Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3974_1.pdf: 1351475 bytes, checksum: c1defee5bad0df39584e355770125fa4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A busca de compostos alternativos para um emprego racional de conservantes naturais em produtos cárneos tem a finalidade de atender as perspectivas do consumidor e prolongar a vida de prateleira com segurança tanto no aspecto biológico como químico. O uso da quitosana, um polímero natural obtido da biomassa de fungos, tem se destacado devido as suas propriedades: biodegradável, extremamente abundante e atóxico, e poder antibacteriano, podendo ser utilizado em sistemas naturais de conservação de produtos cárneos. Dentre os diversos microrganismos que se destacam como contaminante de produtos cárneos, Listeria monocytogenes figura como uma ameaça à saúde do consumidor, sendo tal agravante relacionado à sua elevada resistência fisiológica e capacidade de sobrevivência e multiplicação em alimentos armazenados sob refrigeração. Este estudo objetivou verificar a bioatividade de quitosana de Mucor rouxii (UCP064) na inibição de Listeria monocytogenes em produto cárneo. Para produção da quitosana foi utilizado como substrato para crescimento do Mucor rouxii UCP 064 o meio Jacatupé (Pachyrhizus erosus), incubado a 28ºC a 150 rpm por 96 horas. Para avaliar o crescimento do M. rouxii, foram verificados o pH, consumo de glicose e a proteína em diferentes tempos. A biomassa produzida foi liofilizada, sendo a quitosana extraída por tratamento álcali-ácido. A caracterização da quitosana foi determinada por espectroscopia de raio infravermelho para obtenção do grau de desacetilação (DD) e viscosidade para o peso molecular. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) foi determinada através do teste de macrodiluição. O rendimento máximo da biomassa de Mucor rouxii ocorreu com 48 horas, com valor de 16,9 g.L -1, com produção de 62 mg.g.L -1 de quitosana, tendo durante o crescimento, o pH variado de 5 a 4. A quitosana obtida apresentou grau de deacetilação de 85% DD e peso molecular de 2,60 x 104 g.mol -1. A CIM e a CBM foram determinadas como sendo as concentrações de 2,5 mg.ml -1 e 5,0 mg.ml -1 , respectivamente. Para aplicação em produto cárneo, a CBM foi adicionada em patê de carne, onde foi comprovada a eficácia antibacterina da quitosana contra a Listeria monocytogenes. Conclui-se, que a quitosana de Mucor rouxii pode ser utilizado como potencial fonte antilisterial para uso na conservação de produtos cárneos, reduzindo assim os aditivos artificiais que são considerados prejudiciais à saúde

Thirteen South African medicinal plants which are used traditionally to treat symptoms associated with Listeria monocytogenes infections, were screened for activity against the pathogen. Different plant parts were extracted separately with ethyl acetate or chloroform. All the extracts were first screened against the bacteria using the disc diffusion method. Zones of inhibition observed in the presence of the chloroform extracts of Eucomis autumnalis, ethyl acetate extracts of Acacia karroo and Plectranthus ecklonii (50 mg/ml) were 12 mm, 14 mm and 15 mm respectively. Active extracts were further tested against the bacteria for minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) using the microtitre dilution method. Ethyl acetate extracts of A. karroo exhibited MIC of 3.1 mg/ml and MBC of 6.25 mg/ml. Ethyl acetate extracts of P. ecklonii showed MIC of 0.5 mg/ml and MBC of 1.0 mg/ml. Five samples namely A. karroo (ethyl acetate extract), P ecklonii (ethyl acetate extract), Senecio inonartus (ethyl acetate extract), S. inonartus (chloroform extract) and Aloe arborescens (ethyl acetate extract) showed good MIC against L. monocytogenes and a MBC range from 1.0 to 12.5 mg/ml. The two plants, A. karroo and P. ecklonii were further selected for the isolation of the active compound(s). Column chromatographic purification of ethyl acetate extracts of the leaves of A. karroo led to the isolation of three known pure compounds namely â-sitosterol, epigallocatechin and epicatechin. The MICs of the â-sitosterol and epigallocatechin that were isolated from A. karrroo were found to be 31.25 µg/ml and 62.5 µg/ml respectively against L. monocytogenes. The confocal scanning laser microscopy (CSLM) showed that the biomass of the listerial biofilms were reduced when the isolated compounds were added and slightly reduced when the crude extract was added. The aggregation of cells which were exposed to â-sitosterol and epigallocatechin was reduced from 25 µm as observed in untreated cells to < 10 µm in length. Therefore as one of the local South African plants identified in the present study, the pure compounds isolated from A. karroo, could be used as a potential natural alternative for eliminating L. monocytogenes biofilms from food processing surfaces. This could help in combating the problem of food contamination and food poisoning caused by the pathogen. It could also help in preparing antibiofilm agents that are cost effective and easily accessible to the public. A. karroo should be further be explored in this regard. The present study reports for the first time the isolation of the three compounds, â-sitosterol, and epicatechin and epigallocatechin from A. karroo. Bioassay-guided fractionation of the P. ecklonii ethyl acetate extract led to the isolation of two known compounds, parvifloron D and parvifloron F. Parvifloron D and F exhibited a minimum inhibitory concentration (MIC) of 15.6 and 31.25 µg/ml respectively against L. monocytogenes. The MICs of parvifloron D and F against a drug-sensitive strain of Mycobacterium tuberculosis were found to be 190 and 95 µg/ml respectively. The ethyl acetate extract of P. ecklonii and its isolated compounds were tested for their activity on tyrosinase inhibition. The concentration of plant extract at which half the tyrosinase activity was inhibited (IC50) was found to be 61.73 ± 2.69 µg/ml. The antibacterial activity of the extract of P. ecklonii and its isolated compounds correlates with the traditional use of the plant for various ailments such as stomach-aches, diarrhoea and skin diseases. This is the first report on the bioactivity of an extract of P. ecklonii and its two compounds. The antibacterial activity of the extracts of A. karroo, P. ecklonii and their isolated compounds correlates with the traditional use of these plants for symptoms associated with listeriosis. / Thesis (PhD)--University of Pretoria, 2011. / Plant Science / unrestricted

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 517056 bytes, checksum: 29070a0d8d4421b71f8bf632a8608739 (MD5) Previous issue date: 2010-09-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The use of micro-organisms as starter cultures may help in developing new products as well as improving quality and safety of food products. The aim of this study was to characterize isolates of coagulase negative staphylococci regarding their contribution the safety of a fermented meat product. Staphylocuccus spp. and Listeria spp. were grown in Nutritive Broth and BHI broth, respectively. Survival and inactivation of Staphylococcus spp. and Listeria spp. were evaluated in a laboratory model, Salami Broth. The inhibitory activity of cultures of Staphylococcus spp. on Listeria spp. was evaluated by agar diffusion assay and agar spot test. Acid production by Staphylococcus spp. was assessed by HPLC on culture supernatants. Italian salami was produced and inoculated with commercial starter culture and 106 CFU.g-1 S. pasteuri BIS 26 and, or 104 CFU.g-1 L. monocytogenes IP1-23 or L. innocua LMA 80. Staphylococcus spp. and Listeria spp. showed highest specific growth rates under aerobic conditions at 37 ° C. Staphylococcus spp. and Listeria spp. did not developed in salami broth under test conditions. No inhibitory activity was observed in culture supernatants of Staphylococcus spp. on Listeria spp., however, when cultivation was carried out on agar surface the diameter of inhibition zones ranged from 3 mm to 8 mm. HPLC analysis showed that lactic acid was in higher concentration as compared to other organic acids, with values between 0.2 and 0.4 % v/v. The final pH of the Italian type salami after 31 days of ripening ranged from 4.8 to 5.3. In the salami, the population of L. monocytogenes IP1-23 was reduced by about 5 log cycles when inoculated with the commercial starter culture and 2 log cycles when S. pasteuri BIS 26 was added. The difference between treatments indicates that L. monocytogenes IP1-23 was more sensitive than L. innocua LMA 80. However, results of in vitro assays showed that this is not always the case, recommending caution when using L. innocua as an indicator organism. / A utilização de micro-organismos como culturas starter pode contribuir para o desenvolvimento de novos produtos, para a melhoria da qualidade e da segurança dos produtos alimentícios. O objetivo deste estudo foi caracterizar isolados de Staphylococcus coagulase negativos quanto à sua possível contribuição para segurança de produto cárneo fermentado. O crescimento de Staphylocuccus spp. e Listeria spp. foi avaliado em caldo nutritivo e caldo BHI, respectivamente. A sobrevivência e inativação de Staphylococcus spp. e Listeria spp. foram avaliadas em um modelo laboratorial, caldo salame. A atividade de inibição de culturas de Staphylococcus spp. sobre Listeria spp. foi avaliada pelos métodos difusão em ágar e ágar &#8220;spot&#8221;. A análise da produção de ácidos em amostras de sobrenadantes de Staphylococcus spp. foi feita por HPLC. Salame tipo italiano foi produzido e inoculado com cultura starter comercial acrescida de 106 UFC.g-1 da cultura de Staphylococcus pasteuri BIS 26 e, ou 104 UFC.g-1 da cultura de Listeria monocytogenes IP1-23 ou Listeria innocua LMA 80. Staphylocuccus spp. e Listeria spp. apresentaram maiores velocidades específicas de crescimento em aerobiose na temperatura de 37 °C. Os isolados de Staphylococcus spp. e Listeria spp. não se desenvolveram no caldo salame, nas condições testadas. Não foi observada inibição do sobrenadante das culturas de Staphylococcus spp. sobre L. innocua e L. monocytogenes, entretanto, no cultivo em superfície, as médias dos diâmetro dos halos de inibição variaram de 3 mm a 8 mm. Na análise por HPLC, o ácido láctico foi o detectado em maior concentração, com valores entre 0,2 e 0,4 % v/v. O pH final dos salames tipo italiano após 31 dias de maturação variou entre 4,8 e 5,3. Nos salames, a população de L. monocytogenes IP1-23 foi reduzida em cerca de 5 ciclos logarítmicos quando inoculada juntamente com a cultura starter comercial enquanto no tratamento em que a cultura de S. pasteuri BIS 26 foi adicionada a redução foi de cerca de 2 ciclos log. A diferença observada entre os tratamentos indica que L. monocytogenes IP1-23 foi mais sensível que L. innocua LMA 80. No entanto, os resultados de ensaios in vitro mostraram que nem sempre isto ocorre, e deve-se ter cautela ao utilizar L. innocua como um organismo indicador.