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Évaluation du pouvoir discriminatif d’anticorps créés à partir de peptides synthétiques issus de gluten de blé, d’orge, de seigle et d’avoinePoirier, David 27 January 2024 (has links)
Les symptômes de la maladie cœliaque sont déclenchés par l'ingestion de céréales contenant du gluten comme le blé, l'orge, le seigle et, dans de rares cas, l'avoine. Afin d’éviter ceux-ci, les personnes touchées doivent adopter un régime sans gluten. Pour être déclaré sans-gluten, un aliment ne doit pas contenir plus de 20 mg/kg de gluten. Ainsi, ces denrées doivent être analysées afin de garantir leur innocuité. Actuellement, des tests immunochimiques basés sur la reconnaissance de séquences protéiques de gluten sont utilisés. Cependant, des problèmes de sur- et de sous-estimation de la teneur exacte en gluten surviennent en fonction de la source de gluten analysée, c’est-à-dire selon la céréale. En cas de surestimation, cela réduit l’offre alimentaire des personnes cœliaques, mais en cas de sous-estimation, de graves conséquences affectent cette population. De plus, la réglementation canadienne exige une déclaration de la source du gluten sur l'étiquetage des produits préemballés, ce qui ne peut être réalisé adéquatement avec les moyens actuels. Ce travail porte sur le développement de nouveaux anticorps visant à discriminer les sources de gluten en utilisant des peptides synthétiques comme stratégie d'immunisation. Pour ce faire, 14 peptides synthétiques sélectionnés de séquences protéiques de gluten ont chacun été bioconjugués à une protéine porteuse et l'immunisation de lapins a été réalisée. Les anticorps polyclonaux (pAbs) résultants distinguent avec succès le gluten de blé, d'orge et d'avoine. Les pAbs dirigés contre le seigle réagissent également avec le gluten de blé et de seigle. Les résultats obtenus démontrent que la discrimination des sources de gluten peut répondre à la législation canadienne, mais aussi complémenter les tests immunochimiques actuels en nivelant les problèmes de sur- et sous-estimation de la teneur en gluten et améliorer davantage la sécurité des aliments destinés aux patients cœliaques. / Symptoms of celiac disease are triggered by ingesting grains that contain gluten like wheat, barley, rye, and, in rare cases, oats. In order to avoid symptoms, those affected should adopt a gluten-free diet. To be declared gluten-free, a food must not contain more than 20 mg / kg of gluten. Thus, these foods must be analyzed in order to guarantee their safety. Currently, immunoassays based on the recognition of gluten protein sequences are used. However, problems of overestimating and underestimating of the exact gluten content arise depending on the type of gluten being analyzed (wheat, barley, rye or oat). If gluten is overestimated, this reduces the food supply of celiac patients, but if underestimated, serious consequences then affect this population. In addition, Canadian regulations require a declaration of the source of gluten on the labelling of prepackaged products, which cannot be done adequately with current means. This work focuses on the development of new antibodies aimed at discriminating between sources of gluten using synthetic peptides as immunization strategy. To proceed, 14 synthetic peptides selected from gluten protein sequences were each bioconjugated to a carrier protein and rabbit immunization was performed. The resulting polyclonal antibodies (pAbs) successfully distinguish gluten from wheat, barley and oats. Rye pAbs react evenly with wheat and rye gluten. The results obtained demonstrate that the discrimination of gluten sources can meet Canadian legislation, but also complement current immunoassays by levelling the problems of over and underestimation of gluten content and further improve the safety of food intended for celiac patients.
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Design, synthèse et étude-structure activité des bactériocines synthétiques pour l'utilisation dans les secteurs alimentaire, vétérinaire et médicalBédard, François 08 May 2024 (has links)
La résistance aux antibiotiques est devenue un problème majeur dans la prévention et le traitement des infections bactériennes. Comme elles démontrent des activités inhibitrices in vitro contre un grand nombre de bactéries pathogènes cliniquement importantes, les bactériocines sont de plus en plus considérées comme une alternative potentielle aux antibiotiques conventionnels. Malgré cet énorme potentiel, leur utilisation est grandement limitée par les coûts élevés associés à leur production par fermentation. La synthèse chimique de ces dernières a été envisagée, mais aucune approche n’a donné jusqu’à maintenant un rendement qui puisse faire diminuer significativement les coûts de production. Dans le but de développer une voie de synthèse efficace pour ces peptides antibactériens, nous avons utilisé comme modèle la pédiocine PA-1, une bactériocine de classe IIa avec une activité anti-Listeria. L’optimisation de l’approche synthétique nous a permis d’augmenter les rendements de 1% à 45% et de concevoir des analogues avec des propriétés pharmacologiques améliorées comme une plus grande résistance à l’oxydation et à la lyse enzymatique. Cette importante réalisation nous a non seulement permis de produire la bactériocine en grande quantité, mais aussi déterminer sa structure tridimensionnelle et d’évaluer son impact sur le microbiote au niveau du tractus gastro-intestinal humain. L’approche développée s’est également avérée efficace pour la production d’autres bactériocines de la classe II comme la bactofencine A et permet de cibler davantage de pathogènes qu’on retrouve dans les différents secteurs alimentaire, vétérinaire et médical. En plus de décrire la synthèse et les études structure-activité de la bactofencine A, cet ouvrage présente les stratégies utilisées pour produire et déterminer la structure de la pédiocine PA-1 ainsi que les études sur son activité antimicrobienne et ses effets sur le microbiote dans le tractus gastro-intestinal. / Antibiotic resistance has become a major problem in the prevention and treatment of bacterial infections. As they demonstrate in vitro inhibitory activities against a large number of clinically important pathogenic bacteria, bacteriocins are increasingly seen as a potential alternative to conventional antibiotics. Despite this enormous potential, their use is greatly limited by the high costs associated with their production by fermentation. The chemical synthesis of the latter has been considered, but no approach has yielded so far a yield that can significantly reduce production costs. In order to develop an efficient synthetic route for these antibacterial peptides, we used as model the pediocin PA-1, a class IIa bacteriocin with anti-Listeria activity. Optimization of the synthetic approach allowed us to increase yields by 1% to 45% and to design analogues with improved pharmacological properties such as greater resistance to oxidation and enzymatic lysis. This important achievement allowed us to not only produce bacteriocin in large quantities but also to determine its three-dimensional structure and to evaluate its impact on the microbiota in the human gastrointestinal tract. The approach developed has also been shown to be effective for the production of other class II bacteriocins such as Bactofencin A and allows targeting more pathogens found in the different food, veterinary and medical sectors. In addition to describing the synthesis and structure-activity studies of Bactofencin A, this book presents the strategies used to produce and determine the structure of pediocin PA-1 as well as studies on its antimicrobial activity and its effects on microbiota. the gastrointestinal tract.
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Production éco-circulaire de peptides antibactériens, antifongiques et antioxydants déminéralisés à partir d'hémoglobine bovine par électrodialyse avec membranes bipolaires : étude de faisabilité, mécanisme enzymatique, optimisation des paramètres, comparaison avec l'hydrolyse conventionnelle et prévention du colmatageAbou Diab, Mira 10 February 2024 (has links)
Le cruor bovin, la matière solide du sang, est un déchet des abattoirs produit en très grande quantité dans le monde. Ce coproduit est composé principalement d'hémoglobine, une protéine riche en peptides bioactifs après son hydrolyse enzymatique. Cependant, lors de l'hydrolyse conventionnelle par la pepsine, des agents chimiques sont nécessaires pour ajuster et réguler le pH de la solution et, les hydrolysats finaux produits contiennent des niveaux élevés en sels minéraux. Pour pallier ces inconvénients, il a été proposé d'appliquer dans cette étude, pour la première fois, une technologie verte, appelée électrodialyse avec membrane bipolaire (EDMB), comme méthode alternative à l'hydrolyse enzymatique conventionnelle de l'hémoglobine afin d'obtenir des peptides bioactifs purifiés. Les objectifs de cette thèse étaient de tester la faisabilité de ce nouveau procédé pour la production de peptides bioactifs à partir d'hémoglobine bovine, d'établir les conditions optimales, d'éviter le colmatage membranaire et d'appliquer un nouveau procédé original d'EDMB à « multiple-étapes » permettant la production de peptides bioactifs déminéralisés sans ajout de produits chimiques. Des configurations bipolaires/monopolaires (anioniques ou cationiques) utilisant les ions H⁺ et OH⁻ générés par les membranes bipolaires pour réguler le pH ont été étudiées et comparées à un procédé conventionnel utilisant des acides et des bases chimiques. La configuration d'EDMB formée avec les membranes cationiques a permis la production d'hydrolysats contenant une faible concentration en sels minéraux mais avec la présence d'un colmatage sur la membrane cationique, alors que la configuration d'EDMB utilisant des membranes anioniques a permis la production d'hydrolysats sans colmatage mais avec une concentration en sel similaire à celle de l'hydrolyse conventionnelle (contrôle). En se basant sur ces résultats, une nouvelle configuration d'EDMB à trois compartiments a été mise en place et étudiée pour dénaturer l'hémoglobine, inactiver la réaction enzymatique et déminéraliser l'hydrolysat peptidique en simultané. Une déminéralisation de 85% a été atteinte. Cependant, un colmatage a encore été observé sur la membrane anionique en raison de la précipitation de l'hème. Pour cette raison, une étape supplémentaire de décoloration a été réalisée avant la déminéralisation pour éviter le colmatage en utilisant l'acide électro-généré. Les peptides décolorés et déminéralisés récupérés ont montré une activité antioxydante, une activité antibactérienne contre plusieurs souches bactériennes (Gram+ et Gram-) et pour la première fois une activité antifongique contre de nombreuses souches de moisissures et de levures. Dans un contexte d'économie circulaire, cette technologie durable s'avèrerait efficace pour effectuer plusieurs opérations simultanément et présente un potentiel important au niveau industriel pour l'hydrolyse du sang, puisqu'elle produit des bio-peptides purifiés ayant une faible teneur en sels minéraux et pouvant être utilisés comme conservateurs naturels sur la viande. / Bovine cruor, a slaughterhouse waste, is produced in large quantities all around the world. This co-product is mainly composed of hemoglobin, a protein rich in bioactive peptides after its enzymatic hydrolysis. However, during conventional hydrolysis, chemical agents are necessary to adjust or regulate the pH of the solution and the final hydrolysates produced contain high levels of mineral salts. Therefore, in this study we applied for the first time a green technology named electrodialysis with bipolar membrane (EDBM) as an alternative method to the conventional enzymatic hydrolysis of hemoglobin to obtain purified bioactive peptides. The main objectives of the present thesis were to test the feasibility of this new process to produce bioactive peptides from bovine hemoglobin, to establish the optimal conditions while avoiding membrane fouling and to apply a new original « multiple-step » EDBM process allowing the production of demineralized bioactive peptides without the addition of chemical salts. Bipolar and monopolar (anionic or cationic) configurations using the H⁺ and OH⁻ generated by the bipolar membranes to regulate the pH were investigated and compared to a conventional process using chemical acid and base. The EDBM configuration formed with cationic membranes allowed the production of hydrolysates containing a low concentration of mineral salts but with fouling formation on the cationic membrane, while EDBM configuration formed with anionic membranes allowed the production of hydrolysates without fouling but with a salt concentration similar to the control. Based on these results, a new three-compartment EDBM configuration was carried-out to denaturate the hemoglobin, inactivate the enzymatic reaction, and demineralize the hemoglobin hydrolysate simultaneously. A demineralization level of 85% has been achieved. However, fouling was still observed on the anionic membrane due to hem precipitation. For this reason, an additional step of discoloration was tested before the demineralization to avoid fouling using the electrogenerated acid. The discolored and demineralized peptides recovered showed antioxidant activity, antibacterial activity against multiple bacterial strains (Gram+ and Gram-), and for the first time, antifungal activity against several molds and yeasts strains. Moving towards a circular economy, this sustainable technology was found to be effective in performing multiple operations simultaneously and has a great potential for industrial hydrolysis of blood, since it produces purified biopeptides with a low mineral content that can be used as natural preservatives on meat.
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Application de la réaction multicomposante de Ugi à la synthèse de peptides complexesJobin, Steve 17 January 2025 (has links)
Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2017-2018 / Les oligopeptides et les mini-protéines sont des outils moléculaires très utiles en biochimie et pour le développement de nouveaux médicaments. Leur utilisation comme agents thérapeutiques est très attrayante, car ce type de biomolécules possède plusieurs caractéristiques avantageuses recherchées comme une forte activité et une haute spécificité pour la cible, ainsi qu’une faible toxicité. La préparation de ces composés s’effectue majoritairement par voie chimique et est généralement efficace. Toutefois, certaines structures peptidiques plus complexes demeurent difficiles à synthétiser par les stratégies classiques, rendant pertinente la recherche de nouvelles méthodes de synthèse. Dans le cadre de ce mémoire, la réaction multicomposante de Ugi a été ciblée comme ayant le potentiel de générer efficacement des structures peptidiques inédites. L’objectif du projet était de développer et d’appliquer une approche par réaction multicomposante de Ugi sur support solide pour la synthèse de peptides complexes et macrocycliques. Dans un premier temps, la réaction de Ugi a été appliquée dans un contexte de couplage de fragments peptidiques. Cette méthode a ensuite permis la synthèse de peptides allant jusqu’à 30 acides aminés, démontrant ainsi son efficacité en tant qu’alternative intéressante dans la synthèse de longs peptides. Par la suite, la réaction de Ugi a été utilisée pour simultanément lier et ancrer deux acides aminés à un support solide via leur squelette peptidique. L’objectif de cette approche était de synthétiser des peptides cycliques. La méthode montre que l’approche par réaction multicomposante de Ugi a permis la synthèse de composés mono- et bicycliques avec une importante économie de temps et de réactifs. En résumé, la réaction de Ugi a été employée avec succès pour développer de nouvelles méthodes permettant la synthèse de peptides complexes. Les approches développées ont le potentiel de donner accès à des structures jusqu’alors difficilement atteignables afin d’exploiter l’immense diversité moléculaire accessible avec ce type de biomolécules. / Oligopeptides and small proteins are useful tools in biochemistry and for molecular development of new therapeutic agents. Their use offers many advantages over small molecules, including a low toxicity and a strong binding on a particular target. Synthesis of such compounds mainly passes through a chemical pathway and works generally quite well. However, some complex peptide’s structures cannot yet be accessed with existing methods, which makes place for the development of new synthesis strategies. The main goal of this work that I did during my two master’s years was to find new synthesis ways to access complex peptidic structures and take advantage of all the chemical diversity available with this class of biomolecules. To do so, Ugi multicomponent reaction on solid support was targeted as a useful chemical tool that could help us to achieve the synthesis of new complex and macrocyclic peptides. First, this reaction was applied in a solid supported fragment coupling approach to access long peptides. This strategy does not require any prereactionnal modification of the building blocks, nor needing specific amino acids and does not exhibit any sign of epimerization at the ligation site. These characteristics make this method very interesting as an alternative synthetic method for long peptides production. The Ugi reaction was then used to form, in a one-pot fashion, an amide bond between two amino acids while creating another bond with a solid supported aldehyde acting as a linker. The main goal of this new approach is to allow the synthesis of head-to-tail cyclic peptides on solid-support. This method was applied to the synthesis of linear, cyclic and bicyclic peptides which would be useful in the development of new therapeutics. In conclusion, the Ugi multicomponent reaction was used for the synthesis of complex peptides. The developed methodologies allow synthesising new peptides that are unavailable up to now by chemical synthesis and that could exhibit some bioactive properties.
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Design et synthèse d'une chimiothèque de cyclopeptides et d'analogues de la Shepherdine pour l'inhibition de l'interaction HSP90-SurvivineGirard, Anick 19 April 2018 (has links)
Malgré les progrès réalisés dans les différentes stratégies thérapeutiques, l’efficacité des principales approches antitumorales a atteint un plateau critique dans le traitement de plusieurs cancers. Il y a donc un besoin urgent de découvrir de nouveaux composés anticancéreux innovateurs et efficaces. Surexprimée dans la plupart des cancers et indétectable dans la majorité des tissus normaux, la Survivine est une protéine multifonctionnelle qui joue un rôle clé dans le contrôle de la division cellulaire et de l’apoptose. Malgré son immense potentiel thérapeutique dans le traitement des cancers, le portfolio de la Survivine est très mince. Dans le but de développer des inhibiteurs sélectifs de la Survivine deux approches différentes ont été utilisées dans ce projet : 1) une approche par design rationnel à partir d’un ligand et 2) une approche combinatoire. Un point critique dans les fonctions de la Survivine dans les cancers est son association avec la protéine du choc thermique 90kDa (Hsp90). La Shepherdine est un peptide inhibiteur de l’interaction entre la Survivine et la Hsp90. Malheureusement, elle est dégradée rapidement et possède une perméabilité cellulaire très faible. Pour contourner ce problème, la Shepherdine a été utilisée comme référence dans une approche de design rationnel pour réaliser des études de relation structure-activité et ultimement développer des analogues synthétiques possédant des propriétés pharmacologiques améliorées. L’approche combinatoire «one-bead-one-compound» (OBOC) possède un grand potentiel pour découvrir de nouveaux ligands de la Survivine, car elle permet d’exploiter de manière optimale la diversité moléculaire accessible avec les peptides cycliques. Par contre, leur utilisation dans cette approche est limitée par les problèmes associés avec la détermination de la séquence peptidique des composés après le criblage. Pour contourner ce problème, une nouvelle approche par réouverture de cycle a été mise au point pour la synthèse et le décodage de chimiothèques OBOC de peptides cycliques. Cette nouvelle méthode servira pour la préparation d’une chimiothèque OBOC de peptides cycliques qui seront criblés pour découvrir des ligands de la Survivine et de potentiels inhibiteurs.
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Caractérisation du peptide fluoré LX2 pour le développement d'un nouveau canal ionique membranaireAuger, Maud 10 July 2024 (has links)
Dans le but de développer un canal ionique membranaire à visée nanochimiothérapeutique, ce mémoire présente la synthèse et la caractérisation des peptides fluorés LX2 et LX2 acétylé lorsqu'ils interagissent avec des modèles de membranes cellulaires. Ces peptides s'inspirent du peptide LS2 (LSLLLSL)3, un polypeptide de 21 acides aminés composé de résidus leucine et sérine, qui a été développé et caractérisé par le groupe du Pr W.F. DeGrado. Dans le cas du LX2 (LXLLLXL)3, les sérines ont été remplacées par des acides 2-amino-4,4,4-trifluorobutyrique. Des études de modélisation antérieures suggèrent que ce peptide membranaire s'auto-assemble en tétramère dans des membranes phospholipidiques. Différentes techniques ont été utilisées pour caractériser le LX2 et sa forme acétylée, ainsi que leurs interactions avec des membranes modèles de type eucaryote formées de POPC et de cholestérol. Le dichroïsme circulaire et la spectroscopie infrarouge ont permis de déterminer la structure secondaire des peptides en solution et au sein des membranes. La spectroscopie infrarouge et la résonance magnétique nucléaire ont donné de l'information sur les perturbations induites par les peptides sur les membranes. La séquence CODEX utilisée en spectroscopie RMN des solides a constitué une première étape afin de mettre en évidence l'oligomérisation des peptides.
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Production de fractions antihypertensives par hydrolyses enzymatiques des protéines de lentilles d'eauBernier, Marie-Ève 15 January 2025 (has links)
Les lentilles d'eau, de petites plantes aquatiques flottantes, présentent un fort potentiel pour la production de peptides bioactifs. Cela est principalement dû à leur teneur en protéines, pouvant atteindre jusqu'à 45 % et à leur croissance exceptionnellement rapide, capable de doubler en seulement 24 à 48 heures. Dans ce contexte, les lentilles d'eau ont été hydrolysées pour obtenir des peptides antihypertenseurs potentiels. Les objectifs spécifiques de ce projet étaient les suivants : (1) Réaliser l'hydrolyse enzymatique des protéines de lentilles d'eau en utilisant quatre enzymes différentes (pepsine, chymotrypsine, papaïne et trypsine) et évaluer le degré d'hydrolyse (DH) des différents hydrolysats ; (2) évaluer l'impact de la centrifugation des hydrolysats en caractérisant les fractions obtenues et en identifiant les séquences peptidiques présentes ; (3) évaluer le contenu phénolique total (TPC) de chaque fraction avant et après centrifugation de l'hydrolysat, et (4) évaluer l'activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (ECA) (activité antihypertensive) des fractions générées. Parmi les enzymes utilisées, la pepsine et la trypsine ont montré les plus hauts DHs, soit environ 9%. Les peptides présents dans les différentes fractions (hydrolysat final, surnageant et culot) ont été caractérisés à l'aide de l'UPLC-MS/MS, révélant des différences dans les populations peptidiques entre les fractions dérivées de différentes enzymes, ainsi qu'entre les diverses fractions obtenues à l'aide de la même enzyme. L'étape de centrifugation a donc permis la concentration de peptides spécifiques dans certaines fractions. Au total, 485 séquences peptidiques ont été identifiées dans les hydrolysats finaux. De ces séquences, 434 étaient spécifiques à un hydrolysat donné, tandis que 51 étaient communes à deux ou trois hydrolysats et aucune n'était commune aux quatre hydrolysats. L'analyse du contenu phénolique total (TPC) a révélé que les composés phénoliques étaient libérés lors des hydrolyses enzymatiques, principalement retrouvés dans les surnageants après centrifugation, avec des concentrations atteignant 11 mg d'acide gallique/g d'échantillon. Les fractions les plus prometteuses en ce qui concerne l'activité antihypertensive étaient l'hydrolysat chymotrypsique (CHY DFH), le surnageant chymotrypsique (CHY DS) et le surnageant de la papaïne (PAPA DS), présentant des valeurs d'IC$\mathsf{_{50}}$ de 0,55 ± 0,19; 0,70 ± 0,09 et 0,62 ± 0,11 mg peptides/mL respectivement. Ces fractions ne correspondent pas à celles récupérées des hydrolyses ayant le DH le plus élevé, ni à celles possédant le TPC le plus élevé, ce qui suggère que les peptides présents dans ces fractions pourraient être responsables de l'activité biologique observée. À notre connaissance, il s'agit de la première étude portant sur l'hydrolyse enzymatique des protéines de lentilles d'eau pour produire des fractions peptidiques ayant une activité antihypertensive. Selon la fraction analysée, l'inhibition de l'ECA peut être attribuée à des peptides bioactifs, à des composés phénoliques ou à une synergie entre les deux. L'hydrolyse effectuée avec la chymotrypsine et la papaïne a augmenté de manière significative l'activité inhibitrice de l'ECA de plus de huit fois et sept fois respectivement. Les fractions résultant de ces hydrolyses contiennent potentiellement des séquences ayant des propriétés antihypertensives, nécessitant ainsi des analyses complémentaires pour les révéler. / Water lentils, small floating aquatic plants, have significant potential to produce bioactive peptides. This is mainly due to their protein content, which can reach up to 45%, and their exceptionally fast growth, capable of doubling in just 24 to 48 hours. In this context, water lentils were hydrolysed to yield potential antihypertensive peptides. The specific objectives of this project were: (1) to perform enzymatic hydrolysis of duckweed proteins utilizing several enzymes (pepsin, chymotrypsin, papain and trypsin) and evaluate the degree of hydrolysis (DH) of the different hydrolysates; (2) to assess the impact of hydrolysate centrifugation by characterizing the fractions obtained and identifying the peptide sequences present; (3) to evaluate the total phenolic content (TPC) of each fraction before and after centrifugation of the hydrolysate, and (4) to evaluate inhibitory activity of angiotensin-converting enzyme (ACE) (antihypertensive activity) of the generated fractions. Among the enzyme used, pepsin and trypsin showed the ability to achieve the highest degree of hydrolysis (DH), approximately 9%. Peptides present in the various fractions (Final hydrolysate, supernatant and pellet) were characterized and identified using UPLC-MS/MS, unveiling differences in peptide populations between fractions derived from different enzymes, as well as between diverse fractions originating from the same enzyme. This underscored that the centrifugation step enabled the concentration of specific peptides within certain fractions. In total, 485 peptide sequences were identified in the final hydrolysates. Of these sequences, 434 were specific to a particular hydrolysate, while 51 were common to two or three hydrolysates, and none were common to all four hydrolysates. Analysis of total phenolic content (TPC) revealed that phenolic compounds were released during enzymatic hydrolysis, primarily found in the supernatants after centrifugation, with concentrations reaching up to 11 mg of gallic acid/g of sample. The most promising fractions in terms of antihypertensive activity were the chymotryptic hydrolysate (CHY DFH), the chymotryptic supernatant (CHY DS) and the papain supernatant (PAPA DS), with IC$\mathsf{_{50}}$ values of 0.55 ± 0.19, 0.70 ± 0.09 and 0.62 ± 0.11 mg peptides/mL, respectively. These fractions did not correspond to those recovered from the hydrolysates with the highest DH or the highest TPC. This suggests that the peptides present in these fractions may be responsible for the observed biological activity. To our knowledge, this was the first study to investigate the enzymatic hydrolysis of duckweed proteins to produce bioactive peptide fractions with antihypertensive activity. Depending on the fraction analyzed, ACE inhibition can be attributed to bioactive peptides, phenolic compounds, or a synergy between the two. The resulting fractions from these hydrolyses potentially contain sequences with antihypertensive properties, thus requiring additional analyses to reveal them.
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Développement du motif sulfahydantoïne comme source de composés bioactifsLapointe Verreault, Camille 20 April 2018 (has links)
Le présent mémoire se divise en deux parties. La première décrit le développement d’une nouvelle méthodologie de synthèse de peptides analogues contraints par une sulfahydantoïne. La deuxième partie décrit la synthèse de nouveaux composés dérivés du motif sulfahydantoïne au potentiel antibactérien. Le premier chapitre est consacré à la description des agents thérapeutiques peptidiques et de leurs applications. Il est sujet également de l’intérêt de développer de nouveaux peptides contraints. Le deuxième chapitre décrit la synthèse du motif sulfahydantoïne ainsi que la synthèse de peptides analogues contraints sur support solide et en solution. Le troisième chapitre traite des résultats conformationnelles des peptides contraints obtenus à l’aide de la spectropolarimétrie de dichroïsme circulaire et par la spectroscopie de résonance magnétique nucléaire. Le quatrième et dernier chapitre porte sur la synthèse de nouveaux composés dérivés de la sulfahydantoïne et leur caractérisation. Finalement, les résultats des tests biologiques réalisés avec les composés sont présentés.
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Design et synthèse de peptides macrocycliques pour le développement de nanopores moléculairesBlanchette, Jean-Philippe 13 April 2018 (has links)
Le présent mémoire se divise en deux parties principales. La première traite de la synthèse efficace de macrocycles peptidiques par une approche sur support solide. La seconde partie présente le design et les avancements dans la synthèse d'une nouvelle nanostructure peptidique de type canal. Ces deux projets ont en commun l'utilisation de macrocycles peptidiques. Le premier chapitre constitue une introduction aux canaux et nanopores naturels et artificiels développés dans le passé, ainsi que l'approche novatrice de notre groupe de recherche, amenant ainsi les objectifs de ce projet de maîtrise. Le deuxième chapitre traite de la synthèse de séquences peptidiques modèles pour le développement et la compréhension des paramètres influençant une réaction clé de clivage cyclidatif, permettant l'obtention de macrocycles peptidiques. Le troisième chapitre porte sur l'étude de la séquence sur cette même réaction clé, facteur très important pour cette réaction. Le quatrième chapitre traite quant à lui du design et de la stratégie pour la formation d'un nanopore moléculaire, incluant un macrocycle peptidique comme élément de pore de la nanostructure. Les essais et avancements pour la synthèse de ce canal cible seront discutés.
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Peptide design for the flotation of sulphidesMejia Bohorquez, Barbara 07 June 2024 (has links)
Au cours des dernières années, la demande croissante en cuivre, zinc et nickel a conduit à une augmentation de la récupération de minéraux précieux à partir de minerai complexes. Parmi ces minéraux, la chalcopyrite, la sphalérite et la pentlandite sont des minéraux sulfurés souvent trouvés en association avec d'autres tels que la pyrite et la pyrrhotite. La séparation et la concentration de ces minéraux sont généralement réalisées par flottation, un procédé qui sépare les particules hydrophobes des particules hydrophiles et permet de récupérer les premières dans une mousse en tête de cuve. Le degré d'hydrophobicité d'un minéral dépend de sa nature inhérente et des altérations de surface induites par les collecteurs et les déprimants ajoutés à la suspension de particules, avec d'autres agents tensio-actifs. Néanmoins, les collecteurs utilisés dans la flottation des sulfures sont connus pour être nocifs. Par conséquent, il y a un intérêt pour le développement de nouveaux collecteurs plus respectueux de l'environnement. Dans le travail actuel, mené dans le cadre de nos efforts pour développer des collecteurs alternatifs, efficaces et économiquement compétitifs, nous avons utilisé la technique de présentation de peptides par des phages (phage display) couplée aux technologies de séquençage à haute capacité pour l'identification des peptides présentant une forte affinité pour la chalcopyrite. Pour ce faire, nous avons utilisé une bibliothèque de heptapeptides linéaires, et les candidats potentiels ont été soumis à une validation par le biais de tests d'adsorption. Ces tests comprenaient une comparaison des capacités d'adsorption des séquences produites de différentes manières et sous différentes formes : des phages, des peptides synthétiques et des protéines de fusion avec d'autres éléments d'intérêt. Les résultats de ces tests ont confirmé la capacité d'adsorption des séquences sélectionnées sur la chalcopyrite. De plus, nous avons démontré que les peptides synthétiques désalés constituent une option viable pour des tests d'adsorption. En outre, nous avons créé deux types de bio-collecteurs en ajoutant à nos séquences affinitaires des queues hydrophobes,composées de leucine (L), de différentes longueurs : soit 3 L ou 5 L. Ces queues hydrophobes ont été intégrées dans deux séquences validées pour construire des collecteurs à base de peptides. Ces nouveaux collecteurs ont été évalués pour leur adsorption sur la chalcopyrite et le quartz. Ensuite, des tests de micro-flottations ont été réalisées à l'aide d'un tube d'Hallimond. Les résultats ont révélé que ces peptides étaient efficaces et sélectifs pour faire flotter la chalcopyrite par rapport au quartz, démontrant le potentiel des queues hydrophobes et de l'utilisation de collecteurs à base de peptides dans la flottation des minerais sulfurés. Finalement, nous avons exploré la faisabilité de l'utilisation de diverses protéines recombinantes pour produire les peptides. Nous avons utilisé trois gènes rapporteurs de tailles variables : 1) la protéine fluorescent verte (EGFP), avec et sans l'ajout des liens, 2) PhiLOV3 dans diverses configurations, et 3) la thioredoxine fusionnée avec des répétitions du peptide. Une expression réussie des peptides fusionnés aux gènes rapporteurs a été obtenue en quantités signifficatives et sous une forme soluble lors de l'utilisation de l'EGFP. / In recent years, the growing demand for copper, zinc and nickel has led to an increase in the recovery of valuable minerals from complex ores. Among these minerals, chalcopyrite, sphalerite, and pentlandite are sulphides minerals often found in association with other such as pyrite and pyrrhotite. The separation and concentration of these minerals are typically achieved by froth flotation, a process that separates hydrophobic from hydrophilic particles and enables the hydrophobic particles to be recovered in a foam at the top of the tank. The degree of hydrophobicity exhibited by a mineral depends on its inherent nature and surface alterations induced by collectors and depressants added to the particle suspension, along with other surfactants. However, collectors used in sulphide flotation have been known to be harmful to the environment. Hence, there is an interest in the development of novel collectors that are more environmentally friendly. In the current work, conducted as part of our efforts to develop efficient and economically competitivee alternative collectors, we employed the phage display technique coupled with high-throughput sequencing technologies to identify peptides with high affinity for chalcopyrite. To achieve this, we employed a library of linear peptides, and potential candidates were subject to validation through adsorption tests. These tests involved comparing the adsorption capacities of sequences produced in different ways: phages, synthetic peptides, and fusion proteins with other elements of interest. The results of these tests confirmed the adsorption capacity of the selected sequences on chalcopyrite. Moreover, we demonstrated that desalted synthetic peptides serve as a viable option for adsorption tests. Furthermore, we have created two types of bio-collectors by adding hydrophobic tails, composed of leucine (L), of different lengths to our affinity sequences: either 3 L or 5 L. These hydrophobic tails were added were integrated into two validated sequences to construct peptidebase collectors. These newly devised collectors were assessed for adsorption on chalcopyrite and quartz. Subsequently, micro-flotation test were conducted using a Hallimond tube. The results revealed that these peptides were efficient and selective in floating chalcopyrite with respect to quartz, showing the potential of the hydrophobic tails, and the use of peptide-base collectors in the flotation of sulphide ores. Lastly, we explored the feasibility of utilizing various recombinant proteins to produce the peptides. We employed three different reporter genes of varying sizes: 1) Enhanced green fluorescence protein (EGFP), both with and without linkers, 2) PhiLOV3 in diverse configurations, and 3) Thioredoxine fused with repetitions of the peptide. Successful expression of peptides fused to reporter genes was achieved in significant quantities and a soluble form when utilizing EGFP.
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