxo-imidazolidin-4-ona, por meio de adição do tipo Michael; iii) em seguida, esses derivados foram Nalquilados na posição 3 do anel imidazolidínico com cloretos de benzil ou fenacil substituídos; iv) finalmente esses derivados foram S-alquilados, utilizando os mesmos haletos. Após a comprovação estrutural pelos métodos espectroscópicos convencionais de ressonância magnética nuclear de hidrogênio, infravermelho e espectrometria de massas, foram realizados os testes biológicos de toxicidde aguda, atividade antiinflamatória (modelo do bolsão inflamatório e do edema de pata induzido por carragenina) e atividade analgésica (método da chapa qunte). Constatou-se que o pré-tratamento com as substâncias testadas, em doses baixas, suprime a migração de leucócitos e inibe o desenvolvimento do edema de pata induzido por carragenina, sendo um indicativo do elevado poder dessas substâncias. Além disso, uma dessas substâncias também apresentou atividade análgesica, dependente do tempo, e os ensaios de toxicidade aguda indicam que essas duas substâncias são levemente ou praticamente não-tóxicas

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Thèse d'exercice : Pharmacie : Université de Nantes : 2004. / Bibliogr. f. 91-96 [70 réf.].

Thèse de doctorat : Synthèse organique : Metz : 2006. / Thèse soutenue sur ensemble de travaux. Bibliogr. p. 98 -108.

Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2007. / Bibliogr.: f. [204]-227. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2004. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Les coproduits de crabe des neiges (Chionoecetes opilio) riches en chitine sont majoritairement utilisés dans le compost. Toutefois, ils sont aussi riches en biomolécules actives tels les peptides antibactériens notamment générés par une hydrolyse enzymatique. Cependant, l’origine et la localisation de ces peptides dans les coproduits de C. opilio n’ont pas encore été élucidées. Diverses matrices composant les coproduits de C. opilio ont été isolées puis hydrolysées avec le mélange d’enzymes commerciales Protamex®. Chaque hydrolysat des différentes matrices a été fractionné en utilisant une colonne de chromatographie d’interactions hydrophobes de type Sep-pack C18 et l’activité antibactérienne a été vérifiée contre trois souches bactériennes indicatrices : Escherichia coli ATCC 25922, Listeria innocua HPB13 et Vibrio parahemolyticus ATCC 17802. Une activité antibactérienne contre Listeria innocua HPB13 a été décelée dans un extrait peptidique provenant de l’hépatopancréas. L’analyse en chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) a permis d’identifier quatre peptides ayant des homologies supérieures à 80% avec des peptides antibactériens connus. Parmi ces peptides (Odorranain-C7, YFGAP : Yellowfin tuna GAPDH-related antimicrobial peptide, crustine, peptide antibactérien prédit), la crustine est le seul peptide provenant des crustacés retrouvé majoritairement dans l’hémolymphe, mais n’a jamais été identifié chez C. opilio. L’extraction protéique de l’hémolymphe de C. opilio, suivie par une purification en chromatographie liquide des protéines à basses pressions (FPLC) et une migration protéique par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en conditions dénaturantes (SDS-PAGE), a permis de visualiser des bandes de protéines correspondant à la taille moyenne de la crustine. L’analyse en spectrométrie de masse d’ionisation par électronébulisation (ESI-MS/MS) a permis d’identifier un peptide ayant une homologie avec la crustine qui était supérieure à 80 %. Ces analyses ont été complétées par une amplification du gène codant pour la crustine avec plusieurs combinaisons d’amorces suivie par un séquençage. Les résultats obtenus ont permis de confirmer la présence d’une activité antibactérienne provenant de l’hépatopancréas de C. opilio et d’identifier une homologie avec le peptide antibactérien apparenté à la crustine. Le résultat obtenu à partir du SDS-PAGE suggère aussi la présence de ce peptide dans l’hémolymphe de C. opilio contrairement aux résultats, moins concluants, de l’amplification du gène codant pour la crustine. De nouvelles stratégies d’amplification seraient nécessaires pour confirmer les résultats obtenus en biochimie / Snow crab (Chionoecetes opilio) by-products rich in chitin are mainly used in compost. However, they are also rich in active biomolecules such as antibacterial peptides that could be generated by enzymatic hydrolysis. However, the origin and location of these peptides from C. opilio by-products have not been elucidated yet. Various matrices constituting C. opilio by-products were isolated and then hydrolyzed with the commercial enzyme mixture Protamex®. Each hydrolysate of the different matrices was fractionated using a hydrophobic interaction Sep-pack C18 column and the antibacterial activity was verified against three indicative strains: Escherichia coli ATCC 25922, Listeria innocua HPB13 and Vibrio parahemolyticus ATCC 17802. Antibacterial activity was detected from the hepatopancreas’ peptide extract against Listeria innocua HPB13 only. Liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LCMS/MS) analysis has allowed identifying four peptide fractions with homologies greater than 80% with known antibacterial peptides (Odorranain-C7, YFGAP: Yellowfin tuna GAPDHrelated antimicrobial peptide, crustin, predicted antibacterial peptide). Among these peptides, crustin is the only peptide derived from crustaceans found mainly in the haemolymph, but not identified in C. opilio. Protein extraction from the C. opilio hemolymph, followed by Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) purification and protein migration on denaturing polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), allowed visualizing bands associated with proteins having the average size of crustin. Electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) analysis allowed identifying a peptide with homology greater than 80% with crustin. Complementary analyzes were performed by amplification of the gene coding for crustin with several combinations of primers followed by sequencing. The results confirmed the presence of an antibacterial activity from C. opilio hepatopancreas and allowed identifying a homology with the crustin-like antibacterial peptide. The SDS-PAGE results also suggest the presence of this peptide in the hemolymph of C. opilio contrary to the gene coding for crustin amplification, which were less conclusive. Further amplification strategies would be needed to confirm the results obtained from biochemistry.

Clostridium difficile, un bacille à Gram positif anaérobie strict qui forme des spores, est un pathogène opportuniste responsable de simples diarrhées ou de colites pseudomembraneuses qui peuvent provoquer la mort. Le traitement de base réside en l'arrêt des antibiotiques qui ont détruit la flore de l'hôte et provoqué les symptômes, ou en la prescription de vancomycine et/ou de métronidazole. Malheureusement, l'efficacité de ces antibiotiques est variable et le nombre de rechutes est élevé. En outre, de plus en plus de souches deviennent résistantes aux antibiotiques. C'est pour cette raison qu'un besoin d'alternatives thérapeutiques s'est fait ressentir. Une des approches prometteuses est l'utilisation des endolysines, qui sont des enzymes hydrolytiques encodées par les bactériophages et qui se sont déjà révélées être efficaces contre plusieurs bactéries à Gram positif. Dans cette étude, nous avons démontré l'activité lytique d'endolysines encodées par des phages de Clostridium difficile sur des cellules vivantes. Différentes endolysines ont été clonées dans E. coli, exprimées et purifiées, puis leur activité a été vérifiée de plusieurs manières. Certains facteurs biochimiques propres à ces enzymes ont été étudiés, tels que les cofacteurs nécessaires pour une meilleure activité lytique, le pH optimal et le spectre d'efficacité sur différentes souches bactériennes. Finalement, l'étude de ces enzymes comme outil de diagnostic ou de biologie moléculaire est abordée. Les résultats de nos travaux indiquent que les endolysines PlyCD52 et PlyCD38-2 de C. difficile possèdent une faible activité lytique. L'activité des endolysines n'est pas influencée par les cofacteurs Tween 0,5%, Triton 0,1%, MgCl[indice inférieur 2] contrairement à l'EDTA qui inhibe celle-ci. Le pH optimum semble être compris entre 7 et 8,5 et ces enzymes agissent sur différentes souches de C. difficile à l'exception de la souche CD630. Malgré ces résultats encourageants, des travaux supplémentaires seront nécessaires afin de stabiliser les enzymes qui ont une forte tendance à précipiter et d'obtenir une meilleure activité.

C. albicans est un microorganisme opportuniste présent chez plus de 60% de la population. La pathogénicité de C. albicans est contrôlée par le système immunitaire de l’hôte, grâce entre autres aux peptides antimicrobiens (PAMs). Ces PAMs peuvent être de différentes origines. Notre étude a pour but d’évaluer l’effet d’un PAM d’amphibiens, la dermaseptine-S1 (DS1), sur la croissance, la transformation et l’expression de certains gènes de virulence de C. albicans. C. albicans (ATCC-SC5314) a été cultivé en présence ou en absence de la DS1 à 10, 50, et 100 μg/ml, pendant 24 h puis la croissance a été évaluée par un teste de numération cellulaire. Le passage de la forme levure à la forme hyphe a été évalué par microscopie optique et électronique à balayage après culture en présence ou en absence de la DS1 pendant 3 et 6 h à 37°C et ce en présence de 10% de sérum de veau foetal. L’effet de la DS1 sur la formation de biofilm a été évalué par un test MTT et par microscopie électronique à balayage. Enfin, l’expression de certains gènes protéase aspartique sécrétée (Saps 1, 2, 3, 9, 10 et Hwp1) a été évaluée par qRT-PCR. Nous avons montré que la DS1 réduit de façon significative la croissance de C. albicans. La DS1 inhibe le passage de C. albicans de sa forme blastospore à la forme hyphe, ainsi que la formation du biofilm. L’effet de la DS1 sur C. albicans pourrait passer par un contrôle de l’expression de plusieurs gènes impliqués dans la sécrétion d’enzyme protéolytique. En effet, la DS1 diminue de façon significative l’expression des gènes Saps 1, 2, 3, 9 et 10 ainsi que du gène Hwp1. L’ensemble de nos travaux démontre que la DS1 peut contrôler la pathogénicité de C. albicans. / Candida is an opportunistic microorganism present in more than 60% of the population. The pathogenicity of Candida is controlled by the host immune system, such as antimicrobial peptides (AMPs). These PAMs can be of different origins. Our study is to evaluate the effect of an amphibian-isolated antimicrobial peptide, dermaseptin-S1 (DS1) on the growth, transformation and the expression of certain C. albicans virulence genes. C. albicans (ATCC-SC5314) was cultured in the presence or the absence of DS1 at 10, 50, and 100 μg / ml for 24 h and then the growth of yeast was assessed by cell count. The transformation of yeast was evaluated at 3 and 6 h of culture under conditions conducive to transformation (37°C in the presence of 10% of serum) by optical and scanning electron microscopy. Biofilm formation was assessed using a collagen scaffold, after incubation for 30 min at 30°C, with MTT assay and scanning electron microscopy. Finally, the expression of some secreted aspartic protease genes (Saps 1, 2, 3, 9, 10 and Hwp1) was evaluated by qRT-PCR. The results showed that DS1 significantly reduces the growth of C. albicans. This effect is proportional to the concentration of the peptide. This peptide inhibits the passage of C. albicans from the blastospore to the hypha form. The effect of DS1 on C. albicans involves controlling the expression of several genes. Indeed, DS1 significantly decreases the expression of Sap 1, 2, 3, 9 and 10 genes as well as Hwp1 gene. All of our work demonstrates that DS1 can control the pathogenicity of C. albicans.

L’utilisation de deux protocoles de décontamination comportant d’une part des antibiotiques topiques, la polymyxine E et la tobramycine en administration nasale, oropharyngée et digestive (protocole polymyxine /tobramycine), à la mupirocine nasale et la toilette cutanée à la chlorhexidine (Hibiscrub®) (protocole mupirocine / chlorhexidine) a réduit de façon significative l’ensemble des IAs chez les patients intubés, alors que chaque protocole utilisé seul s’est révélé inefficace. L’utilisation de la décontamination par le protocole mupirocine / chlorhexidine contribue à contrôler l’épidémiologie du S aureus résistant à la méticilline (SARM) en réanimation en réduisant les IAs dues à ce germe chez les patients intubés et en permettant d’obtenir un taux acceptable de décolonisation chez les patients colonisés. L’augmentation significative des infections à SARM observée sous l’effet de la décontamination par polymyxine / tobramycine seule dans une situation hautement endémique pour le S aureus résistant à la méticilline de la fin des années 90 nécessiterait d’être réévalué dans l’épidémiologie actuelle. Le dépistage systématique, les mesures d’isolement contact, et la décolonisation des porteurs de SARM par le protocole mupirocine / chlorhexidine ne se sont pas avérés utiles sur l’acquisition de SARM en réanimation (colonisation ou infection) par opposition aux mesures générales de prévention horizontale comportant en particulier le renforcement de l’hygiène des mains. Enfin, l’utilisation en routine de la décontamination multiple par polymyxine E, tobramycine plus amphotéricine B en administration oropharyngée et gastrique associée au protocole mupirocine / chlorhexidine chez les patients intubés a été associée à une importante diminution à court terme de l’ensemble des infections acquises, en particulier celles liées aux dispositifs invasifs, mais aussi celles liées à des bacilles à Gram négatif multirésistants, dans une situation de niveau modéré de multirésistance aux antibiotiques. / The combination of two decontamination regimens utilizing (1) selective digestive decontamination (SDD) with topical antimicrobials (polymyxin E and tobramycin [P/T]) administered in the nostrils, the oropharynx and and the digestive tract with (2) nasal mupirocin and chlorhexidine (Hibiscrub®) body wash (mupirocin/chlorhexidine [M/C]) signicantly reduced all-cause acquired infections in intubated patients in the intensive care unit (ICU), whereas each regimen alone was ineffective. The use of the M/C regimen was able to control the meticillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) endemicity in the ICU because it significantly reduced MRSA acquired infections in intubated patients and was associated with an acceptable decolonisation rate in MRSA carriers. The significant increase in MRSA infections associated with the use of P/T during a period highly endemic for MRSA at the end of the 1990s would require further reassessment due the recent change in MRSA epidemiology. Systematic screening, contact precautions and decolonisation of MRSA carriers with M/C did not provide an individual benefit on the acquisition (colonisation or infection) of MRSA in the ICU as compared to general horizontal prevention measures, particularly the promotion of hand hygiene. Finally, the routine use of a combined decontamination using oropharyngeal and digestive polymyxin E, tobramycin and amphotericin B with the M/C regimen in intubated patients was associated with a substantial reduction at one year of all-cause acquired infections, particularly those associated to invasive devices and those involving multi-drug-resistant Gram negative bacilli, in an ICU with low endemicity of antibiotic resistance.