Objetivo: Determinar el Nivel de Satisfacción del Usuario que recibe Tratamiento Anti-retroviral de Gran Actividad (TARGA) acerca de la Calidad de la Atención del Equipo Multidisciplinario del Hospital Nacional Hipólito Unanue en el 2007. Material y Método: es de Nivel aplicativo, tipo cuantitativo, método descriptivo de corte transversal. La población estuvo conformada por todos los pacientes que reciben TARGA en forma ambulatoria. La muestra conformada por 78 de ellos fue obtenida mediante el muestreo probabilístico aleatorio simple. La técnica usada fue la encuesta y el instrumento un cuestionario. Resultados: En cuanto al nivel de satisfacción del usuario que recibe TARGA respecto a la calidad de atención que brinda el equipo multidisciplinario, tenemos que de un total de 78 (100 %) usuarios, 21 (26.92%) tienen un nivel de satisfacción alto, 42 (53.85%) medio, y 15 (19.23%) bajo. En la dimensión humana de 78 (100%), 27(34.62%) de usuarios tienen un nivel de satisfacción alto, 34 (43.59%) medio, y 17 (21.79%) bajo, en la dimensión técnica, de 78 (100%), 20 (25.64%) tienen un nivel de satisfacción alta, 42 (53.85%) media, y 16 (20.51%) baja y en la dimensión entorno de 78 (100%), 40 (51.28%) de usuarios tienen un nivel de satisfacción alto, 23 (19.49%) medio, y 15 (19.23%) bajo. Conclusiones: Por lo expuesto se deduce que la mayoría de los usuarios que reciben TARGA tiene un nivel de satisfacción media y baja respecto a la calidad de atención que brinda el equipo multidisciplinario y según lo evidenciado en los gráficos solo se ha encontrado satisfacción alta en la dimensión entorno, a pesar de ello tener en cuenta los casos con satisfacción media y baja aunque sea minoría y a la mayoría con nivel media y bajo en las dimensiones técnica y humana. Ello se llevará a cabo cuando el equipo multidisciplinario brinde atención de calidad haciendo que el PVVS logre sentirse bien, continúe viniendo a sus consultas, a recibir su tratamiento, cumpla lo indicado para el cuidado de su salud y de esta manera mejore su calidad de vida. Palabras Claves: TARGA, Satisfacción del Usuario, Calidad de Atención, Equipo Multidisciplinario. / Objective: To determine the Level of Satisfaction of the User who receives Treatment Anti-retroviral de Gran Activity (TARGA) about the Quality of the Attention of the Multidisciplinario Equipment of the Hospital Nacional Hipólito Unanue in the 2007. Material and Method: it is of aplicativo Level, quantitative type, descriptive method of cross section. The population was conformed by all the patients who receive TARGA in ambulatory form. L to sample conformed by 78 of them was obtained by means of the simple random probabilístico sampling. The used technique was the survey and the instrument a questionnaire. Results: As far as the level of satisfaction of the user who receives TARGA with respect to the quality of attention that offers the multidisciplinary equipment, we have of a total of 78 (100%) usuary ones, 21 (26,92%) have a level of high satisfaction, 42 (53,85%) average, and 15 (19,23%) low. In the human dimension of 78 (100%), 27 (34,62%) of users have a level of high satisfaction, 34 (43,59%) average, and 17 (21,79%) low, in the technical dimension, of 78 (100%), 20 (25,64%) have a level of high satisfaction, 42 (53,85%) average, and 16 (20,51%) low and in the dimension surroundings of 78 (100%), 40 (51,28%) of users have a level of high satisfaction, 23 (19,49%) average, and 15 (19,23%) low. Conclusions: By the exposed thing it is deduced that most of the users who receive TARGA he has a level of average satisfaction and low with respect to the quality of attention that offers the multidisciplinary equipment and according to the demonstrated thing in the graphs single has been high satisfaction in the dimension surroundings, in spite of it to consider the cases with average and low satisfaction although is minority and to the majority with low mean level and in the dimensions technical and human. It will be carried out when the multidisciplinary equipment offers quality attention causing that the PVVS manages to feel well, continues coming to their consultations, to receive their treatment, fulfills the indicated thing for the care of its health and this way it improves his quality of life. Key words: TARGA, Satisfaction of the User, Quality of Attention, Multidisciplinario Equipment.

Objetivo: Determinar el Nivel de Satisfacción del Usuario que recibe Tratamiento Anti-retroviral de Gran Actividad (TARGA) acerca de la Calidad de la Atención del Equipo Multidisciplinario del Hospital Nacional Hipólito Unanue en el 2007. Material y Método: es de Nivel aplicativo, tipo cuantitativo, método descriptivo de corte transversal. La población estuvo conformada por todos los pacientes que reciben TARGA en forma ambulatoria. La muestra conformada por 78 de ellos fue obtenida mediante el muestreo probabilístico aleatorio simple. La técnica usada fue la encuesta y el instrumento un cuestionario. Resultados: En cuanto al nivel de satisfacción del usuario que recibe TARGA respecto a la calidad de atención que brinda el equipo multidisciplinario, tenemos que de un total de 78 (100 %) usuarios, 21 (26.92%) tienen un nivel de satisfacción alto, 42 (53.85%) medio, y 15 (19.23%) bajo. En la dimensión humana de 78 (100%), 27(34.62%) de usuarios tienen un nivel de satisfacción alto, 34 (43.59%) medio, y 17 (21.79%) bajo, en la dimensión técnica, de 78 (100%), 20 (25.64%) tienen un nivel de satisfacción alta, 42 (53.85%) media, y 16 (20.51%) baja y en la dimensión entorno de 78 (100%), 40 (51.28%) de usuarios tienen un nivel de satisfacción alto, 23 (19.49%) medio, y 15 (19.23%) bajo. Conclusiones: Por lo expuesto se deduce que la mayoría de los usuarios que reciben TARGA tiene un nivel de satisfacción media y baja respecto a la calidad de atención que brinda el equipo multidisciplinario y según lo evidenciado en los gráficos solo se ha encontrado satisfacción alta en la dimensión entorno, a pesar de ello tener en cuenta los casos con satisfacción media y baja aunque sea minoría y a la mayoría con nivel media y bajo en las dimensiones técnica y humana. Ello se llevará a cabo cuando el equipo multidisciplinario brinde atención de calidad haciendo que el PVVS logre sentirse bien, continúe viniendo a sus consultas, a recibir su tratamiento, cumpla lo indicado para el cuidado de su salud y de esta manera mejore su calidad de vida. Palabras Claves: TARGA, Satisfacción del Usuario, Calidad de Atención, Equipo Multidisciplinario. / Objective: To determine the Level of Satisfaction of the User who receives Treatment Anti-retroviral de Gran Activity (TARGA) about the Quality of the Attention of the Multidisciplinario Equipment of the Hospital Nacional Hipólito Unanue in the 2007. Material and Method: it is of aplicativo Level, quantitative type, descriptive method of cross section. The population was conformed by all the patients who receive TARGA in ambulatory form. L to sample conformed by 78 of them was obtained by means of the simple random probabilístico sampling. The used technique was the survey and the instrument a questionnaire. Results: As far as the level of satisfaction of the user who receives TARGA with respect to the quality of attention that offers the multidisciplinary equipment, we have of a total of 78 (100%) usuary ones, 21 (26,92%) have a level of high satisfaction, 42 (53,85%) average, and 15 (19,23%) low. In the human dimension of 78 (100%), 27 (34,62%) of users have a level of high satisfaction, 34 (43,59%) average, and 17 (21,79%) low, in the technical dimension, of 78 (100%), 20 (25,64%) have a level of high satisfaction, 42 (53,85%) average, and 16 (20,51%) low and in the dimension surroundings of 78 (100%), 40 (51,28%) of users have a level of high satisfaction, 23 (19,49%) average, and 15 (19,23%) low. Conclusions: By the exposed thing it is deduced that most of the users who receive TARGA he has a level of average satisfaction and low with respect to the quality of attention that offers the multidisciplinary equipment and according to the demonstrated thing in the graphs single has been high satisfaction in the dimension surroundings, in spite of it to consider the cases with average and low satisfaction although is minority and to the majority with low mean level and in the dimensions technical and human. It will be carried out when the multidisciplinary equipment offers quality attention causing that the PVVS manages to feel well, continues coming to their consultations, to receive their treatment, fulfills the indicated thing for the care of its health and this way it improves his quality of life. Key words: TARGA, Satisfaction of the User, Quality of Attention, Multidisciplinario Equipment.

La presente investigación ha tenido por objetivos evaluar la actividad citotóxica, antimitótica, antimutagénica y antiviral del extracto metanólico al 10% p/v de hojas de Calophylum brasiliense Cambess de la zona de Satipo. MATERIAL Y METODOS: Se utilizaron métodos estandarizados de acuerdo all Manual de Técnicas del CYTED y según Skehan, Gustafson y Simmons. RESULTADOS: Se observó un buen efecto citotóxico en el bioensayo en Artemia salina con una CL50 (Concentración Letal Media) = 70.5 ppm, con un limite superior e inferior al 95% de 136.50ppm y de 36.4ppm de acuerdo al método de Probits, observándose una inhibición sobre líneas celulares tumorales U251, PC-3, HCT15, MCF7 y K562 de 109.42%, 95.67%, 96.16%, 102.68% y 95.69% respectivamente con una p menor a 0,01. En la evaluaciòn antimitòtica en cebolla, al cabo de 6 horas de tratamiento el índice mitótico de las células meristemáticas decreció de un IM= 13 del control a un IM = 1.0 a la concentración de 0.5% a 25ºC. Con respecto a la evaluaciòn antimutagénica en erizo de mar los resultados no fueron estadísticamente significativos a las concentraciones ensayadas. La actividad antiviral del extracto metanólico sobre la Transcriptasa Reversa (RT) del HIV-1, realizada con el Kit Lenti RT(Cavidi Tech), presentó una CL50 de 70.2905 ug/ml con un límite superior e inferior al 95% de 138.89ug/ml y 35.5707ug/ml . Asimismo en el extracto se observó la presencia de: alcaloides, cumarinas, lactonas, triterpenos, entre otros, habiéndose aislado tres compuestos CBHS5, CbHS16 y CbHS525354 los cuales han sido analizados utilizando técnicas espectroscópicas de IR, RMNH1, RMNC13 y EM. DISCUSIÓN: Los compuestos aislados podrían estar implicados en la acción farmacológica antitumoral y antiviral. CONCLUSIÓN: El extracto de Calophylum brasiliense de la zona de Satipo presenta un buen efecto citotóxico, antitumoral , antimitótico y antiviral sobre el virus del SIDA. / --- The purpose of the present investigation was to evaluate cytotoxic, antimitòtic, antimutagenic and antiviral the activity of the methanolic extract to 10% p/v of leaves of Calophylum brasiliense Cambess of Satipo. MATERIAL Y METHODS: being used several experimental models of CYTED, Skehan, Gustafson y Simmons. RESULTS: Citotoxic effects: The extract has a good citotoxic effect evaluated in Artemia salina with a CL50 of 70.5 ppm (with 95% confidence limits of 36.4-136.5 ppm). Also there is an inhibitory effect over cellular tumoral lines U251,PC-3, HCT15,MCF7 and K562 (109.42, 95.67, 96.16, 102.68, and 95.69% respectivelly, p minor a 0.01) Antimitotic effect; Was evatuated in Allium cepa meristemic cells. Ther was a decrement in the mitotic index from 13 to 1 working with a concentration of 0.5% at 25°C. Antimutagenic activity: There was no observable effects at concentrations up to 15 ppm in embrionic development of fecundated eggs of Sea urchin. Antiviral effects were evaluated by the method of HIV-1 Reverse Transcriptase inhibition. There was a CL50 of 70.3 ug/ml (with 95% confidence limits of 35.6-138.9 ppm). Phyitochemical evaluation: The methanolic extract of Calophylum brasiliense contains alcaloids, cumarines, lactones, triterpenes. We have been able to isolate three compounds with the provisional names of CbHS5, CbHS16 and CbHS525354. DISCUSSION: The composeds observing can presented an good effect pharmacologycal antitumoral y antiviral. CONCLUSION: The extract of Calophylum brasiliense of Satipo presented an good inhibitory effect of Cancer y SIDA. Key Words: Calophylum brasiliense, citotoxicity, antimitotic, antiviral Embriotoxicity, alkaloids, cumarinas, Cancer, AIDS. Cytotoxische, antimitotic, antimutagenic und Antiviren auswertung von Calophylum brasiliense

Les systèmes de communication chimique constituent un élément indispensable dans l'établissement des relations intra- ou inter-espèces en milieu marin, tissant un réseau de relations entre individus, au sein d'un écosystème. Les invertébrés dépourvus de système immunitaire à mémoire et au mode de vie sessile produisent des métabolites bioactifs jouant un rôle essentiel dans la réponse aux pressions environnementales telles que la prédation et la défense vis-à-vis d'autres organismes potentiellement pathogènes. L'objectif de ces travaux a été d'identifier la présence de peptides antimicrobiens chez des mollusques bivalves et des gastéropodes d'importance commerciale. Ainsi, la recherche de molécules de défense antimicrobiennes de nature peptidique a été conduite dans des extraits acides des mollusques bivalves, Cerastoderma edule, Ruditapes philippinarum, Ostrea edulis et gastéropodes, Buccinum undatum, Littorina littorea et Crepidula fornicata, ainsi qu'à partir de l'hémolymphe de Crassostrea gigas. Les extraits ont été pré-purifiés par extraction sur phase solide C18 (SPE) et l'élution a été réalisée par 3 paliers successifs de 10%, 40% et 80% d'ACN-0,1% TFA. L'activité antibactérienne a été évaluée via la détermination de la CMI sur un ensemble de bactéries à Gram+ et à Gram- ; et l'activité antivirale a été déterminée in vitro sur le modèle virus Herpes simplex type 1/cellules Vero via la viabilité cellulaire. Les espèces C. edule, L. littorea et C. gigas se sont révélées être les espèces les plus efficaces et non cytotoxiques. Une caractérisation partielle de l'activité détectée chez ces espèces a permis de déterminer la nature peptidique des molécules actives. La purification des peptides antimicrobiens a été conduite sur l'hémolymphe de C. gigas et a permis l'identification d'un peptide dont la structure de type lantibiotique laisse présager une origine bactérienne. L'hypothèse d'une association entre C. gigas et des bactéries nous a conduit, à partir de cultures d'huîtres non axéniques, à rechercher des bactéries antagonistes dans l'hémolymphe et a permis d'isoler 2 Vibrio spp. et 3 Pseudoalteromonas spp. A partir de la bactérie Pseudoalteromonas spp. souche hCg 5, un composé actif a été partiellement caractérisé. L'ensemble de ces résultats suggère que les bactéries associées au système immunitaire pourraient jouer un rôle essentiel dans la défense des bivalves.

There are several reasons to celebrate the latest advances in the treatment of the infection with HIV. According to the Joint United Nations Programme on HIV/AIDS, the number of new infections dropped by 15%; there is also a decrease by 22% in the number of deaths related to HIV/AIDS. Nevertheless, there are new emerging challenges, i.e. the transmission of drug-resistant HIV-1 strains. Therefore, there is a demand for the continued research for new and more potent antiretroviral agents. The entry of HIV into the cell implies a complex and well-orchestrated series of steps in which both viral and cellular molecules are implied, ending with the production of new viral particles. The HIV gp120 glycoprotein binds to the cellular CD4 receptor and to a chemokine receptor, inducing structural rearrangements that continue with the cellular and viral membrane fusion mediated by the HIV glycoprotein gp41. Hence, the entry of HIV is an essential step of the viral replication that offers an open path for the design of new antiviral compounds that could be added to the repertory of drugs used in the treatment of HIV infection. In coincidence with the recent and highly relevant information of the fusion mechanism occurring during the viral entry, the design of new fusion inhibitors has become one of the most promising and debated areas in the study of entry inhibitors. ADS-J1 was originally selected to bind to gp41 and to inhibit the fusion of membranes. In several assays, including the generation of HIV strains resistant to ADS-J1, our laboratory has proved that ADS-J1 interact with gp120 instead of gp41. A more recent publication suggested that ADS-J1 binds to the pocket region of gp41 preventing the infection by the virus. Here, we confirmed that ADS-J1 interacts with gp120 instead of gp41. Recombination of gp120 into a wild type HIV-1 backbone restored the resistant phenotype. Moreover, time of addition assays clearly demonstrated that ADS-J1 does not interact with gp41. VIRIP was identified as a natural peptide present in human hemofiltrate that inhibits the HIV gp41-mediated membrane fusion. It was suggested that VIRIP interact with the fusion peptide in gp41, therefore blocking the fusion of membranes. With the objective to determine the precise mode of action of VIRIP, we generated a HIV-1 virus resistant to VIR-353, an analogue of VIRIP. Additionally, we determined the most relevant combination of mutations for the resistant phenotype. Recent studies have shown the effectivity of VIR-576, a peptide closely related to VIRIP and VIR-353 in a clinical trial phase I/II. The resistance to VIRIP/VIR-353 took a long time to emerge, suggesting a high genetic barrier to resistance. The mutations responsible for the resistant phenotype affected in large scale the replicative capacity of the virus, nevertheless, several compensatory mutations restored the viral fitness, while the resistance to VIR-353 was unaltered. The antiviral combination of VIR-353 and T20 showed an additive effect in inhibiting viral replication, indicating that VIR-353 appeared no to affect the binding of T20 to gp41 in its antiviral activity, the combination of the two fusion inhibitors showed an additive effect in inhibiting viral replication. In general, our results evidence the plasticity of the HIV envelope glycoproteins. This plasticity is highly remarked when the virus replicates under drug selective pressure, which imposes an additional genetic barrier for the virus to overcome. / ADS‐J1 ha estat seleccionat per unir‐se a gp41 i inhibir la fusió de les membranes. A través de diversos assajos, incloent la generació de soques resistents a ADS‐J1, el nostre laboratori va demostrar que ADS‐J1 interactua amb gp120 i no amb gp41. Una publicació posterior va suggerir que ADS‐J1 s’uneix a la ‘pocket‐region’ de gp41, prevenint l’infecció pel virus. En el present treball, nosaltres confirmem que ADSJ1 interactua amb gp120 i no amb gp41 i que la recombinació de gp120 en un VIH silvestre restitueix el fenotip resistent. Assajos de temps de addició van demostrar clarament que ADS‐J1 no interactua amb gp41. VIRIP va ser identificat com un pèptid natural present en el hemofiltrat humà capaç d’inhibir la fusió de membranes operada per gp41 del VIH. Es va suggerir que VIRIP interactua amb el pèptid de fusió de gp41, bloquejant la fusió de les membranes. Nosaltres hem generat un virus resistent a VIR‐353, un anàleg de VIRIP. Addicionalment, hem determinat la combinació de mutacions que generen el fenotip resistent. Estudis recents van mostrar l'efectivitat de VIR‐576, un pèptid amb alta similitud a VIRIP i VIR‐353 en un assaig clínic fase I/II. La resistència a VIRIP/VIR‐353 va requerir un període de temps llarg per emergir, la qual cosa suggereix una elevada barrera genètica a la resistència. Les mutacions responsables del fenotip resistent van afectar en greument la capacitat replicativa del virus, no obstant això, diverses mutacions compensatòries van restaurar‐ne la capacitat replicativa, mantenint intacta la resistència a VIR‐353. L’activitat antiviral de T20 no sembla afectada per VIR‐353, la combinació dels dos inhibidors de fusió van mostrar un efecte additiu en la inhibició de la replicació. En general, els nostres resultats evidencien la plasticitat de les glicoproteïnes de l'embolcall del VIH. Aquesta plasticitat es realça quan el virus replica sota la pressió selectiva imposada per fàrmacs que inhibeixen la replicació viral, la qual cosa afegeix una barrera genètica addicional a ser superada pel virus.

La presente investigación ha tenido por objetivos evaluar la actividad citotóxica, antimitótica, antimutagénica y antiviral del extracto metanólico al 10% p/v de hojas de Calophylum brasiliense Cambess de la zona de Satipo. MATERIAL Y METODOS: Se utilizaron métodos estandarizados de acuerdo all Manual de Técnicas del CYTED y según Skehan, Gustafson y Simmons. RESULTADOS: Se observó un buen efecto citotóxico en el bioensayo en Artemia salina con una CL50 (Concentración Letal Media) = 70.5 ppm, con un limite superior e inferior al 95% de 136.50ppm y de 36.4ppm de acuerdo al método de Probits, observándose una inhibición sobre líneas celulares tumorales U251, PC-3, HCT15, MCF7 y K562 de 109.42%, 95.67%, 96.16%, 102.68% y 95.69% respectivamente con una p menor a 0,01. En la evaluaciòn antimitòtica en cebolla, al cabo de 6 horas de tratamiento el índice mitótico de las células meristemáticas decreció de un IM= 13 del control a un IM = 1.0 a la concentración de 0.5% a 25ºC. Con respecto a la evaluaciòn antimutagénica en erizo de mar los resultados no fueron estadísticamente significativos a las concentraciones ensayadas. La actividad antiviral del extracto metanólico sobre la Transcriptasa Reversa (RT) del HIV-1, realizada con el Kit Lenti RT(Cavidi Tech), presentó una CL50 de 70.2905 ug/ml con un límite superior e inferior al 95% de 138.89ug/ml y 35.5707ug/ml . Asimismo en el extracto se observó la presencia de: alcaloides, cumarinas, lactonas, triterpenos, entre otros, habiéndose aislado tres compuestos CBHS5, CbHS16 y CbHS525354 los cuales han sido analizados utilizando técnicas espectroscópicas de IR, RMNH1, RMNC13 y EM. DISCUSIÓN: Los compuestos aislados podrían estar implicados en la acción farmacológica antitumoral y antiviral. CONCLUSIÓN: El extracto de Calophylum brasiliense de la zona de Satipo presenta un buen efecto citotóxico, antitumoral , antimitótico y antiviral sobre el virus del SIDA. / The purpose of the present investigation was to evaluate cytotoxic, antimitòtic, antimutagenic and antiviral the activity of the methanolic extract to 10% p/v of leaves of Calophylum brasiliense Cambess of Satipo. MATERIAL Y METHODS: being used several experimental models of CYTED, Skehan, Gustafson y Simmons. RESULTS: Citotoxic effects: The extract has a good citotoxic effect evaluated in Artemia salina with a CL50 of 70.5 ppm (with 95% confidence limits of 36.4-136.5 ppm). Also there is an inhibitory effect over cellular tumoral lines U251,PC-3, HCT15,MCF7 and K562 (109.42, 95.67, 96.16, 102.68, and 95.69% respectivelly, p minor a 0.01) Antimitotic effect; Was evatuated in Allium cepa meristemic cells. Ther was a decrement in the mitotic index from 13 to 1 working with a concentration of 0.5% at 25°C. Antimutagenic activity: There was no observable effects at concentrations up to 15 ppm in embrionic development of fecundated eggs of Sea urchin. Antiviral effects were evaluated by the method of HIV-1 Reverse Transcriptase inhibition. There was a CL50 of 70.3 ug/ml (with 95% confidence limits of 35.6-138.9 ppm). Phyitochemical evaluation: The methanolic extract of Calophylum brasiliense contains alcaloids, cumarines, lactones, triterpenes. We have been able to isolate three compounds with the provisional names of CbHS5, CbHS16 and CbHS525354. DISCUSSION: The composeds observing can presented an good effect pharmacologycal antitumoral y antiviral. CONCLUSION: The extract of Calophylum brasiliense of Satipo presented an good inhibitory effect of Cancer y SIDA.

El virus Zika es un flavivirus emergente que en los últimos 2 años causó una serie de problemas de salud y económicas en América Latina; afectando con mayor severidad a los recién nacidos. Por ello, evaluamos la actividad inhibitoria de los aceites esenciales de la planta aromática (verbenaceae) Lippia alba en la línea celular VERO – 76 y C6/36. Lippia alba se colectó en el departamento de Amazonas y se identificó en el Museo de Historia Natural de la UNMSM. La extracción del aceite esencial total de la planta entera de Lippia alba fue realizada mediante un equipo de hidrodestilación por arrastre de vapor usando un aparato de tipo clevenger y almacenada dentro de un frasco oscuro a 4°C. El virus Zika fue donado por el Laboratorio de Virología Clínica y Molecular de la Universidad de São Paulo y analizado mediante RT – PCR (Tiempo Real). In vitro se propagó el virus Zika en la línea celular C6/36 Aedes albopictus; una vez cosechada la semilla viral se halló el título viral a 9.8 x 106 UFP/ml. de ZIKV. El aceite esencial se probó en las líneas celular C6/36 y VERO – 76 para determinar el CC50 con 400.8 μg/ml y 167 μg/ml, respetivamente. Finalmente, se determinó PIRP75 a una concentración de 13.36 μg/ml. En conclusión, el extracto de Lippia alba presenta actividad antiviral contra virus Zika. / Tesis

Le cytomégalovirus humain (CMVH) est un virus mondialement répandu impliqué dans des pathologies sévères chez les sujets immunodéficients et lors d’infection congénitale. L’arsenal thérapeutique est limité, non dénué de toxicité, et ne pouvant être administrés aux femmes enceintes. De plus, ces traitements favorisent l’émergence de mutations de résistance. Il est donc nécessaire de développer de nouvelles thérapies, mais également de mieux comprendre les mécanismes de l’infection à CMVH lors de la grossesse. Au cours de ce travail de thèse, nous avons travaillé sur différents modèles d’infection virale, premièrement in vitro afin de tester de nouvelles molécules au potentiel antiviral, ciblant l’enzyme cyclooxygénase-2 impliquée dans les processus d’inflammation ; secondairement, ex vivo, sur des explants de placentas de premier et troisième trimestre. Dans ce dernier modèle, nous nous sommes intéressés au profil d’expression des cytokines inflammatoires induites par l’infection à CMVH. Nous avons ainsi testé des nouveaux inhibiteurs de la cyclooxygénase-2 in vitro. L’un d’entre eux, RG193, montre un effet synergique avec le maribavir et la baïcaléine, ce qui est prometteur pour d’éventuelles bithérapies. Concernant le modèle de culture ex vivo, nous avons pu démontrer la viabilité des explants et l’efficacité antivirale de diverses molécules sur l’infection à CMVH. Les résultats préliminaires sur l’expression des cytokines par les placentas infectés montrent des différences notables entre premier et troisième trimestre de grossesse. Cependant, les antiviraux testés semblent avoir peu d’impact sur la régulation des ARN messagers des cytokines pro-inflammatoires MCP-1, TNF-α, IP-10 suite à l’infection. / The human cytomegalovirus (HCMV) is a worldwide common virus involved in diseases in immunocompromised patients, and in congenital infection. Few treatments. Antiviral drugs are limited, not devoid of toxicity, and so cannot be administered to pregnant women. Moreover, they promote the emergence of resistance mutations. Development of new therapies is necessary, also a better understanding of the mechanisms of HCMV infection during pregnancy. In this work, we used different models of viral infection; first in vitro, in order to test new potential antiviral molecules targeting the cyclooxygenase 2 enzyme, which is involved in the inflammation process; secondly an ex vivo model, on first and third trimester placental explants. We also studied the expression profile of inflammatory cytokines induced by the HCMV infection in this model.We have tested new cyclooxygenase 2 inhibitors in vitro. Within them, RG193 shows a synergistic effect with the maribavir and baicalein, which is promising for potential dual therapy. Concerning the ex vivo culture model, we could demonstrate the viability of explants and antiviral efficacy of various molecules on HCMV infection. Preliminary results on the expression of cytokines in infected placentas show differences between first and third trimester of pregnancy. However, antiviral tested appear to have little impact on the regulation of proinflammatory cytokines MCP-1, TNF- α, IP-10 mRNA during infection.

L’adénovirus (AdV) est un virus non enveloppé à ADN double brin qui entre dans la cellule par endocytose. Dans l’endosome un désassemblage partiel de la capside permet la libération d’une protéine interne de la capside, la protéine VI (PVI). Cette protéine code une hélice amphipathique qui va permettre la rupture de l’endosome. Des travaux antérieurs du laboratoire ont montré que le transport des particules virales vers le noyau nécessite la présence du motif conservé PPxY dans la PVI qui permet le recrutement d’ubiquitines ligases de la famille des Nedd4 (telles que Nedd4.1 et Nedd4.2). Il a précédemment été montré que la rupture des membranes induite lors d’infections bactériennes activait l’autophagie afin d’éliminer le pathogène intracellulaire via une dégradation lysosomale. Nos résultats démontrent que l’AdV induit également l’autophagie lors de son entrée dans la cellule. L’utilisation de différents AdV mutants nous a permis de démontrer que la rupture de l’endosome était responsable de l’induction de l’autophagie. De plus nos résultats montrent que le virus sauvage est capable d’éviter sa dégradation en contrôlant l’autophagie grâce au recrutement de la ligase Nedd4.2 via le motif PPxY de la PVI. Au contraire, un virus mutant dépourvu du motif PPxY et donc incapable de recruter la Nedd4.2 est séquestré dans les vésicules autophagiques puis dégradé par la fusion de ces vésicules avec les lysosomes. Ainsi le motif PPxY constitue un déterminant moléculaire permettant au virus de contourner les défenses cellulaires antivirales. / Adenoviruses (AdV) are linear ds-DNA containing, non-enveloped viruses that enter cells by receptor-mediated endocytosis. Once in the endosome it occurs a partial disassembly of the capsid allowing the releases of the membrane lytic capsid protein VI, which encodes an N-terminal amphipathic helix responsible for the endosome rupture. Our previous work showed that transport to the nucleus requires a conserved PPxY motif in PVI, which recruits ubiquitin ligases of the Nedd4 family (e.g. Nedd4.1 and 4.2). Previous work has shown that membrane damage induced by invasive bacteria elicits selective cellular autophagy to eliminate the pathogen via lysosomal degradation. In our current work we show that Adv also induce autophagy upon entry. Using a set of mutant AdV’s attenuated at each step of the membrane penetration process we show that indeed the membrane damage induced by the virus is causative for autophagy induction. Moreover the data show that wildtype AdV limit the level of autophagy induction and evade autophagic degradation by using a Nedd4.2 dependent process. In contrast, mutant viruses mutated for its PPxY and that fail to recruit Nedd4.2 are subject to autophagic degradation. Our data suggest that the presence of the PPxY motif in the virus subverts the autophagic process and thus identify the PPxY motif as an integral part of the virus to undermine cellular antiviral mechanism.

Los virus de RNA de cadena positiva conforman el grupo más numeroso y diverso de los patógenos virales de las plantas. Se replican mediante un mecanismo en el que la RNA polimerasa RNA dependiente viral, junto con otras proteínas virales y del huésped, sintetizan un intermediario de polaridad complementaria (o negativa), que a la vez sirve de molde para la síntesis del RNA genómico de polaridad positiva. Este mecanismo puede seguir un modelo geométrico o de stamping machine (Sardanyés et al. 2009). Por otro lado, las rutas de silenciamiento de RNA en plantas desempeñan un papel muy importante en la regulación de los procesos de desarrollo, mantenimiento de la estructura cromosómica y mecanismos de defensa contra virus patógenos (Matzke y Matzke, 2004). Los microRNA (miRNAs) son una clase de pequeños RNAs (sRNAs) endógenos que se producen en el núcleo a partir de transcritos precursores (pre-miRNA) en forma de horquilla, por la acción, en plantas, de Dicer 1 (DCL1). Los miRNAs maduros (21 nt) son cargados por RISC y dirigen la degradación de mRNAs endógenos que contienen una secuencia diana complementaria, regulando así su concentración. Para oponerse al silenciamiento de RNA antiviral, en la mayoría de virus de plantas y algunos virus animales han evolucionado proteínas supresoras del silenciamiento que interfieren en pasos clave de la ruta de los pequeños RNAs interferentes (siRNA): directamente secuestrando los siRNAs, inhibiendo su producción o previniendo su diseminación por el huésped a corta o larga distancia (Li y Ding, 2006). Recientemente se ha desarrollado una nueva estrategia para producir plantas resistentes a virus basada en las rutas de silenciamiento de RNA. Consiste en expresar en plantas transgénicas miRNAs artificiales (amiRNAs) dirigidos contra secuencias específicas de los virus sobre los que se desea resistencia (Niu et al., 2006). Plantas de Arabidopsis thaliana transgénicas que expresan amiRNAs en los que se ha sustituido en el pre-amiRNA la secuencia de 21 nt del miR159 maduro, por diferentes secuencias complementarias a distintas regiones del genoma de un potyvirus (Riechmann et al., 1992. Urcuqui-Inchima et al., 2001) como el virus del mosaico del nabo (TuMV) han resultado ser resistentes a este virus en ensayos de laboratorio (Niu et al., 2006). El estudio de los aspectos moleculares de la resistencia mediada por microRNAs artificiales durante la complejidad de la infección viral puede permitir la mejora en el diseño de esta estrategia de resistencia desde el punto de vista de robustez, especificidad, durabilidad y seguridad medioambiental. Sobre todo porque los virus de RNA presentan una elevada tasa de mutación (Duffy et al., 2008) y linajes evolutivos independientes de TuMV son capaces de romper la resistencia mediada por un amiRNA, debido a la aparición de alelos mutantes que evaden el reconocimiento del miRNA artificial (Lafforgue et al., 2011). / Martínez García, F. (2014). Análisis de la dinámica de replicación de un virus de RNA de plantas y del uso de microRNAs artificiales como estrategia antiviral [Tesis doctoral]. Editorial Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/35447 / TESIS / Premios Extraordinarios de tesis doctorales