Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2003. / Bibliogr.: f. [123]-148. Publié aussi en version électronique.

Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2002. / Bibliogr.: f. 228-255. Publié aussi en version électronique.

Th. 3e cycle--Biochim.--Lille 1, 1980. N°: 872.

Les symptômes de la maladie cœliaque sont déclenchés par l'ingestion de céréales contenant du gluten comme le blé, l'orge, le seigle et, dans de rares cas, l'avoine. Afin d’éviter ceux-ci, les personnes touchées doivent adopter un régime sans gluten. Pour être déclaré sans-gluten, un aliment ne doit pas contenir plus de 20 mg/kg de gluten. Ainsi, ces denrées doivent être analysées afin de garantir leur innocuité. Actuellement, des tests immunochimiques basés sur la reconnaissance de séquences protéiques de gluten sont utilisés. Cependant, des problèmes de sur- et de sous-estimation de la teneur exacte en gluten surviennent en fonction de la source de gluten analysée, c’est-à-dire selon la céréale. En cas de surestimation, cela réduit l’offre alimentaire des personnes cœliaques, mais en cas de sous-estimation, de graves conséquences affectent cette population. De plus, la réglementation canadienne exige une déclaration de la source du gluten sur l'étiquetage des produits préemballés, ce qui ne peut être réalisé adéquatement avec les moyens actuels. Ce travail porte sur le développement de nouveaux anticorps visant à discriminer les sources de gluten en utilisant des peptides synthétiques comme stratégie d'immunisation. Pour ce faire, 14 peptides synthétiques sélectionnés de séquences protéiques de gluten ont chacun été bioconjugués à une protéine porteuse et l'immunisation de lapins a été réalisée. Les anticorps polyclonaux (pAbs) résultants distinguent avec succès le gluten de blé, d'orge et d'avoine. Les pAbs dirigés contre le seigle réagissent également avec le gluten de blé et de seigle. Les résultats obtenus démontrent que la discrimination des sources de gluten peut répondre à la législation canadienne, mais aussi complémenter les tests immunochimiques actuels en nivelant les problèmes de sur- et sous-estimation de la teneur en gluten et améliorer davantage la sécurité des aliments destinés aux patients cœliaques. / Symptoms of celiac disease are triggered by ingesting grains that contain gluten like wheat, barley, rye, and, in rare cases, oats. In order to avoid symptoms, those affected should adopt a gluten-free diet. To be declared gluten-free, a food must not contain more than 20 mg / kg of gluten. Thus, these foods must be analyzed in order to guarantee their safety. Currently, immunoassays based on the recognition of gluten protein sequences are used. However, problems of overestimating and underestimating of the exact gluten content arise depending on the type of gluten being analyzed (wheat, barley, rye or oat). If gluten is overestimated, this reduces the food supply of celiac patients, but if underestimated, serious consequences then affect this population. In addition, Canadian regulations require a declaration of the source of gluten on the labelling of prepackaged products, which cannot be done adequately with current means. This work focuses on the development of new antibodies aimed at discriminating between sources of gluten using synthetic peptides as immunization strategy. To proceed, 14 synthetic peptides selected from gluten protein sequences were each bioconjugated to a carrier protein and rabbit immunization was performed. The resulting polyclonal antibodies (pAbs) successfully distinguish gluten from wheat, barley and oats. Rye pAbs react evenly with wheat and rye gluten. The results obtained demonstrate that the discrimination of gluten sources can meet Canadian legislation, but also complement current immunoassays by levelling the problems of over and underestimation of gluten content and further improve the safety of food intended for celiac patients.

La fusion entre des cellules de rate de souris immunisées avec des suspensions de tumeurs primaires mammaires humaines et des cellules d'une lignée de myélome de souris a permis d’obtenir des anticorps monoclonaux reconnaissant les cellules épithéliales. De cette banque d'anticorps, trois réagissent contre des filaments cytoplasmiques. La caractérisation de ces anticorps monoclonaux a été faite à l'aide de techniques d'immunohistochimie, immunofluorescence et immunoperoxydase, en utilisant différentes lignées cellulaires humaines et différents tissus épithéliaux et non-épithéliaux humains, afin de connaître la spécificité des anticorps. Le poids moléculaire relatif des protéines reconnues par les anticorps a été déterminé par immunodétection de type western après transfert des protéines sur membrane de nitrocellulose. Les résultats présentés dans ce mémoire concernent uniquement la caractérisation d'un anticorps monoclonal, 1B6, qui reconnaît spécifiquement plusieurs cytokératines. Par sa spécificité, cet anticorps est un marqueur des cytokératines, donc des cellules d'origine épithéliale normales et tumorales. Il représente ainsi un outil utile et unique à notre connaissance pour le diagnostic, en pathologie, de métastases d'origine épithéliale. Au niveau de la recherche fondamentale, il constitue un outil intéressant pour l'étude, entre autres de la différenciation cellulaire épithéliale et du rôle des cytokératines. / Montréal Trigonix inc. 2018

Les mitochondries sont des organelles intracellulaires impliquées dans de nombreuses voies biologiques. Suite à la mort ou l’activation de certains types cellulaires, elles peuvent être relarguées dans le milieu extracellulaire où, elles sont reconnues comme des signaux de danger (DAMPS), générant une réponse pro-inflammatoire par le système immunitaire inné. Les interactions entre les mitochondries et l’immunité adaptative sont encore méconnues. Neuf classes d’anticorps anti mitochondriaux (AMA M1 à M9) ont été décrits différentes pathologies telles que la syphilis, la cirrhose biliaire primitive (CBP), le lupus érythémateux disséminé (LED) ou le syndrome des anti phospholipides (APS), sans que leur association avec l’expression clinique de ces maladies n’ait jamais été étudiée. Dans la présente étude, nous avons développé des méthodes de détection des AMA et anti-ADN mitochondrial (AMtDNA) puis étudié des corrélations entre la présence de ces anticorps et les caractéristiques de la maladie exprimées par des patients lupiques. Nous avons mis en évidence une association protectrice des AMA envers les évènements thrombotiques ainsi qu’une corrélation entre les niveaux d’AMtDNA et une élévation de l’index d’activité de la maladie (SLEDAI) en lien avec un accroissement des anticorps ciblant l’ADN double-brins (DsDNA). / Mitochondria are intracellular organelles that are involved in a vast number of biological pathways. They may be released in the extracellular milieu upon cell death or the activation of several types of cells where they will be recognized as danger signals (DAMPs), eliciting a pro-inflammatory response by the innate immune system. To this day, interplays between mitochondria and the adaptive branch of the immunity are poorly defined. Nine classes of anti mitochondrial antibodies (AMA M1 to M9) were reported in diseases such as syphilis, primary biliary cirrhosis (PBS), systemic lupus erythematosus (SLE) or the anti-phospholipid syndrome (APS) but their association to the clinical manifestations of these diseases have never been studied. In the present study, we developed methods for the detection of AMA and anti-mitochondrial DNA antibodies (AMtDNA) then studied correlations between the presence of these antibodies and clinical features expressed by lupus patients. We found a protective association of AMA towards thrombotic events and that AMtDNA levels correlates with an increase of the SLE disease activity index (SLEDAI) linked to an increase of the antibodies targeting double-stranded DNA (DsDNA).

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2004. / Titre provenant de l'écran-titre.

Les anticorps (Ac) marqués à l'aide de phthalocyanines (Pc) ont un grand potentiel d'applications pour des essais d'immunofluorescence tout comme pour la thérapie photodynamique (PDT). La PDT est une forme relativement nouvelle de traitement du cancer ou d'autres maladies bénignes tel le psoriasis. Cette technique implique l'administration et l'activation par la lumière d'un photosensibilisateur localisé préférentiellement au niveau des cellules cancéreuses ou en croissance intense. La plupart des photosensibilisateurs utilisés pour la PDT sont de type porphyrine tels les Pcs. Dans cette étude, nous utilisons différentes phthalocyanines hautement solubles dans l'eau. Notre étude est basée sur l'utilisation d'anticorps monoclonaux comme vecteur des Pcs et comporte deux volets distincts. Tout d'abord l'utilisation des Pcs comme fluorochrome et finalement l'utilisation des complexes OKT3-AlPcS[indice inférieur 3]A[indice inférieur 1] dans l'amélioration de la PDT. Les Pcs sont liés de façon covalente aux Ac monoclonaux via une chaîne carboxy activée du Pc par la méthode de carbodiimide/N-hydroxysulfosuccinimide. Le complexe OKT3-AlPcS[indice inférieur 3]A[indice inférieur 1] lié à l'antigène de la surface cellulaire des cellules Jurkat CD3+ est visualisé par un trieur en cryométrie de flux (FACSCAN) et la phototoxicité in vitro est déterminée par un essai colorimétrique (test MTT). Nous avons donc produit un Ac de très bonne pureté et confirmé par cryométrie de flux la conservation de l'activité et de la spécificité de la liaison de l'Ac pour le récepteur après liaison covalente avec le Pc. Nous sommes ainsi les premiers à proposer l'utilisation des Pcs comme fluorochrome. Nous avons de plus vérifié la cytotoxicité médiée par le complexe qui s'est avérée non spécifique au clone cellulaire exprimant le récepteur CD3 reconnu par l'Ac. Nous proposons deux mécanismes de liaison du complexe OKT3-AlPcS[indice inférieur 3]A[indice inférieur 1] au niveau des cellules."--Résumé abrégé par UMI.

De part, leur implication dans la prolifération cellulaire, l'invasion et leur surexpression dans de nombreux cancers, les récepteurs à tyrosine kinase de la famille HER constituent des cibles de choix en oncologie. Parmi ces récepteurs, le récepteur HER3 semble pertinent car il est impliqué dans la tumorigenèse de nombreux cancers (sein, ovaire, pancréas, mélanome…) et il est associé à un mauvais pronostic. De plus, la surexpression du récepteur HER3 est souvent associée à l'apparition de résistance aux thérapies ciblées. Nous avons sélectionné plusieurs anticorps anti-HER3 humains et murins respectivement par « phage display » et fusion cellulaire. Ces derniers reconnaissent spécifiqument le récepteur HER3. Parmi les nombreux anticorps découvert, nous avons sélectionné un anticorps anti-HER3 humain H4B-121 et 2 anticorps anti-HER3 murins 9F7-F11 et 16D3-C1. Ces derniers ont la capacité à faire régresser des tumeurs épidermoide, pancréatique et triple négative chez la souris, en présence ou en abscence de neuréguline et indépendamment du status HER2 et P53/PTEN. Cette inhibition est possible grâce à un blocage du cycle cellulaire en phase G1, une inhibition de la prolifération ainsi qu'une induction de l'apoptose. Ces trois anticorps sont capables de bloquer l'hétérodimérisation des récepteurs HER2/HER3 ainsi que la phosphorylation du récepteur HER3. Ils sont aussi capables d'inhiber la phosphorylation de la protéine AKT ainsi que de ses cibles (MDM2, FOXO et XIAP). De plus, nous avons montré que nos anticorps sont capables de lyser les cellules tumorales par ADCC (Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity). Cette étude démontre que ces anticorps anti-HER3 représentent une nouvelle thérapie pour les cancers du pancréas et du sein triple négatif. / Due to their implication in the cellular proliferation, the invasion and their surexpression in numerous cancers, the tyrosine kinase receptors of HER family constitute one of the best targets in oncology. Within this family, the human epidermal growth factor receptor 3 (HER3) plays a role in tumorigenesis of different cancers (Breast, melanoma, pancreas and ovary). This receptor is implicated in drug resistance and he is over expressed in cancers that are not eligible for the currently approved targeted therapies. To this end, we generated specific antibodies (Abs) against domain 1 (D1) and domain 3 (D3) of HER3 that recognize epitopes that do not overlap with the neuregulin-binding site. The fully human H4B-121 Ab and the mouse monoclonal Abs 16D3-C1 and 9F7-F11 inhibited tumor growth in nude mice xenografted with epidermoid, pancreatic, or triple-negative breast cancer cells independently of NRG addiction, HER2 status and p53/PTEN mutations. The combination of one anti-HER3 Ab and trastuzumab improved tumor growth inhibition in mice xenografted with HER2(low) cancer cell lines, for which trastuzumab alone shows no or moderate efficiency. Ab-induced disruption of tumor growth was associated with G1 cell cycle arrest, proliferation inhibition, and apoptosis of cancer cells. Anti-HER3 Abs blocked HER2/HER3 heterodimerization and HER3 phosphorylation at the cell membrane, leading to inhibition of phosphorylation of the downstream AKT targets murine double minute 2, X-linked inhibitor of apoptosis, and forkhead box O1. Anti-HER3 Abs can also induice antibody dependant cell-mediated cytotoxicity. This study demonstrates that anti-HER3 D1 and D3 Abs could represent a new option for immunotherapy of pancreatic and triple-negative breast cancers.

La formation du complexe de fusion qui précède la fusion est essentielle à l’infection de la cellule-cible par le VIH-1. L’inhibition de la formation de ce complexe de fusion peut empêcher l’infection et représenter un moyen de traitement antirétroviral. Plusieurs équipes ont essayé de produire des anticorps neutralisants par immunisation de souris ou de lapins avec des peptides linéaires non conformationnels, mais sans résultat. L’élaboration d’une lignée de cellules eucaryotes exprimant la structure HR1-PID-HR2 TM viral nous a permis de le faire. Cette lignée est un outil susceptible d’engendrer des anticorps monoclonaux (mAb). Trois mAbs contre le complexe de fusion de la région gp41 ont été produits chez la souris. L’activité neutralisante des anticorps produits a été évaluée sur des souches de laboratoires et des isolats primaires de VIH-1 de clades B et C. Ils induisent des réponses neutralisantes à large spectre. Les résultats obtenus montrent aussi que les trois anticorps monoclonaux pouvaient inhiber la formation de syncytia et bloquer l’interaction entre les structures HR1 et HR2 / Envelope glycoprotein is the primary target for human immunodeficiency virus (HIV) vaccine design. The N-terminal and the C-terminal regions of the gp41 interact with each other to form six helix bundle which is responsible for the fusion between the viral membrane and the target cell membrane. Monoclonal antibodies that disrupt the formation of the six helix bundle inhibit the HIV fusion. During the last decade, several human monoclonal antibodies of potent antiviral capacity for neutralizing primary isolates of different clades have been developed. The most broadly neutralizing monoclonal antibodies (mAbs) were screened from HIV-1 seropositive patients and recognized linear epitopes within the membrane proximal region of gp41. In this study, we developed a stable transfected eucaryot cell line expriming a well folded complex. Three mAbs against HIV-1 gp41 were prepared in mice. Our results show that the three mAbs were able to neutralize and inhibit the HIV-1 infection. Two of the mAbs bound to the recombinant folded gp140 and recognized HR1/HR2 regions while one of them recognized linear epitope within the HR2. Interestingly, the results showed that the three mAbs could inhibit the syncytium formation and block the interaction between the HR1 and the HR2 region